血清在细胞培养中的作用和质量要求
鼠血清用途

鼠血清用途鼠血清是从实验室鼠类动物中获取的血清,经过处理和提纯得到的制剂。
鼠血清在生物医学研究和临床应用中具有广泛的用途,主要包括以下几个方面:1. 细胞培养鼠血清作为细胞培养基的重要组成部分,可以提供细胞生长和分化所需的营养物质、生长因子和激素。
在细胞培养实验中,鼠血清可以促进细胞增殖、保持细胞的功能和形态稳定,为细胞实验提供良好的生长环境。
2. 免疫学研究在免疫学研究中,鼠血清可用于制备抗体、培养淋巴细胞和活化免疫细胞。
通过添加适量的鼠血清,可以促进免疫细胞的生长和增殖,从而更好地开展免疫相关的实验研究。
3. 疾病模型在建立动物模型研究疾病方面,鼠血清也发挥着重要作用。
通过给予实验动物注射鼠血清,可以模拟某些疾病的发展过程,对疾病机制进行深入研究。
例如,鼠血清可以用于建立自身免疫性疾病模型、炎症模型等,为疾病的发病机制和治疗策略提供重要的实验依据。
4. 药物筛选在药物研发和筛选过程中,鼠血清也是不可或缺的试剂。
通过在细胞培养实验中添加鼠血清,可以评估药物的毒性、活性和安全性,为新药的研发提供重要参考依据。
5. 组织工程在组织工程和再生医学研究中,鼠血清被用作细胞生长和分化的诱导因子。
通过添加适量的鼠血清,可以促进干细胞的分化为特定细胞类型,如神经细胞、肌肉细胞等,为组织修复和再生医学提供重要的实验基础。
总的来说,鼠血清在生物医学研究和临床应用中具有广泛的用途,涉及到细胞培养、免疫学研究、疾病模型、药物筛选和组织工程等多个领域。
它为科研人员和临床医生提供了重要的实验材料和工具,促进了生物医学领域的发展和进步。
同时,随着生物医学研究的不断深入和发展,对鼠血清的提纯和标准化要求也变得越来越高,未来将会继续在这一领域进行深入研究,以推动其在生物医学领域的应用发展。
细胞体外培养里面加人血清白蛋白的意思

细胞体外培养里面加人血清白蛋白的意思细胞体外培养是一种在实验室中培养和繁殖细胞的技术。
在这个过程中,培养基中通常会添加一定比例的人血清,以提供细胞所需的营养物质和生长因子。
而在一些特定的实验条件下,为了满足细胞对特定蛋白质的需求,人血清白蛋白会被添加到培养基中。
1. 细胞体外培养的基本概念细胞体外培养是一种用于研究细胞生长和生物学特性的重要技术。
通过培养细胞体外,研究人员可以更方便地对细胞进行操作和观察,从而揭示细胞的生理、代谢和分化等方面的特性,并为医学研究和药物开发提供重要的实验数据。
2. 人血清在细胞培养中的作用人血清作为一种含有多种生长因子、蛋白质和营养物质的营养液,在细胞培养中起着至关重要的作用。
它可以为细胞提供所需的营养物质,促进细胞的生长和繁殖。
另外,人血清中还含有一定比例的生长因子和激素,可以调节细胞的代谢和生长,对细胞的分化和功能发挥起着重要作用。
3. 人血清白蛋白的添加意义人血清白蛋白是一种重要的蛋白质成分,其在细胞培养中的添加不仅可以提供额外的营养物质,更重要的是可以模拟细胞在体内的生长环境,促进细胞的正常生长和功能发挥。
在一些特定的实验条件下,例如神经细胞的培养、癌细胞的研究等,人血清白蛋白的添加可以更好地满足细胞对特定蛋白质的需求,促进细胞的正常生长和功能发挥。
4. 添加人血清白蛋白的培养基配方和使用注意事项在进行细胞培养实验时,如果需要添加人血清白蛋白,一般可以根据实验的具体要求在培养基中添加适当比例的人血清白蛋白,例如0.5、1等。
在添加人血清白蛋白时,需要严格控制培养基的成分和比例,以确保细胞在最适宜的生长环境中。
另外,在培养过程中要注意对人血清白蛋白的保存和使用,避免因保存不当或者污染导致细胞培养失败。
总结:细胞体外培养是一种重要的实验技术,而人血清白蛋白的添加则可以进一步优化培养环境,满足细胞对特定蛋白质的需求,促进细胞的正常生长和功能发挥。
在进行细胞培养实验时,研究人员需要根据实验的具体要求合理添加人血清白蛋白,并严格控制其成分和比例,以获得准确可靠的实验结果。
牛血清在细胞培养中的作用

一、牛血清在细胞培养基中的主要功能牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能。
1.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。
3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
5.起酸碱度缓冲液作用。
6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
二、牛血清的主要成份血清是一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已为人所知,但还有一部分尚不清楚,而且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。
1.蛋白质是牛血清中主要成份。
除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白,球蛋白。
纤维粘连素细胞促进细胞附着;α2 巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用;胎牛血清中含胎球蛋白促细胞附着;转铁蛋白能结合铁离子,减少其毒性和被细胞利用。
2.多肽:血小板促生长因子能促细胞分裂,是多肽家庭的主要成员之一,是主要的促细胞增殖因子;成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等,血清中含量虽很少,但对细胞生长也有一定作用。
3.激素:激素对细胞的作用是多方面的。
胰岛素:促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸,与促细胞分裂有关。
类胰岛素生长因子:能与细胞表达的胰岛素受体结合,从而有胰岛素同样的作用。
促生长激素:促细胞增殖效应。
氢化可的松:血清中含有定量的该成分,它可能兼有促细胞贴附和增殖作用,但有人证明,血清中的氢化可的松,如细胞密度高时可能有抑制细胞的作用和诱导其发生分化。
4其他成份氨基酸、葡萄糖、酮酸等对多种营养成分的合成培养基意义不大。
与蛋白相结合状态的微量元素对细胞培养有意义。
三、牛血清的质量要求随着科学技术的发展和生活水平的不断提高对生物医药产品的质量要求也越来越高,所以对制备工艺中所涉及到的各种原材料的质量标准要求也越来越高,特别是对用于细胞培养基中的主要天然成份――牛血清的质量要求也不断提高。
细胞培养血清使用方法

细胞培养血清使用方法一、细胞培养血清的选择1.获取合适的细胞培养血清:在选择细胞培养血清时,应根据细胞类型和培养需求来选择适合的血清种类。
常见的细胞培养血清包括胎牛血清(FBS)、小牛血清(CS)、羊血清(GS)等。
2.质量检测:在使用细胞培养血清前,应进行必要的质量检测。
常见的检测项目包括细胞毒性检测、内毒素检测、抗体检测等,以确保细胞培养血清的质量符合要求。
二、细胞培养血清的保存与预处理1.储存温度:细胞培养血清应保持在-20℃以下的低温环境中保存,避免冻融过程中引起的细胞因子等成分的损失。
2.解冻方法:在使用前,需要将细胞培养血清从冷冻状态解冻。
解冻时应将血清瓶或管直接放入37℃的水浴中,待完全解冻后再使用。
避免频繁冻融对细胞培养血清质量造成影响。
3.灭菌处理:为防止细胞培养血清中的微生物污染细胞培养系统,使用前应对血清进行灭菌处理。
常见的方法有过滤灭菌和紫外线灭菌等。
三、细胞培养血清的使用方法1.添加量:在培养基中添加适量的细胞培养血清,通常按照5%-20%的比例添加,视细胞类型、生长阶段和实验要求而定。
同时,将血清的添加量逐渐减少,有助于维持细胞类型和稳定细胞表型。
2.血清浓度试验:在初始阶段的细胞培养中,可以进行不同浓度细胞培养血清的试验,以确定最适合细胞生长和增殖的血清浓度。
3.细胞分配与传代:在细胞传代过程中,应根据细胞的生长情况和实验要求,精确计算和添加细胞培养血清的量。
通常情况下,传代时应先将细胞离心,去除老化的细胞和细胞碎片,再将新鲜培养基补充到细胞中,继续传代和培养。
四、细胞培养血清的注意事项1.避免重复冻融:频繁冻融对细胞培养血清质量会有影响,因此在使用前需要根据实验需求,将血清储存和使用合理安排,避免过多的冻融过程。
2.避免污染:在使用细胞培养血清时,应注意防止污染对细胞培养的影响。
避免细菌、真菌和其他微生物的污染,同时在操作过程中注意无菌操作,避免引入外源性污染。
3.使用正常生长因子替代:部分细胞类型在一定条件下可以使用无血清培养基进行培养,无血清培养基中含有正常生长因子的替代物,能够促进细胞的生长和增殖。
细胞复苏时使用较高浓度的牛血清的原因

细胞复苏时使用较高浓度的牛血清的原因以细胞复苏时使用较高浓度的牛血清的原因为标题细胞培养是生物科学中的一项重要技术,它可以帮助科学家们研究细胞的生理、病理以及药物相应等方面的问题。
而在细胞培养的过程中,添加适当浓度的血清对于细胞的生长和复苏起到了至关重要的作用。
牛血清是一种常用的细胞培养血清,它富含了许多生长因子、细胞外基质和营养物质,能够提供细胞生长所需的养分和环境。
在细胞复苏时,使用较高浓度的牛血清有以下几个原因:1. 提供丰富的营养物质:细胞在培养基中需要获得足够的营养物质才能进行正常的代谢活动。
高浓度的牛血清能够提供丰富的蛋白质、糖类、脂类等营养物质,为细胞提供充足的能量和材料,促进细胞的生长和复苏。
2. 保护细胞膜完整性:细胞膜是细胞的保护屏障,它能够控制物质的进出,并维持细胞内外环境的稳定。
在细胞复苏过程中,高浓度的牛血清中含有丰富的脂类成分,可以提供足够的脂质来修复受损的细胞膜,保护细胞膜的完整性。
3. 提供生长因子和细胞外基质:牛血清中含有多种生长因子和细胞外基质成分,如胶原蛋白、纤维蛋白等。
这些物质能够促进细胞的黏附和生长,并参与细胞信号传导、细胞分化等过程。
在细胞复苏时,添加高浓度的牛血清可以提供足够的生长因子和细胞外基质,促进细胞的复苏和重建。
4. 抑制细胞凋亡:细胞凋亡是一种正常的细胞死亡过程,但在细胞培养中,细胞凋亡会对细胞的生长和复苏产生不利影响。
牛血清中的某些成分可以抑制细胞凋亡的发生,保护细胞的生命活力,使细胞能够更好地进行复苏和生长。
细胞复苏时使用较高浓度的牛血清有助于提供丰富的营养物质、保护细胞膜完整性、提供生长因子和细胞外基质以及抑制细胞凋亡等作用。
这些因素共同作用,可以促进细胞的生长和复苏,为科学家们的细胞研究提供可靠的支持。
在实际应用中,科学家们可以根据具体的实验目的和细胞类型选择适当浓度的牛血清,以实现最佳的实验效果。
细胞培养技术的发展为生物科学研究提供了重要的工具和平台,而牛血清作为细胞培养的重要组成部分,其高浓度的应用也具有重要的意义。
a型标准血清

a型标准血清A型标准血清。
A型标准血清是一种用于实验室研究和临床诊断的重要生物制品,它在医学领域中扮演着至关重要的角色。
A型标准血清通常来源于健康人体的静脉血,经过一系列严格的生物制品加工工艺制备而成,具有一定的生物学活性和生物学特性。
本文将对A型标准血清的来源、制备工艺、质量标准和应用领域进行详细介绍,以便更好地了解和应用这一重要的生物制品。
A型标准血清的来源主要是健康人体的静脉血,通常由专业的采血人员采集,然后送往生物制品加工厂进行加工处理。
在采集过程中,需要严格遵守相关的采血操作规范,确保采集到的静脉血样品具有良好的生物学活性和生物学特性。
此外,在整个加工过程中,需要严格控制各项生产工艺参数,确保A型标准血清的质量符合相关的标准要求。
A型标准血清的制备工艺主要包括采血、离心、分装、灭菌、冻干等多个环节。
在采血后,需要对血样进行离心分离,以获取血清部分。
然后将血清进行分装、灭菌和冻干处理,最终得到A型标准血清成品。
在整个制备工艺中,需要严格控制各项操作参数,确保产品的质量和稳定性。
A型标准血清的质量标准通常包括外观、生物学活性、微生物指标、重金属含量等多个方面。
外观上,A型标准血清应呈现为无色透明液体,不得有异物和沉淀物。
生物学活性是血清的重要指标之一,通常通过细胞培养实验来评价。
此外,A型标准血清中的微生物指标和重金属含量也是衡量其质量的重要指标。
A型标准血清在实验室研究和临床诊断中有着广泛的应用。
在细胞培养实验中,A型标准血清可作为细胞培养基的重要组成部分,为细胞提供生长和营养所需的物质。
在临床诊断中,A型标准血清可用于临床生化检验和免疫学检测,为临床诊断提供重要的实验数据。
总之,A型标准血清作为重要的生物制品,在医学领域中具有不可替代的作用。
通过对其来源、制备工艺、质量标准和应用领域的详细介绍,相信读者对A型标准血清有了更全面的了解,能够更好地应用于实验室研究和临床诊断中。
希望本文能够对相关领域的科研工作者和临床医生有所帮助。
细胞培养复习题(含答案)

1.体外培养的细胞按生长方式可分为哪二种? 按细胞在体外生长的形态特征,可分为哪几种常见类型?⑴按生长方式分为二型:粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。
悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面, 而在悬浮状态下即可生长的细胞。
(绝大多数有机体细胞属粘附型细胞。
)⑵可分四型: (1)上皮型细胞 (2)成纤维型细胞 (3)游走型细胞 (4)多形型细胞2.简述体外培养细胞的整个生命活动过程的分期及每代贴附生长细胞的生长过程⑴通常, 体外培养细胞的全部生命期大致可被分为以下三个阶段:①原代培养期: 也称初代培养, 是指从机体中取出细胞接种培养到第一次传代之前的这一阶段。
此期的细胞呈现出活跃移动的特点, 可见细胞分裂, 但不旺盛。
处于原代培养阶段的细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上有很大的相似性。
细胞群具有明显的异质性, 细胞间的相互依存性强, 在软琼脂培养基培养时细胞集落形成率很低。
②. 传代期:通常是培养细胞全生命期中持续时间最长的时期, 原代培养的细胞经传代后常被称做细胞系。
一般情况下, 正常体细胞在传代10-50次左右后, 细胞分裂的能力就会逐渐减弱, 甚至完全丧失, 细胞便进入衰退期。
③衰退期:处于衰退期的培养细胞, 增殖速率已经变得很慢或不再增殖, 直至最后衰退死亡。
以上特点, 主要是针对体外培养的机体正常细胞, 对于体外发生转化的细胞和肿瘤细胞而言, 永生性或恶型性的获得使得这类细胞获得持久性的增殖能力, 这样的细胞群体常被称为无限细胞系或连续细胞系。
⑵每代贴附生长细胞的生长过程:①游离期:细胞接种后在培养液中呈悬浮状态, 也称悬浮期。
此时细胞质回缩, 胞体呈圆球形。
时间:10分钟一4小时②贴壁期:细胞附着于底物上, 游离期结束。
底物:玻璃、塑料、胶原、其它细胞等③潜伏期:此时细胞有生长活动, 而无细胞分裂。
细胞株潜伏期一般为6~24小时。
④对数生长期:细胞数随时间变化成倍增长, 活力最佳, 最适合进行实验研究。
牛血清在细胞培养中的作用

牛血清在细胞培养中的作用1.提供养分和生长因子:牛血清中含有多种营养物质,如葡萄糖、氨基酸、无机盐等,可以提供细胞生长所需的养分。
此外,牛血清还含有多种生长因子和激素,如胰岛素样生长因子、表皮生长因子等,它们可以促进细胞的增殖和分化。
2.维持细胞外基质的完整性:细胞外基质是细胞外的支持结构,对于细胞的附着、生长和分化起着重要作用。
牛血清中的纤维蛋白原和胶原蛋白可以在培养基中形成凝胶,维持细胞外基质的完整性,并且提供了一个支持细胞生长的三维结构。
3.抗氧化和抗炎作用:牛血清中含有多种抗氧化剂,如谷胱甘肽和超氧化物歧化酶等,可以减少细胞受到氧化应激的损伤。
此外,牛血清中的一些成分还具有抗炎作用,可以抑制细胞因子的释放和炎症反应的发生。
4.提供细胞黏附基质:牛血清中含有一些黏附蛋白,如纤连蛋白、胶原蛋白等,它们能够在培养基中与细胞表面的受体结合,促进细胞的附着和生长。
5.调节细胞凋亡:牛血清中的一些成分可以调节细胞的凋亡(程序性死亡)过程。
它们可以促进细胞的存活或促使细胞死亡,从而对细胞发育和功能提供调控。
然而,也需注意到牛血清在细胞培养中存在一些问题。
首先,由于牛血清是从动物体内提取得到的,存在一定的批次差异,质量和成分的稳定性有时会不稳定。
其次,牛血清中可能含有一些未知的病原体,如病毒、细菌等,这些病原体可能会对细胞培养产生不良影响。
此外,牛血清也存在一些伦理和道德问题,因为获取牛血清需要对动物进行捕杀和处理。
总之,牛血清在细胞培养中扮演着关键角色,可以提供细胞生长所需的营养和生长因子,维持细胞外基质的完整性,具有抗氧化和抗炎作用,调节细胞凋亡等。
然而,随着对血清替代品的不断研究和发展,未来可能会有更好的替代选择来替代牛血清在细胞培养中的作用。
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天津市灏洋生物制品科技有限责任公司血清在细胞培养中的作用和质量要求现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程,这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切的关系,特别是在生物医药领域,细胞培养更具有特殊的作用和价值。
比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多都是通过细胞培养来实现的,基因工程乙肝疫苗大多是以CHO细胞作为载体;基因工程抗体药物的制备也离不开细胞培养。
细胞工程领域更离不开细胞培养技术,杂交瘤单克隆抗体的研究制备完全是通过细胞培养来实现的,发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。
总之,细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。
细胞培养的发展,培养基的质量是关键,而培养基的构成中动物血清对细胞的生长繁殖起着重要作用。
在动物血清中牛血清的应用又是最广泛的,所以牛血清的质量好坏直接影响生物制品的质量和安全性,保证牛血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。
一、牛血清的主要成分牛血清是一种成分复杂的混合物,其大部分成分已为人所知,但还有一部分仍不清楚,而且血清的组成及含量通常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而存在差异。
牛血清主要成分有以下几类:1、蛋白质类除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外还有白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白(抑制胰蛋白酶的作用)、胎牛血清中含胎球蛋白(促进细胞附着)、转铁蛋白(能结合铁离子,减少其毒性和被细胞利用)、纤维粘连素(促进细胞附着生长)等;2、多肽类主要是一些促进细胞生长和分裂的生长因子,最主要的生长因子是血小板生长因子,还有成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等,虽然在血清中含量很少,但对细胞的生长和分裂也起着重要作用;3、激素类激素对细胞的作用是多方面的。
包括:胰岛素:促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸,与促细胞分裂有关;类胰岛素生长因子:能与细胞表达的胰岛素受体结合,从而有胰岛素同样的作用:促生长激素:促进细胞增殖的效应;氢化可的松:血清中含有微量该成分,它可能具有促细胞贴附和增殖作用。
但有人证明,血清中的氢化可的松,在细胞密度较高时可能有抑制细胞生长和诱导细胞发生分化的作用。
4、其他成分如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。
在合成培养基中这些成分的作用并不明显,与蛋白相结合的微量元素对细胞生长起促进作用。
二、牛血清在细胞培养基中的主要功能牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能。
1、提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物,以及低分子营养物;2、提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属离子和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力;3、是细胞贴壁、铺展生长所需因子的来源;4、起酸碱度缓冲液作用;5、提供蛋白酶抑制剂,细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受损伤;6、有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热源物质结合,起到解毒作用。
三、牛血清的分类根据牛出生时间和血清采制分离方法分为:1、胎牛血清:八月龄胎牛心脏穿刺取血;2、新生牛血清:出生12-24小时新生牛静脉采血;高级新生牛血清:采血后静置自然析出的血清;标准新生牛血清:经离心分离的血清;普通新生牛血清:融血或微融血的血清;3、小牛血清:出生三月龄小牛动脉采血分离血清。
四、牛血清的质量要求我公司生产的牛血清完全符合《中国生物制品主要原辅材料指控标准》中的要求,从血清来源到产品质量都有严格的检测标准。
1、血清的来源:来自国内非疫区,有说明血清质量的证明资料:包括收集过程的全部资料、检验结果和交付情况。
2、血清的收集:胎牛血清是心脏穿刺取血,新生牛(10~14天)和小牛(10个月内)血清静脉取血。
血清在低温下采集、一次分离、分离后立即混合冻存,符合工业生产的标准。
3、血清的制备:⑴、热灭活血清:热灭活是在56℃水浴中严格控温30min;⑵、超低IgG胎牛血清:我们持有从血清中通过层析的方法去除IgG的专利。
经过这种程序处理的血清只有极低的IgG浓度(<5ug/ml),但保持了血清的全部生物学活性。
⑶、血清透析:用12000~14000分子量的透析膜在0.15M NaCl中透析直到使葡萄糖含量<0.5mg/ml(用葡萄糖氧化酶/过氧化酶方法测定)。
⑷、γ-射线照射:已经证明γ-射线照射可以有效灭活血清中可能污染的病毒、支原体。
照射剂量为30~45KG。
而且这个剂量的γ-射线照射不会改变血清的理化性质和对细胞培养的影响。
4、除菌过滤:经过上述处理的粗制血清须经过一系列的过滤才能成为成品。
最后的过滤包括100nm过滤,胎牛血清要通过三层100nm过滤。
5、终产品的血清质量⑴、化学检测①、渗透压(280~340mOsmol/kg):使用凝固点降低的方法检测渗透压,我们每天使用国家标准技术研究所标定的标准溶液对我们的渗透压检测仪器进行校准;②、pH值(7.0~7.5):同样我们每天使用国家标准技术研究所标定的标准溶液对pH计进行校准;③、蛋白含量:(电泳法)样品被加到醋酸纤维素介质中并在缓冲溶液体系内迁移,条带经染色、清洁、干燥后用密度仪进行扫描以检测白蛋白和球蛋白组分的相对浓度。
白蛋白、球蛋白和血红蛋白随着牛年龄的增加血清中总蛋白含量相应增加,总的血清蛋白含量可以确定产品的规格和年龄。
⑵、微生物检查①、细菌和真菌:直接培养法②、支原体:(培养法和DNA染色法)在支原体专业培养基上培养了3~4周,培养温度36℃±2℃分别在需氧和厌氧的条件下进行,有的还需要在支原体琼脂培养皿上传4代,Hoechst荧光素DNA染色检查那些培养法无法检出的支原体如猪鼻支原体等。
③、病毒:牛兰舌病毒 Bovin blue tongue;牛腺病毒 Bovine Adenovirus;牛细小病毒 Bovine Parvovirus;牛病毒性腹泄病毒Bovine Viral Diarhea Virus;狂犬病病毒 Rabies;呼肠弧病毒 Reovirus;牛呼吸道合胞病毒 BRSV;副流感病毒Ⅲ型 Parainfluenza。
检查方法:已证明无外源因子污染的牛细胞培养物,在细胞生长液中加15%待测血清,连传3代共21天。
阴性对照细胞培养液中加15%已知无病毒污染的牛血清,与试验组同条件下进行。
在观察期内注意细胞形态变化或细胞病变。
在观察期内第14天待检样品和对照样品用标准病毒检测方法检查。
如待检细胞培养物经胰酶消化后分种到6个含盖玻片的容器内。
阴性对照样品按同样方法。
再将牛腹泄病毒、牛细小病毒、牛腺病毒、狂犬病毒和呼肠弧病毒分别加入待检培养物盖玻片容器内作为阳性对照,再培养7天,用荧光抗体技术进行检查。
细胞病变或病毒引起的其他改变通过苏木精或伊红染色进行观察。
取另外一个待检细胞培养瓶用人“O”红细胞、豚鼠红细胞和新鲜鸡红细胞作血球吸附病毒检查。
试验在2~8℃和20~24℃进行。
阴性对照细胞预先感染副流感Ⅲ型病毒作为阳性对照。
未感染的细胞作为阴性对照。
⑶、内毒素检测用鲎试剂检查。
⑷、细菌噬菌体检查噬菌斑和增殖法测定⑸、激素含量测定每批FBS中某些激素含量都要进行测定。
包括雌二醇、胰岛素、孕酮、睾丸素、甲状腺素等(6)、血红蛋白检测血红蛋白与氧合血红蛋白的比≥70%,血红蛋白含量≤15mg/dl⑺、细胞生长效果测定①、细胞克隆效果测定细胞选择:Sp20/Ag-14 或P3X63-Ag8.653血清浓度与细胞数:10%血清/1个细胞/孔4%血清/5个细胞/孔细胞培养基RPMI-1640, 96孔培养盘36℃±2℃,5%二氧化碳培养10~15天。
试验中选择一个已知参考牛血清作对照。
克隆效率计算:克隆效率=(阳性孔平均数/ 培养孔总数) ×100%相对克隆效率=待测血清克隆效率/参考血清克隆效率②、贴壁效率试验:用人的传代细胞作每批血清的贴壁效率试验,A549(人肺癌细胞)该细胞可以反应出低浓度血清的贴壁变化。
采用6孔培养盘每批血清用两种浓度和两种不同的细胞接种数即10%血清――100细胞/孔,4%血清200介细胞/孔。
放36℃±2℃,湿润5%二氧化碳培养箱培养10~14天,计算着色细胞克隆,确定贴壁效率。
从这两种不同血清浓度来确立实验血清支持细胞贴壁生长的水平,分析两种试验条件下平均贴壁效率。
贴壁效率(%)=(每孔克隆平均数/ 每孔活存的培养细胞平均数) X100%相对贴壁效率=被测血清贴壁效率/参考血清贴壁效率③、二倍体纤维细胞促生长试验人二倍体细胞株 WI28 MRc525cm2细胞培养瓶,5%血清,每瓶接种1.5×105细胞连传3代,每代血清浓度和接种细胞数相同,每代培养7天,每代接种二个细胞瓶,36℃±2℃培养。
以同样条件用已知参考血清进行平行培养。
每代收获细胞计数,计算每批待检血清与参考血清的相对生长率(RGR)。
RGR=(试验血清每瓶细胞平均数/ 参考血清每瓶细胞平均数) ×100%牛血清主要质量要求胎牛血清新生牛血清成牛血清牛龄胎牛 10~14天<10个月无菌 - - - 病毒 - - - 支原体 - - - 噬菌体 - - - 内毒素(ng/ml)≤1.0 ≤10.0 ≤10(15)血红蛋白(g%) 3.0~4.5 3.5~6.0 5.0~8.5pH 6.7~8.0 7.0~8.0 7.0~8.0渗透压(mOsmol/kg) 240~340 240~340 240~3406、出厂标准⑴、产品标志:制造厂名;产品名称;商标;产品型号或产品标记;制造日期、生产批号或出厂日期、编号;⑵、成品规格、包装及储运:根据所采血清的来源,血清品种分为胎牛血清、新生牛血清和牛血清三种;成品血清用100ml瓶装,加盖橡皮塞和铝盖;成品血清应于-20℃冻存,运输过程中,应尽量保持较低的温度,在室温的时间应越短越好,切忌反复冻融。
五、牛血清的使用所产生的常见问题1、由于血清营养丰富,贮存条件特殊,因此在贮存和使用过程中容易产生以下问题:⑴、改变培养液的pH值牛血清的pH理论值为7.0~8.0,培养基在加入规定量的碳酸氢钠后(即达到细胞生长所需要的渗透压),再加入10%的牛血清,一般会使培养液的pH值发生改变。
因此在使用过程中应注意PH的变化,如有必要可用1mol/LNaOH或1mol/LHCl调pH到所需值。
⑵、由于血清的营养成分丰富,非常适合细菌、真菌和支原体等生长。
使用时要注意操作规范,否则将会把污染物带入正在培养的细胞中,而使得细胞不能正常生长。
⑶、血清在贮存解冻过程中会产生沉淀,这是由于血清中含有大量脂蛋白、纤维蛋白及多肽类物质,在-15℃冷冻保存解冻后就会自然形成沉淀,随着保存时间的延长,沉淀量会增加。