生化反应

（3）方法：将待检菌接种于上述培养基中，于35℃培养 24～48h，沿试管壁慢慢加入吲哚试剂。 （4）结果：于两者液面接触处出现红色为阳性，无色为 阴性。 （5）应用：主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。如ECO、产 酸克雷伯菌、普通变形杆菌等
靛基质试验原理
色氨酸
色氨酸酶
靛基质 （吲哚）
对二甲基氨基苯甲醛
糖发酵试验结果判断
反应现象 黄色、有气泡 结果描述
⊕分解××糖产酸、产气
黄色、无气泡
培养基不变色
+分解××糖产酸
-不分解××糖
糖发酵试验—溴甲酚紫指示剂
V.P.试验 甲基红试验（M.R.试验）


细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖，所产生的 丙酮酸，可被进一步代谢。 丙酮酸代谢途径的不同，可通过V.P. 和M.R. 这一对实验进行鉴别。
+ + + + + + + - + + + +
-
大肠杆菌 产气杆菌 阴沟杆菌 肺炎克雷伯
沙门菌属
志贺菌属 粘质沙雷菌
I M Vi C + + - 不活泼大肠杆菌与痢疾志贺氏的鉴别
菌 名 乳糖 动力
迟缓 -
赖
+
甘露醇
+
不活泼 大肠艾希氏
痢疾志贺氏
-
-
-
-
ＩＭＶiＣ - - + + 肺炎克雷伯与阴沟杆菌、产气杆菌、粘质沙 雷菌的鉴别
生化反应
用生化试验的方法，检测细菌对糖、蛋
白质等基质的分解能力和代谢产物，用于鉴 别细菌的反应，统称为生化反应。
糖醇类发酵试验



细菌可发酵的基质 糖（葡萄糖、蔗糖、乳糖等） 醇（甘露醇） 糖苷（水杨苷） 发酵后产生的有机酸 乳酸、醋酸、丙酸等 发酵后产生的气体 甲烷、氢、二氧化碳等
一、糖醇类代谢试验
-
-
+
液化沙雷
红色沙雷
+
+
+
+
+
-
变形杆菌属的关键性生化试验
菌名
奇异变形杆菌 普通变形杆菌 潘氏变形杆菌 产粘变形杆菌
I
鸟
VP
+ -
+
+
洋葱、嗜麦芽生化反应
菌名 洋葱伯克
甘露醇
氧化酶
DNA
+
+
-
嗜麦芽
-
-
+
不动杆菌属鉴别的关键性试验
菌 名 精氨酸 枸橼酸盐 丙二酸盐 42℃ 溶血 醋酸钙
鲍曼
溶血



糖发酵试验 单糖发酵试验 双糖铁/三糖铁发酵试验 甲基红试验 V-P试验 葡萄糖氧化／发酵试验（O/F试验) 七叶苷水解试验
糖发酵试验

原理

细菌分解糖→丙酮酸→酸性产物(或产 酸产气)→pH↓ →指示剂呈酸性变色(若产 气者有气泡出现) 培养基：糖发酵管、微量糖发酵管 试剂：溴甲酚紫(6.8～5.2 紫～黄) 应用：观察细菌对糖的分解情况，常用于 肠道杆菌的鉴定
V-P试验
氧化/发酵（O/F）试验
原理：细菌对糖的代谢分有氧氧化和无氧酵解。糖在有氧 环境下氧化完全，生成CO2和水。在无氧环境下，进行不 完全分解（发酵），生成酸类、醇类和气体。 发酵型细菌在有氧和无氧的环境中，都可以分解糖。 氧化型（非发酵菌）细菌在无氧环境中，不能分解糖， 应用：1.葡萄球菌属 链球菌属的鉴别 O/F 发酵型 氧化型 2.革兰阴性杆菌间的鉴别 非发酵菌 发酵菌


氨基酸脱羧酶试验（赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸）
肠杆菌科作为推测性鉴定的重要生化反应
I M Vi C
TSI
A/A ⊕ AHale Waihona Puke BaiduA ⊕ A/A ⊕ A/A ⊕
动 脲 力 酶
赖 鸟 精 H2S 疑 似 菌
++---++ --++ --++
- +-+/-
K/A ⊕/+
K/A + K/A
++---++
+ + + + +
菌 名
TSI
A/A A/A A/A K/A
赖
＋ ＋ － ＋
鸟
＋ ＋ ＋
精 动力
－ － ＋ － － ＋ ＋ ＋
肺炎克雷伯 产气杆菌 阴沟杆菌 粘质沙雷
克雷伯菌属鉴别的关键性试验
菌 名 I C 丙二酸盐
肺炎克雷伯 产酸克雷伯 鼻硬结克雷伯
臭鼻克雷伯
+ -
+ + -
+ + +
-
沙雷氏菌属间鉴别
阿拉伯糖 木 粘质沙雷 糖 鸟 氨 酸
尿素酶试验原理
尿素
尿素酶
氨+CO2 培养基pH升高 酚红呈碱性变色
尿 素 酶 试 验
枸橼酸盐利用试验




原理：某些细菌能利用培养基中的枸橼酸盐或铵 盐作为碳源，分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵 盐生成的氨，使培养基变碱，指示剂呈碱性反应 培养基：枸橼酸盐培养基 试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色，pH7.6 以上呈蓝色） 结果：培养基变蓝：+ 培养基不变色：－ 应用：肠杆菌科属间鉴别
蛋白质类代谢试验


靛基质试验 硫化氢试验 尿素酶试验 枸橼酸盐利用试验 氨基酸脱羧酶试验（赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸）
靛基质试验

原理：某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸
生成吲哚（靛基质），当加入吲哚试剂（对位二甲氨基苯 甲醛）后则形成红色的玫瑰吲哚。

培养基：蛋白胨水或半固体
玫瑰靛基质 （玫瑰吲哚）
靛基质试验
硫化氢试验


原理：细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸，生成 硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐结合 生成黑色络合物。 培养基：含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基 结果：培养基变黑为阳性，不变黑为阴性 应用：常用于肠道杆菌的鉴定 沙门菌属、爱德华菌属、枸橼酸杆菌属、变形 杆菌属细菌，绝大多数硫化氢阳性
甲基红试验
V-P试验



原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮酸 脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙酰甲 基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的 精氨酸所含的胍基结合，生成红色化合物。 培养基：葡萄糖蛋白胨水 结果：加入试剂后，培养基呈现红色：+ 培养基不变色： － 应用：主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌
葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径
葡萄糖 分解 大量混合酸
丙酮酸
脱酸 乙酰甲基甲醇 二乙酰
V-P试剂
pH降至4.4以下
甲基红试剂
培养基变红
培养基变红
甲基红试验—葡萄糖蛋白胨水


培养基：葡萄糖蛋白胨水 试剂：甲基红试剂(PH4.4～6.2 红～黄 ) 结果：培养基呈现红色：+ 培养基不变色： － 应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主 要见于大肠肝菌与产气杆菌的鉴别
硫化氢试验
尿素酶试验


原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和 CO2，氨使培养基呈碱性变色。 培养基：尿素培养基 试剂：酚红指示剂(6.8～8.0 黄～红) 结果：培养基变红：+ 培养基不变色－ 应用：肠杆菌科属间鉴定 奇异变形杆菌和普通变形杆菌脲酶阳性、雷氏 普罗威登菌和摩根菌为阳性 、布氏杆菌等
琼氏
约氏 洛菲
+ + + + -
+ + + + +
-
+ + -
+ + -
+ -
肠球菌种间鉴别
种名
鸟肠球菌 粪肠球菌 屎肠球菌 鹑鸡肠球菌 铅黄肠球菌
山梨醇
阿拉伯糖 30℃动力 黄色素
+ + -
+ + + -
+ +
+
常见动力阴性菌鉴别的关键性生化反应
菌 名
肺炎克雷伯菌 志贺氏菌 不动杆菌
双糖鉄
A/A K/A K/K

几类细菌O/F试验结果
细菌
粪产碱杆菌（产碱型） 非发酵菌（氧化型） 肠杆菌科细菌（发酵型）
葡萄糖 有氧管
葡萄糖 无氧管
+
-
+
+
氧化发酵试验（O/F试验）
七叶苷水解试验
1.原理：某些细菌（如肠球菌）可水解七叶苷， 生成葡萄糖和七叶素。七叶素可与培养基中的 柠檬酸铁试剂的二价铁离子反应生成黑色的化 合物沉淀，使培养基变黑。 2.方法：细菌接种培养基→24h →结果 3.结果：黑—阳性 不变-阴性 应用应用：主要用于肠球菌与其他链球菌的鉴别。 也可用于革兰阴性杆菌及厌氧菌的鉴别。

双糖或三糖铁试验


原理：用于观察细菌对糖的发酵能力，以及是否 产生硫化氢，可初步鉴定细菌的种属。 双糖或三糖：葡萄糖、乳糖或葡、乳、蔗糖 葡萄糖:乳糖、蔗糖 1:10 指示剂：酚红(6.8～8.0 黄～红 ) 结果： K/A葡萄糖/乳糖(+/-)，产酸少，斜面因 接触空气被氧化变红，底层变酸变黄。 红/黄 A/A葡萄糖/乳糖(+/+) ，产酸大，斜面 和底层均成酸性而变黄。 黄/黄 细菌分解含硫氨基酸，生成硫化氢，遇铁离 子形成黑色的硫化铁沉淀物。黑
枸橼酸盐利用试验原理
培养基
碳酸盐 枸橼酸盐
铵盐 氨盐
培养基PH上升
溴麝香草酚蓝 呈碱性变色
培养基变蓝
枸 橼 酸 盐 利 用 试 验
氨基酸脱羧酶试验 （赖aa、鸟aa、精aa水解）
原理：细菌产生的脱羧酶可使氨基酸脱掉羧基， 生成胺和CO2，胺可使培养基PH升高，指示剂变色。 （1）赖氨酸：脱羧生成尸胺和CO2 （2）鸟氨酸：脱羧产生腐胺和CO2 （3）精氨酸：脱羧形成精胺和CO2 指示剂：溴甲酚紫 （5.2～6.8 黄～紫红 ) 结果：紫：阳性 黄—阴性 应用：沙门菌属中除伤寒和鸡沙门菌外，其余沙门 菌的赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶均为阳性。志贺菌属 除宋内和鲍氏志贺菌外，其他志贺菌均为阴性。