汇总胶体金生产工艺配方原则.ppt
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胶体金原料工艺指导原则
胶体金原料工艺指导原则胶体金是一种由纳米金颗粒组成的胶体溶液，其表面特性和粒径大小对于其性质和应用起着重要的影响。
因此，胶体金原料工艺的指导原则对于生产高质量的胶体金具有重要意义。
以下是胶体金原料工艺指导原则：1.原料选择：选择高纯度的金粒子作为原料，以确保胶体金的稳定性和纯度。
金原料应符合相关的质量标准。
2.溶剂选择：选择适合的溶剂用于制备胶体金。
一般来说，溶剂应具有较低的毒性和挥发性，以及较高的溶解能力和稳定性。
3.表面修饰剂的选择：表面修饰剂是控制胶体金颗粒聚集和稳定性的关键因素。
选择适当的表面修饰剂可以增强胶体金的分散性和稳定性，从而提高其性能和应用价值。
4.原料处理：原料的处理过程对胶体金的质量和性能有重要影响。
可以通过物理或化学方法，如超声波处理、热处理或化学修饰等，来优化原料的分散性和稳定性。
5.控制粒径大小和分布：胶体金颗粒的粒径大小和分布对其性质和应用起着重要的影响。
通过适当的控制工艺参数，如反应温度、溶剂浓度和添加剂浓度等，可以控制胶体金颗粒的粒径大小和分布。
6.反应条件控制：胶体金的制备过程通常是一个化学反应过程。
控制反应条件，如反应时间、温度和pH值等，可以控制胶体金的质量和性能。
7.产品分离和纯化：胶体金的制备过程通常会产生一些杂质或溶剂残留物。
通过适当的分离和纯化工艺，可以去除这些杂质，提高胶体金的纯度和稳定性。
8.质量控制和测试：制备胶体金的过程中应建立质量控制体系，对每一批次的产品进行质量检验和测试，确保产品符合相关的质量标准和要求。
总之，胶体金原料工艺的指导原则是选择合适的原料和溶剂，优化原料的处理过程，控制胶体金颗粒的粒径大小和分布，控制反应条件，分离和纯化产品，建立质量控制体系，以生产高质量的胶体金。
这些原则对于确保胶体金的质量和性能，提高其应用价值具有重要意义。
胶体金的制备及其应用PPT课件
胶体金用于电镜水平的研究，主要包括：①细胞悬液 或单层培养中细胞表面抗原的观察。②单层培养中细胞内 抗原的检测。③组织抗原的检测。
金标记在电镜水平的应用，主要方法包括： 包埋前染色、包埋后染色、免疫负染色、双标记 技术和原位杂交技术等。
实验证明，该法样本用量少、检测速度快、 对比明显、操作简单、敏感性和特异性高，既可 用于抗原检测，也可用于抗体检测，因此，可同 时适用于科研和诊断。
• 目前电镜水平的免疫金染色(IGS)，光镜水平的 免疫金银染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑点免疫 金染色技术日益成为科学研究和临床诊断的有力 工具
免疫胶体金技术的基本原理
• 免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度
的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑 褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚 集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定 性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也 可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银 染色。
主要内容
• 概述 • 免疫胶体金技术的基本原理 • 胶体金的特性 • 胶体金的制备方法 • 胶体金的鉴定和保存 • 免疫胶体金制备和保存 • 免疫胶体金应用
概述
• 胶体金溶液：胶体金溶液是指分散相粒子直径
在l—150 nm之间的金溶胶，属于多相不均匀体系， 颜色呈桔红色到紫红色。
• 1971年胶体金作为标记物开始用于免疫组织化 学,Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察 沙门氏菌,此后他们把胶体金与多种蛋白质结合；
下述标记步骤最为常见：
• ①用0.1mol/L K2CO3或0.1mol/L HCl调节金溶胶至所需pH( 标记ＳＰＡ时调到pH6.0)。
金标记在电镜水平的应用，主要方法包括： 包埋前染色、包埋后染色、免疫负染色、双标记 技术和原位杂交技术等。
实验证明，该法样本用量少、检测速度快、 对比明显、操作简单、敏感性和特异性高，既可 用于抗原检测，也可用于抗体检测，因此，可同 时适用于科研和诊断。
• 目前电镜水平的免疫金染色(IGS)，光镜水平的 免疫金银染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑点免疫 金染色技术日益成为科学研究和临床诊断的有力 工具
免疫胶体金技术的基本原理
• 免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度
的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑 褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚 集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定 性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也 可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银 染色。
主要内容
• 概述 • 免疫胶体金技术的基本原理 • 胶体金的特性 • 胶体金的制备方法 • 胶体金的鉴定和保存 • 免疫胶体金制备和保存 • 免疫胶体金应用
概述
• 胶体金溶液：胶体金溶液是指分散相粒子直径
在l—150 nm之间的金溶胶，属于多相不均匀体系， 颜色呈桔红色到紫红色。
• 1971年胶体金作为标记物开始用于免疫组织化 学,Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察 沙门氏菌,此后他们把胶体金与多种蛋白质结合；
下述标记步骤最为常见：
• ①用0.1mol/L K2CO3或0.1mol/L HCl调节金溶胶至所需pH( 标记ＳＰＡ时调到pH6.0)。
胶体金生产工艺配方原则
蛋白标记原理
❖蛋白质在等电点或稍偏碱的情况下，依 靠静电引力或疏水力或共价键，被牢固 地吸附于胶体金颗粒表。由于蛋白质分 子牢固地结合在金颗粒表面，形成一个 蛋白层，从而阻止了胶体金颗粒的相互 接触，使该胶联溶液较为稳定。
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要点
❖蛋白的预处理
❖使用低浓度和正确的pH值，确保最小的聚 集
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标记工艺
❖胶体金：一般指金的水溶液，又称金溶胶。 ---金以微小的粒子分散在水中所形成的金溶
胶。 其中分散的金颗粒直径一般在1~100nm之间，
为负电荷分布。
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高质量结合物
❖单个分散的颗粒 ❖圆形颗粒 ❖很少聚集 这样得到的胶体稳定性 和重复性好
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胶体金颗粒的形成
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胶体金的生产
❖2种重要步骤
▪ 直接形成 ▪ 分步形成
❖大多数人用分步形成
▪ 比较容易控制颗粒大小，CV也比较小 ▪ 能够生产出大颗粒胶体金
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颗粒大小对胶体的影响
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❖惰性蛋白，它是保护目的蛋白的活性，也 维持胶体金的胶体稳定，它们是消除非特 异性的封闭物质，也起着有分散胶体金颗 粒的骨架作用。常用有BSA 、OVA、 Casein。
❖表面活性剂，具有增加亲水性，促进结合 等作用。常用的有Tween-20，Tritonx-100。
▪ 疏水力 ▪ 共价键
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胶体金培训44页PPT
3.胶体金检测卡的组成
3.1结构：主要由样品垫、金垫、硝酸纤维素膜（NC 膜），吸水垫4个部分组成，从下至上依次首尾互相衔 接，粘贴在PVC底板上。
3.胶体金检测卡的组成
3.2作用： ⑴样品垫：检测样本滴加位置，对检测样本具有一定的
过滤和缓冲作用，降低样本中离子强度或者酸碱度对 检测结果的干扰。
pH调至8.0 标记抗体
BSA或PEG
封闭
12000转/分
离心
复溶
封闭多余的游离胶体金， 稳定胶体金标记物 将胶体金标记物沉淀
将胶体金标记物重新溶解
3.胶体金检测卡的组成
（3）金垫制备 将标记好的金标复合物喷涂在玻璃纤维素膜上，在 干燥间或烘箱中37℃将其烘干。 （4）样品垫制备 将样品垫处理液浸涂在玻璃纤维素膜上，在干燥间 或烘箱中37℃将其烘干。
T:Clen-BSA Y2:羊抗鼠抗体
预先在硝酸纤维素膜上的检测线（T）和质控线（C） 分别包被上盐酸克伦特罗抗原（Clen-BSA）和羊抗 鼠二抗，将胶体金标记克伦特罗免疫鼠抗体并固着在 玻璃纤维上制成金垫，组装成试纸条。将检测的尿样 滴加在样品垫上，当尿样中盐酸克伦罗达到一定的浓 度时，即于固着在载体上的胶体金标记抗体结合，从 而阻止其与固着在检测线（T）的抗原结合，无法在 检测区形成紫红色条带。若尿样中不含盐酸克伦特罗 （Clen)或其代谢物时，胶体金标记抗体与检测区的 抗原结合，在检测线（T）形成紫红色条带。样品和 金标记复合物继续往上移动，在质控线（C）上与包 被的羊抗鼠二抗结合，在质控线（C）上形成一条紫 红色条带，证明本检测卡有效。无论尿样中是否含有 盐酸克伦特罗（Clen)在质控线（C）均应出现一条 紫红色条带。
⑵金垫：将胶体金标记抗体通过干燥固定在玻璃纤维素 膜上，是追踪抗体与抗原的反应。
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PPT78页)
245 185 140 100
胶体金诊断试剂工艺配方原则
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
不同种类膜的 IgG结合能力
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
吸附过程
溶液中的蛋白
吸附
蛋白转移到表面区域 蛋白在表面重排
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
不同种类膜的 BSA结合能力
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
为什么蛋白会结合到膜上?
结合力是什么?
▪ 静电 ▪ 疏水力
这两种结合力的效应是什么?
▪ 使蛋白从溶液中分离出来 ▪ 长久结合作用
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
❖盐
▪ 通常不会影响 ▪ 对某些蛋白，两性离子的盐类有助于蛋白结合 ▪ 减少信号强度，消假阳
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
❖糖：对包被蛋白的稳定性有重要作用，减 缓老化速度，也可以增加亲水力。
❖惰性蛋白：对消除假阳有重要作用 ❖表面活性剂：增加亲水力，也可增色。
胶体金诊断试剂工艺配方原则
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
不同种类膜的 IgG结合能力
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
吸附过程
溶液中的蛋白
吸附
蛋白转移到表面区域 蛋白在表面重排
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
不同种类膜的 BSA结合能力
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
为什么蛋白会结合到膜上?
结合力是什么?
▪ 静电 ▪ 疏水力
这两种结合力的效应是什么?
▪ 使蛋白从溶液中分离出来 ▪ 长久结合作用
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
❖盐
▪ 通常不会影响 ▪ 对某些蛋白，两性离子的盐类有助于蛋白结合 ▪ 减少信号强度，消假阳
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
❖糖：对包被蛋白的稳定性有重要作用，减 缓老化速度，也可以增加亲水力。
❖惰性蛋白：对消除假阳有重要作用 ❖表面活性剂：增加亲水力，也可增色。
胶体金生产工艺配方原则参考幻灯片共81页
胶体金生产工艺配方原则参考幻灯片
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 根茎， 再有枝 叶，尔 后花实 ，好好 劳动， 不要想 太多， 那样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 根茎， 再有枝 叶，尔 后花实 ，好好 劳动， 不要想 太多， 那样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢
胶体金技术简介 ppt课件
稳定性好：金标试剂稳定，可长期室温保存
检测标本种类多：既可用于测血清/血浆/全血，又可用于测 尿或唾液,或处理后的组织等固体样品
6
免疫层析法应用领域
类别 人类医学
农牧业 环境 食品安全
应用领域
检测的物质
各级医院,血站,CDC,防 疫站,诊断中心；家庭
自检；商检系统；边检 口岸；公安系统.
女性妊娠（hCG,LH等)
传染病（乙肝五项、艾滋,、梅毒、流感等） 肿瘤标志物（AFP、、粪便血红蛋白等）
心梗系列(肌钙蛋白、肌红蛋白、肌酸激酶）
毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒等）
畜牧兽医站, 商检系统, 传染病（禽流感、兽瘟疫等）
边检口岸,农牧类院系
和研究所
病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）
环保监测部门,研究机 有害物质超标 构
喷点法与浸泡法的比较 (AJQ3000喷头)
1.释放快慢 2.液体量不同，干燥快慢，边缘
效应 3.生产方便性
20
样品垫
材料选择
各成分的作用 1.缓冲溶液的作用 (PH) 2.盐的作用 3.大分子蛋白BSA\PVP 4.表面活性剂 Tween-20,TritonX-100
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吸水纸
吸水效率 进口与国产纸的差异
一步法
固相系统,常温保存
开发周期长,使用方便
20-40nm 胶体金 大孔径膜 侧向流动
免疫渗滤法
多步法
液体/固相系统 液体需要冷冻保存 开发周期短,使用不方便
10-15nm 胶体金 小孔径膜 竖向流动
4
免疫层析法技术优势:简单/现场/快速
1.打开包装取出试纸条 2.直接插入待测样品中 3. 目测读出结果（3-10分钟内）
最新胶体金介绍ppt课件
体金标记物结合，捕获目 标蛋白，结合膜上T线材 料，从而显示出检测结果。
2、涂布材料
①涂金子的材料一般是玻纤 和无纺布
②涂布的方法一般有两种：
一是用喷膜机把金子喷在 玻纤上；二是手工涂布。
其他原材料的介绍
1、箭头胶 箭头胶是常用的一种原材料，它
的作用是将辅料垫、金子垫和膜 紧密的贴在一起，同时也起到操 作标示的作用。
胶体金介绍ppt课件
胶体金原理及其产品介绍
与常规诊断方法相比
优点 快速：全部检测过程仅需 3-10分钟。
缺点 定量问题
简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，无需专 灵敏度问题 业人员，携带方便，可随时随地进行。
廉价：单个测试条成本极低
可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立 刻拿到结果，不必等待。
毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒等）
畜牧兽医站, 商检系统,边 检口岸,农牧类院系和研究
所
其他（疟疾） 传染病（禽流感,兽瘟疫等）
病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）
环保监测部门,研究机构 有害物质超标
食品安全检测中心,各监管 农兽药残留（磺胺类、瘦肉精等）,大肠杆菌,黄曲霉素 部门
免疫层析法的临床应用
2、吸水纸
①吸水纸是产生装配在试纸条的上端， 它的作用有：产生吸力，引导层析过 程的进行；可用作手柄。
②吸水纸的标准：吸水性能强；厚薄适 中；吸水后不会过度膨胀；易贴彩胶， 吸水后彩胶也不易脱落；
3、PVC板
PVC板是用来承载膜、金子、 辅料等成分的底板，它是试纸 条的骨架。
PVC板的标准：板上的粘性 要适中；板的长度要合乎规格； 板的硬度也要达到一定的标准。
评价一个试剂的标准
评价一个试剂好坏的标准有： 1、灵敏度 2、特异性 3、背景 4、吸样和上样 5、和对照试剂比较 6、市场反馈 7、检验机构的评价
2、涂布材料
①涂金子的材料一般是玻纤 和无纺布
②涂布的方法一般有两种：
一是用喷膜机把金子喷在 玻纤上；二是手工涂布。
其他原材料的介绍
1、箭头胶 箭头胶是常用的一种原材料，它
的作用是将辅料垫、金子垫和膜 紧密的贴在一起，同时也起到操 作标示的作用。
胶体金介绍ppt课件
胶体金原理及其产品介绍
与常规诊断方法相比
优点 快速：全部检测过程仅需 3-10分钟。
缺点 定量问题
简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，无需专 灵敏度问题 业人员，携带方便，可随时随地进行。
廉价：单个测试条成本极低
可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立 刻拿到结果，不必等待。
毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒等）
畜牧兽医站, 商检系统,边 检口岸,农牧类院系和研究
所
其他（疟疾） 传染病（禽流感,兽瘟疫等）
病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）
环保监测部门,研究机构 有害物质超标
食品安全检测中心,各监管 农兽药残留（磺胺类、瘦肉精等）,大肠杆菌,黄曲霉素 部门
免疫层析法的临床应用
2、吸水纸
①吸水纸是产生装配在试纸条的上端， 它的作用有：产生吸力，引导层析过 程的进行；可用作手柄。
②吸水纸的标准：吸水性能强；厚薄适 中；吸水后不会过度膨胀；易贴彩胶， 吸水后彩胶也不易脱落；
3、PVC板
PVC板是用来承载膜、金子、 辅料等成分的底板，它是试纸 条的骨架。
PVC板的标准：板上的粘性 要适中；板的长度要合乎规格； 板的硬度也要达到一定的标准。
评价一个试剂的标准
评价一个试剂好坏的标准有： 1、灵敏度 2、特异性 3、背景 4、吸样和上样 5、和对照试剂比较 6、市场反馈 7、检验机构的评价
胶体金生产工艺配方原则82页文档
胶体金生产工艺配方原则
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺， 坚韧勤 勉。
1、最灵繁的人也看不见自己的背脊。——非洲 2、最困难的事情就是认识自己。——希腊 3、有勇气承担命运这才是英雄好汉。——黑塞 4、与肝胆人共事，无字句处读书。——周恩来 5、阅读使人充实，会谈使人敏捷，写作使人精确。——培根
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺， 坚韧勤 勉。
1、最灵繁的人也看不见自己的背脊。——非洲 2、最困难的事情就是认识自己。——希腊 3、有勇气承担命运这才是英雄好汉。——黑塞 4、与肝胆人共事，无字句处读书。——周恩来 5、阅读使人充实，会谈使人敏捷，写作使人精确。——培根
胶体金 ppt课件
(三) 技术要点
• 1.试剂盒组成 ①滴金反应板 (图20-1)胶体 金免疫渗滤试验中主要试剂成分之一， 由塑料小盒、吸水垫料和点加了抗原或 抗体的醋酸纤维素膜片三部分组成。② 胶体金标记物 ③洗涤液 。
2.操作要点
• 2.操作要点 ①将反应板平放于实验台面上，于 小孔内滴加含待测抗原标本1-2滴，待完全渗 入；②于小孔内滴加胶体金标记抗体试剂1-2 滴，待完全渗入；
• （2）胶体金的颜色和光吸收性：对同一
种物质的水溶胶金颗粒来说，粒子大小 不同，颜色亦不同，胶体金颗粒在5～ 20nm之间，吸收波长520nm，呈葡萄酒 红色，20～40nm之间吸收波长530nm， 液体为深红色，60nm的金溶液主要吸收 波长600nm，金溶液呈兰紫色，若离心
去掉较大的金颗胶体金的制备并不难，但要制好高质量的胶体金 却也并非易事。因此对每次制好的胶体金应加以 检定，主要检查指标有颗粒大小，粒径的均一程 度及有无凝集颗粒等。在日光下仔细观察比较胶 体金的颜色，可以粗略估计制得的金颗粒的大小。 当然也可用分光光度计扫描λmax来估计金颗粒的 粒径。制备的胶体金最好作电镜观察，并选一些 代表性的作显微摄影，可以比较精确地测定胶体 金的平均粒径。 良好的胶体金应该是清亮透明的， 若制备的胶体金混浊或液体表面有漂浮物，提示 此次制备的胶体金有较多的凝集颗粒。
最常用的制备方法为柠檬酸盐还原法。
①先配制HAuC14水溶液，加热至沸。②搅动下准 确加入一定量的柠檬酸三钠 （Na3C6H5O7·2H2O）水溶液。③继续加热煮 沸一定时间。此时可观察到淡黄色的氯金酸水溶 液在柠檬酸钠加入后很快变灰色，续而转成黑色， 随后逐渐稳定成红色。全过程约2～3min。④冷 却至室温后用蒸馏水恢复至原体积。通过改变柠 檬酸三钠的用量可以制得不同大小的胶体金颗粒
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要点
❖蛋白的预处理
❖使用低浓度和正确的pH值，确保最小的聚 集
❖合适的蛋白量（可通过盐滴定进行评价）
❖搅拌速度、容器的洁净程度、离心的速 度
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盐滴定
❖盐滴定不能衡量蛋白单层的形成 ❖盐滴定只能代表盐溶液中多少量的蛋白可
以使胶体金稳定 ❖pH和时间都会有影响
各种缓冲系: Tris-HCl, PB, CB等 盐类：NaCl 糖：蔗糖，海藻糖等 表面活性剂：Tween20，Triton x-100等 惰性蛋白：Casein等 防腐剂 ：叠氮钠，卡松等
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推荐的起始缓冲液
❖10mM Phosphate pH 7.0 3% Ethanol
多位点结合
只有1个位点的结合是可逆的
多位点结合使得蛋白稳定在固相表面， 即使其中的每个单位点都是可逆的
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影响蛋白结合的因素
▪ 蛋白缓冲液 ▪ 使用的膜 ▪ 蛋白自身 ▪ 应用体系
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蛋白缓冲液
❖没有通用的缓冲液，不同的系统必须分别 优化。
❖作用：提供适合的PH, 改善亲水性, 增溶性, 提高稳定性
胶体金诊断试剂工艺 配方原则
内容
一、和膜相关的配方和原理 二、和金子垫相关的配方和原理 三、和样品垫相关的配方和原理 四、相关问题
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一、和膜相关的配方和原理
电镜下的NC膜
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硝酸纤维膜生产工艺图
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孔径定义的问题
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❖蛋白质疏水性状和亲水性状 当蛋白质溶解在溶剂中时，蛋白质处于非常
稳定的状态，此时蛋白质的亲水基团展开 在外，疏水基团收缩在内，亲水基团和水 分子接触，保证了溶解性的状态；当蛋白 质沉淀出来时，疏水基团展开，亲水基团 收缩，此时为疏水状态，也呈现不稳定的 固体状态，疏水基团和其他固体物的疏水 基团通过疏水作用力结合，达到固定的目 的。
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蛋白结合到固相材料上
❖ 蛋白结合到固相材料上是一个多步骤过程 ❖ 取决于
▪ 蛋白溶液扩散到固相表面 ▪ 蛋白从溶液中分离出来 ▪ 蛋白吸附到固相上 ▪ 蛋白重排到最低能态
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吸附过程
溶液中的蛋白
吸附
蛋白转移到表面区域 蛋白在表面重排
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孔径对侧向层析速度的影响
标称孔径 (m)
3 5 8 12
层析 4.5 cm 的时间 (sec)
245 185 140 100
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不同种类膜的 IgG结合能力
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不同种类膜的 BSA结合能力
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为什么蛋白会结合到膜上?
结合力是什么?
▪ 比较容易控制颗粒大小，CV也比较小 ▪ 能够生产出大颗粒胶体金
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颗粒大小对胶体的影响
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蛋白标记原理
❖蛋白质在等电点或稍偏碱的情况下，依 靠静电引力或疏水力或共价键，被牢固 地吸附于胶体金颗粒表。由于蛋白质分 子牢固地结合在金颗粒表面，形成一个 蛋白层，从而阻止了胶体金颗粒的相互 接触，使该胶联溶液较为稳定。
❖定律: “蛋白在缓冲液中越不稳定，蛋白结合力越
强”
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缓冲液的优化
❖ 离子强度
▪ 对于蛋白从溶液中脱离出来很重要，少量的离子强度， 蛋白难以从溶液中脱离沉淀出来，过量的的离子强度， 溶液配制中就已会出现沉淀。
❖ pH
▪ 蛋白在等电点最不稳定
❖ 沉淀剂
▪ 通常用醇降低蛋白的稳定性，也可润湿膜，减少膜带 有的静电，利于结合包被。
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蛋白邦定作用力
▪ 电荷作用力（静电作用 力）
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“潜水艇” 效应
❖表面活性剂处理过的膜在使用时的常见问 题
❖因为使用的表面活性剂是水溶性的 ❖喷膜时这些表面活性剂被“冲走”了
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反应动力学
❖流速增加,反应速率减低 ❖流速增加,检测时间缩短 ❖流速增加,灵敏度降低 ❖流速增加,试剂用量增加 ❖流速增加,背景降低 ❖距离增加,流速降低 ❖孔径增加,蛋白结合量减少
胶体金的生产
❖胶体金的形成是还原HAuCl4.
❖HAuCL4 + e-
Au0
❖还原剂越强，得到的金颗粒越小
❖生产 40nm诊断用金颗粒一般用柠檬酸三钠
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胶体金颗粒的形成
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胶体金的生产
❖2种重要步骤
▪ 直接形成 ▪ 分步形成
❖大多数人用分步形成
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二、和金子垫相关的配方和原理
❖和金子垫相关的工艺和配方有： 1）标记工艺； 2）金标稀释液 3）金垫处理液
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标记工艺
❖胶体金：一般指金的水溶液，又称金溶胶。 ---金以微小的粒子分散在水中所形成的金溶
胶。 其中分散的金颗粒直径一般在1~100nm之间，
❖盐
▪ 通常不会影响 ▪ 对某些蛋白，两性离子的盐类有助于蛋白结合 ▪ 减少信号强度，消假阳
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❖糖：对包被蛋白的稳定性有重要作用，减 缓老化速度，也可以增加亲水力。
❖惰性蛋白：对消除假阳有重要作用 ❖表面活性剂：增加亲水力，也可增色。
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缓冲液的基本成分
为负电荷分布。
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高质量结合物
❖单个分散的颗粒 ❖圆形颗粒 ❖很少聚集 这样得到的胶体稳定性 和重复性好
Cluster free, high quality gold reagent
Clustered, poor quality gold reagent Made by：QS HLJ
▪ 静电 ▪ 疏水力
这两种结合力的效应是什么?
▪ 使蛋白从溶液中分离出来 ▪ 长久结合作用
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ห้องสมุดไป่ตู้
❖静电作用力 静电作用力是正负电荷相互吸引产生的作用
力 ❖疏水作用力 疏水作用力又称为疏水键。它是由侧链的疏
水基团相互接近. 而形成的一种作用力。对 维持分子的三、四级结构起着重要的作用。 每一个蛋白质都具有疏水基团和亲水基团。
要点
❖蛋白的预处理
❖使用低浓度和正确的pH值，确保最小的聚 集
❖合适的蛋白量（可通过盐滴定进行评价）
❖搅拌速度、容器的洁净程度、离心的速 度
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盐滴定
❖盐滴定不能衡量蛋白单层的形成 ❖盐滴定只能代表盐溶液中多少量的蛋白可
以使胶体金稳定 ❖pH和时间都会有影响
各种缓冲系: Tris-HCl, PB, CB等 盐类：NaCl 糖：蔗糖，海藻糖等 表面活性剂：Tween20，Triton x-100等 惰性蛋白：Casein等 防腐剂 ：叠氮钠，卡松等
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推荐的起始缓冲液
❖10mM Phosphate pH 7.0 3% Ethanol
多位点结合
只有1个位点的结合是可逆的
多位点结合使得蛋白稳定在固相表面， 即使其中的每个单位点都是可逆的
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影响蛋白结合的因素
▪ 蛋白缓冲液 ▪ 使用的膜 ▪ 蛋白自身 ▪ 应用体系
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蛋白缓冲液
❖没有通用的缓冲液，不同的系统必须分别 优化。
❖作用：提供适合的PH, 改善亲水性, 增溶性, 提高稳定性
胶体金诊断试剂工艺 配方原则
内容
一、和膜相关的配方和原理 二、和金子垫相关的配方和原理 三、和样品垫相关的配方和原理 四、相关问题
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一、和膜相关的配方和原理
电镜下的NC膜
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硝酸纤维膜生产工艺图
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孔径定义的问题
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❖蛋白质疏水性状和亲水性状 当蛋白质溶解在溶剂中时，蛋白质处于非常
稳定的状态，此时蛋白质的亲水基团展开 在外，疏水基团收缩在内，亲水基团和水 分子接触，保证了溶解性的状态；当蛋白 质沉淀出来时，疏水基团展开，亲水基团 收缩，此时为疏水状态，也呈现不稳定的 固体状态，疏水基团和其他固体物的疏水 基团通过疏水作用力结合，达到固定的目 的。
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蛋白结合到固相材料上
❖ 蛋白结合到固相材料上是一个多步骤过程 ❖ 取决于
▪ 蛋白溶液扩散到固相表面 ▪ 蛋白从溶液中分离出来 ▪ 蛋白吸附到固相上 ▪ 蛋白重排到最低能态
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吸附过程
溶液中的蛋白
吸附
蛋白转移到表面区域 蛋白在表面重排
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孔径对侧向层析速度的影响
标称孔径 (m)
3 5 8 12
层析 4.5 cm 的时间 (sec)
245 185 140 100
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不同种类膜的 IgG结合能力
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不同种类膜的 BSA结合能力
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为什么蛋白会结合到膜上?
结合力是什么?
▪ 比较容易控制颗粒大小，CV也比较小 ▪ 能够生产出大颗粒胶体金
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颗粒大小对胶体的影响
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蛋白标记原理
❖蛋白质在等电点或稍偏碱的情况下，依 靠静电引力或疏水力或共价键，被牢固 地吸附于胶体金颗粒表。由于蛋白质分 子牢固地结合在金颗粒表面，形成一个 蛋白层，从而阻止了胶体金颗粒的相互 接触，使该胶联溶液较为稳定。
❖定律: “蛋白在缓冲液中越不稳定，蛋白结合力越
强”
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缓冲液的优化
❖ 离子强度
▪ 对于蛋白从溶液中脱离出来很重要，少量的离子强度， 蛋白难以从溶液中脱离沉淀出来，过量的的离子强度， 溶液配制中就已会出现沉淀。
❖ pH
▪ 蛋白在等电点最不稳定
❖ 沉淀剂
▪ 通常用醇降低蛋白的稳定性，也可润湿膜，减少膜带 有的静电，利于结合包被。
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蛋白邦定作用力
▪ 电荷作用力（静电作用 力）
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“潜水艇” 效应
❖表面活性剂处理过的膜在使用时的常见问 题
❖因为使用的表面活性剂是水溶性的 ❖喷膜时这些表面活性剂被“冲走”了
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反应动力学
❖流速增加,反应速率减低 ❖流速增加,检测时间缩短 ❖流速增加,灵敏度降低 ❖流速增加,试剂用量增加 ❖流速增加,背景降低 ❖距离增加,流速降低 ❖孔径增加,蛋白结合量减少
胶体金的生产
❖胶体金的形成是还原HAuCl4.
❖HAuCL4 + e-
Au0
❖还原剂越强，得到的金颗粒越小
❖生产 40nm诊断用金颗粒一般用柠檬酸三钠
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胶体金颗粒的形成
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胶体金的生产
❖2种重要步骤
▪ 直接形成 ▪ 分步形成
❖大多数人用分步形成
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二、和金子垫相关的配方和原理
❖和金子垫相关的工艺和配方有： 1）标记工艺； 2）金标稀释液 3）金垫处理液
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标记工艺
❖胶体金：一般指金的水溶液，又称金溶胶。 ---金以微小的粒子分散在水中所形成的金溶
胶。 其中分散的金颗粒直径一般在1~100nm之间，
❖盐
▪ 通常不会影响 ▪ 对某些蛋白，两性离子的盐类有助于蛋白结合 ▪ 减少信号强度，消假阳
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❖糖：对包被蛋白的稳定性有重要作用，减 缓老化速度，也可以增加亲水力。
❖惰性蛋白：对消除假阳有重要作用 ❖表面活性剂：增加亲水力，也可增色。
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缓冲液的基本成分
为负电荷分布。
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高质量结合物
❖单个分散的颗粒 ❖圆形颗粒 ❖很少聚集 这样得到的胶体稳定性 和重复性好
Cluster free, high quality gold reagent
Clustered, poor quality gold reagent Made by：QS HLJ
▪ 静电 ▪ 疏水力
这两种结合力的效应是什么?
▪ 使蛋白从溶液中分离出来 ▪ 长久结合作用
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ห้องสมุดไป่ตู้
❖静电作用力 静电作用力是正负电荷相互吸引产生的作用
力 ❖疏水作用力 疏水作用力又称为疏水键。它是由侧链的疏
水基团相互接近. 而形成的一种作用力。对 维持分子的三、四级结构起着重要的作用。 每一个蛋白质都具有疏水基团和亲水基团。