胶体金 ppt课件
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胶体金试纸条检测技术PPT课件
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6
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
胶体金标记技术（Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应 用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
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二、胶体金试纸条诊断技术的原理
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H5亚型AIV尿 囊液阳性结果
阴性对照
H5ＡIV细胞 毒阳性结果 阴性对照
16
谢谢观看!
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17
快乐工作，快乐生活！ 感谢您的聆听！ ！
欢迎批评指导！！
2019
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最常用的是双抗夹心法检测抗原检测线质检线吸收垫样品垫硝酸纤维素膜连接垫胶体金垫底板测定时将试纸条下端浸入液体标本中下端吸水材料即吸取液体向上端移动流经c处时使干片上的免疫金复合物复溶若标本中有待测特异抗原即可与免疫金复合物中的抗体结合此抗原抗体复合物流至测试区即被固相抗体捕获在膜上显出红色反应线条t
胶体金试纸条诊断技术
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一、简 介
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析 技术研制而成，该技术是90年代初在免疫渗 滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫 学检测技术，最先用于人绒毛膜促性腺激素 （ HCG） 的 测 定 和 乙 型 肝 炎 病 毒 表 面 抗 原 （HBsAg）等检测。
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4
胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功 能，而不被坏其生物活性，可以与蛋白质 等（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非 共价结合，形成胶体金标记物。
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5
➢胶体金的质量判定标准
胶体金技术简介 ppt课件
传染病（乙肝五项、艾滋,、梅毒、流感等） 肿瘤标志物（AFP、、粪便血红蛋白等）
心梗系列(肌钙蛋白、肌红蛋白、肌酸激酶）
毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒等）
畜牧兽医站, 商检系统, 传染病（禽流感、兽瘟疫等）
边检口岸,农牧类院系
和研究所
病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）
环保监测部门,研究机 有害物质超标 构
25
注意事项
试剂原料耗材的批号控制，确保来源可靠有保障 设置关键控制点，确保流程无差错 仪器定期维护校准 研发时即考虑一定生产量的工艺问题，避免上量后不匹配 均一性，稳定性
26
胶体金技术在中国的发展---回顾
1995年：国内基本空白，没有研发，1-2家生产单位仅是大包装分切 1997年：杭州艾康起步，依靠美国技术转让快速发展为国内第一品牌，
80年代：第一代产品，免疫渗滤法 (Flow Through)
90年代：第二代产品，免疫层析法 （Lateral Flow）,女性妊娠 HCG
21世纪：快速诊断方法适应市场需要， 胶体金技术进入快速发展期，成为IVD 的热点（传染病、毒品、食品安全、畜 牧兽医等领域）
3
两种技术的比较
免疫层析法
胶体金标记技术
容器清洁或硅化处理 胶体金颗粒制备 (负电)
颜色与颗粒的关系. 最佳标记颗粒大小40nm.
蛋白质最适用量测定:盐析法
17
NC膜与溶液喷点-NC膜
NC膜的性能
NC膜的选择 爬速对灵敏度的影响 底衬的作用 不同膜厂家的产品差异(Pall/Whatman/Millipore/Sartorius)
18
NC膜与溶液喷点---溶液喷点
C\T线溶液前处理: 1.过滤,0.2um孔径滤膜 2.离心1万转10分钟 喷点过程 头尾去除,喷点中的报废标志 C\T线喷点工艺(BJQ3000喷头)与接
心梗系列(肌钙蛋白、肌红蛋白、肌酸激酶）
毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒等）
畜牧兽医站, 商检系统, 传染病（禽流感、兽瘟疫等）
边检口岸,农牧类院系
和研究所
病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）
环保监测部门,研究机 有害物质超标 构
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注意事项
试剂原料耗材的批号控制，确保来源可靠有保障 设置关键控制点，确保流程无差错 仪器定期维护校准 研发时即考虑一定生产量的工艺问题，避免上量后不匹配 均一性，稳定性
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胶体金技术在中国的发展---回顾
1995年：国内基本空白，没有研发，1-2家生产单位仅是大包装分切 1997年：杭州艾康起步，依靠美国技术转让快速发展为国内第一品牌，
80年代：第一代产品，免疫渗滤法 (Flow Through)
90年代：第二代产品，免疫层析法 （Lateral Flow）,女性妊娠 HCG
21世纪：快速诊断方法适应市场需要， 胶体金技术进入快速发展期，成为IVD 的热点（传染病、毒品、食品安全、畜 牧兽医等领域）
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两种技术的比较
免疫层析法
胶体金标记技术
容器清洁或硅化处理 胶体金颗粒制备 (负电)
颜色与颗粒的关系. 最佳标记颗粒大小40nm.
蛋白质最适用量测定:盐析法
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NC膜与溶液喷点-NC膜
NC膜的性能
NC膜的选择 爬速对灵敏度的影响 底衬的作用 不同膜厂家的产品差异(Pall/Whatman/Millipore/Sartorius)
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NC膜与溶液喷点---溶液喷点
C\T线溶液前处理: 1.过滤,0.2um孔径滤膜 2.离心1万转10分钟 喷点过程 头尾去除,喷点中的报废标志 C\T线喷点工艺(BJQ3000喷头)与接
免疫胶体金技术ppt课件
λmax
橙色
518nm
橙色
522nm
红色
525nm
紫红ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
535nm
TEM Images of Colloidal Au
Average particle size ~ 17nm
Good gold colloids and bad (unstable) gold colloids
. 劣质金外形不均一，且 非球形，有凝集景象， 颗粒间变异系数较大
➢Final conjugation (IgG)
Take 100ml of gold sol and adjust to Ph9 Adjust the dialyzed and centrifuged antibody solution
(0.1ug/ul) to pH9.2 Add the determined amount of antibody solution dropwise
胶体金与蛋白质的结合胜利与否，取决于pH值，普 通只需在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才干结 实地结合，因此，标志之前须将胶体金溶液的pH值调至 待标志蛋白质的等电点略偏碱。
需求提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3，需求 降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl。测定金溶液的pH能 够损害pH测定计的探头，因此，普通用精细的pH试纸测 定其pH即可.
2. Adjust the antibody (0.1ug/ul) to the proper pH with 100nM K2CO3 or 100mM HC1.
3. Add the antibody to each tube in a series from 0150ul (ie 0-15ug in steps of 0, 1, 2, 3 ....15ug).
《免疫胶体金技术》课件
该技术适用于现场快速检测和应急响 应，为及时诊断和治疗提供了有力支 持。
简便操作
免疫胶体金技术操作简便，不需要复 杂的仪器和设备，降低了对实验条件 和技术的要求。
VS
该技术适用于基层医疗机构、实验室 及家庭自测等多种场景，方便快捷， 易于推广应用。
稳定性好
免疫胶体金技术稳定性好，试剂有效期长，可长时间保存，保证了检测结果的稳定性和可靠性。
《免疫胶体金技术》PPT课件
目 录
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备 • 免疫胶体金技术的特点与优势 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的挑战与前景
01
免疫胶体金技术概述
定义与原理
总结词
简述免疫胶体金技术的定义和基本原理。
详细描述
免疫胶体金技术是一种基于胶体金标记的免疫分析方法，利用胶体金作为示踪标记物，结合抗原抗体反应进行检 测和定量分析。其原理基于抗原抗体反应的特异性和胶体金的颜色变化，实现对目标物质的快速、灵敏和可视化 检测。
组装质控线
在硝酸纤维素膜上固定另一种 抗原或抗体，形成质控线。
组装试剂条
将硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸 和吸水纸按顺序粘贴成试剂条
。
质量检测与控制
外观检查
观察试剂条是否平整、无破损、颜色均匀。
稳定性检测
在不同温度和湿度条件下存放试剂条，观察 其稳定性。
性能测试
通过与已知浓度的标准品进行对比，检测试 剂条的灵敏度和特异性。
历史与发展
总结词
概述免疫胶体金技术的发展历程和重要突破。
详细描述
免疫胶体金技术最早可追溯到20世纪70年代，随着科学家对胶体金和免疫学研究的深入，该技术逐渐 发展成熟。近年来，免疫胶体金技术不断取得突破，在临床诊断、生物安全检测、食品安全检测等领 域得到广泛应用。
简便操作
免疫胶体金技术操作简便，不需要复 杂的仪器和设备，降低了对实验条件 和技术的要求。
VS
该技术适用于基层医疗机构、实验室 及家庭自测等多种场景，方便快捷， 易于推广应用。
稳定性好
免疫胶体金技术稳定性好，试剂有效期长，可长时间保存，保证了检测结果的稳定性和可靠性。
《免疫胶体金技术》PPT课件
目 录
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备 • 免疫胶体金技术的特点与优势 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的挑战与前景
01
免疫胶体金技术概述
定义与原理
总结词
简述免疫胶体金技术的定义和基本原理。
详细描述
免疫胶体金技术是一种基于胶体金标记的免疫分析方法，利用胶体金作为示踪标记物，结合抗原抗体反应进行检 测和定量分析。其原理基于抗原抗体反应的特异性和胶体金的颜色变化，实现对目标物质的快速、灵敏和可视化 检测。
组装质控线
在硝酸纤维素膜上固定另一种 抗原或抗体，形成质控线。
组装试剂条
将硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸 和吸水纸按顺序粘贴成试剂条
。
质量检测与控制
外观检查
观察试剂条是否平整、无破损、颜色均匀。
稳定性检测
在不同温度和湿度条件下存放试剂条，观察 其稳定性。
性能测试
通过与已知浓度的标准品进行对比，检测试 剂条的灵敏度和特异性。
历史与发展
总结词
概述免疫胶体金技术的发展历程和重要突破。
详细描述
免疫胶体金技术最早可追溯到20世纪70年代，随着科学家对胶体金和免疫学研究的深入，该技术逐渐 发展成熟。近年来，免疫胶体金技术不断取得突破，在临床诊断、生物安全检测、食品安全检测等领 域得到广泛应用。
实验六 胶体金免疫层析技术ppt课件
胶体金快速诊断技术的应用
病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、 新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。
寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊虫 病、恙虫病。
细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。
实验六 胶体金免疫层析技术
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H5亚型AIV尿 囊液阳性结果
实验六 胶体金免疫层析技术
阴性对照
H5ＡIV细胞 毒阳性结果 阴性对照
实验六 胶体金免疫层析技术
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胶体金试纸条诊断技术的原理
以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的 毛细作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另 一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体 金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。
最常用的是双抗夹心法检测抗原
实验六 胶体金免疫层析技术
7
胶体金试纸条示意图
样品垫
连接垫 （胶体金垫）
粒为球形，大小均一，无棱角。 ✓质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，
形状各异。
实验六 胶体金免疫层析技术
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简介
胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带 负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电 吸引而形成牢固结合。
胶 体 金 标 记 技 术 （ Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应用 于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。
胶体金试纸条诊断技术
肖书奇
电话：
E-mail:
实验六 胶体金免疫层析技术
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实验目的
掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方 法及结果的判定
实验六 胶体金免疫层析技术
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简介
胶体金试纸条诊断是采用胶体金免疫层析 技术研制而成，该技术是90年代初在免疫 渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的 免疫学检测技术，最先用于人绒毛膜促性 腺激素（HCG）的测定和乙型肝炎病毒表 面抗原（HBsAg）等检测。
胶体金的制备及其应用PPT课件
胶体金用于电镜水平的研究，主要包括：①细胞悬液 或单层培养中细胞表面抗原的观察。②单层培养中细胞内 抗原的检测。③组织抗原的检测。
金标记在电镜水平的应用，主要方法包括： 包埋前染色、包埋后染色、免疫负染色、双标记 技术和原位杂交技术等。
实验证明，该法样本用量少、检测速度快、 对比明显、操作简单、敏感性和特异性高，既可 用于抗原检测，也可用于抗体检测，因此，可同 时适用于科研和诊断。
• 目前电镜水平的免疫金染色(IGS)，光镜水平的 免疫金银染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑点免疫 金染色技术日益成为科学研究和临床诊断的有力 工具
免疫胶体金技术的基本原理
• 免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度
的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑 褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚 集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定 性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也 可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银 染色。
主要内容
• 概述 • 免疫胶体金技术的基本原理 • 胶体金的特性 • 胶体金的制备方法 • 胶体金的鉴定和保存 • 免疫胶体金制备和保存 • 免疫胶体金应用
概述
• 胶体金溶液：胶体金溶液是指分散相粒子直径
在l—150 nm之间的金溶胶，属于多相不均匀体系， 颜色呈桔红色到紫红色。
• 1971年胶体金作为标记物开始用于免疫组织化 学,Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察 沙门氏菌,此后他们把胶体金与多种蛋白质结合；
下述标记步骤最为常见：
• ①用0.1mol/L K2CO3或0.1mol/L HCl调节金溶胶至所需pH( 标记ＳＰＡ时调到pH6.0)。
金标记在电镜水平的应用，主要方法包括： 包埋前染色、包埋后染色、免疫负染色、双标记 技术和原位杂交技术等。
实验证明，该法样本用量少、检测速度快、 对比明显、操作简单、敏感性和特异性高，既可 用于抗原检测，也可用于抗体检测，因此，可同 时适用于科研和诊断。
• 目前电镜水平的免疫金染色(IGS)，光镜水平的 免疫金银染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑点免疫 金染色技术日益成为科学研究和临床诊断的有力 工具
免疫胶体金技术的基本原理
• 免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度
的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑 褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚 集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定 性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也 可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银 染色。
主要内容
• 概述 • 免疫胶体金技术的基本原理 • 胶体金的特性 • 胶体金的制备方法 • 胶体金的鉴定和保存 • 免疫胶体金制备和保存 • 免疫胶体金应用
概述
• 胶体金溶液：胶体金溶液是指分散相粒子直径
在l—150 nm之间的金溶胶，属于多相不均匀体系， 颜色呈桔红色到紫红色。
• 1971年胶体金作为标记物开始用于免疫组织化 学,Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察 沙门氏菌,此后他们把胶体金与多种蛋白质结合；
下述标记步骤最为常见：
• ①用0.1mol/L K2CO3或0.1mol/L HCl调节金溶胶至所需pH( 标记ＳＰＡ时调到pH6.0)。
胶体金技术的应用及展望PPT课件
This paper mainly introduces the design of an intelligent temperature control system which realizes the function of temperature measurement and control by using single bus digital temperature sensor DS18B20 and single chip microcomputer. The core components of the system are AT89C51 m sensor.
肌梗死）. The determination assays for human myoglobin（肌红蛋白）,
cardiac troponin complex（肌钙蛋白复合物） and the MB isoform of the
enzyme creatine kinase are presented. Cyclic voltammetry measurements
机理
根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗 粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和 生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学 、组织学、病理学和细胞生物学等领域。
This paper mainly introduces the design of an intelligent temperature control system which realizes the function of temperature measurement and control by using single bus digital temperature sensor DS18B20 and single chip microcomputer. The core components of the system are AT89C51 m sensor.
胶体金介绍ppt课件-PPT课件
3、PVC板 PVC板是用来承载膜、金子、 辅料等成分的底板，它是试纸 条的骨架。 PVC板的标准：板上的粘性 要适中；板的长度要合乎规格； 板的硬度也要达到一定的标准。
评价一个试剂的标准
评价一个试剂好坏的标准有： 1、灵敏度 2、特异性 3、背景 4、吸样和上样 5、和对照试剂比较 6、市场反馈 7、检验机构的评价
结果判读
怀孕
与常规诊断方法相比
优点 快速：全部检测过程仅需 3-10分钟。 简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，无需专 业人员，携带方便，可随时随地进行。 廉价：单个测试条成本极低 可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立 刻拿到结果，不必等待。 稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存。 检测标本种类多：既可用于查血，又可用于检尿或唾液， 因而适合各种检查 缺点 定量问题 灵敏度问题
试纸条组成结构
胶体金垫 样品垫 控制线（C线） 吸水滤纸
PVC底板
层析方向 测试线 （T线）
NC膜（硝酸纤维素膜）
胶体金层析法一般原理介绍
（双抗体夹心）
（以HCG检测为例）
视频
早早孕产品形式
图片
形式
试纸条
卡型
笔型
电子验孕笔
价格
最经济
3-5元
5-10元
>$5.0
（国外价格）
使用方法
1.试纸：将试纸条标： “MAX”一端浸入尿液，尿液液面请勿 超过标志线，待尿液爬至观察区后取出试纸条平放。3-5分钟 观察结果，10分钟后无效。 2.用吸管吸取尿液，加入4滴到检测卡的加样孔中，3-5分钟观察 结果，10分钟后无效。 3.将尿液滴加到试纸上或直接淋在检测笔的吸尿棒上，尿液爬上 后平放，10分钟观察。
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影响胶体金溶液稳定性的主要原因
• ①胶粒间的相互吸引力。当胶粒相距很近时， 这种吸引力可能导致胶粒合并变大。
• ②水化层的带电情况。一种溶胶的各个胶粒 都带有相同的电荷。同性电荷相斥，双电层 愈厚，胶粒带电量愈大，排斥力愈大，愈能 阻止胶粒合并聚结，溶胶愈稳定。
• ③胶体界面的溶剂膜，当二固体间夹有 一厚层液体时，这层液体膜有一个反抗 二固体接近的排斥力。两个胶粒要进一 步接近，只有克服它们之间的溶剂化膜 的斥力才有可能，因此溶剂膜的斥力是 使溶胶稳定的原因之一。
5.胶体金保存
• 胶体金在洁净的玻璃器皿中可较长时间 保存，加入少许防腐剂（如0.02％NaN3） 可有利于保存。保存不当时会有细菌生 长或有凝集颗粒形成。少量凝集颗粒并 不影响以后胶体金的标记，使用时为提 高标记效率可先低速离心去除凝集颗粒。
6.注意事项
• （1）氯金酸易潮解，应干燥、避光保存。 • （2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此
在配制氯金酸水溶液时，不应使用金属药匙 称量氯金酸。 • （3）用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏 水或三蒸馏水，或者是高质量的去离子水。 • （4）用以制备胶体金的玻璃容器必须是绝 对清洁的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。 最好是经硅化处理的，硅化方法可用5％二 氯甲硅烷的氯仿溶液浸泡数分钟，用蒸馏水 冲净后干燥备用。
2.技术要点
• （1）胶体金溶液的pH值调整 用K2CO3或 HC1溶液调节胶体金溶液的pH至选定值。原 则上可选择待标记蛋白质等电点，也可略为偏 碱。但通常最适反应pH往往需经多次试验才 能确定。
• 在调节胶体金的pH值时应注意，胶体金会阻 塞pH计的电极，不可直接将电极插入胶体金 溶液中，宜先用终浓度为0.1％的聚乙二醇 （PEG20000）稳定胶体金后，再测定胶体金 的pH值。
4.胶体金鉴定
• 胶体金的制备并不难，但要制好高质量的胶体金 却也并非易事。因此对每次制好的胶体金应加以 检定，主要检查指标有颗粒大小，粒径的均一程 度及有无凝集颗粒等。在日光下仔细观察比较胶 体金的颜色，可以粗略估计制得的金颗粒的大小。 当然也可用分光光度计扫描λmax来估计金颗粒的 粒径。制备的胶体金最好作电镜观察，并选一些 代表性的作显微摄影，可以比较精确地测定胶体 金的平均粒径。 良好的胶体金应该是清亮透明的， 若制备的胶体金混浊或液体表面有漂浮物，提示 此次制备的胶体金有较多的凝集颗粒。
• （2）蛋白质最适标记量的确定 将待标记蛋白 作一系列稀释后各取一定量加入装有一定量胶 体金的试管中，然后分别加入NaCl溶液，混匀 后静置数小时，对照管(无蛋白)及加人蛋白量不 足的管，溶液颜色由红变蓝;蛋白量足或超过的 管保持红色不变，其中含蛋白量最低的一管即
为稳定胶体金所必须的最适标记量。以此比例 并增加10%-20%即为标记全部胶体金溶液所需 的蛋白总量。
这一特点，用肉眼观察胶体金的颜色或
吸收峰波长大小可粗略估计金颗粒的大 小（如表20-1所示）
3.胶体金的制备
• （1）制备原理 向一定浓度的金溶液内加入一定量的还原剂
使金离子变成金原子，形成金颗粒悬液。 目前常用的还原剂有：白磷、乙醇、过氧 化氢、硼氢化钠、抗坏血酸、枸橼酸钠、 鞣酸等。
• （2）操作要点
• 2.胶体金性状
• （1）胶体金一般性质：胶体金颗粒大小 多在1～100nm，微小金颗粒稳定地、均 匀地、呈单一分散状态悬浮在液体中， 成为胶体金溶液。胶体金因而具有胶体 的多种特性，特别是对电解质的敏感性。 电解质能破坏胶体金颗粒的外周水化层， 从而打破胶体的稳定状态，使分散的单 一金颗粒凝聚成大颗粒，而从液体中沉 淀下来。某些蛋白质等大分子物质有保 护胶体金、加强其稳定性的作用。
一、胶体金特性及其制备
• 1.胶体金的结构 胶体金（colloidal gold） 也称金溶胶（gold solution），是由金盐 被还原成原金后形成的金颗粒悬液。 胶 体金颗粒由一个基础金核（原子金Au） 及包围在外的双离子层构成，紧连#43;则分散在胶体间溶液中， 以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态。
金免疫技术
金免疫技术（colloidal gold immunoassay technique）是一种以胶体金作为标记物的免疫 标记技术，于70年代初期由Faulk和Taylor始创， 最初用于免疫电镜技术。
目前，金免疫技术除用于免疫组织化学染色外， 还应用于金免疫测定中，由于金标记常与膜载 体配合，形成特定的测定模式，典型的如斑点 免疫渗滤试验和斑点免疫层析试验等，已是目 前应用广泛、简便、快速的检验方法。
二、免疫金的制备
• 免疫金（immunogold）是指胶体金与抗 原（抗体）的结合物,在免疫组织化学技 术中，习惯上要称之为金探针。
1.制备原理
• 胶体金颗粒表面带负电荷，与蛋白质的 正电荷基团间靠静电力相互吸引，达到 范德华引力范围内即形成牢固的结合,同 时胶体金颗粒的粗糙表面也是形成吸附 的重要条件。因此环境pH和离子强度是 影响吸附的主要因素，其他如胶体金颗 粒的大小、蛋白质的分子量及蛋白质浓 度等也会影响蛋白质的吸附。
最常用的制备方法为柠檬酸盐还原法。
①先配制HAuC14水溶液，加热至沸。②搅动下准 确加入一定量的柠檬酸三钠 （Na3C6H5O7·2H2O）水溶液。③继续加热煮 沸一定时间。此时可观察到淡黄色的氯金酸水溶 液在柠檬酸钠加入后很快变灰色，续而转成黑色， 随后逐渐稳定成红色。全过程约2～3min。④冷 却至室温后用蒸馏水恢复至原体积。通过改变柠 檬酸三钠的用量可以制得不同大小的胶体金颗粒
• （2）胶体金的颜色和光吸收性：对同一
种物质的水溶胶金颗粒来说，粒子大小 不同，颜色亦不同，胶体金颗粒在5～ 20nm之间，吸收波长520nm，呈葡萄酒 红色，20～40nm之间吸收波长530nm， 液体为深红色，60nm的金溶液主要吸收 波长600nm，金溶液呈兰紫色，若离心
去掉较大的金颗粒，溶胶呈红色。根据