炔类药物及其代谢物的高效衍生-电喷雾质谱分析

分类号

学校代码１０５４２密级

学号２０１００２１２１３６６

炔类药物及其代谢物的高效衍生

一电喷雾质谱分析

Ｈｉｇｈｌｙ—ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｄｅｒｉｖａｔｉｏｎｆｏｒＥＳＩ－ＭＳｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｌｋｙｎｙｌｄｒｕｇｓａｎｄｔｈｅｉｒ

ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ

?…‘

研究生姓名指导教师姓名、职称学科专业研究方向

朱卫桃

郭宾副教授

药物分析

色谱与药物分析

湖南师范大学学位评定委员会办公室

二零一三年五月

摘要

本文研究的炔类药物是指化学结构中含有炔基基团的化合物，包括人工合成和天然来源药物，如长效雌激素、孕激素、单胺氧化酶抑制剂、烯二炔类抗生素、逆转录酶抑制剂等，在人工避孕、降血糖、抗癌等方面应用较广。多数炔类药物在服用后的体内代谢过程复杂，其检测难点是含量低、结构多样、基质干扰大，同时又因离子化问题（如炔类激素）Ｉ琨ＮＴ高灵敏度和选择性质谱的运用。为实现复杂生物基质中炔类药物的有效分析，本论文从分子结构修饰入手，探索新型的样品衍生化策略，进而建立一种高效、专一、灵敏的高效液相色谱．质谱生物体液检测方法，因此在拓展常规质谱检测技术的运用范围上具有重要的方法学意义。

基于炔类药物结构有着相同的炔基基团，本课题利用点击化学反应原理将叠氮化合物与待测物分子环化加成，生成质荷比增大的衍生物离子，不仅提高了分析物在电喷雾质谱中的离子化效率，而且有效降低基质中的杂质干扰；同时该方法具有产率高、副产物少、产物易于分离、反应条件简单等优点，便于对炔类药物的进行定量分析。这种基于学科交叉优势的新型检测筛选方法很适合“一锅法’’对生物基质中的多种端基炔类激素的同时定量检测和代谢物的定性鉴别。该方法被成功运用于相关激素类药物及其复杂代谢产物的检测和筛查。

本论文的主要工作如下：

１．基于叠氮．炔点击反应的化学原理，首先优化筛选出一种高效

的催化剂，以提高反应方法的衍生效率，进而考察和验证不同结构叠氮化合物衍生剂的有效性。论文以５种端基炔类物质为研究对象考察了强溶剂、溶剂比、反应温度、反应时间、催化剂浓度等条件对目标物离子化效率的影响，并获得最佳点击反应条件。

２．基于上述最佳衍生化条件，建立了复杂生物基质中９种端基炔类激素的点击反应液相．串联质谱分析方法。重点考察了血清和尿液中点击方法的最佳条件，建立采用“一锅法”对生物基质中的多组分端基炔类激素进行同时点击反应．定量检测，并对方法学的可靠性和实用性进行验证。

３．基于细胞色素Ｐ４５０酶对药物代谢的催化转化，采用人肝微粒体体外代谢系统开展５种激素类药物的代谢转化研究，进一步运用新建的高效液相点击．质谱法对代谢生成的中间产物或代谢物进行筛查，表明该点击反应的衍生化手段特别适用于具有特征质谱碎片的代谢物检测，结合二级质谱离子的特征丢失和裂解行为，可准确识别和发现新型代谢产物，为炔类药物的代谢研究提供新型分析手段。

关键词：炔类药物，点击化学，化学衍生，代谢产物，电喷雾

ＩＩ

ＡＢＳＴＲＡＣＴ

Ａｌｋｙｎｙｌｄｒｕｇｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｉｎｔｈｅｐａｐｅｒｒｅｆｅｒｓｔｏｃｏｍｐｏｕｎｄｓｔｈａｔ

ｃｏｎｔａｉｎａｌｋｙｎｙｌｇｒｏｕｐｓｉｎｃｈｅｍｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．Ｉｔｉｎｃｌｕｄｅｓｓｙｎｔｈｅｔｉｃｄｒｕｇｓａｎｄｎａｔｕｒａｌｐｒｏｄｕｃｔｓ，ｓｕｃｈａｓｌｏｎｇ—ｔｅｒｍｅｓｔｒｏｇｅｎ，ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ，ｍｏｎｏａｍｉｎｅｏｘｉｄａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ｅｎｅｄｉｙｎｅａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ｗｈｉｃｈａｒｅｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄａｓｃｏｎｔｒａｃｅｐｔｉｖｅ，ｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃａｎｄａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒ

ｏｆｔｈｅｓｅａｇｅｎｔｓ，ｅｔｃ．Ａｆｔｅｒｕｐｔａｋｅ，ｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｃｐｒｏｃｅｓｓｅｓ

ｄｒｕｇｓｉｎｖｉｖｏａｒｅｏｆｔｅｎｃｏｍｐｌｅｘ．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙｄｕｅｔｏｔｈｅｉｒｌｏｗ

ａｎｄｃｏｍｐｌｅｘｍａｔｒｉｘｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ．ｃｏｎｔｅｎｔ，ｄｉｖｅｒｓｉｆｙｉｎｇｓｔｒｕｃｔｕｒｅ

Ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｔｈｅｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｐｒｏｂｌｅｍｓ（ｓｕｃｈａｓａｃｅｔｙｌｅｎｅｈｏｒｍｏｎｅ）ｌｉｍｉｔｓｔｈｅ

ａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｖｅｍｏｄｅｍｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｈｉｇｈｌｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅ

Ｔｏｉｍｐｌｅｍｅｎｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｃｅｔｙｌｅｎｅｄｒｕｇｓｉｎｃｏｍｐｌｅｘｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓ，ｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｄｅｖｅｌｏｐｅｓａｎｅｗｓａｍｐｌｅｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎｓｔｒａｔｅｇｙ，ａｎｄｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｓａｈｉ曲ｌｙｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｅｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＨＰＬＣ—ＭＳ）ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｌｕｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｕｓｉｔｉｓｏｆｉｍｐｏｒｔａｎｔｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｉｎｅｘｐａｎｄｉｎｇｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．

Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｋｙｎｙｌｇｒｏｕｐｉｎｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｔｈｅｐａｐｅｒｔａｋｅｓａｄｖａｎｔａｇｅｏｆｃｌｉｃｋｃｈｅｍｉｓｔｒｙｒｅａｃｔｉｏｎ，ｕｓｉｎｇａｚｉｄｅｃｙｃｌｉｚａｔｉｏｎａｄｄｉｔｉｏｎｔｏ

ＩＩＩ

ｈｏｒｍｏｎｅｓｉｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｉｔｐｕｔｓｅｍｐｈａｓｉｓｏｎｔｅｓｔｉｎｇｔｈｅｃｌｉｃｋｍｅｔｈｏｄｉｎｓｅｒｕｍａｎｄｕｒｉｎｅａｎｄｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｓｔｈｅ”ｏｎｅ—ｐｏｔｍｅｔｈｏｄ”ｕｓｅｄｉｎｃｌｉｃｋｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｉｓｖａｌｉｄａｔｅｄｂｙｍｕｌｔｉｐｌｅ

ａｎｄｐｒａｃｔｉｃａｂｉｌｉｔｙｏｆａｃｅｔｙｌｅｎｅｈｏｒｍｏｎｅｓ，ａｎｄａｌｓｏｔｅｓｔｉｆｅｓｔｈｅｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ

ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ．

３．ＢａｓｅｄｏｎｔｈｅｃａｔａｌｙｔｉｃｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎｏｆｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０ｅｎｚｙｍｅｓｉｎ

ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｄｒｕｇｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ｔｈｅａｕｔｈｏｒｄｏｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｃ

ｏｆｆｉｖｅｈｏｒｍｏｎｅｄｒｕｇｓｂｙｕｓｉｎｇｖｉｔｒｏｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｓｙｓｔｅｍｏｆｈｕｍａｎｌｉｖｅｒ

ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｓｏｒｍｉｃｒｏｓｏｍｅｓ．Ｄｕｒｉｎｇｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｚｉｎｇｐｒｏｃｅｓｓｔｈｅ

。ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓａｒｅｓｒｅｅｎｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｈｅｌｐｏｆｎｅｗｌｙ－ｂｕｌｉｔｍｅｔｈｏｄｏｆｃｌｉｃｋ．ｂａｓｅｄＨＰＬＣ－ＭＳ，ｗｈｉｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｓｔｈａｔｔｈｅｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｌｉｃｋｒｅａｃｔｉｏｎｉｓｑｕｉｔｅｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｔｈｅｔｅｓｔｏｎｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｂｙｕｓｅｏｆｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｆｒａｇｍｅｎｔｓ．ＴｈｅｃｌｉｃｋｒｅａｃｔｉｏｎＣａｎｃｏｒｒｅｃｔｌｙｒｅｃｏｇｎｉｚｅｔｈｅｎｅｗｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｅｃｏｎｄａｒｙｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｕｍｉｏｎｓ．Ｔｈｕｓｉｔｐｒｏｖｉｄｅｓａｎｅｗａｎａｌｙｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｆｏｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｏｆａｃｅｔｙｌｅｎｅｄｒｕｇｓ．

ＫｅｙＷｏｒｄｓ：ａｌｋｙｎｙｌｄｒｕｇｓ，ｃｌｉｃｋｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｆｉｖｍｉｏｎ，ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ，ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ

Ｖ

目录

摘要………………………………………………………………………．ＩＡＢＳＴＲＡＣＴ…………………………………………………………………………………ＩＩＩ第一章绪论……………………………………………………………．．１１．１点击反应的简述……………………………………………………．．１１．２高效液相一电喷雾．质谱分析法简述……………………………．３１．３炔类药物的检测及代谢物的检测简介…………………………５１．４本论文的研究意义………………………………………………７第二章炔类物质点击反应方法的研究………………………………９２．１引言…………………………………………………………………………………．．９２．２实验部分…………………………………………………………．．９２．３结果与讨论………………………………………………………．１４２．４结论…………………………………………………………………………………１９第三章液相一串联质谱法对生物基质中９种端基炔类激素的点击反应检测……………………………………………………………………………………………．２０３．１前言…………………………………………………………………………………２０３．２实验部分…………………………………………………………２０３．３结果与讨论…………………………………………………………２４３．４小结…………………………………………………………………………………３７第四章端基炔类激素代谢物灵敏筛选…………………………………４２４．１前言…………………………………………………………………………………４２４．２实验部分………………………………………………………………４２

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１．１．２点击化学的应用

１．１．２．１先导化合物库的建立

炔基化合物与叠氮化合物的加成产物具有Ｎ杂环结构，因此可以通过带有炔基或叠氮基的简单序列合成一系列结构复杂的、多样性的先导化合物库。如Ｅｉｃｈｌｅｒ等【６】通过Ｈｕｉｓｇｅｎｌ，３．偶极环加成反应来组装缩氨酸的分子架，从而制得种类多的缩氨酸的组合化合物库。Ｔｈｏｒｓｏｎ等【７】利用点击反应生成的具有类似天然产物性能的万古霉素，这些抗生素类似物可供临床使用。美国Ｃｏｅｌａｃａｎｔｈ公司利用液相点击方法合成了２０００００个单体化合物，这些单体化合物的纯度都达到８５％以上，引起很大的关注。

１．１．２．２原位点击化学

目前原位点击化学用来合成天然化合物以及对传统药物合成和进一步筛选方面取得很大的进展。它依靠酶为反应模板，选择性连接各模块组分，因此能合成酶自身的抑制剂。Ｍｕｌｄｏｏｎ等【８】以ＨＩＶ－１蛋白酶本身作为反应模板，通过１，３．偶极环加成反应，加快反应速率合成了ＨＩＶ－１蛋白酶抑制剂，该抑制剂成为治疗ＡＩＤＳ的有效药物。

１．１．２．３点击反应与生物藕联技术

Ｃｕ（Ｉ）催化体系在体内、体外生物的应用比较广泛，反应条件温和，有生物兼容性，已经运用于ＤＮＡ和蛋白质的标记。Ｊｕ等【９】利用Ｈｕｓｉｇｅｎｌ，３．偶极环加成将标记的叠氮基单链ＤＮＡ与６．羰基荧光素丙炔胺在含水的条件下反应，该反应产率高，几乎没有副产物，反应条件很温和，用于ＤＮＡ测序。蛋白质在生理和病理上都发挥着极其重要的作用‘１０】，利用点击化学检测蛋白质的活性以及分析蛋白质的表达和功能［１ｌ】。该方法解决了传统方法在活体细胞和器官中难以运用的缺点。近年来，点击标记方法在放射性药物合成中逐渐得到关注，如Ｍａｒｉｋ［１２】等利用合成含１８Ｆ的炔基化合物，通过点击反应得到多肽的１８Ｆ放射性标记。１．１．２．４点击反应与高分子化学

为了提高特殊结构的高分子性能，通过改变某些功能基团来实现聚合物的优良性能。姚荣兴等【１３】利用常用催化剂硫酸铜和抗坏血酸钠催化含有氟基的叠氮化合物和带有乙炔基的化合物的１，３．偶极环加成反应，不仅在物理性能上发生了变

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炔类药物及其代谢物的高效衍生一电喷雾质谱分析

化，还提高了该高分子的热稳定性。王臻等【１４】利用点击反应制备的催化剂多聚萨伦锰（ＩＩＩ）Ｓａｌｅｎ－Ｍｎ（ＩＩＩ）在苯乙烯环氧化反应中有良好的催化性能。１．１．２．５点击反应在其它领域的应用

点击反应还可以用于生物分子的固定以及物质表面功能化。Ａｄｒｏｎｏｖ［”Ｊ利用

１，３．偶极环加成反应合成了聚苯乙烯修饰的单层碳纳米管，反应条件温Ｈｕｉｓｇｅｎ

和，在溶液中的稳定性好。Ｌｉｎ等【１６】利用点击反应将炔基化或叠氮化的小分子和生物大分子键合到磁性纳米粒子的表面，通过荧光活性的强弱来判断该反应成功与否。也有通过链接反应将香豆素键合到由叠氮基修饰的硅表耐１７Ｊ。１．１．３本研究中点击反应的考察

鉴于Ｃｕ＋催化叠氮化物和端基炔的１，３一偶极环加成反应（ＣｕＡＡＣ）的优点，本论文利用该点击反应的优点对端基炔类物质进行分析检测。本论文利用带有易电离的叠氮物质将极性弱的炔类激素进行衍生后，进行ＬＣ．ＥＳＩ．ＭＳ／ＭＳ检测。考察该分析方法的可行性，我作了多方面的研究。影响ＣｕＡＡＣ反应的因素有很多，比如溶剂的选择，Ｃｕ＋的来源，配体的选择等如表１．１。

表１－１ＣｕＡＡＣ反应的影响因子

Ｔａｂ．１－１ＩｍｐａｃｔｆａｃｔｏｒｏｆＣｕＡＡＣｒｅａｃｔｉｏｎ

１．２高效液相．电喷雾．质谱分析法简述

自２０世纪８０年代发展起来的高效液相色谱．电喷雾电离质谱法（ＨＰＬＣ．ＥＳＩ／ＭＳ）分析技术，该技术结合了液相色谱的高分离能力与质谱的高选择性和高灵敏度有机结合。

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１．２．１ＥＳＩ的阐述和应用

电喷雾离子化技术（ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ，ＥＳＩ）利用强静电场将溶液状态直接转化为气态离子分子，是Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ等【４５】发明的。电喷雾的应用范围比较广，能分析的化合物种类多，如天然产物附】、蛋白质ｔ４ｒｌ、违禁药物【４８１、聚合物｛４９１、有机合成物［５０】、药物及其代谢物【５ｌ】等物质。在过去的十年中，电喷雾质谱法以自身的优势已经远远超越传统的方法，并在液相机理研究中占领了显著的地位，以高效“钓鱼”方式（快速、灵敏、特定以及同步检测／鉴定），把复杂中间体和产物直接从原来的环境中分离出来【５２１。

ＥＳＩ是软电离技术，ＥＳＩ电离的主要缺陷是不能直接分析非极性的化合物，只有在溶液中以离子的形式存在的化合物容易被电离【５３１，传统的分析方法如薄层色谱法、染色法等很难区分这些非极性和中等极性的甾醇类化合物，缺少专一性和灵敏度，但是这些化合物在生物化学中的作用极为重要。衍生化手段有助于信号强，且稳定，因此通过化学衍生的方法来克服这种难电离的局限性，采取容易离子化的基团以共价键与非极性目标物连接，该方法具有高灵敏度和专一性。ＫＭｅｔｚｅｒ掣５４１采用吡啶三氧化硫复合物为衍生剂与胆固醇结合，生成硫酸酯衍生物，该产物具有很高的负离子电离效率，容易被检测到。具有代表性的衍生化官能团如酚羟基、氨基、羰基等都有相应的衍生试剂，可用来作衍生定量分析错误！未找到引用源。。特别是生物样品的成分很复杂，微量成分的测定容易受内源性物质的干扰，因此衍生方法在测定复杂生物基质成分和代谢研究方面尤为重要。对于炔雌醇等带有酚羟基的化合物，可以通过单磺酰氯衍生来提高检测信号［ｓ９－６Ｈ

ｏ

１．２．２质量分析器的研究

目前常用的质量分析器有四极杆（ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ）、（Ｑ１Ｑ２Ｑ３）－－重四级杆、离子肼（ＩＴ）、飞行时间（ＴＯＦ）、傅里叶转换．离子同旋加速共振（ＦＴｒ．ＩＣＲ）。样品在离子源中电离成质荷比不同的碎片离子，质量分析器将不同的质荷比按大小顺序依次到达检测器，从而得到不同的质谱图。分析器的不同使得分辨率、精确度和灵敏度方面存在差异。本课题选择的Ｑ１Ｑ２Ｑ３在多反应监狈１］（ｍｕｌｔｉｐｌｅ．ｒｅａｃｔｉｏｎｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ，ＭＲＭ）的模式下，经过Ｑｌ中确定母离子的质荷比，通过在Ｑ２内的碰撞活化之后，在Ｑ３中选择母离子中的特征子离子进行扫描。ＡＰｌ４０００三重四

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第二章炔类物质点击反应方法的研究

２．１引言

本体系研究的创新点主要是将带有端基炔类的物质通过运用点击反应的方法进行衍生前处理，使其在电喷雾质谱中电离效率极具增强。该点击方法具有产率高、副产物少、产物易于分离，反应条件简单等优点，以及结合电喷雾效率高，便于对反应产物进行定量分析。该点击方法运用很广泛，主要是在有机合成和化合物库的建立。２０１１年王丽芳等人【８３１将点击反应首次用于分析领域中的ＬＣ．ＭＳ检测，使用传统的分析平台如ＬＣ和ＭＳ来检测叠氮离子是一项艰巨的任务，对于低分子量的叠氮离子，在ＬＣ．ＭＳ中有强背景干扰，该作者采用大分子量的炔来衍生化叠氮离子，能高选择性、快速、定量检测叠氮离子。说明该点击方法很．．适用于普通实验室，能够做到真正解决实际问题。本论文利用相同的原理对炔类物质进行检测研究。

根据Ｃｕ０）催化的ｌ，３．偶极环加成反应可行性，需要考虑反应底物炔类物质和衍生试剂叠氮化合物口ｏ，洲、强溶剂的选择及与水的比例【１９，３６１、配体的选择【１９’８５瑚】，其中最重要的是催化剂的选择㈣３２，３８一－９０］。本体系对这些影响点击反应的方法进行全面的研究，从而找到最适合的点击方法用于电喷雾质谱分析。考虑到反应中的固体催化剂经过高速离心易于除去，一开始选用了三种自己制备的一价铜催化剂，这三种一价铜催化剂分别是Ｃｕ／ＡＩＯ（ＯＨ）Ｅ３７１、Ｃｕ／Ｃ［３３，４１，９１］、ＣｕＣｌ［３６１，实验结果不理想，没有得到相应的产物。因此选用了常用催化剂ＣｕＳ０４／ＮａＡｓｃ进行研究。

２．２实验部分

２．２．１仪器与试剂

ＡＰＩ４０００ＱＴｒａｐ质谱仪，配有ＥＳＩ离子源（美国应用生物系统公司）；１１００型高效液相色谱仪（美国Ａｇｉｌｅｎｔ仪器有限公司）；ＡｇｉｌｅｎｔＥｃｌｉｐｓｅＣ１８（１５０ｍｍｘ４．６ｎⅡｎ，５ｌａｍ，Ａｇｉｌｅｎｔ公司）。

ＭＥＴＴＬＥＲＴＯＬＥＤＯ电子天平（上海梅特勒一托利多，中国）；ＳＨＢ—ＩＩＩ循环水

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式多用真空泵；ＫＱ３２００Ｅ型超声波清洗器（昆山，中国）；ＬＤ４－２Ａ型号离心机。

表２－１主要药品和试剂

Ｔａｂ．２?１Ｍａｉｎｄｒｕｇｓａｎｄｒｅａｇｅｎｔｓ

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