液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯
液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯
华南师范大学实验报告课程名称仪器分析实验实验项目液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯实验类型□验证□设计□综合实验时间2010 年 3 月31 日实验指导老师实验评分一、实验目的1.掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法；2.了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术。
二、实验原理高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。
储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内。
由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动是，经过反复多次的吸附－解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，记录成数据。
液相色谱的定性依据是保留时间的相对性，通常相对误差不能大于5%。
定量参数常常采用峰高、峰面积、相对峰高、相对峰面积等。
定量方法通常采用外标法、内标法和面积归一化法。
外标法为标准物质标准溶液制定标准曲线法；内标法为在标准溶液、样品溶液中加入内标物质，以相对峰高、相对面积对标准物质的浓度制定标准曲线；面积归一化法假定所有出峰物质的吸光系数相同，计算某物质的峰面积占所有峰面积的百分比。
三、仪器与试剂：1.仪器：SCL-10A vp紫外可见双波长检测器；SPD-M10A vp柱温箱；LC-10AT高效液相色谱仪；10μL微量注射器2.试剂：2μL/mL苯标液；2μL/mL甲苯标液；0.2μL/mL、2μL/mL、4μL/mL、10μL/mL的苯与甲苯的混合标准溶液；甲醇溶液；待测试样溶液四、实验内容与步骤：1.选择合适的流动相配比，优化色谱条件设置有关参数：控制流速为1mL/min。
柱温30℃，检测波长354nm。
设置流动相配比（甲醇：水=1：1），用10μL微量注射器注射5μL的10μL/mL苯与甲苯的混合标准溶液进行测定，观察其分离度和出峰时间。
苯、甲苯、乙苯混合物的分离和定量分析
苯、甲苯、乙苯混合物的分离和定量分析一、实验目的1、掌握气相色谱法分离多组分混合物的方法。
2、练习用归一化法定量测定混合物中各组分的含量。
二、实验原理1、色谱法是一种分离技术，是试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。
其中的一相固定不动，称为固定相；另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。
2、气相色谱：流动相为气体（称为载气）；按固定相的不同又分为：气固色谱和气液色谱。
3、气相色谱法的特点1）分离效率高：可分离复杂混合物，有机同系物、异构体、手性异构体。
2）灵敏度高：可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量。
3）分析速度快：一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。
4）应用范围广：适用于沸点低于400℃的各种有机或无机试样的分析。
4、不足之处：1）不适用于高沸点、难挥发、热不稳定物质的分析。
2）被分离组分的定性较为困难。
5、气相色谱流程图：1-载气钢瓶；2-减压阀；3-净化干燥管；4-针形阀；5-流量计;6-压力表；4-针形阀；5-流量计;6-压力表；9-热导检测器；10-放大器；11-温度控制器；12-记录仪；1) 载气系统：包括气源、净化干燥管和载气流速控制; 2) 进样系统：进样器及气化室；3) 色谱柱：填充柱（填充固定相）或毛细管柱（内壁涂有固定液）； 4) 检测器：可连接各种检测器，以热导检测器或氢火焰检测器最为常见； 5) 记录系统：放大器、记录仪或数据处理仪； 6) 温度控制系统：柱室、气化室的温度控制。
6、定量方法：归一化法：若试样中含有n 个组分，且各组分均能洗出色谱峰，则其中某个组分的质量可按下式计算：%100)'('%100%1i 21⨯⋅⋅=⨯+⋅⋅⋅++=∑=ni iiii ni A f A f m m m m C三、仪器与试剂1、色谱仪: 气相色谱仪，热导池检测器，微量注射器（2μL ）2、色谱柱：2 m ×5 mm3、固定相: 15%邻苯二甲酸二壬酯；102白色担体60~80目，载气：氮气4、苯（纯）、甲苯（纯）、乙苯（纯） 苯，甲苯，乙苯三组分混合样品。
高效液相色谱法测定水性涂料中苯、甲苯、乙苯、二甲苯残留量
高效液相色谱法测定水性涂料中苯、甲苯、乙苯、二甲苯残留量姚帮本;郭佳佳;李云;韩枫;陈碧云;宫雅雪;胡猛;丁媛丽【摘要】苯、甲苯、乙苯和二甲苯是涂料和油漆等工业中的主要原料和溶剂,使用极其广泛,危害极其严重.苯系物在水性涂料中含量较低,检测灵敏度要求高.建立了高效液相色谱测定水性涂料中苯、甲苯、乙苯、二甲苯残留量的分析方法.样品经甲醇提取,苯、甲苯、乙苯及二甲苯检出限均为5 mg/kg.在2个浓度水平上做回收试验,回收率分别在95.9％～ 102.0％之间,相对标准偏差(n=6)≤3％.【期刊名称】《安徽化工》【年(卷),期】2018(044)006【总页数】3页(P118-120)【关键词】苯;甲苯;乙苯;二甲苯;水性涂料;液相色谱【作者】姚帮本;郭佳佳;李云;韩枫;陈碧云;宫雅雪;胡猛;丁媛丽【作者单位】安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051;安徽省产品质量监督检验研究院,安徽合肥230051【正文语种】中文【中图分类】O657.71;TQ630.7涂料使用的有机溶剂可能含有苯、甲苯、乙苯和二甲苯等有毒有害成分。
苯系物是属于极度危害的化学物质，可通过呼吸道、消化道和皮肤进入人体而产生危害，其毒性主要表现在对人体至畸、致突变和致癌等方面，可引起各种类型的白血病[1-2]。
由于气相色谱流动相单一，操作简便，分离良好，因此，关于苯系物的气相色谱检测方法层出不穷，不断成熟，并被应用在各个领域[3-4]。
气相色谱在苯系物的定性方面较为繁杂，准确性有待提高。
然而，液相色谱可以通过化合物因光学特性所产生的光谱而准确地界定属性。
苯、甲苯、乙苯混合物的分离和定量分析
1.实验目的1.1掌握气相色谱分离多组分混合物的方法。
1.2练习用归一化法测量混合物中各组分的含量。
2.实验原理 2.1气相色谱仪结构2.2混合物分离：色谱峰的确定在确定的固定相和色谱条件下，每种物质都有一定的保留时间t R ，因此在相同的条件下，分别测定纯物质和混合物各物质的保留值，将二者进行比较，即可确定样品中各组分的种类。
2.3定量分析：色谱定量归一化法 %100%/⨯=∑iii ii i f A f A Wi A ：峰面积 i f ：校正因子（苯：0.780，甲苯：0.794，乙苯：0.818）气相色谱图 3.实验仪器与试剂气相色谱仪 热导池检测器 色谱柱微量注射器 固定相：15%邻苯二甲酸二壬酯 102白色载体60~80目 载气N 2 丙酮苯（AR ）甲苯（AR ）乙苯（AR ）苯、甲苯、乙苯混合样品（体积比为1:1:1） 4.实验过程4.1开通载气N 2瓶阀门，打开气相色谱仪开关，2min 左右后启动电脑和软件。
4.2设置参数: 进样口温度：180℃ 色谱柱温度：100℃ 检测器温度：200℃ 4.3纯试剂色谱仪器稳定后，用10L μ微量注射器分别注射2L μ苯、甲苯、乙苯的纯试剂，分别得到苯、甲苯、乙苯的纯试剂的气相色谱图。
4.4混合物分析在相同条件下，用微量注射器注射2L μ混合物样品，得到混合物的气相色谱图。
（每次注射前均用丙酮洗涤，滤纸擦干，并用所注射试剂进行润洗）。
4.5结束实验后要把设定的各项温度降到50℃以下，关闭软件和电脑，关掉气相色谱仪和载气阀。
5.实验数据处理 5.1纯试剂的色谱5.2混合物分析（混合物气相色谱图见附页） 6.实验总结与思考6.1气相色谱法：是利用气体作为流动相的一种色谱分析方法，根据不同组分在色谱柱两相中的分配能力不同而达到分离的目的。
6.2与液相色谱相比气相色谱法的特点：6.2.1优点：气相色谱中的物质在气体中传递速度快，气态样品中各组分与固定相作用次数多，而且可供选择的固定液相种类多，因而选择性好、分离效能高、分析速度快；具有多种检测器可供选择，灵敏度较好。
气相色谱测混合样品中的苯和甲苯【范本模板】
气相色谱法分析混合样品中苯和甲苯班级:09环境工程姓名：常梅梅学号:200905050028气相色谱法分析混合样品中苯和甲苯摘要:本文介绍了气相色谱法测定混合样品中苯和甲苯的含量实验及其实验方法、内容和步骤,并讨论了该实验的可行性和必要性、存在的优点。
关键词：苯和甲苯；气相色谱;实验的可行性气相色谱法定性和定量分析苯和甲苯是化学和化工等相关专业的分析化学实验中一个典型的实验。
该实验的目的是让我们了解气相色谱分析的基本原理、气相色谱仪的操作过程、微最进样器的正确使用以及色谱定量分析方法．并定量分析混合物中的各种苯系物。
由于通过该实验的学习能够提高我们在色谱分析方面的能力。
随着科学和技术的不断进步,渐渐地发现该实验也存在着一些不足之处。
众所周知，对于色谱分析来讲,样品制备技术是至关重要的.其直接影响整个分析过程准确度的好坏和分析效率的高低。
对于传统的样品前处理技术，如：液．液萃取（Liquid—liquid extraction，LLE）,其存在步骤多、耗时，需要大量有机溶剂而不利于环境保护，同时容易造成分析物流失，重现性较差等缺陷,其应用也受到很大的限制，所以当然更不适台本科生的教学实验要求。
在此情况下，介绍一个既要让学生全面了解色谱分析中所包含各种步骤．又要保证良好的教学效果的学生实验是一件当务之急的环节。
固相微萃取71作为一种新型、“绿色”无溶剂样品制备技术足当今国内外比较热门的研究方向之一,它克服了上述传统样品前处理技术所具有的缺点，因此在化学、化工、医药等领域得到r较好的应用。
作为苯系物是一类重要的化工原料，同时也是一类倍受戈注的环境污染物．很多化工厂排放的废水中含有少量的泼类物质，因此选用此类物质作为分析对象较有实“际应用价值”. 王一龙，蔡宏伟，雷家珩在几年来从事固相微萃取一气相色谱联用技术的研究基础上，提出将该技术运用于测定水中残留痕量的苯系物作为大学化学教学实验这一新的想法，同时介绍了该实验方法、内容和步骤，并讨论了该教挚实验的可行性、存在的优点[1］学效果。
高效液相色谱测定混合样品中苯和甲苯
实验项目：高效液相色谱测定混合样品中苯和甲苯试验【实验题目】高效液相色谱测定混合样品中苯和甲苯【实验目的】1、掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法2、了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术【实验原理】高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动是，经过反复多次的吸附－解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。
【仪器和试剂】主要仪器：高效液相色谱HPLC-20A T ，10μL 微量注射器1支试剂：苯标准溶液，甲苯标准溶液，苯、甲苯标准溶液0.2μL/mL ，2μL/mL ，4μL /mL ，10μL/mL ，色谱醇，甲醇【实验内容与步骤】1．调好最佳色谱条件，控制流速为1ml/min 。
柱温30℃，检测波长254nm 。
2．优化条件用微量注射器注射60%甲醇和水的混合溶液，记录保留时间；如保留时间过长，增大甲醇与水的混合比例到80%，记录保留时间；如保留时间过长，继续增大甲醇与水的混合比例到85%，记录保留时间，直至保留时间小于5min 。
3．苯、甲苯定性分析在最佳条件下，用微量注射器分别进样4μL 试样，4μL 苯标液和4μL 甲苯的标液(注射器用甲醇润洗3～5遍)观察其记录保留时间，确定苯和甲苯的峰。
4．苯、甲苯定量分析在最佳条件下，用微量注射器分别进样0.2μL/mL 、2μL/mL 、4μL/mL 、10μL/mL 的标液各4μL 。
观察记录保留时间和峰面积。
根据峰面积在工作曲线上查出苯和甲苯待侧液的浓度，并计算试样中苯和甲苯的含量。
【实验数据及其处理】 一、色谱条件优化0.02.55.07.510.012.515.0min0.00.51.01.52.02.53.03.54.0μV(x100,000)色谱①为85% ②为80% ③为60%从图中可看出，在低极性的溶剂中，组分的保留时间长，通过增大甲醇与水的混合比例，可逐渐缩短组分的保留时间。
分析实验报告 气相色谱法分析苯和甲苯(实验相关)
华南师范大学实验报告学生姓名：杨秀琼学号：20082401129专业：化学年级班级：08化二课程名称：仪器分析实验实验项目：气相色谱分析混合样品中的苯和甲苯实验类型：综合实验时间：2010/4/8实验指导老师：朱立才老师实验评分：一、实验目的1、了解气相色谱仪的基本结构及掌握分离分析的基本原理2、了解氢火焰离子化检测器的检测原理3、了解影响分离效果的因素4、掌握定性、定量分析与测定二、实验原理气相色谱分离事利用上试样中各组分在色谱柱中的气相和固定时间的分配系数不同，当气化后的试样被载气带入色谱柱进行时，组分就在其中的两相中进行反复多次的分配，由于固定相各个组分的吸附或溶解能力不同，因此各组分在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱唱后，使彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器。
检测器讲各组分的熔度或质量的变化转换成一定的电信号，经过放大后在记录仪上记录下来，即可得到各组分的色谱峰。
根据保留时间和峰高或峰面积，便可进行定性和定量的分析。
三、实验步骤1、样品及标准溶液的配制样品配制：已配好，直接取即可标准溶液配制：已配好分别为0.2μL/ mL,2μL/ mL,4μL/ mL,10μL/ mL的标准溶液，直接取即可2、最佳分离条件通过测定，已经得到本次实验的最佳分离条件，只需设置参数即可。
参数设置：将炉温设置到250。
C，进样方式：分流（50：1）；进样量：1μl;恒流模式：柱流量：1.0mL/min；升温程序：50℃～150℃（6min）检测器（FID）温度：250℃尾吹气流量：30mL/min;氢气流量：30mL/min；空气流量:300mL/min 将这些参数下载设好，等待仪器处于正常准备就绪状态。
3、定性分析1)、在最佳分离条件下，用10μL的微量注射器，分别注射10.0μL浓度为2.0μL/mL苯标准溶液和浓度为2.0μL/mL甲苯标准溶液垂直插入进样口，插到尽头，打下去，马上抽出针头，按“start”；这是开始记录数据了，观察记录保留时间，确定苯和甲苯的峰。
气相色谱法分析混合物样品中的苯和甲苯
华南师范大学实验报告课程名称：仪器分析实验实验项目：气相色谱法分析混合物样品中的苯和甲苯气相色谱法分析混合物样品中的苯和甲苯一、实验目的：二、实验原理：气相色谱法（gas chromatography 简称GC）是色谱法的一种。
色谱法是一种分离技术。
试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。
其中的一相固定不动，称为固定相；另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。
气相色谱方法是利用试样中各组份在气相和固定液相间的分配系数不同将混合物分离、测定的仪器分析方法，特别适用于分析含量少的气体和易挥发的液体。
当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组份就在其中的两相间进行反复多次分配，由于固定相对各组份的吸附或溶解能力不同，因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，按流出顺序离开色谱柱进入检测器，被检测，在记录器上绘制出各组份的色谱峰——流出曲线。
在色谱条件一定时，任何一种物质都有确定的保留参数，如保留时间、保留体积及相对保留值等。
因此，在相同的色谱操作条件下，通过比较已知纯样和未知物的保留参数或在固定相上的位置，即可确定未知物为何种物质。
测量峰高或峰面积，采用外标法、内标法或归一化法，可确定待测组分的质量分数。
混合物的分离与定量分析涉及到色谱峰的确定和定量方式 选择两个方面。
前者属于色谱定性分析，后者为定量分析。
在确定的实验条件下，每种物质都有一定的保留时间，因此，在相同的实验条件下，分别测定纯物质和样品各组分的保留值，将两者进行对比，就可确定各组分的种类。
调整保留时间=保留时间-死时间分配系数 K= 组分在流动相中的浓度组分在固定相中的浓度； 一定温度下，组分的分配系数K 越大，出峰越慢。
试样一定时，K 主要取决于固定相的性质，每个组分在各种固定相中的分配系数不同。
本实验采用归一化法，即分别求出样品中所有组分的峰面积Ai 和校正因子fi ，然后按下式计算各组分的百分含量:%100⨯∑iii i i f A f AWi/% =峰面积Ai由电脑积分求得校正因子fi由下式求得：fi=qi/Ai实际上都采用相对校正因子f’i，可以直接测量，亦从手册中查得：（重量校正因子的文献值是苯：0.780；甲苯：0.794；乙苯：0.818）归一化法简便、准确；进样量的准确性和操作条件的变动对测定结果影响不大；仅适用于试样中所有组分全出峰的情况。
二甲苯混合样品的色谱分析能力目标
定性分析
利用已知标准物质直接对照定性
依据：在一定的柱条件（柱长、固定相）、操作条件下，组分有 固定的保留值。 方法：控制在相同的实验条件下，分别注入标准物质和未知样品， 通过比较两者的保留值（保留时间或相对保留时间）。
常与测量池相等。
热导检测器条件选择
桥电流的选择。一般认为TCD灵敏度S值与桥电流的三次方成正比，
所以，增大桥电流是提高TCD灵敏度的一个有效方法。但桥电流偏大，
则噪声也急剧增大，且热丝越易被氧化，因此在满足分析灵敏度要求 的前提下，应尽量选取低的桥电流。 检测器温度。TCD灵敏度与热丝和池体间的温差成正比，也就是说 可以通过提高热丝温度（不能过高以免热丝烧断）或降低检测器池体 温度来提高检测器灵敏度。
热导池检测器（TCD）
工作原理
载气 试样
参比池
散热差异
R4
测量池
样品
电阻值差异
电桥失去平衡 输出的电压信号与 样品的浓度或正比
比较TCD与FID
TCD与FID的区别
项目 FID检测器 1、质量型检测器 2、破坏型检测器 3、选择性检测器 TCD检测器 1、浓度型检测器 2、非破坏型检测器 3、通用型检测器 灵敏度较低，一般<400pg/mL， 单丝流路热导检测器，灵敏 度可达4×10-10g/mL 105
影响分离度R的主要因素
保留值差值——热力学因素
反映了试样中各组分在两相间的分配情况；
与各组分在两相间的分配系数有关； 与各物质(组分、固定相、流动相)的分子结构与性质有关。 峰宽——动力学因素 反映了试样中各组分在色谱柱中的运动情况； 与各组分在两相间的传质阻力有关。
热导池检测器（TCD）
学生完成苯、甲苯、二甲苯混合样品的色谱分析实验操作 （要求：每位学生独立完成，合理安排时间。）
液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯
液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯一、实验题目：液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯二、实验目的：1．掌握高效液相色谱仪的原理和仪器构成。
2．了解样品处理、测定和数据处理的全过程，掌握标准曲线定量方法。
三、实验原理：高效液相色谱和其化液相色谱技术一样，其基本原理：利用欲分离的诸组分在固定相和流动相间的分配有差异（即有不同的分配系数），当两相作相对运动时，这些组分在此两相中的分配反复进行，从几千次到百万次，即使组分的分配系数只有微小差异，随着液体流动相移动却可以有明显的差距，最后使这些组分都得到分离。
高效液相色谱法是常用的分析方法，由于组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，导致组分在固定相上的保留程度不一样。
按分离原理可将HPLC分为分配色谱、离子交换色谱、离子色谱、尺寸排阻色谱和亲和色谱等。
本次实验是利用分配色谱原理，根据各待测物在互不相溶的两相中的溶液解度不同。
因而具有不同的分配系数。
在色谱柱中，随着流动相的移动，这种分配平衡需用进行多次，造成各待测物的迁移速率不同，从而实现分离的过程。
四、仪器与试剂1．仪器高效液相色谱仪；微量注射器（1μL）；贮液胶管。
2．试剂甲醇（分析纯）、苯（2μL/L）、甲苯（2μL/L）、苯与甲苯（2μL/L）、苯与甲苯（4μL/L）、苯与甲苯（10μL/L）、样品。
五、实验步骤与内容1．仪器操作：依次打开高压泵、检测器、工作站。
参考色谱条件：流动相、甲醇-水、等梯度洗脱、流速、柱温、进样量（10μL）、紫外检测波长。
2．仪器达到稳定后，依次注射不同浓度的苯溶液、甲苯溶液、及苯与甲苯的混合溶液，根据计算机给出的数据，以溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
同时根据样品的峰面积在曲线上查出样品中苯与甲苯的浓度。
3．实验完毕，清洗色谱系统后，关机。
六、数据的记录及结果分析0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-25255075100125150175mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)3.660/1341665苯（2μL/L ）0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-25255075100125150175200225mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)4.711/1988903甲苯（2μL/L ）0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-25255075100125150175200225mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)3.669/13460994.725/2013398苯与甲苯（2μL/L ）0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-5050100150200250300350400450mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)3.676/26278404.732/3943152苯与甲苯（4μL/L ）0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-1001002003004005006007008009001000mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)3.672/58438114.730/8970976苯与甲苯（10μL/L ）0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0min-5050100150200250300350mAU0102030405060708090%254nm,4nm (1.00)3.660/20655784.710/3045297样品结果分析：根据实验原理，各待测物在互不相溶的两相溶解度不同，具有不同的分配系数，在色谱柱中，随着流动相的移动，这种分配平衡需进行多次，造成各待测物的迁移速率不同。
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液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯
一、实验题目：液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯
二、实验目的：
1．掌握高效液相色谱仪的原理和仪器构成。
2．了解样品处理、测定和数据处理的全过程，掌握标准曲线定量方法。
三、实验原理：
高效液相色谱和其化液相色谱技术一样，其基本原理：利用欲分离的诸组分在固定相和流动相间的分配有差异（即有不同的分配系数），当两相作相对运动时，这些组分在此两相中的分配反复进行，从几千次到百万次，即使组分的分配系数只有微小差异，随着液体流动相移动却可以有明显的差距，最后使这些组分都得到分离。
高效液相色谱法是常用的分析方法，由于组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，导致组分在固定相上的保留程度不一样。
按分离原理可将HPLC分为分配色谱、离子交换色谱、离子色谱、尺寸排阻色谱和亲和色谱等。
本次实验是利用分配色谱原理，根据各待测物在互不相溶的两相中的溶液解度不同。
因而具有不同的分配系数。
在色谱柱中，随着流动相的移动，这种分配平衡需用进行多次，造成各待测物的迁移速率不同，从而实现分离的过程。
四、仪器与试剂
1．仪器
高效液相色谱仪；微量注射器（1μL）；贮液胶管。
2．试剂
甲醇（分析纯）、苯（2μL/L）、甲苯（2μL/L）、苯与甲苯（2μL/L）、苯与甲苯（4μL/L）、苯与甲苯（10μL/L）、样品。
五、实验步骤与内容
1．仪器操作：依次打开高压泵、检测器、工作站。
参考色谱条件：流动相、甲醇-水、等梯度洗脱、流速、柱温、进样量（10μL）、紫外检测波长。
2．仪器达到稳定后，依次注射不同浓度的苯溶液、甲苯溶液、及苯与甲苯的混合溶液，根据计算机给出的数据，以溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
同时根据样品的峰面积在曲线上查出样品中苯与甲苯的浓度。
3．实验完毕，清洗色谱系统后，关机。
六、数据的记录及结果分析
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
m in
-25
25
50
75
100
125150
175
m A U
10
20
30
40
50
60
70
80
90
%
254nm ,4nm (1.00)
3.660/1341665
苯（2μL/L ）
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
m in
-25
25
50
75100
125150
175
200225
m A U
10
20
30
40
50
60
70
80
90
%
254nm ,4nm (1.00)
4.711/1988903
甲苯（2μL/L ）
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
m in
-25
25
5075100
125150175200
225m A U
10
20
30
40
50
60
70
80
90
%
254nm ,4nm (1.00)
3.669/1346099
4.725/2013398
苯与甲苯（2μL/L ）
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
m in
-50
50
100
150
200
250
300350400
450
m A U
10
20
30
40
50
60
70
80
90
%
254nm ,4nm (1.00)
3.676/2627840
4.732/3943152
苯与甲苯（4μL/L ）
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
m in
-100
100200300400500600
7008009001000m A U
010
20
30
40
50
60
70
80
90
%
254nm ,4nm (1.00)
3.672/5843811
4.730/8970976
苯与甲苯（10μL/L ）
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
m in
-50
50
100
150200
250
300
350
m A U
10
20
30
40
50
60
70
80
90
%
254nm ,4nm (1.00)
3.660/2065578
4.710/3045297
样品
结果分析：
根据实验原理，各待测物在互不相溶的两相溶解度不同，具有不同的分配系数，在色谱柱中，随着流动相的移动，这种分配平衡需进行多次，造成各待测物的迁移速率不同。
先用已经知浓度的甲苯、和苯分别通入色谱柱，得知苯在3.660min 时流出，甲苯在 4.711min 时流出，因此可由此判断下面的图谱中3.660min 附近的为苯，4.711min 附近的为甲苯。
根据不同浓度的苯与甲苯的混合溶液和峰面积作工作曲线：
苯与甲苯的标准曲线如下条：
1000000
20000003000000400000050000006000000
70000008000000900000010000000峰面积
浓度
苯的曲线方程为：y=306378+556163.5*X 相关系数r=0.99929
甲苯的曲线方程为：y=376504.76923+862375.73077*X 相关系数r=0.99957
根据标准曲线的方程，可求出样品中苯的含量为3.16μL/L ，甲苯的含量为3.09μL/L 。