组织固定液的使用
环保病理组织固定液
环保病理组织固定液组织固定是生物学与医学研究中不可或缺的手段，传统的以甲醛为主体配方的固定液在让我们窥见生物体秘密的同时，却让研究者饱受了甲醛毒性给我们的灾难。
尤其在大量使用甲醛作为组织标本固定液的病理科，取材室内空气中弥散的甲醛浓度高出安全浓度数百至数千倍！在追求和谐生活的今天，我们该换换空气了甲醛是健康的一大杀手，是被世界卫生组织确认为对人体有毒害、致癌、致畸形的化学物质，是公认的变态反应源，在我国有毒化学品控制名单上位居前列。
甲醛对人体的危害有三种：刺激作用：甲醛对皮肤和黏膜有很强的刺激作用，可使人眼部干涩、流泪、视力模糊、鼻黏膜水肿、咽喉不适、皮肤瘙痒。
毒性作用：可引起头晕、失眠、疲倦、注意力不集中、记忆力下降等神经系统损害，腹痛、恶心、呕吐、全身无力等消化系统损害，咳嗽、胸闷、气喘等呼吸系统损害。
还可导致免疫力下降、月经紊乱、不孕症、新生儿畸形等，儿童和孕妇对其尤为敏感。
致癌作用：动物实验证明甲醛既是致癌剂又是促癌剂，有可能导致鼻咽癌、肺癌、皮肤癌、白血病、结肠癌等。
10克甲醛可使人致死。
甲醛一直是污染病理科及周边环境的有害物质，病理科工作人员因此患化学性鼻炎的几率几乎是100%，在英国一份对病理工作人员的疾病调查报告中指出，病理工作人员患恶性淋巴瘤的概率远高于其它医疗部门人员。
组织固定液是以乙醇、多元醇、食品添加剂为主体的新一代复合组织固定液，不含甲醛、甲醇，是无毒无害的水性溶液，完全符合环保要求，克服了福尔马林（甲醛溶液）对环境的污染和对人体健康的危害，是福尔马林的更新换代产品。
使用说明：组织标本固定液与采用富尔马林的使用方法没有差别，适于HE组化和免疫组化染色，使用前无需稀释。
固定液渗透力与富尔马林相近；经固定的标本组织弹性好，便于切片；固定效果良好，细胞结构清晰；染色鲜艳，背景对比度强。
1 使用时，先往容器中注入固定液，然后再放入标本，固定液的体积为标本体积的5-10倍。
2 标本固定前应按规范切开。
免疫组化实验的详细步骤
免疫组化实验的详细步骤1. 制备组织切片- 将组织固定在适当的固定液中(如甲醛溶液)- 通过脱水、清理和浸蜡等步骤制备石蜡包埋块- 使用切片机将包埋块切成4-6微米厚的切片- 将切片贴附到载玻片上2. 脱蜡和水化- 将载玻片浸入二甲苯或者相似的溶液中,去除石蜡- 使用梯度浓度的乙醇溶液(100%,95%,70%)逐步水化切片3. 抗原修复- 抗原修复是一个关键步骤,可以暴露被固定过程掩盖的抗原表位 - 常用的方法包括加热诱导抗原修复和酶促抗原修复4. 内源性过氧化物酶或者生物素的封闭- 使用3%的过氧化氢溶液处理切片,以封闭内源性过氧化物酶活性 - 对于利用生物素-亲和素系统的实验,需要使用生物素封闭试剂进行封闭5. 加入封闭液- 使用含有蛋白质成分的封闭液(如牛血清白蛋白)处理切片- 这一步可以阻止抗体的非特异性结合6. 加入一抗- 将特异性的一抗(如小鼠抗人蛋白单克隆抗体)稀释至适当浓度- 滴加到切片上,在湿盒中于4℃过夜或37℃温育1-2小时7. 加入二抗- 洗去未结合的一抗- 加入与一抗种属相匹配的二抗(如生物素标记的羊抗小鼠抗体)8. 加入探针- 对于酶促反应型免疫组化,加入酶标记的亲和素(如过氧化物酶-亲和素复合物)- 对于荧光免疫组化,加入荧光标记的亲和素9. 显色- 酶促反应型:加入适当的染色底物(如),产生可见的棕黄色沉淀- 荧光免疫组化:不需要此步骤10. 染色和封片- 用苏木素对细胞核进行复染- 用封片剂和覆盖玻片封闭切片,制成永久装片11. 观察结果- 使用光学显微镜或荧光显微镜观察目的蛋白的分布和表达情况以上是免疫组化实验的一般步骤,具体操作细节可能因实验目的和具体方法而有所调整。
准确无误的实验步骤需要参考相关文献和说明。
10中性福尔马林
产品名称：10%中性福尔马林组织固定液简介：10%中性福尔马林组织固定剂，是由10%中性福尔马林溶液（即4%甲醛）、磷酸盐缓冲液等组成。
用作固定的浓度为10%的福尔马林，实际含甲醛4%，10%福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。
对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定剂。
配制方法：在病理科、手术室中运用，10%福尔马林固定液具备两个条件。
条件一：福尔马林在溶液中的含量浓度为10%（即甲醛含量为4%），甲醛在水中最高浓度为40%，即10%的中性福尔马林溶液，其中甲醛含量即是10%的40%甲醛。
10%中性福尔马林固定剂条件二：10%中性福尔马林溶液的酸碱度为PH值7.2~7.4之间。
调配标准符合国家标准，具有完善的标准体系。
配制过程中特别注意事项：原料很重要，水、甲醛、磷酸二氢钠，磷酸氢二钠。
一般厂家很不注重水，自来水，蒸馏水、去离子水都不太标准。
康乃欣公司用的水是这样一个流程：自来水经过四次中性树脂过滤，目的是去除水中杂质和离子，接着经过紫外线灭菌，经过微纳米中性树脂过滤去菌体尸体，最后经过双重蒸馏后得到的水，才用于调配10%中性福尔马林固定剂。
康乃欣用的40%浓度甲醛，磷酸二氢钠、磷酸氢二钠都是分析醇。
在配制10%中性福尔马林固定液使用车间，都是三十万级车间、机械流水线灌装。
康乃欣质量标准高于国家标准，采用国际通用标准。
产品用途：维持保存、固定细胞和组织固原有的形态和结构。
适用范围：用于人体、动物组织标本的固定。
产品成分：10%中性福尔马林溶液（即4%甲醛）、磷酸盐缓冲液等。
产品特点：渗透力强、固定均匀；对组织收缩少，尤其对神经及髓鞘、脂肪、糖等固定效果最佳。
操作步骤：1、先在组织固定剂上编号及写上相关信息；2、将离体组织及时浸入固定剂中，离体时间一般不超多5分钟，固定时间为2—12小时。
产品说明：1、组织标本的体积与液体的比例为1:4，此值效果最佳；不大于1:3.2、小块组织标本﹙小于1.2cm×1.2cm×0.6cm）及各种活检验组织标本，固定2—12小时即可，可直接进行切片、脱水、染色、镜检等操作。
病理切片染色[整理版]
![病理切片染色[整理版]](https://img.taocdn.com/s3/m/a5b133e17d1cfad6195f312b3169a4517723e520.png)
病理切片染色★常规病理送检注意事项★1. 手术中切取的组织标本，应立即投入固定液中固定(手术室应备有标本瓶和固定液)。
一般以10％中性福马林为固定液。
固定液的量不得少于标本体积的5～10倍。
标本瓶口宜大，便于标本固定后取出。
标本与瓶壁、瓶底接触影响固定者，以脱脂棉衬垫；浮于液面者，以脱脂棉覆盖。
如为传染性标本，应注意勿污染容器外面。
2. 标本容器上，应贴有患者姓名或送检单联号的标签。
如同一患者同时取有数种组织，或同一组织由不同部位取出，应分装不同容器，并分别注明。
不同患者的标本，不得放在同一容器内。
3．采取标本时，注意勿用有齿镊或钳夹取，勿挤压，以免发生人为的变形，影响诊断。
标本送检前勿剖开，应保持原形全部送检。
必须剖开时，最好邀请病理医师到场，否则应在病理检查申请单内详细描写标本剖开前后情况。
送检的组织不可太小，以免影响诊断。
4．标本如为整个器官或其大部，或体积较大，可不固定，但应尽早送病理科处理(外地或远途标本，可参照第三节的方法处理后送检)。
5．各种体液、穿刺液细胞学检查标本，应立即送检。
若不能立即送检，应随即离心沉淀，将沉渣做成均匀的涂片2～3张，及时放入乙醚和95％乙醇等量混合液或95％乙醇中固定，然后连同固定液，或在涂片表面涂以甘油后送检。
阴道排出物、鼻咽或其他分泌物、穿刺物涂片，应于涂片制成后即放入上述固定液中固定，然后送检。
6. 送检标本时，应逐项详细填写病理检查申请单，字迹要清楚。
临床科有特殊要求时，应在申请单上注明或事先联系。
★组织的脱水透明和浸蜡★(一)工作中注意事项1．标本未经充分固定，不得进入脱水处理的程序。
2. 在处理全过程中，每l标本均应附有编号。
随时注意防止标本间相互混杂。
细小标本应用拭镜纸包裹进行脱水，以免遗失。
3．标本多的单位，可根据标本的性质、大小、分类分批进行脱水，以便按组织的特点安排时间，保证质量，常规标本脱水和透明均应在室温进行。
4．一般以乙醇为组织脱水剂，自低浓度向高浓度渐进并多次更换，组织所含水分才能充分去除，透明、浸蜡才能顺利进行，对保证切片质量甚为重要。
中药材病理切片实验流程
中药材病理切片实验流程中药材病理切片实验流程一般包括以下步骤：1. 材料准备：选择需要研究的中药材样本，并从中药市场或植物园等地采集样本。
将样本保持新鲜，并根据需要，根据不同部位（如根、茎、叶、果实）进行切割和清洗。
2. 组织固定：将样本组织固定在合适的固定液中，如10% 确定液或4% 福尔马林。
在室温下浸泡一定时间，通常为24小时以上，以确保组织固定。
3. 组织脱水：将固定的组织样本从固定液中取出，然后按照一定的醇浓度梯度（例如70%，80%，90%，95%，100%）进行脱水处理。
每个醇浓度通常持续15-30分钟。
4. 组织浸渍：将脱水后的组织样本用透明剂（如山梨醇和苯酚等）浸泡，在透明剂中浸泡一定时间以达到透明化的目的。
透明时间视样本的大小和硬度而定，通常为数小时至数天。
5. 组织包埋：将透明化的组织放置在熔蜡中，等待熔蜡凝固，形成包埋块。
此步骤有助于以后制备病理切片。
6. 切片处理：使用切片机将包埋块切割成合适的厚度（通常为3-5微米）的切片。
7. 切片染色：将蜡块切片上的组织片染色，以增强细胞和组织的对比度。
常见的染色方法包括经典的血液学染色（如伊红染色和嗜伊红染色）以及免疫组化染色等。
8. 制片封片：将染色后的切片放置在玻璃片上，并使用合适的封片剂将切片封装，以便保存和观察。
9. 显微镜观察：将封片放置在显微镜下，并使用合适的放大倍数来观察组织和细胞的结构和变化。
10. 图像和数据分析：利用数字图像设备获取切片图像，并使用图像处理和分析软件对图像进行分析和数据提取。
11. 结果解释和讨论：对观察到的结果进行解释和讨论，结合文献和病理知识进行对比和分析。
Gendre固定液使用说明
Gendre固定液Gendre Fixative Solution编号名称规格单位北京华越洋WG03593Gendre固定液100ml，500ml瓶Gendre固定液用途：固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。
Gendre固定液(Gendre Fixative Solution)类似于Bouin's固定液，主要由PA、甲醛、乙醇、乙酸混合而成，PA可沉淀蛋白引起组织收缩，但不会使组织硬化，其与甲醛和乙酸混合后，穿透度加快，固定均匀，组织收缩轻微，对细胞的微细结构显示的很清晰，为一种良好的固定液。
该固定液主要用于保存糖原，保存的糖原呈粗大颗粒状，小块组织细胞固定数小时至过夜后直接转入95%的乙醇脱水，其缺点是易把糖原推向细胞的一端，造成人为的“极化现象”。
Gendre固定液固定时的注意事项：1、Gendre Fixative Solution对人体有一定的损害，请在通风好的环境下小心操作，避免吸入。
2、2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同，对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。
常规活检组织比较适合的厚度为2~4mm，一般不超过6mm。
3、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10：1。
如果容积不够大，可以在固定期间更换1~3次固定液。
4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。
5、取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。
Gendre固定液固定的条件：1、一般需固定4h至整夜。
如果组织块大，可适当延长固定时间，但不宜超过24h。
2、固定后，组织可稍微流水冲洗或不冲洗直接转入70%的乙醇脱水，经乙醇脱水时可除去大部分PA，组织留有一点黄色，对染色也无影响。
Gendre固定液保存条件：RT,避光。
有效期半年。
华越洋Gendre固定液其他相关固定液：Bouin固定液,Bouin氏固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。
4%多聚甲醛(pH 7.2~7.4)使用说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://
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4%多聚甲醛（pH 7.2~7.4）
4%多聚甲醛（pH 7.2~7.4）
4%多聚甲醛（pH 7.2~7.4）可以用于免疫染色时细胞样品或组织切片的固定。
按照每个样品固定时需要1mL 固定液计算，一个包装的4%多聚甲醛固定液可以固定100个样品。
使用说明
对于细胞样品，去除培养液后，按照每六孔板一个孔加入1mL 固定液的比例，加入4%多聚甲醛固定液。
对于其它样品，加入4%多聚甲醛固定液的量都以充分盖住样品为准。
通常室温固定10min 即可完成固定。
也可固定较长时间，例如4℃固定过夜。
温馨提示
多聚甲醛有刺激性气味，为了您的自身安全，使用试剂前，请做好防护，如穿实验服，戴口罩，戴手套等。
储存温度
建议分装后保存于-20℃。
包装清单
货号 品名 包装
HCY068 4%多聚甲醛（pH 7.2~7.4） 100mL 说明书 1份。
小鼠肝脏组织人cyp酶家族免疫组化染色实验步骤
小鼠肝脏组织人cyp酶家族免疫组化染色实验步骤以下是小鼠肝脏组织人CYP酶家族免疫组化染色的一般实验步骤：1.杀死小鼠并迅速取出肝脏组织。
使用适当的动物伦理规范和操作程序。
2.将肝脏组织固定在合适的组织固定液中（如4%的paraformaldehyde）进行固定。
固定时间一般为4-24小时，具体时间取决于组织大小和固定液的浓度。
3.将固定后的肝脏组织进行组织处理，包括脱水、清除脂肪、蜡包埋等步骤，以便进行免疫组化染色。
具体处理步骤和方法需根据实验室常规和使用的试剂进行操作。
4.制备切片：使用旋转式、滑微型或冷冻切片机制备肝脏组织切片。
切片厚度通常为4-10微米，具体厚度取决于实验需求和使用的切片设备。
5.抗体选择：选择与人CYP酶家族相关的抗体进行免疫组化染色。
选择的抗体应具有与目标蛋白质特异性结合的能力，并且在小鼠样本中获得良好的信号。
6.免疫组化染色：进行抗体染色步骤，具体步骤如下： a. 切片去蜡：将切片脱蜡并重新水化。
b. 抗原恢复：进行热或酶解抗原恢复步骤，以增强抗体对目标蛋白质的识别。
c.阻断非特异性结合：使用适当的阻断剂（如牛血清蛋白或小鼠血清）对切片进行阻断，以减少非特异性结合。
d. 抗体孵育：在切片上加入目标抗体，并在合适的温度和时间下进行孵育，使抗体与目标蛋白质结合。
e. 二次抗体孵育：添加适当标记的二抗（如荧光标记的二抗）与一抗结合，并形成目标蛋白质和抗体复合物。
f. 染色显现：可根据需要添加染色剂进行显现，可使用荧光显微镜观察染色结果。
7.显微镜观察和图像获取：使用适当的显微镜观察标本，并使用相应的成像系统进行图像采集。
这些步骤提供了一般性的指导，具体的实验设计和操作细节可能因研究目的、使用的试剂和实验室条件而有所差异。
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谈谈固定液的使用作者: liza3(站内联系TA)发布: 2013-01-11当前，应用于固定试剂的种类较多，它们对于固定不同的组织成分起着不同的作用，因此我们在使用时应该了解不同固定剂的效能，才能合理的固定组织。
根据Bencroft的分类法，将不同的固定剂分为四种类型：Ⅰ类：醛类，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。
Ⅱ类：氧化剂类，四氧化锇（奥酸），高锰酸钾，重铬酸钾等。
Ⅲ类：蛋白变性类，甲醇，乙醇，醋酸等。
Ⅳ类：其他，氯化汞，苦味酸等。
上述四种类型的固定剂，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技术方面中用到。
下面根据使用的需要，将着重介绍几种常用的固定剂。
（1）甲醛甲醛商品名为福尔马林，一般市售的含甲醛37—40%，由甲醛气体饱和于水而成，比重为1.1 2。
它也可以稳定的固体形式存在，它的成分为高分子量的聚合体，称为多聚甲醛。
甲醛溶液较难纯化，在每批市售商品中，都含有不少的杂质如甲醇，这种在组织化学方法当中，能使酶钝化，影响其反应。
甲酸，它可使固定液变酸，在陈列标本或长时间固定的组织，由于酸的作用，往往细胞核染色欠佳。
甲醛有效固定作用的要点是，在蛋白质末端基团之间形成交联链。
参与甲醛固定蛋白质的基团，主要为氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环。
甲醛与组织蛋白类的反应是多样和复杂的，因为它能和多种不同的功能基团结合，在多数情况下在其间形成桥键。
甲醛有这种交联的功能，也是它的缺点，在用甲醛固定过的组织中，需要做免疫组化的，往往提倡用酶消化或热抗原修复法来使蛋白与甲醛交联的醛键断裂开，以利于后来的染色。
甲醛可配成简单的或混合的固定液，最简单和最容易掌握的方法，就是取10ml甲醛液，加水9 0ml，这就是10%的福尔马林.当然,现在使用的固定液要求较为严格些,最好是使用缓冲福尔马林固定液,这将有利于后来的免疫组化染色的需要.从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点:1. 组织收缩较少,损伤少,保存固有物质好.2. 固定均匀,穿透力强.3. 能使组织硬化,增进组织弹性,有利于切片.4. 能保存脂肪及脂类物质.5. 成本较低.虽然甲醛有上述的优点,但这都是相对而言,任何物质都不可能十全十美的,它也有许多缺点:1. 杂质含量较多,如甲醇,可钝化酶类,影响反应.2. 含有微量甲酸,导致固定液酸变,影响染色.3. 可产生福尔马林色素,影响观察.4. 不能固定尿酸和糖类物质.5. 容易挥发,污染环境,可导致标本干涸.6. 可长期存在于固定过的组织上.有人做过实验,组织用甲醛固定后在流水中冲洗5小时后,仍留有相当多的甲醛与蛋白质相结合,但需要经过长时间的流水冲洗(24天的冲洗)方能除去.可见存在于组织上的甲醛是不可能除去的.因为临床活检不可能有这么长的时间来冲洗组织.因此要特别指出的是,在其后的各种技术操作中,要特别注意到甲醛的存在,必须要想办法除去它,否则将会给各种染色造成影响,甚至导致失败。
应用甲醛,可以配成许多种固定液:1. 10%缓冲福尔马林固定液甲醛100ml蒸馏水900mlNaH2PO44gNa2HPO4 6.5g该固定液是当今流行的固定液,因它对组织固定较好,损伤较少,因对其后的各方面的研究都较好,尤其是对免疫组化的染色.2、10%福尔马林固定液甲醛100 ml自来水900ml这是一种最简单的固定液，适合于边远地区携带的固定液，但由于它的单一性，因此，只要有条件的单位都不要求使用这种固定液。
3、10%福尔马林盐固定液甲醛100ml自来水900mlNacl 9克先将Nacl溶于水，再加入甲醛。
这也是一种较为简单的固定液，但由于加入Nacl，它是一种重金属盐物质，加入了它可促进和改善染色，增加染色的强度。
4、Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液75ml甲醛2 ml冰醋酸5 ml该固定液中的冰醋酸，对胶原纤维等组织有膨胀作用。
而甲醛对组织有收缩作用。
两种试剂的混合使用，用以抵消彼此间的副作用。
使组织固定达到优良的固定水平。
5．醛糖钙固定液甲醛100ml蔗糖300ml乙酸钙20g蒸镏水90ml先将蔗糖和乙酸钙溶于蒸镏水，后加入甲醛。
该固定液对于做酶的组织化学的研究效果较好，组织固定后，做冰冻切片，再给予显示。
当前国内外基本上都还是要用甲醛来固定组织。
从免疫组织化学的角度来说，甲醛固定的组织大部分都可以用免疫组化的手段来检测，据多人认为，它对IgA ，IgM，J链，K链和λ链的标记效果较好，且背景清晰。
但美中不足的是：经它固定的组织，可与蛋白形成醛交联蛋白，这种醛键可封闭抗原。
固此，在免疫组化实际检测中，应根据不同的要求和需要，采用酶消化或者其它抗原修复如微波、高压等的方法，以便破坏醛键重新暴露抗原。
（2）酒精：又称乙醇，为无色透明的液体，沸点是78度，工业酒精是95%。
酒精它有许多优点：1、可保存尿酸结晶和糖原等物质。
高浓度的酒精如95%，无水酒精可保存上述两种物质，因它们易溶于水，因此，要证明上述两种物质的存在，就不能用含水的固定液来固定组织。
2、能在任何比例的情况下与水混合，在病理技术中，酒精是一种十分重要的试剂，它起着关键的作用。
如果没有酒精，将会无法完成必要的工作。
如组织的脱水，切片染色前后都离不开酒精，在常规的工作中，通常都用95%的工业酒精来配成60%、70%、80%、90%等不同的浓度来使用。
3、可溶解苯类物质为染色步骤中的桥梁试剂。
常规活检等切片上的石蜡必须除去，才能进行染色，能除去石蜡的物质有苯及汽油等，常用的有苯类试剂，苯不溶于水，但能溶于酒精，酒精在这里充担着除去苯和连接水的作用，为切片入水架起了桥梁，因此称它为桥梁试剂。
4、能除去切片上的水份，使切片无水化。
切片经染色后，由于所用的试剂都为水溶液，因此在切片上含有大量的水份，这些水份经系列梯度酒精的置换吸附后，到无水酒精中已完全无水，这样处理对于切片的保存是有好处的，否则，切片将会褪色。
5、可用来保存标本。
大体标本经福尔马林固定后，如为了陈列保存，必须取出冲冼。
然后移入75%的酒精中。
如果用福尔马林作陈列标本的固定液，则因为福尔马林含有杂质较多，液体容易酸化，时间一长，会逐渐变为微黄*色或淡黄*色，影响美观，影响陈列的效果。
6、可与其它试剂配成多种的混合固定液，有时为了加快固定，常采用酒精和其它试剂来配成混合固定液，这种固定液在固定的同时，兼有对组织脱水的作用。
应用酒精配成的混合固定液有：①Carnoy氏固定液氯仿300ml冰醋酸100 ml95%酒精600 ml该固定液固定组织快速，在固定的同时兼有脱水的作用。
溶液中的氯仿和酒精，对组织的收缩较厉害，但应用了冰醋酸，这种现象便被中和去。
②AF固定液甲醛100 ml冰醋酸50 ml95%酒精850 ml这种固定液的作用与上液有相似之处，但要注意的是，凡使用含有醋酸的固定液，其脱水用具不能使用铜制的脱水盒，因冰醋酸跟铜离子起反应，生成醋酸铜，这种物质可沉淀于组织间，可破坏组织中的抗原，造成免疫组化检测的失败。
应用时应多加注意。
酒精也有许多不足之处，它的缺点是：1、可溶解脂类物质，凡要证明组织是否含有脂类和类脂物时，切不能用含有酒精的固定液去固定组织，也不能用石蜡切片，因为酒精可将它们溶解去，而石蜡切片组织中含有的脂类物质，则在组织脱水时被溶解去，只留下脂类或类脂物所占有的空间。
2、对组织收缩较大，不宜作单纯固定液。
高浓度的酒精，对组织有显著的收缩作用，造成组织发硬易脆，难以切片等现象。
因此，它不作为单纯的固定液。
3、渗透力不强。
当用酒精固定组织时，组织表面很快就被固定，并形成了一层蛋白膜，这层膜可阻挡固定液向里渗透，造成了中间组织固定不佳的现象。
4、可沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，凡经酒精固定的组织，核的染色都不好。
5、可脱去切片上已着染的各种颜色，切片经染色后，一是必须洗去多余的染液，二是必须脱去切片上的水。
在用酒精洗切片时，必须仔细地掌握显微镜下观察，还要掌握酒精的浓度，低浓底的酒精脱色力强，稍不注意，便可脱去切片上大部分的颜色。
切片脱水时，要较快地通过低浓度的酒精，以免使已着染的颜色被脱去。
6、价格较贵。
从经济学的角度，应用酒精固定组织划不来，例如：一瓶500ml的甲醛，可配成500ml的固定液，按每例标本需要100ml计，可固定50例标本，而一瓶500ml的酒精，即使配成80%酒精，也只能固定6例标本，因此，若用酒精固定组织，其价格比用甲醛固定组织的要高8倍。
（3）冰醋酸。
冰醋酸为无色透明的液体，易挥发，气味大，一打开瓶盖，整个文章都可闻其味道，纯醋酸在17℃时常为结晶状，因称为冰醋酸，在冬天使用时，可用微波炉进行解冻，再行使用，它的优点有：1、能迅速固定染色质，助于染色，用醋酸配成的固定液，其作用快，固定效果均匀，对于染色质的固定快，因此，用其作固定的切片染色好，在配其它染色液如明矾苏木素和伊红时，常常需加入一定量的醋酸，以促进染色。
2、能使组织尤其是富含纤维的组织膨胀。
各种固定液对组织都有收缩的作用，尤其是对富含纤维的组织。
而它不但不会使组织收缩，而且还会令许多组织发生膨胀的作用。
根据这个特点，用它配成许多种不同的混合固定液，以达到固定好，收缩少，易切片，效果好等目的。
用它配成的混合固定液有：（1）Zenker氏固定液：重铬酸钾25G升汞50G蒸馏水1000ml冰醋酸50ml先将重铬酸钾和升汞溶于水中，尢其是重铬酸钾，应用热水或加温的方法将其溶解，然后过滤贮存于带盖的玻璃瓶中，如暴露于空气中，该溶液将会被慢慢氧化而便颜色加深，导致失效。
临用时，取贮存液950ml，加入50ml的冰醋酸，即可使用。
应用该固定液固定的组织，一般不要超过24h，取出组织，流水冲冼12小时以上，然后保存于75%-80%的酒精中，在切片染色前，必须用碘除去汞盐的沉着。
应用该固定液的组织，细胞核及细胞浆染色十分清晰，特别是要显示骨骼肌的横纹时，应用本液可获得满意的结果，但由于其含有醋酸，故不能用于保存细胞颗粒，红细胞及含铁血黄素。
（2）Flemming氏液2%酸水溶液200ml1%铬酸水溶液700ml冰醋酸100ml该液中的奥酸对脂肪组织既有固定作用，又有染色作用，对有髓神经纤维也有固定兼染髓鞘的作用。
如果做HE的染色，该液不适合。
应用该液固定的组织，切片不能太大过厚，一般1-2毫米厚固定时间1-3天，后经水洗，保存于80%酒精中，除上述两液体外，还有Bouin氏液和Carnoy 氏液等。
冰醋酸也有许多不足之处：1、不能作为单一的固定剂。
冰醋酸在实际应用中，常被作为添加剂来使用，如许多种固定液，都加入了冰醋酸。
另外，在苏木素和伊红染液中，也常加入了冰醋酸。
2、不能凝固蛋白质，不能保存白细胞颗粒，红细胞及含血铁黄素等。