葡萄糖氧化酶酶活测定
邻联茴香胺分光光度法测定饲料添加剂中葡萄糖氧化酶活力-文档资料
邻联茴香胺分光光度法测定饲料添加剂中葡萄糖氧化酶活力1 引言葡萄糖氧化酶是一种绿色饲料添加剂，在饲料和畜牧生产中可作为抗氧化剂减缓饲料氧化变质[1]，改善动物肠道微生物平衡[2]，提高饲料利用率[3]，促进动物生长，降低中毒反应更在一定程度上替代抗菌药物和抗球虫病药物，具有广泛的应用前景。
由于葡萄糖氧化酶的高度专一性，基于不同的酶活定义而建立的检测方法主要有电化学法、测压法、凝胶电泳法、滴定法、分光光度法和傅立叶变换红外光谱法等[4]。
电化学法、测压法、凝胶电泳法存在方法操作复杂，要求严格，有很强的仪器依赖性；滴定法存在工作量大、样品需要量大、人工读数导致的测量精度低，尤其在混合型饲料添加剂的检测中不能排除酸性、碱性载体干扰的缺点。
傅立叶变换红外光谱法是较新开发的一种检测方法，优点为检测速度快，试剂用量少。
缺点为仪器要求和模型建立需要前期投入太大，限制了其使用范围。
因此寻找一种简便，快捷，灵敏的高的酶活力检测方法很有意义。
本研究采用邻联茴香胺分光光度法测定葡糖糖酶活力。
反应机理为：葡萄糖氧化酶是一种需氧脱氢酶，能催化氧化葡萄糖生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和无色的还原型邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下生成水和红色的氧化型邻联茴香胺。
在一定的pH、温度、浓度及反应时间内通过测定产物吸光度在460nm 波长下的变化速率定量计算出酶活力。
基本反应式为：β-D-葡萄糖+H20+O2 δ-D-葡萄糖基-1，5-内酯+H2OH2O2+邻联茴香胺氧化型邻联茴香胺+2H2O1实验部分1.1仪器设备北京瑞利仪器XX公司UV-2600型紫外可见分光光度计；北京中兴伟业仪器XX公司DZKW-2型电热恒温水浴锅；赛多利斯科学仪器XX公司BSA224S型分析天平。
1.2实验试剂和材料标示含量为40GODU/g的葡萄糖氧化酶饲料添加剂；辣根过氧化物酶（上海蓝季生物）；邻联茴香胺（sigma，D9143）；磷酸二氢钠（国药试剂）；磷酸氢二钠（国药试剂）；葡萄糖（国药试剂）。
测定葡萄糖氧化酶活力的一种简便方法
测定葡萄糖氧化酶活力的一种简便方法周建芹 , 陈韶华 , 王剑文( 1. 苏州大学医学部药学院 , 江苏苏州215123; 2. 苏州大学医学部实验中心 , 江苏苏州215123 )摘 : 利用靛蓝胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶催化葡萄糖溶液产生的过氧化氢浓度 , 经过标要准曲线转换得到葡萄糖氧化酶的活力。
研究了缓冲液 pH 值、水浴温度、靛蓝胭脂红用量等对葡萄糖氧化酶活力测定的影响。
结果表明 : 利用靛蓝胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶活力时 , 缓冲液最佳 pH 值为 4、最佳水浴温度为100 ℃、靛蓝胭脂红最佳用量为 1.3 mL。
此方法的重现性较好 , 反应系统较稳定。
葡萄糖氧化酶在自然界中普遍存在 , 在食品、医药和发酵等工业生产及分析检测中用途广泛 , 是高等院校生物化学、酶学和酶工程等相关实验课程中经常选用的一种重要的模式酶。
在有氧情况下 , 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化产生葡萄糖酸和过氧化氢 : 葡萄糖 + O2 葡萄糖酸 + H2 O2 。
测定葡萄糖氧化酶活力常用的方法有 2 种。
一种是滴定法 , 即用碱滴定葡萄糖氧化酶催化葡萄糖产生的葡萄糖酸 , 这种方法误差比较大 , 灵敏度比较低 , 尤其是葡萄糖含量比较低时。
另一种是利用葡萄糖氧化酶—辣根过氧化物酶—苯胺衍生物或染料隐性体偶联反应体系测定。
过氧化物酶在有氧存在时 , 催化葡萄糖氧化、生成的过氧化氢分解 , 分解出的氧又将苯胺衍生物或染料隐性体(如邻 - 联二茴香胺 ) 氧化变成红色或棕色物质 , 颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。
这种方法非常灵敏 , 但也存在显色物质不稳定、在 1 m in内有明显褪色、数据重复性不好等不足 , 而且因为要与辣根过氧化物酶联用 , 因此这个方法比较昂贵 , 增加了测定成本。
葡萄糖氧化酶活力测定的困难限制了其在学生实验及课外科研项目中的应用 , 因此寻找一种廉价、简便并且灵敏度高的活力测定方法很有意义。
葡萄糖(Glu)测定氧化酶法标准操作程序SOP文件
生成的醌亚胺的颜色深浅与样品中葡萄糖浓度成正比。
3 标本
血清及肝素/EDTA抗凝血浆，处理方法见标本准备。
稳定性：15－25℃8小时
2-8℃72小时
收集后的标本应该尽快检测，或者与细胞进行分离。
4 试剂
4.1ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ剂
来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
血糖降低：生理性血糖过低见于妊娠期、哺乳期、饥饿及长期剧烈体力劳动后。病理性血糖过低常见于过量的胰岛素治疗，胰岛细胞增生或瘤，严重肝病及对抗胰岛素的激素分泌不足。
12 危急值
成人女性和婴儿：<2.2或>22.2mmol/L
成人男性：>22.2或<2.7 mmol/L
新生儿：<1.6或>16.6 mmol/L
血糖增高:生理状态下，饱食后或运动后有一过性的血糖增高，注射葡萄糖、肾上腺素及精神紧张可使血糖升高。病理性升高多见于糖尿病。其它内分沁系统
ABCD医院
生化实验室
文件编号：
ABCD-SOP-04-23
葡萄糖（Glu）测定氧化酶法
版序：ABCD
页码：第3页，共3页
的疾病，如甲状腺机能亢进、垂体前叶嗜酸性细胞腺瘤、肾上腺皮质功能亢进、嗜铬细胞瘤、垂体前叶嗜碱性细胞机能亢进症等。
Measurement POINT(1)[34]
TECHNICAL LIMIT(HIGH) [ 25.2 ]
POINT(2)[ 0]
CALIBRATION METHOD [ LINEAR ]
POINT(3)[ 0 ]
CALIBRATION POINT [ 2 ]
葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理_概述及解释说明
葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理概述及解释说明1. 引言1.1 概述本文旨在介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，并对其进行详细的解释和说明。
血糖测定是医学和生物科学领域中非常重要的一项实验技术，用于评估人体内的葡萄糖水平以及相关代谢功能的异常情况。
葡萄糖氧化酶法是一种常用的血糖测定方法，其基本原理是利用特定酶对葡萄糖进行氧化反应并与辅助试剂发生显色反应，从而间接地测定血液中的葡萄糖含量。
1.2 文章结构本文将按照以下结构进行展开：首先，介绍葡萄糖氧化酶的简要概况和血糖测定方法的总体概述；其次，详细讲解葡萄糖氧化酶法测定血糖的基本原理；然后，描述实验步骤并给出操作流程；接着，分析实验结果并讨论其中的意义和影响因素；最后，总结实验结论并展望未来该领域的研究意义和发展方向。
1.3 目的本文的目的是全面而清晰地介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，帮助读者了解该方法在实际应用中的作用和意义。
通过本文的阅读，读者可以深入了解葡萄糖氧化酶法的基本理论和操作流程，并对实验结果进行准确而详细的分析与讨论。
同时，本文也旨在提供对该方法局限性和未来发展方向进行探讨，并为相关研究人员提供参考，促进该领域的进一步发展和突破。
2. 葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理：2.1 葡萄糖氧化酶简介：葡萄糖氧化酶是一种存在于细胞内的酶类，在生物体中起到将葡萄糖转化为能量的重要作用。
该酶主要参与细胞内氧化还原反应，并催化葡萄糖与辅酶NAD+之间的反应。
在此过程中，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，并产生还原型辅酶NADH。
2.2 血糖测定方法概述：血液中的血糖水平是一个重要的生理指标，可以提供人体能量供给的信息。
因此，血糖水平的测定对于诊断和治疗许多代谢性疾病非常重要。
目前，有多种方法用于测定血液中的血糖浓度，其中最常用且最经典的方法就是使用葡萄糖氧化酶法。
2.3 葡萄糖氧化酶法的基本原理：葡萄糖氧化酶法是一种非常敏感和特异性的测定血糖浓度的方法。
该方法基于葡萄糖氧化酶与葡萄糖的特异性反应，通过检测在该反应中生成的还原型辅酶NADH的产生量来间接测定血液中的血糖浓度。
生化实验报告全文
一、实验目的1. 了解葡萄糖氧化酶（GOD）的催化作用原理。
2. 掌握测定葡萄糖氧化酶活性的方法。
3. 分析不同条件下葡萄糖氧化酶活性的变化。
二、实验原理葡萄糖氧化酶（GOD）是一种氧化还原酶，它催化葡萄糖与氧反应生成葡萄糖酸和过氧化氢。
在实验中，通过测定过氧化氢的生成量来间接反映葡萄糖氧化酶的活性。
过氧化氢在特定条件下会分解生成水和氧气，利用氧气的生成量可以计算出过氧化氢的浓度，从而推算出葡萄糖氧化酶的活性。
三、实验材料与仪器1. 试剂：- 葡萄糖标准溶液- 氧气电极- 氢氧化钠溶液- 酚酞指示剂- 水浴锅2. 仪器：- 721分光光度计- 恒温培养箱- 移液枪- 试管- 烧杯四、实验步骤1. 准备工作：- 将葡萄糖标准溶液配制成不同浓度的系列溶液。
- 配制好氢氧化钠溶液和酚酞指示剂。
2. 实验操作：- 将葡萄糖标准溶液加入试管中，加入适量的氢氧化钠溶液和酚酞指示剂。
- 使用移液枪将氧气电极插入溶液中，开始计时。
- 观察溶液颜色变化，记录溶液从粉红色变为无色所需的时间。
3. 数据处理：- 根据溶液颜色变化所需时间，计算出过氧化氢的生成量。
- 以葡萄糖浓度为横坐标，过氧化氢生成量为纵坐标，绘制标准曲线。
- 根据待测样品的浓度，从标准曲线上查得对应的过氧化氢生成量。
- 计算出待测样品的葡萄糖氧化酶活性。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：- 以葡萄糖浓度为横坐标，过氧化氢生成量为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 待测样品的葡萄糖氧化酶活性：- 根据待测样品的浓度，从标准曲线上查得对应的过氧化氢生成量。
- 计算出待测样品的葡萄糖氧化酶活性。
3. 不同条件下葡萄糖氧化酶活性的变化：- 在不同温度、pH值和酶浓度下，观察葡萄糖氧化酶活性的变化。
六、实验结论通过本实验，我们成功测定了葡萄糖氧化酶的活性，并分析了不同条件下葡萄糖氧化酶活性的变化。
实验结果表明，葡萄糖氧化酶活性受温度、pH值和酶浓度等因素的影响。
葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度课件
02
03
孵育
将反应孔放入恒温孵育箱中，在 适宜的温度下孵育一定时间，使 反应进行完全。
04
结果计算
数据处理
将实验获得的光密度值输入到相应软件或表 格中，进行数据整理和计算。
标准曲线制作
根据标准曲线和样本的光密度值，计算出血 糖浓度。
结果换算
根据标准品的光密度值制作标准曲线，用于 样本结果的换算。
结果报告
个性化医疗
结合患者个体差异和疾病进程，制 定个性化的血糖监测方案，提高治 疗效果和生活质量。
感谢您的观看
THANKS
。
操作简便
该方法操作简便，易于 自动化，适合大规模样
本检测。
缺点
成本较高
葡萄糖氧化酶制备困难， 成本较高，导致整个测定 方法的成本较高。
对氧气有依赖性
葡萄糖氧化酶法需要氧气 参与反应，如果样本中存 在缺氧情况，会影响测定 结果。
对温度和pH敏感
该方法对温度和pH敏感， 需要在特定的条件下进行 测定，否则会影响结果的 准确性。
开发实时、连续监测血糖浓度的技术 ，以满足临床对糖尿病患者血糖监测 的需求。
纳米技术应用
利用纳米材料提高酶的催化效率和灵 敏度，降低检测下限，提高检测准确 性。
新技术的应用
生物传感器技术
将葡萄糖氧化酶与电化学或光学传感器结合，开发便携式血糖检 测仪，方便患者自我监测。
人工智能与机器学习
利用人工智能和机器学习算法对葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度数据 进行处理和分析，提高诊断准确性和预测能力。
葡萄糖氧化酶法测定血糖 浓度课件
目录
• 葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的原理 • 葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的实验步骤 • 葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的优缺点 • 葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的应用场景 • 葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的未来发展
葡萄糖氧化酶质量标准
葡萄糖氧化酶质量标准
葡萄糖氧化酶质量标准是指用于评估葡萄糖氧化酶的纯度、活性和稳定性的一系列参考标准。
以下是一些可能的葡萄糖氧化酶质量标准：
1. 纯度：确定葡萄糖氧化酶中是否存在杂质或其他蛋白质。
可以通过比色法、电泳法或质谱法等技术进行检测。
2. 活性：评估葡萄糖氧化酶在特定条件下的催化能力。
常用的方法是测定其催化单位（1U定义为将1微摩尔葡萄糖氧化为-
D-葡萄糖的酶幅度）。
3. 组合特性：确定葡萄糖氧化酶的催化速度、温度和pH的依
赖关系。
这些特性可以通过实验室条件下的酶反应速率研究来确定。
4. 稳定性：评估葡萄糖氧化酶在储存和使用过程中的稳定性。
可以通过长时间储存酶样品，并定期检测其活性和纯度来评估。
葡萄糖氧化酶的质量标准通常是根据国际或行业标准进行制定和评估的。
如需准确的质量标准信息，建议参考葡萄糖氧化酶的制造商提供的相关文件和技术资料。
d-葡萄糖底物uv分光光度法 酶活测定方法
葡萄糖底物UV分光光度法是一种用于测定酶活的常见方法。
本文将介绍葡萄糖底物UV分光光度法的原理、步骤及其在生物化学和生物医学研究中的应用。
一、原理1. 葡萄糖酶（也称葡萄糖氧化酶）能够催化葡萄糖与氧气在水溶液中发生氧化反应，生成葡萄糖内酯和过氧化氢。
这个氧化反应是可以通过UV分光光度法测定的。
2. 葡萄糖底物UV分光光度法的原理是通过测定在酶催化下葡萄糖与氧气反应所产生的过氧化氢的浓度变化来间接测定酶的活性。
二、步骤1. 样品处理：将待测样品中的葡萄糖与底物混合，使底物的浓度在一定范围内，以确保底物的过量不会影响酶的活性测定。
2. 加入酶液：将一定量的葡萄糖酶加入混合液中，并在一定温度下孵育一段时间，使酶与底物发生反应。
3. 反应停止：加入一种化学试剂使反应停止，同时转化过氧化氢形成一种有色产物。
4. 测定吸光度：使用紫外-可见分光光度计测定产生的有色产物的吸光度，根据标准曲线计算出反应体系中的过氧化氢的浓度。
5. 计算酶活：根据过氧化氢的浓度变化和所加的酶的蛋白质含量等数据，计算出酶的活性。
三、应用1. 生物化学研究中的应用：葡萄糖底物UV分光光度法广泛应用于酶动力学研究中，可以用来测定各种酶的活性及其对底物的亲和力。
2. 生物医学研究中的应用：在生物医学研究中，葡萄糖底物UV分光光度法可以用来研究酶与疾病的关联性，例如糖尿病患者血清中的葡萄糖酶活性与血糖水平的关系。
结论葡萄糖底物UV分光光度法是一种简单、敏感、精确的酶活测定方法，具有广泛的应用前景和重要的科研意义。
通过对葡萄糖底物UV分光光度法的原理、步骤及应用进行了解和掌握，可以更好地指导实验操作并推动生物化学和生物医学领域的研究进展。
近年来，随着生物技术的不断发展，葡萄糖底物UV分光光度法在生物医学研究中的应用越发广泛。
除了用于酶动力学研究和疾病相关性分析外，葡萄糖底物UV分光光度法还在其他领域展现出了巨大的潜力。
1. 新药研发在新药研发过程中，葡萄糖底物UV分光光度法被用于筛选潜在的药物候选化合物。
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葡萄糖氧化酶酶活测定
1 酶活单位与定义
pH6.0、30℃的条件下，每分钟能把 1.0μmol 的β-D-葡萄糖氧化成 D-葡萄糖酸和 H2O2 的酶量为一个单位。
2 测定原理
葡萄糖和氧反应，在葡萄糖氧化酶的作用下，生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和无色的还原型邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下，生成水和红色的氧化型邻联茴香胺。
3 试剂和溶液
3.1 磷酸盐缓冲液（pH6.0）
称取 16.61g 磷酸二氢钠（ NaH2PO4·2H2O ）和 35.82g 磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O），溶于无 CO2 的水中，稀释到 1000ml。
3.2 邻联茴香胺甲醇缓冲液
1g 邻联茴香胺加在 100ml 甲醇中搅拌溶解备用。
临用时现配，取 0.1ml 加入到上述缓冲液 12ml 中混匀。
3.3 180g/l 葡萄糖水溶液
18g 葡萄糖加适量水溶解，并定容至 100ml。
3.4 0.03%辣根过氧化物酶液
称取辣根过氧化物酶（HRP,美国 Ameresco 公司）10mg，溶于 30ml 蒸馏水。
4 仪器设备
721-分光光度计、恒温水浴、秒表
5 分析步骤
5.1 待测酶样品的处理将待测酶样做适当稀释后进行试验，使得测定△A 值在 0.25～0.4。
5.2 测定
6 结果表示与计算
X=[△ A÷（11.3×t×0.1）] ×n t—测定时间，min
0.1—样品体积，ml
11.3—消光系数
n—稀释倍数
所得结果表示至整数。