蛋白质沉淀反应实验
蛋白质的沉淀实验报告

蛋白质的沉淀实验报告蛋白质的沉淀实验报告一、引言蛋白质是生物体内一类重要的生物大分子,具有多种功能,如结构支持、催化反应、传递信息等。
为了研究蛋白质的性质和功能,科学家们经常需要对蛋白质进行分离和纯化。
其中,蛋白质的沉淀是一种常用的分离方法。
本实验旨在通过沉淀实验,探究蛋白质的沉淀条件和纯化效果。
二、实验材料与方法1. 实验材料:- 鸡蛋清- 乙醇- 硫酸铵- 氯化钠- 氯化钾- 磷酸盐缓冲液2. 实验步骤:1)制备蛋白质溶液:取适量鸡蛋清,加入磷酸盐缓冲液,搅拌均匀。
2)蛋白质的沉淀:将蛋白质溶液分别加入不同浓度的乙醇溶液中,并观察沉淀情况。
3)蛋白质的纯化:将沉淀后的蛋白质溶液加入硫酸铵溶液中,并离心沉淀,收集上清液。
三、实验结果与分析1. 蛋白质的沉淀在实验中,我们分别将蛋白质溶液加入了不同浓度的乙醇溶液中,并观察到了不同程度的沉淀。
结果显示,随着乙醇浓度的增加,蛋白质的沉淀量逐渐增加。
这是因为乙醇的加入改变了溶液中的离子强度和极性,导致蛋白质与水分子结合力的变化,从而使蛋白质发生沉淀。
2. 蛋白质的纯化在蛋白质沉淀后,我们将沉淀物加入硫酸铵溶液中,并进行离心沉淀。
通过这一步骤,我们成功地将蛋白质从杂质中分离出来,得到了相对纯净的蛋白质溶液。
这是因为硫酸铵能够改变蛋白质的溶解度,使其发生沉淀,而杂质则大多不会发生沉淀,从而实现了蛋白质的纯化。
四、实验总结与展望通过本次实验,我们成功地进行了蛋白质的沉淀实验,并探究了蛋白质的沉淀条件和纯化效果。
实验结果表明,乙醇浓度的增加可以促进蛋白质的沉淀,而硫酸铵则可以实现蛋白质的纯化。
这些结果对于蛋白质的分离和纯化具有重要的指导意义。
然而,本实验还存在一些不足之处。
首先,实验过程中的操作技巧对结果的影响较大,需要进一步提高实验者的技术水平。
其次,本实验仅针对鸡蛋清中的蛋白质进行了沉淀和纯化,对于其他来源的蛋白质可能存在差异。
因此,未来可以进一步扩大样本范围,进行更多的实验验证。
蛋白质的沉淀反应实验报告

蛋白质的沉淀反应实验报告蛋白质的沉淀反应实验报告引言:蛋白质是生物体内一类重要的有机化合物,它们在细胞的结构和功能中起着重要的作用。
为了研究蛋白质的性质和功能,科学家们通过一系列实验来深入探索。
本实验旨在通过蛋白质的沉淀反应,研究其在溶液中的特性和行为。
实验材料和方法:1. 实验材料:- 鸡蛋清溶液- 醋酸铵溶液- 硫酸铵溶液- 乙醇- 甲醇- 氯仿- 玻璃棒- 离心机- 试管- 显微镜2. 实验方法:- 步骤一:取适量鸡蛋清溶液放入试管中。
- 步骤二:加入醋酸铵溶液,轻轻搅拌均匀。
- 步骤三:将试管放入离心机,以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤四:将上清液倒掉,留下沉淀。
- 步骤五:加入硫酸铵溶液,用玻璃棒搅拌均匀。
- 步骤六:将试管放入离心机,以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤七:将上清液倒掉,留下沉淀。
- 步骤八:加入乙醇,用玻璃棒搅拌均匀。
- 步骤九:将试管放入离心机,以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤十:将上清液倒掉,留下沉淀。
- 步骤十一:加入甲醇,用玻璃棒搅拌均匀。
- 步骤十二:将试管放入离心机,以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤十三:将上清液倒掉,留下沉淀。
- 步骤十四:加入氯仿,用玻璃棒搅拌均匀。
- 步骤十五:将试管放入离心机,以2000转/分钟离心10分钟。
- 步骤十六:将上清液倒掉,留下沉淀。
- 步骤十七:观察沉淀的形态和颜色,并使用显微镜进行进一步观察。
结果和讨论:经过实验,我们观察到了蛋白质的沉淀反应。
在添加醋酸铵溶液后,鸡蛋清中的蛋白质发生了沉淀。
通过离心的过程,我们得到了一系列沉淀物。
在加入硫酸铵溶液后,沉淀物变得更加明显,颜色也发生了变化。
随后,通过加入乙醇、甲醇和氯仿,我们可以观察到沉淀物的进一步变化。
根据观察结果,我们可以得出一些结论。
首先,蛋白质在醋酸铵的作用下发生了沉淀,说明醋酸铵可以用作蛋白质的沉淀剂。
其次,随着添加硫酸铵、乙醇、甲醇和氯仿,沉淀物的形态和颜色发生了变化,这表明不同的溶剂可以对蛋白质的沉淀产生不同的影响。
蛋白质的沉淀反应(实验)

记录沉淀物的生成速度,可以反映蛋白质的稳定 性以及溶液中其他成分对蛋白质的影响。
离心后沉淀
通过离心实验,观察离心后上清液和沉淀物的变 化,判断蛋白质的溶解度和聚集状态。
蛋白质结构变化分析
紫外可见光谱分析
通过紫外可见光谱分析,观察蛋白质在沉淀前后吸收峰的变化, 判断蛋白质结构的变化。
傅里叶变换红外光谱分析
观察沉淀物
观察沉淀物的形态、颜色和质地,判断沉淀 是否完全。
绘制图表
将实验数据整理成表格或图表,便于分析和 比较。
测量数据
使用测量工具测量沉淀物的重量、体积等数 据,记录实验结果。
分析结论
根据实验结果和数据,分析蛋白质的沉淀反 应性质和条件,得出结论。
04
结果分析
沉淀现象分析
沉淀物形态
观察沉淀物的形态,如颗粒大小、颜色、透明度 等,以判断蛋白质的纯度和聚集状态。
酶
在某些情况下,可能需要 使用酶来水解蛋白质,以 促进沉淀或改变蛋白质的 构象。
pH调节剂
用于调节溶液的pH值,以 适应不同蛋白质的稳定性 和活性。
03
实验操作过程
准备阶段
实验材料
需要准备实验所需的蛋白质溶液、 沉淀剂、离心管、离心机等实验 器材。
实验原理
了解蛋白质的沉淀反应原理,即通 过改变蛋白质溶解度或电荷性质, 使其从溶液中析出。
沉淀剂
01
02
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
03
盐类
常用的沉淀剂包括硫酸铵、 氯化钠、磷酸钠等盐类, 通过增加离子强度使蛋白 质析出。
有机溶剂
如乙醇、丙酮等有机溶剂, 通过降低水分子与蛋白质 的结合力使蛋白质沉淀。
重金属盐
如硫酸铅、硝酸银等重金 属盐,与蛋白质结合形成 不溶性的复合物而沉淀。
蛋白质的沉淀反应实验结果

蛋白质的沉淀反应实验结果蛋白质是构成细胞最基本的化学物质之一,也是生命活动的重要组成部分。
为了研究蛋白质的性质和结构,科学家们进行了许多研究和实验。
其中一项重要的实验就是蛋白质的沉淀反应实验。
本文将从不同类别的角度探讨这项实验的结果。
一、化学角度蛋白质的沉淀反应实验是基于化学反应原理进行的。
在实验中,使用醋酸钠、酸性亚硫酸钠等试剂,使蛋白质与这些试剂发生反应,从而使蛋白质沉淀。
通过实验结果可以发现,当醋酸钠、酸性亚硫酸钠用量恰当时,蛋白质的沉淀效果较好。
这说明,对于化学实验来说,试剂的选择和用量都至关重要。
二、生物角度蛋白质是生物体内最基本的营养成分之一。
在生物学角度看,蛋白质的沉淀反应实验可以帮助人们更好地了解蛋白质的生物学特性。
通过实验结果可以发现,蛋白质在一定条件下会沉淀,这表明蛋白质在某些情况下会失去其溶解性质,而变成不溶性的物质。
这对于人们研究蛋白质在生物体内的代谢和运输有着重要的意义。
三、医学角度蛋白质是构成我们身体组织和器官的重要成分,对促进身体健康和预防疾病有着不可忽视的作用。
从医学角度看,蛋白质的沉淀反应实验可以帮助人们鉴定某些疾病的原因,同时也可以帮助医生评估病人的营养情况。
通过实验结果可以发现,蛋白质的沉淀量与蛋白质的含量和质量有直接关系,因此,医生可以通过蛋白质的沉淀反应实验,了解病人体内的蛋白质含量,判断其营养情况和健康状况。
综上所述,蛋白质的沉淀反应实验在不同领域都具有重要的应用价值。
它不仅可以帮助人们了解蛋白质的化学性质和生物学特性,同时也可以帮助医学界更好地评估病人的健康状态。
相信在未来的发展中,蛋白质的沉淀反应实验将会有更加广泛的应用前景。
蛋白质沉淀反应实验

蛋白质的沉淀反应一、目的和要求1、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识2、掌握几种沉淀蛋白质的方法3、了解蛋白质变性与沉淀的关系二、沉淀反应(一)原理在水溶液中,蛋白质分子的表面上由于有水化层和同性电荷的作用,所以成为稳定的胶体颗粒。
但这种稳定的状态是有条件的。
在某些理化因素的作用下,蛋白质分子表面带电性质发生变化、脱水甚至变性,则会以固态形式从溶液中析出,这个过程就称为蛋白质的沉淀反应。
蛋白质的沉淀反应可分为以下两种类型:1、可逆沉淀反应沉淀反应发生后,蛋白质分子内部结构并没有发生大的或者显着变化。
在沉淀因素去除后,又可恢复其亲水性,这种沉淀反应就是可逆沉淀反应,也叫做不变性沉淀反应。
属于这类沉淀反应的有盐析作用、等电点沉淀以及在低温下短时间的有机溶剂沉淀法等。
2、不可逆沉淀反应蛋白质在沉淀的同时,其空间结构发生大的改变,许多副键发生断裂,即使除去沉淀因素,蛋白质也不会恢复其亲水性,并丧失生物活性,这种沉淀反应就是不可逆沉淀反应。
重金属盐、生物碱试剂、强酸、强碱、加热、强烈震荡、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。
(二)盐析1、材料与试剂(1)10%的卵清蛋白溶液(要求新鲜配制)、浓蛋白溶液(2)饱和硫酸铵溶液(3)固体硫酸铵(4)滤纸、玻棒2、操作方法(1)取试管一支,加入浓蛋白溶液2ml,再加等量的饱和硫酸铵溶液,混匀后静置10分钟将出现沉淀。
此沉淀物为球蛋白。
(2)取上清液于另一支试管。
(3)向上清液液中加入硫酸铵粉末,边加边用玻棒搅拌,直至粉末不再溶解为止。
静置数分钟后,沉淀析出的是清蛋白。
(4)向两支试管中分别加水,观察其沉淀是否溶解。
(三)重金属盐沉淀重金属离子如Pb2+、Cu2+、Hg2+、Ag2+等可与蛋白质分子上的羟基结合生成不溶性金属盐而沉淀:重金属盐类沉淀蛋白质的反应通常很完全,特别是在碱金属盐类存在时。
因此,生化分析中,常用重金属盐除去体液中的蛋白质;临床上用蛋白质解除重金属盐引起的食物中毒。
蛋白质沉淀反应实验报告

一、实验目的1. 理解蛋白质沉淀反应的基本原理。
2. 掌握常用的蛋白质沉淀方法。
3. 分析蛋白质沉淀反应的影响因素。
4. 学习蛋白质沉淀反应在生物科学中的应用。
二、实验原理蛋白质沉淀反应是指在一定条件下,蛋白质从溶液中析出的现象。
蛋白质沉淀反应的原因主要有两种:一是破坏蛋白质的水化膜,二是中和蛋白质所带的电荷。
当蛋白质的水化膜被破坏或电荷被中和时,蛋白质颗粒之间的相互排斥力减弱,导致蛋白质颗粒聚集形成沉淀。
蛋白质沉淀反应在生物科学中具有广泛的应用,如蛋白质的分离、纯化、定量分析等。
三、实验材料1. 蛋白质溶液:鸡蛋清溶液、牛奶蛋白质溶液等。
2. 沉淀剂:硫酸铵、硫酸钠、氯化钠、乙醇、甲醇、氯仿等。
3. 实验仪器:试管、移液管、滴管、pH计、离心机等。
四、实验方法1. 盐析法:向蛋白质溶液中加入适量的硫酸铵,观察蛋白质沉淀现象。
2. 低温沉淀法:将蛋白质溶液置于低温条件下,观察蛋白质沉淀现象。
3. 有机溶剂沉淀法:向蛋白质溶液中加入适量的乙醇或甲醇,观察蛋白质沉淀现象。
4. 重金属盐沉淀法:向蛋白质溶液中加入适量的重金属盐(如氯化汞),观察蛋白质沉淀现象。
五、实验步骤1. 准备蛋白质溶液:取鸡蛋清溶液或牛奶蛋白质溶液,用蒸馏水稀释至一定浓度。
2. 盐析法:向蛋白质溶液中加入适量的硫酸铵,观察蛋白质沉淀现象。
3. 低温沉淀法:将蛋白质溶液置于4℃低温条件下,观察蛋白质沉淀现象。
4. 有机溶剂沉淀法:向蛋白质溶液中加入适量的乙醇或甲醇,观察蛋白质沉淀现象。
5. 重金属盐沉淀法:向蛋白质溶液中加入适量的重金属盐(如氯化汞),观察蛋白质沉淀现象。
6. 记录实验结果,分析沉淀现象。
六、实验结果与分析1. 盐析法:向蛋白质溶液中加入硫酸铵后,观察到蛋白质沉淀现象。
这是因为硫酸铵破坏了蛋白质的水化膜,同时中和了蛋白质所带的电荷,导致蛋白质颗粒聚集形成沉淀。
2. 低温沉淀法:将蛋白质溶液置于4℃低温条件下,观察到蛋白质沉淀现象。
蛋白质的沉淀反应实验报告
蛋白质的沉淀反应实验报告一、实验目的1、掌握几种常用的使蛋白质沉淀的方法。
2、理解蛋白质沉淀的原理和应用。
二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的大分子化合物。
在一定条件下,蛋白质分子会发生沉淀现象。
蛋白质沉淀的原因主要有以下几种:1、盐析:在蛋白质溶液中加入中性盐,如硫酸铵、氯化钠等,随着盐浓度的增加,蛋白质的溶解度逐渐降低而沉淀析出。
这是因为中性盐会破坏蛋白质分子表面的水化膜,并中和蛋白质分子所带的电荷,从而使其沉淀。
盐析沉淀的蛋白质一般不变性,经透析或超滤等方法除去盐后,蛋白质仍能恢复其原有的溶解性和生物活性。
2、有机溶剂沉淀:向蛋白质溶液中加入一定量的有机溶剂,如乙醇、丙酮等,可使蛋白质沉淀。
这是因为有机溶剂能降低溶液的介电常数,增加蛋白质分子之间的静电引力,同时还能破坏蛋白质分子的水化膜,导致蛋白质沉淀。
有机溶剂沉淀的蛋白质往往会发生变性,失去其原有的生物活性。
3、重金属盐沉淀:蛋白质在碱性溶液中可与重金属离子,如汞离子、铅离子等结合形成不溶性的盐而沉淀。
这种沉淀反应是由于重金属离子与蛋白质分子中的巯基、羧基等基团结合,从而破坏了蛋白质的结构,导致其沉淀。
重金属盐沉淀的蛋白质通常会发生变性。
4、生物碱试剂沉淀:生物碱试剂,如苦味酸、鞣酸等,能与蛋白质分子中的碱性基团结合而沉淀。
这种沉淀反应常用于定性和定量分析蛋白质。
三、实验材料与仪器1、实验材料蛋白质溶液(鸡蛋清稀释液)饱和硫酸铵溶液乙醇氯化汞溶液苦味酸溶液氢氧化钠溶液醋酸溶液2、实验仪器试管试管架滴管离心机四、实验步骤1、盐析沉淀取 2 支试管,分别加入 2mL 蛋白质溶液。
向其中一支试管中逐滴加入饱和硫酸铵溶液,边加边振荡,直至出现沉淀为止。
将另一支试管作为对照,观察现象。
2、有机溶剂沉淀取 2 支试管,分别加入 2mL 蛋白质溶液。
向其中一支试管中逐滴加入乙醇,边加边振荡,直至出现沉淀为止。
将另一支试管作为对照,观察现象。
蛋白质的沉淀反应实验
添加标题
实验结论:蛋白质的沉淀反应实验证明了蛋白质的性质和沉淀机制,为进一步研究蛋白质的结构和功能 提供了重要依据。
添加标题
实验结论:实验结果证明了蛋白质的沉淀反应与溶液的pH值、离子强度等因素密切相关,为实际生产和 应用提供了理论支持。
添加标题
实验结论:实验中观察到的沉淀现象和变化规律有助于深入了解蛋白质的分子结构和相互作用机制,为 研究蛋白质的生物活性和功能提供了有益的信息。
安全措施:了解实验中可能存 在的危险因素,并采取相应的
防护措施
实验操作流程
准备试剂和器 材:按照实验 要求准备好所 需的试剂和器 材,如离心机、 试管、滴管等。
配制溶液:按 照实验要求配 制各种溶液, 如蛋白质溶液、 硫酸铵溶液等。
离心分离:将 配制好的溶液 放入离心机中, 进行离心分离, 以去除杂质和
颗粒物。
观察沉淀:离 心分离后,观 察试管中的沉 淀情况,记录 沉淀的数量和
形态。
清洗沉淀:将 沉淀物清洗干 净,以备后续
分析使用。
分析数据:对 实验数据进行 整理和分析, 得出实验结论。
实验注意事项
实验前需仔细检查实验器材是否齐全、完好,确保实验顺利进行。 实验过程中要严格控制反应条件,如温度、pH值等,以保证实验结果的准确性。 在进行沉淀反应时,要确保溶液混合均匀,避免局部浓度过高导致沉淀不完全或结块。 实验后要及时清洗实验器具,保持实验室的整洁卫生。
添加标题
实验结论:蛋白质的沉淀反应实验具有实际应用价值,可用于分离、纯化蛋白质,以及优化蛋白质的结 晶和制备过程。
实验建议与展望
建议:在实验过程中,应严格控制实验条件,确保 实验结果的准确性和可靠性。
展望:随着科学技术的发展,蛋白质的沉淀反应实 验将会有更多的应用前景和发展空间。
蛋白质的沉淀反应实验报告
蛋白质的沉淀反应实验报告
实验目的,通过对蛋白质的沉淀反应进行实验,掌握蛋白质的沉淀方法和技巧,了解蛋白质的性质和特点。
实验原理,蛋白质的沉淀反应是利用蛋白质与醋酸和酒精混合后在酸性条件下
沉淀出来的特性进行实验。
醋酸和酒精可以使蛋白质变性并沉淀出来,酸性条件有利于蛋白质的沉淀。
实验步骤:
1. 取少量蛋白质溶液放入试管中;
2. 加入少量醋酸,并充分混合;
3. 加入适量酒精,再次充分混合;
4. 观察蛋白质的沉淀情况。
实验结果,经过以上步骤,观察到蛋白质在酸性条件下与醋酸和酒精混合后发
生了沉淀反应,沉淀物呈现白色。
实验分析,蛋白质的沉淀反应是由于醋酸和酒精的作用下,蛋白质发生变性并
沉淀出来。
酸性条件有利于蛋白质的沉淀,而酒精可以加速蛋白质的沉淀过程。
因此,通过本实验可以初步了解蛋白质的性质和特点。
实验结论,蛋白质的沉淀反应是一种常见的实验方法,通过本实验可以掌握蛋
白质的沉淀技巧,并了解蛋白质的性质和特点。
在实际应用中,蛋白质的沉淀反应可以用于蛋白质的提取和分离,具有一定的应用价值。
实验注意事项:
1. 实验操作要注意安全,避免醋酸和酒精的接触;
2. 实验过程中要注意观察蛋白质的沉淀情况,及时记录实验结果;
3. 实验结束后要及时清理实验器材,保持实验环境整洁。
通过本实验,我对蛋白质的沉淀反应有了更深入的了解,掌握了蛋白质的沉淀
方法和技巧,对蛋白质的性质和特点有了更清晰的认识。
希望通过今后的实验实践,能够进一步提高自己的实验技能,为科学研究和实际应用做出更多的贡献。
蛋白质的沉淀反应(实验)
3.在蛋白质的可逆沉淀反应中,为何要用蛋 白质氯化钠溶液?
(三)设备
水浴锅 滤纸,漏斗 吸管 试管及试管架 玻棒
四、实验步骤:
(一)蛋白质的可逆沉淀 蛋白质的盐析
2ml蛋白质 浓溶液
等体积饱酸铵粉末
加水
沉淀
观察现象
(二)蛋白质的不可逆沉淀
1.重金属离子沉淀蛋白质 重金属离子与蛋 白质结合成不溶于水的复合物。
三、实验材料与设备:
(一)材料 5ml鲜鸡蛋清,用蒸馏水稀释至100ml,搅拌
后用4-8层纱布过滤,新鲜配制。
(二)试剂
蛋白质溶液 取10ml蛋清,用蒸馏水稀释至100ml, 搅拌均匀后,用纱布过滤
浓蛋白溶液 鸡蛋清稀释2倍(1:1)方法同上 饱和硫酸铵,2%硝酸银,0.5%醋酸铅溶液 浓盐酸,浓硫酸,浓硝酸, 1%硫酸铜,0.1%醋酸,10%醋酸, 饱和氯化钠溶液,10%NaOH溶液,1%醋酸 10%鞣酸,饱和苦味酸溶液,0.01%NaOH
蛋白质的沉淀反应可分为两类。
(1)可逆的沉淀反应 蛋白质虽然沉淀析 出,但蛋白质分子的结构尚未发生显著变化, 除去引起沉淀的因素后,蛋白质的沉淀仍能 溶解于原来溶剂中,并保持其天然性质而不 变性。属于这类反应的有;蛋白质的盐析作 用或在低温下用乙醇(或丙酮)短时间作用 于蛋白质。提纯蛋白质时,常利用此类反应。
3 生物碱试剂沉淀蛋白质
取2支试管,各加2ml蛋白质溶液,加1%的醋 酸4~5滴,分别滴加鞣酸和苦味酸溶液数滴, 观察结果。
4.加热沉淀蛋白质
注意事项
实验要求各种试剂的浓度和加入量必须相当 准确。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
蛋白质沉淀反应实验集团企业公司编码:(LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-
蛋白质的沉淀反应
一、目的和要求
1、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识
2、掌握几种沉淀蛋白质的方法
3、了解蛋白质变性与沉淀的关系
二、沉淀反应
(一)原理
在水溶液中,蛋白质分子的表面上由于有水化层和同性电荷的作用,所以成为稳定的胶体颗粒。
但这种稳定的状态是有条件的。
在某些理化因素的作用下,蛋白质分子表面带电性质发生变化、脱水甚至变性,则会以固态形式从溶液中析出,这个过程就称为蛋白质的沉淀反应。
蛋白质的沉淀反应可分为以下两种类型:
1、可逆沉淀反应
沉淀反应发生后,蛋白质分子内部结构并没有发生大的或者显着变化。
在沉淀因素去除后,又可恢复其亲水性,这种沉淀反应就是可逆沉淀反应,也叫做不变性沉淀反应。
属于这类沉淀反应的有盐析作用、等电点沉淀以及在低温下短时间的有机溶剂沉淀法等。
2、不可逆沉淀反应
蛋白质在沉淀的同时,其空间结构发生大的改变,许多副键发生断裂,即使除去沉淀因素,蛋白质也不会恢复其亲水性,并丧失生物活性,这种沉
淀反应就是不可逆沉淀反应。
重金属盐、生物碱试剂、强酸、强碱、加热、强烈震荡、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。
(二)盐析
1、材料与试剂
(1)10%的卵清蛋白溶液(要求新鲜配制)、浓蛋白溶液(2)饱和硫酸铵溶液(3)固体硫酸铵(4)滤纸、玻棒
2、操作方法
(1)取试管一支,加入浓蛋白溶液2ml,再加等量的饱和硫酸铵溶液,混匀后静置10分钟将出现沉淀。
此沉淀物为球蛋白。
(2)取上清液于另一支试管。
(3)向上清液液中加入硫酸铵粉末,边加边用玻棒搅拌,直至粉末不再溶解为止。
静置数分钟后,沉淀析出的是清蛋白。
(4)向两支试管中分别加水,观察其沉淀是否溶解。
(三)重金属盐沉淀
重金属离子如Pb2+、Cu2+、Hg2+、Ag2+等可与蛋白质分子上的羟基结合生成不溶性金属盐而沉淀:
重金属盐类沉淀蛋白质的反应通常很完全,特别是在碱金属盐类存在时。
因此,生化分析中,常用重金属盐除去体液中的蛋白质;临床上用蛋白质解除重金属盐引起的食物中毒。
1、材料与试剂
(1)10%的卵清蛋白溶液(2)0.1mol/L氢氧化钠溶液
(3)3%硝酸银溶液(4)0.1%硫酸铜溶液(6)试管3支
2、操作方法
(1)取试管2支,分别编号后各加入1ml10%的卵清蛋白溶液。
(2)各管再加入一滴0.1mol/L氢氧化钠溶液。
(3)向1管加3%硝酸银溶液3~4滴;向2管加0.1%硫酸铜溶液3~4滴。
混匀后观察沉淀的生成。
(四)生物碱试剂沉淀反应
生物碱试剂能与蛋白质分子中的氨基结合生成不溶性沉淀,反应如下:
1、材料与试剂
(1)10%的卵清蛋白溶液(2)5%三氯乙酸溶液
2、操作方法
取试管一支,加10%的卵清蛋白溶液20滴后再加入5%三氯乙酸溶液10滴,混匀后观察沉淀的出现。
(五)有机溶剂沉淀反应
1、材料与试剂
(1)10%的卵清蛋白溶液(2)95%乙醇溶液
2、操作方法
取试管1支,加10%的卵清蛋白溶液10滴后,再加入95%乙醇溶液20滴,边加边混匀。
静置片刻后观察结果。
习题
1、盐析时为什么分别用饱和硫酸铵溶液和硫酸铵粉末?
2、重金属盐沉淀蛋白质注意什么?。