无血清培养基应用
无血清培养基的组成和作用介绍
无血清培养基的组成和作用介绍在细胞培养中大多数动物细胞体外培养时都需要加入血清提供营养，但由于血清存在很多潜在风险，促使科学家们进行无血清驯化细胞的研究。
所以，在1976 年Hayashi 等人提出了无血清培养基的概念，此后，大量生物医药学家开始对无血清培养基进行研制。
80 年代后，无血清培养基的研究与制备广泛发展，到 90 年代已有一些商业化无血清培养基。
与传统的培养基相比较，无血清培养基是不含动物血清，但仍可以维持细胞在体外较长时间生长、增殖的一种培养基。
无血清培养基由于其组成成分相对清楚，制备过程简单，在现代生物技术学领域得到广泛应用。
无血清培养基的组成和作用1.葡萄糖动物细胞培养基中添加的糖主要是葡萄糖，添加量通常在5-25mM之间。
葡萄糖的主要代谢途径是通过糖酵解代谢成丙酮酸，进而降解成乳酸。
这最终会导致乳酸在培养基中积累。
代谢流研究分析发现，只有一小部分（约20-30%）的葡萄糖流向其它途径包括三羧酸循环和戊糖磷酸旁路。
除了葡萄糖，研究发现，动物细胞也能利用谷氨酰胺作为主要的能量物质。
谷氨酰胺的添加量常常高于其它氨基酸（2-4mM），也是很多细胞系生长需要的物质。
在大多数情况下，谷氨酰胺和葡萄糖会分别被快速利用，在耗尽之前，会引起细胞生长抑制。
2.氨基酸细胞不同，所需的特定营养也不同，同理，它们所需的必需氨基酸（动物体内不能自身合成）也是不同的。
一些非必需氨基酸通常也会加入到培养基中，这是因为有些细胞系自身不能产生相应的氨基酸，从而会限制细胞生长。
培养基中氨基酸限制会降低细胞生长速率和/或最高细胞密度。
其它非必需氨基酸细胞可以产生，但是不足以维持优生长。
一些氨基酸如谷氨酰胺在培养基中不稳定，因此需要单独加入以维持其在一个合适的浓度水平。
支链氨基酸被很多细胞包括MDCK细胞、人成纤维细胞、小鼠骨髓瘤细胞和BHK 细胞等消耗得特别快。
研究发现，当杂交瘤细胞利用谷氨酰胺利用率很低的时候，支链氨基酸被氧化的更多。
细胞适应无血清培养基的方法
细胞适应无血清培育基的方法目前，血清仍是动物细胞培育中最基本的的添加物，尤其是在原代培育或者细胞生长情形不良时，常常会先使用有血清的培育液进行培育，待细胞生长旺盛以后，再换成无血清培育液。
细胞转入无血清培育基培育要有一个适应过程，一般要渐渐降低血清浓度，从10%削减到5%，3%，1%，直至无血清培育。
在降低过程中要注意察看细胞形态是否发生变更，是否有部分细胞死亡，存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。
在试验后这些细胞一般不再连续保管，很少有细胞能够长期培育于无血清培育基而不发生更改的。
细胞转入无血清培育之前，要留有种子细胞，种子细胞按常规培育于含血清的培育基中，以保证细胞的特性不发生变更。
为了使细胞适应无血清培育，关键的是使所培育细胞：1.处于对数生长中期2.90%活细胞率3.适应时以较高的起始细胞接种细胞适应无血清培育基的方法：1. 直接适应细胞从添加血清的培育基转换到无血清培育基（SFM）中。
一些类型细胞可直接从包含血清的培育基适应无血清培育基。
对于直接适应，接种细胞密度应当:2.5105～3.5105细胞/ml。
当细胞密度实现1106～3106细胞/ml时，传代培育细胞。
当细胞密度在培育4到7天后实现2106～4106细胞/ml时，细胞wan全适应了无血清培育基。
每隔3～5天，当细胞密度实现1106～3106细胞/ml，细胞活率在90％时，储备的适应了无血清培育基的细胞培育物应当再次传代培育。
2. 连续适应分好几步把细胞从添加血清的培育基转换到无血清培育基（SFM）中，与直接适应相比较，连续适应趋向对于细胞更加不冷不热一些。
（1）、以2倍正常接种密度接种生长活跃的细胞培育物到75%有血清培育基：25％SFM混合培育基中，传代培育。
（2）、当细胞密度5105细胞/ml时，以2105到3105细胞/ml细胞密度，在有血清培育基：SFM为50∶50的混合培育基中传代培育。
（3）、以2106到3106细胞/ml细胞密度，25％有血清培育基和75%SFM中传代培育。
NK细胞无血清培养套装使用说明书——脐血2L体系
NK 细胞无血清培养套装使用说明书——脐血2L 体系【适用范围】【试剂准备】【使用步骤】【产品组成】【脐血PBMC 分离】用于脐带血体外诱导扩增NK 细胞。
如用采血袋采集，由于采血袋中含有抗凝剂，务必保证血样净含量50mL （不包括抗凝剂体积），否则在接种细胞时细胞的总数量达不到接种要求，最终收获不到理想细胞数。
2L 培养体系套装：适用于50mL 脐带血的样本量，使用2L 培养基。
分离单个核细胞前，应将脐血、PBS （生理盐水）和淋巴细胞分离液室温平衡至20℃。
将脐带血平均分装到50 mL 离心管中，于室温下700g 离心15 min （离心机升速8，降速4）， 取上层淡黄色血浆至新的50mL 离心管中（下层红色液体用于提取单个核细胞），于水浴锅中 56℃灭活30min ，然后900g 离心10min ，取上清，置于-20℃，15min ，再次900g 离心10min ， 取上清，置于4℃保存。
（900g 离心时离心机的升降速均调节至最高即可） 1. 第0天T175培养瓶包被:先将15mL PBS 加入T175瓶中，再将一支YC00A 添加于T175瓶中，充分混 匀后，37℃孵育2h ，弃去上清，并用15mL PBS 清洗一次,弃清洗液后备用。
接种45mL 培养 基A ，细胞密度2-3E6/mL ，添加诱导因子一支YC00B ， 添加10%比例的自体血浆。
2. 第3天补加100mL 培养基B ，添加5%的自体血浆，动作轻柔、不可将贴壁细胞晃起。
3. 第5天补加150mL 培养基B ，添加1%的自体血浆，分成两个T175进行培养，分瓶时轻轻将底部细胞 团吹起，单个的贴壁细胞不用过度吹打。
4. 第7天补加300mL 培养基B ，添加1%的自体血浆，轻轻地将细胞团晃起后把所有细胞转移至细胞培 养袋，原瓶中各添加50mL 新鲜培养基B 。
原瓶中的单个贴壁细胞不用过度吹打。
(1) 取上一步血浆提取中得到的下层红色液体用生理盐水1：2稀释，混匀，备用。
α-mem培养基内毒素标准
α-MEM培养基内毒素标准
α-MEM培养基是一种广泛用于细胞培养的无血清培养基，通常用于体外培养哺乳动物细胞。
由于α-MEM培养基中含有多种成分，因此在使用前需要对其进行彻底的消毒和灭菌。
在细胞培养过程中，可能会出现细菌、真菌等微生物的污染，从而导致培养物中出现内毒素。
为了确保培养物的质量和安全性，通常需要对α-MEM培养基进行内毒素检测。
内毒素检测的标准通常是根据美国药典（USP）和欧洲药典（EP）等相关标准进行的。
这些标准通常包括以下步骤：
1. 取一定量的α-MEM培养基样品，通常为10 mL。
2. 将样品加入无菌试管中，并加入一定量的内毒素检测液。
3. 将试管置于恒温摇床上，在37°C下孵育一定时间，通常为18-24小时。
4. 观察样品中是否出现浑浊现象，如果出现，则说明样品中存在内毒素。
5. 根据实验结果，确定样品中内毒素的含量，并对其进行评估和处理。
需要注意的是，内毒素检测的标准可能因不同的实验室和应用场景而有所不同。
因此，在进行内毒素检测时，应根
据实际情况选择合适的标准，并严格按照标准操作。
无血清无dmso细胞冻存液操作方法
无血清无dmso细胞冻存液操作方法无血清无DMSO细胞冻存液操作方法细胞冻存是一种常用的细胞保存方法，可以用于长期保存细胞，并保持其生物学特性和功能。
传统的细胞冻存方法通常使用含有10%血清和10% DMSO（二甲基亚砜）的细胞冻存液。
然而，血清和DMSO可能对细胞产生不良影响，因此，无血清无DMSO的细胞冻存液逐渐得到广泛应用。
本文将介绍无血清无DMSO细胞冻存液的制备和操作方法。
1. 准备培养基准备适合细胞生长的培养基。
无血清的培养基可以是无血清的DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）或RPMI （Roswell Park Memorial Institute）培养基等。
根据细胞类型的不同，可以添加不同的补充物，如胰岛素、转铁蛋白、胺基酸等。
2. 收集细胞将细胞培养至对数生长期，使用无血清的PBS（磷酸盐缓冲盐水）或EDTA（乙二胺四乙酸）溶液洗涤细胞，以去除培养基。
3. 细胞计数和离心使用细胞计数仪计数细胞数目，并根据需要的冻存细胞数目进行计算。
然后，将细胞用离心管收集起来。
4. 制备冻存液将无血清的培养基加入到细胞中，使细胞浓度达到所需的浓度。
通常，细胞浓度应在1-2×10^6细胞/mL之间。
将细胞悬液分装到冻存管中。
5. 冻存将冻存管放入-80℃的冰箱中进行快速冷冻。
冷冻速率是细胞存活的关键因素，通常使用-1℃/分钟的速率进行冷冻。
6. 转移到液氮罐中将冻存管从-80℃的冰箱中取出，迅速将其置于液氮罐中进行长期保存。
液氮罐的温度应保持在-196℃。
7. 解冻需要使用冻存细胞时，将冻存管迅速从液氮罐中取出，放在37℃的水浴中解冻。
解冻时间通常为1-2分钟。
8. 培养细胞将解冻后的细胞转移到预先准备好的培养基中，并放入培养箱中继续培养。
注意，解冻后的细胞可能需要适应培养条件，并可能在恢复生长之前经历一段时间的停滞。
无血清无DMSO的细胞冻存液操作方法相比传统方法更加安全和方便。
植物源无血清培养基的研究进展
科技视界SCIENCE & TECHNOLOGY VISION0 引言与传统的培养基相比，无血清培养基不含动物血清或其他生物提取物，能支持细胞在体外长时间生长和繁殖，是继天然培养基和合成培养基之后的第三类培养基。
目前商业化的无血清细胞培养基有明显的特征区别，通常可分为4种类型：无血清培养基（Serum -free medium ，SFM ）、 无动物源培养基（Animal -component -free medium ，ACFM ）、无蛋白培养基（Protein -free medium ，PFM ）、化学成分限定培养基（Chemically defined medium ，CDM ）。
无血清培养基中没有添加血清，但会添加一些额外的成分来维持细胞的生长，因此，无血清培养基通常是由基础培养基和合适比例的激素、生长因子、贴壁因子和结合蛋白等添加因子组成。
在过去的几十年里，血清已经被各种成分所取代，如重组表皮生长因子（Epidermal growthfactor ，EGF ）、胰岛素、转铁蛋白、皮质醇，最常见的是牛垂体提取物（Bovine pituitary extract ，BPE ）用于培养贴壁角质形成细胞。
在基础培养基中添加血清的主要目的是提供促细胞生长成分，作为营养物质、激素、生长因子以及蛋白酶抑制剂，同时血清能够使细胞贴壁以及平铺在细胞瓶中，提供特殊的保护机制来避免细胞的机械损伤和剪切力，还可以抑制有毒部分对细胞的冲击，提高培养基的缓冲能力[1-3]。
血清中含有可以转运脂类、脂肪酸、激素和微量元素（尤其是铁元素）的白蛋白和转铁蛋白。
但是随着欧洲许多国家爆发疯牛病（Bovine spongiform encephalopathy ，BSE ），血清的应用受到越来越多的质疑。
由于批量使用的动物血清来源于自然生物体（主要是新生牛），它本身携带和采集、加工过程有污染外源微生物和致病因子的可能，因此，使用新生牛血清存在作者简介：张凯茵，南京财经大学本科生，主要研究方向为粮油副产品生物转化技术。
动物细胞无血清培养基的优势、特点与实验研究
动物细胞无血清培养基的优势、特点与实验研究摘要：动物细胞无血清培养基相比天然培养基、合成培养基等传统培养基有无可比拟的优势，其组成成分相对清楚，制备过程简单，日益得到生物技术界的重视。
运用统计学实验方法，可科学有效地考察细胞培养基中多因素、多水平间的交互作用。
应用新型蛋白质组分分析技术及生物芯片技术定位胞浆信号通路相关蛋白、膜表面的生长因子受体、激素受体、细胞因子受体、粘附分子等，用以确定细胞培养基中调控分子的添加组合。
对无血清培养基的优势特点及常用的实验研究进行概述。
以期为动物细胞无血清培养基的研究与研制提供参考。
关键词：动物细胞；无血清培养基；实验设计动物细胞培养技术是当今生物工程领域中的前沿研究课题之一，无论是在基础研究还是生产实践方面都得到生物技术界的重视。
随着哺乳动物细胞培养规模的扩大和生物药物需求的增长，基于细胞及产品特性的无血清培养基的研制已成为细胞工程领域的重要课题。
无血清细胞培养技术的研究日益得到人们的重视。
近年来，有关无血清培养基的研制和开发得到了迅速发展，推动了基因工程产品及产业的发展。
1 无血清培养基的优势特点及分类细胞培养基是细胞体外培养的最重要因素。
无血清培养基是继天然培养基、合成培养基之后的第三类培养基。
与传统的培养基相比，无血清培养基是一种不含有动物血清或其他生物提取液，但仍可以维持细胞在体外较长时间生长、繁殖的一种培养基。
无血清培养基由于其组成成分相对清楚，制备过程简单，在现代生物技术学领域得到广泛应用。
无血清培养技术也是阐明细胞生长、增殖、分化及基因表达调控的基础研究问题的有力工具。
常规细胞培养基的制备方法是在基础培养基中添加相应量的血清或组织提取物，其中最常用于培养基的血清是一种组分很不明确的混合物。
所以常规血清细胞培养基存在以下缺点：（1）血清来自于动物体，其对细胞在体外培养时的主要作用是提供生长因子、激素、结合蛋白，并提供保护作用，但同时也有细胞生长抑制因子和毒性因子，所以存在潜在毒性。
无血清培养基介绍
无血清培养基介绍无血清培养基是一种无需添加动物血清的培养基，适用于细胞的体外培养。
相较于传统的含有动物血清的培养基，无血清培养基具有许多优势，如避免了潜在的传染病传播风险、提高了细胞培养的一致性和可重复性，同时也降低了培养的成本。
本文将介绍无血清培养基的成分、制备方法以及应用领域等方面的内容。
无血清培养基的基本成分包括碳源、氮源、微量元素、维生素、生长因子、胶原蛋白和附加物等。
碳源常用的有葡萄糖、果糖等，氮源常用的有谷氨酸、天冬酰胺等。
微量元素是重要的细胞营养物质，包括铁、锌、铜、锰等，其浓度一般较低。
维生素在细胞的代谢过程中起到重要的辅酶和辅因子的作用，为细胞的正常生长提供必需物质。
生长因子是一类具有特定生物活性的蛋白质，能够直接影响细胞的增殖和分化。
胶原蛋白是一种结构性蛋白质，可以提供细胞粘附的基质支持。
其他附加物如氨基酸、核酸、脂质等也可以根据具体需要添加到培养基中。
无血清培养基的制备过程主要包括消毒、配制、滤过、灭菌等步骤。
消毒包括培养器皿、玻璃棒、试剂瓶等的高压蒸汽灭菌，确保杂菌的清除。
配制过程中需要将不同成分按照一定比例配制成培养基液。
滤过是为了除去微生物和大分子物质，常用的有0.22μm的滤膜过滤。
灭菌是一种无菌操作，可以使用高压蒸汽灭菌器或者紫外线灭菌器，确保培养基的无菌性。
无血清培养基在许多领域具有广泛的应用。
在生物医学研究领域，无血清培养基可以用于细胞培养、细胞扩增和细胞实验等。
细胞培养是生物医学研究中非常重要的实验手段，可以用于研究细胞的生理和病理功能，评估药物的毒性和疗效等。
在生物制药领域，无血清培养基可以用于生产重组蛋白、疫苗和细胞疗法等。
传统的生物制药方法中，常使用含有动物血清的培养基，但是这种方法存在一些问题，如潜在的传染病传播风险、批次差异大等。
无血清培养基不仅可以提高生产一致性和控制性，还可以降低成本和生产风险。
总结来说，无血清培养基是一种无需添加动物血清的培养基，具有许多优势，如避免了传染病传播风险、提高了培养一致性和可重复性，降低了培养的成本。
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无血清培养基应用
细胞培养就是从机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
体外细胞培养最常见的是合成培养基如DMEM,F12,MEM等混合一定比例的牛血清进行培养;但是大量使用牛血清制品有许多缺陷，如，动物源成分，无法用于临床研究;成分复杂，批间差大，质量不稳定，重复性差，影响实验和生产，而且极易引起交叉污染，所以无血清培养正在替代有血清培养。
无血清培养基成分
无血清培养基成分为基础培养基及添加组分两大部分。
用于生物制药和疫苗生产的细胞在体外培养时，多数呈贴壁生长或兼性贴壁生长;而当其在无血清、无蛋白培养基中生长时，由于缺乏血清中的各种粘附贴壁因子如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原、玻表粘连蛋白，细胞往往以悬浮形式生长。
添加组分
1.促贴壁物质
许多细胞必须贴壁才能生长，这种情况下无血清培养基中一定要添加促贴壁和扩展因子，一般为细胞外基质，如纤连蛋白、层粘连蛋白等。
它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子，对许多细胞的繁殖和分化，起着重要作用。
纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化，这些细胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。
2.促生长因子及激素
针对不同细胞添加不同的生长因子。
激素也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质，有些激素是许多细胞必不可少的，如胰岛素。
3.酶抑制剂
培养贴壁生长的细胞，需要用胰酶消化传代，在无血清培养基中必不可少须含酶抑制剂，以终止酶的消化作用，达到保护细胞的目的。
最常用的是大豆胰酶;抑制剂。
4.结合蛋白和转运蛋白
常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。
牛血清白蛋白的添加比较大，可增加培养基的粘度，保护细胞免受机械损伤。
许多旋转式培养的无血清培养基都含有牛血清白蛋白。
5.微量元素
硒是最常见的。
使用方法
当前血清仍是动物细胞培养中最基本的的添加物，尤其是在原代培养或者细胞生长状况不良时，常常会先使用有血清的培养液进行培养，待细胞生长旺盛以后，再换成无血清培养液。
细胞转入无血清培养基培养要有一个适应过程，一般要逐步降低血清浓度，从10%减少到5%，3%，1%，直至无血清培养。
在降低过程中要注意观察细胞形态是否发生变化，是否有部分细胞死亡，存活细胞是否还保持原有的功能和生物学特性等。
在实验后这些细胞一般不再继续保留，很少有细胞能够长期培养于无血清培养基而不发生改变的。
细胞转入无血清培养之前，要留有种子细胞，种子细胞按常规培养于含血清的培养基中，以保证细胞的特性不发生变化。
为了使细胞适应无血清培养，关键的是使所培养细胞：
1.处于对数生长中期
2.>90% 活细胞率
3.适应时以较高的起始细胞接种
细胞适应无血清培养基的方法
1.直接适应--细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基(SFM)中。
2.连续适应--分好几步把细胞从添加血清的培养基转换到无血清培养基中，与直接适应相比较，连续适应趋向对于细胞更加温和一些。
特别需要强调的是：配制无血清培养液必须使用高质量的水，如石英玻璃蒸馏器经三次蒸馏或超纯水净化装置制备的水。
因为无血清培养基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保护细胞的大分子，既便水中的有毒物质含量甚微，也可能对细胞产生致死性损害。
这是无血清培养能否成功的关键因素之一。
无血清培养基优势
1.可避免血清批次间的质量变动，提高细胞培养和实验结果的重复性。
2.避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染。
3.避免血清组分对实验研究的影响。
5.可提高产品的表达水平并使细胞产品易于纯化。