天狼猩红染色
天狼猩红染色实验报告
天狼猩红染色实验报告
一、实验器材及试剂
1、实验器材
名称厂家型号
脱水机武汉俊杰电子有限公司JJ-12J
包埋机武汉俊杰电子有限公司JB-P5
病理切片机上海徕卡仪器有限公司RM2016
冻台武汉俊杰电子有限公司JB-L5
组织摊片机浙江省金华市科迪仪器设备有限公司KD-P
烤箱天津市莱玻瑞仪器设备有限公司GFL-230
载玻片及盖玻片江苏世泰实验器材有限公司10127105P-G
正置光学显微镜日本尼康NIKON ECLIPSE E100成像系统日本尼康NIKON DS-U3
2、主要实验试剂
试剂名称厂家货号
无水乙醇国药集团化学试剂有限公司100092683
二甲苯国药集团化学试剂有限公司10023418
天狼猩红染液四川赛因斯特生物科技有限公司
中性树胶国药集团化学试剂有限公司10004160
二、实验步骤
1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无
水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min，自来水洗。
2、天狼猩红染色：切片入天狼猩红染液中染色8-10min，两缸或三缸无水乙醇脱水；
3、脱水封片：切片放入再放入干净的二甲苯透明5min，中性树胶封片。
4、显微镜镜检，图像采集分析。
三、结果判读：
光学显微镜下胶原纤维红色，背景黄色；偏振光下，Ⅰ型胶原呈橘黄色或亮红色的粗纤维，Ⅲ型胶原呈绿色的细纤维。
四、注意事项：
1、无水乙醇脱水时应控制程度，片子不能残留多余的染液，也不能影响黄色的背景。
免疫组织化学和天狼猩红双重染色技术在病理诊断中的应用
免疫组织化学和天狼猩红双重染色技术在病理诊断中的应用【中图分类号】R446.7 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085(2009)20-0084-02【关键词】免疫组织化学组织化学双重染色天狼猩红染色免疫组织化学染色技术作为病理诊断的一种常规技术手段，在病理科疑难疾病的诊断过程中发挥着重要作用。
但是在某种程度上，单一的免疫组织化学染色降低了病理诊断和实验结果的可信度，必要时进行免役组织化学和组织化学双重染色可以帮助确诊。
我们在实践中摸索了免疫组织化学和天狼猩红双重染色方法，染色效果较为满意。
1材料与方法1.1材料和试剂常规梯度脱蜡，脱水试剂，免疫组织化学试剂盒。
载玻片，盖玻片。
自行制备天狼猩红染色剂和酸化水。
1.2双重染色方法选择结肠癌组织，制备石蜡切片，60℃-65℃的烤箱中烘烤12小时以上。
使用前再次烘烤，将加热的组织切片直接进入二甲苯溶液脱蜡，乙醇梯度脱水，3%HO2灭活内源性过氧化物酶的活性，专用微波炉进行抗原热修复，按SP法作免疫组化流程染色，DAB显色，显微镜下观察，蒸馏水终止染色，将免疫组化染色后的组织切片直接从终止的蒸馏水中取出，苏木素重染细胞核20分钟，盐酸酒精分化，流水返蓝约10分钟。
浸入苦味酸天狼猩红液1小时左右，染色时间的长短取决与试剂配置时间的长短和周围环境的湿度，此外，周围环境湿度高，染色时间也需要适当缩短，反之则需要适当延长。
此步染色时间的掌握比较重要，着色过浅也影响细胞形态学观察和实验结果。
然后入酸化水浸洗2次（时间不宜过长）滤纸吸净多余水份，梯度酒精脱水，无水酒精30分钟以上，二甲苯透明，中性树胶封固，盖玻片使用1%盐酸酒精处理。
2结果免疫组织化学染色和组织化学双重染色结果显示，通过免疫组织化学染色肿瘤细胞被染成棕黄色，在偏振光显微镜下观察可见天狼猩红染液将I型胶原染色为粉红色，III型胶原为绿色，通过双重染色可以清晰的观察到肿瘤细胞和胶原纤维的形态特点以及彼此之间的结构关系，肿瘤细胞侵犯间叶组织，肿瘤细胞同胶原蛋白交互排列。
天狼星红染色
染色结果： 普通光学显微镜
胶原纤维 细胞核
红色 蓝色
偏振光显微镜 Ⅰ型胶原纤维 Ⅲ型胶原纤维
强橙黄色或亮红色 绿色
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-3-
天狼星红染色试剂盒
货号：BB-44333
试剂盒储存条件：
2-8℃密封避光保存。
开盖后组份按要求条件保存。
试剂盒组成：
产品组成 规格
组份 A：天狼星红染色液 组份 B：Mayer 苏木素染色液
使用说明书
V1.7.X
BB-4101-1 100 ml 50 ml 50 ml 1
组份编号
4重要事项 ※ ※ ※
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使用限制： 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：
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胶原纤维（Collagen Fiber）是结缔组织中分布最广含量最多的一种纤维，广泛分布于各 种脏器，其中皮肤、巩膜、肌腱最丰富。Ⅰ型胶原纤维主要是骨、皮肤、肌腱纤维；Ⅱ型胶 原纤维主要是软骨胶原；Ⅲ型胶原纤维主要在胚胎组织、成人血管、胃肠道；Ⅳ型胶原纤维 主要在基膜中。天狼星红与其衬染液都是强酸性染料，易与胶原分子中的碱性基团结合，吸 附牢固。偏振光镜检查，胶原纤维有正的单轴双折射光的属性，与天狼星红复合染色液结合 后，可增强双折射，提高分辨率，从而区分两型胶原纤维。
天狼星红染色原理
天狼星红染色原理天狼星红是一种常用的组织染色剂，它在生物学和医学领域有着广泛的应用。
天狼星红染色原理是指天狼星红在染色过程中的作用机制和原理。
下面我们将详细介绍天狼星红染色原理的相关知识。
首先，天狼星红是一种亲水性染料，它能够与细胞内的蛋白质结合形成稳定的复合物。
在染色过程中，天狼星红以阳离子形式存在，它能够与细胞内的阴离子基团结合，从而在细胞内形成可见的染色效果。
这种染色效果能够帮助科研人员观察细胞的形态、结构和功能，为细胞学和组织学研究提供了重要的技术手段。
其次，天狼星红染色原理还涉及到染色剂与细胞结构的亲和性。
天狼星红能够与细胞内的特定结构发生亲和作用，如细胞核、细胞质、细胞器等，从而在染色过程中呈现出不同的染色效果。
这种亲和作用是天狼星红染色原理的重要组成部分，也是其在细胞学和组织学研究中得以广泛应用的重要原因之一。
另外，天狼星红染色原理还与染色剂的渗透性和选择性有关。
天狼星红能够通过细胞膜进入细胞内部，与细胞内的特定结构结合并发生染色反应。
这种渗透性和选择性使得天狼星红在染色过程中能够准确地染色目标结构，为科研人员提供了清晰的观察和分析样本的机会。
总的来说，天狼星红染色原理是一个复杂而又精密的过程，它涉及到染色剂的化学特性、细胞结构的生物学特性以及染色过程的物理化学变化等多个方面的知识。
了解天狼星红染色原理不仅有助于科研人员正确地选择和运用染色剂，还能够帮助他们更好地理解细胞和组织的结构与功能，为生物学和医学研究提供更加准确和可靠的数据支持。
总之，天狼星红染色原理是细胞学和组织学研究中的重要内容，它的深入理解和准确把握对于科研工作具有重要的意义。
希望通过本文的介绍，能够使读者对天狼星红染色原理有一个更加清晰和全面的认识，为相关研究工作提供一定的帮助和指导。
天狼星红染色原理
天狼星红染色原理
原理利用胶原分子与强酸性染料天狼星红结合一起后加强双折光现象，使不同颜色和形态的胶原纤维得以区分。
胶原纤维（collagenousfiber）在三种纤维中数量最多，新鲜时呈白色，有光泽，故又名白纤维。
在HE染色切片中呈嗜酸性，粗细不等，直径0.5~10um，呈波浪形，有分支并交织呈网，胶原纤维的生化成分为I型胶原蛋白。
胶原蛋白（collagen）由纤维细胞分泌，于细胞外聚合成胶原原纤维，经少量黏合成胶原纤维。
胶原纤维是三种纤维中分布最广泛的一种纤维，广泛分布于各脏器内，它在皮肤、巩膜和肌腱最为丰富。
胶原纤维在上述的两种方法中着染不同的颜色，如V.G着染红色，Masson氏着染蓝色或绿色。
这主要取决于染料对组织的渗透、吸附、沉淀和反应，而染料分子量的大小是关键，分子量小的分子移动迅速，行动快，对组织的渗透性较强，能穿透较为致密的组织。
分子量大的染料分子移动较迟缓，渗透力较弱，可作用于组织强求构较疏松的组织，染色时间可适当延长。
在相关的染料中，分子量从小到大依次排列是：苦味酸（黄色）：229.11；桔黄G（黄色）：452；丽春红（红色）：480.42；酸性品红（红色）：585.53；苯胺蓝（蓝色）：737.72；亮绿（绿色）：792.72；甲基蓝（蓝色）>99。
染色是一个较为复杂的化学反应和物理作用的双重过程，在应用这些方法时，根据不同情况，选择不同的方法，认真地操作，方能获得最佳的效果。
病理学特殊染色技术天狼猩红苦味酸染色法
病理学特殊染色技术天狼猩红苦味酸染色法
区别胶原纤维类型（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型胶原）并定量
适用于10%甲醛固定的组织，石蜡切片
试剂：
①天狼猩红苦味酸液：0.5%天狼猩红（Sirius red）10毫升，苦味酸（Picric acid）饱和水溶液90毫升
②天青石蓝液：天青石蓝B（Celestine blue B）1.25克，铁明矾
1.25克，蒸馏水250毫升。
溶解煮沸，冷却，过滤，加甘油30毫升；再加浓硫酸0.5毫升
方法：
⑴石蜡切片4~6微米，脱蜡至水
⑵天青石蓝B液5~10分钟
⑶蒸馏水洗3次
⑷天狼猩红苦味酸液15~30分钟
⑸可用Harris苏木精染核
⑹无水酒精分色、脱水
⑺二甲苯透明，中性树胶封片
结果：显微镜下观察并照相
普通生物显微镜：胶原纤维红色；
细胞核绿色；
其他成分黄色
偏振显微镜观察：
Ⅰ型胶原：红色或黄色，排列紧密，有强双折光性；
Ⅱ型胶原：色彩多，疏松网状，弱双折光性；
Ⅲ型胶原：绿色，细纤维，弱双折光性
Ⅳ型胶原：淡黄色，嫌双折光性（基膜成分）。
组织染色总结
组织染色总结1.HE染色原理：苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
应用：观察组织形态,或鉴别坏死/凋亡细胞。
2.Masson染色/ Van Gieson染色原理：染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松、渗透性高的组织。
应用：区分胶原纤维和肌纤维。
3.EVG染色原理：VERHOEFF’S VAN GIESON染色，简称EVG染色，组织被含有三氯化铁和碘的苏木精染色后,再用过量的媒染剂(三氯化铁)中断组织与染料的结合。
染料被分化液中的大量媒染剂吸引,使其从组织中清除。
弹性纤维对铁苏木精具有较强的吸引力, 使染料能比其他组织保留更久。
应用：观察血管弹性纤维的形态及变化。
4.天狼猩红染色原理：天狼猩红和其衬染液都是强酸性染料，易与胶原分子中的碱性基团结合，吸附牢靠。
偏振光镜检查，胶原纤维有正的单轴双折射光的属性，与天狼猩红染色液结合后，可增强双折射，提高分辨率，从而区分两型胶原纤维。
应用：观察组织纤维化程度，以偏振光进行胶原亚型的分区。
5.VonKossa染色原理：组织切片以硝酸银处理，钙可被银沉积物替换，由强光还原为可见的金属银。
应用：观察组织内病理性钙沉积情况。
6.红油O染色原理：油红O为脂溶性染料,在脂肪内能高度溶解,可特异性的使组织内甘油三酯等中性脂肪着色。
应用：主要对组织内脂质（如脂滴）染色。
7.PAS染色原理:PAS染色（Periodic Acid-Schiff stain）又称过碘酸雪夫染色或糖原染色。
过碘酸能使细胞内乙二醇基氧化成二醛，醛基与雪夫氏溶液起反应，使无色品红结合成红色，沉着于含糖原的细胞结构上。
应用：观察肝脏、肌肉等组织内糖原的变化；观察肠、胃、肺、支气管等杯状细胞酸性粘液物质变化。
8.阿利新蓝染色原理：阿利新蓝（Alcian）为类铜钛花青共轭染料，可与组织内含有的阴离子基团如羧基和硫酸根形成不溶性复合物。
天狼猩红饱和苦味酸染色在大鼠胰腺纤维化评价中的应用
实用 医学 杂志 ２ ０ 年 第 ２ 卷第 １ 期 ０８ ４ ６
天 狼 猩 红饱 和苦 味酸 染 色 在 大 鼠胰腺 纤 维 化 评 价 中的应 用
崔叶青
摘
Hale Waihona Puke 张 小丽 李非 要 目的 ： 用苦 味 酸 天 狼 猩 红 一 振 光 法 评 价 长 期 高脂 饮 食 导 致 的 胰 腺 纤 维 化 。 方 法 ： 立 ｌ 应 偏 建 ８周 高 脂
饮食 大鼠模 型 ， Ｅ染 色观察胰腺形 态变化 ， Ｈ 苦味酸 天狼猩 红一 偏振光 法对胰腺 纤维化特 点进行评价 。结果 ： 长期 高 脂饮食 可以导致大 鼠胰腺 纤维化 改变 ． 对苦味 酸天狼猩红 染色结果进行 图像 分析显示胶原 纤维含 量较对照组 明显 增加（ Ｐ＜００ ） 偏光镜下观察示 以 Ｉ、 ．１ ， Ⅲ胶原 为主要成 分。结论 ： 苦味 酸天狼猩红一 偏振光 法是评价 胰腺纤维化胶 原沉积的有效方法 。
ｅ ａｕ ｔｄ ｕ ｉ ｇｐ ｃ ｏ ｉ ｕ — ｏａ ｚ ｔ ｎ ｍｅｈ ｄ Ｒｅ ｕ ｔ Ｃ ｒ ｎ ｃＨＦ ｓｉ ｄ ｃ ｄ ｔ ｅ ｆ ｒ ｔ ｈ ｎ ｅ ｉ ｅ ｐ ｎ ｒ ａ ． ｉ ｕ ｖ ｌ ａｅ ｓｎ ｉｒ ｓｒ ｓ ｐ ｌ ｒ ａｉ ｔ ｏ ． ｓ ｌｓ ｉ ｉ ｏ ｈ ｏ ｉ Ｄ ｎ ｕ ｅ ｈ ｂ ｏ ｉ ｃ ａ ｇ ｔ ａ ｃ ｅ ｓ Ｓ ｒ ｓ ｉ ｃ ｎ ｈ ｉ
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胶原纤维的天狼猩红染色法与Vangieson染色法的比较
１ ８・ ２
ＳＣ Ａ Ｏ Ｒ Ａ ＦＡ Ａ Ｏ Ｉ ＨＯ Ｎ Ｊ Ｕ Ｎ Ｌ Ｏ Ｎ Ｔ ＭＹ Ｖ Ｌ １ Ｏ．２ ０ ２ Ｏ ． ０ Ｎ ２０
２ 结 果
肝 Ａ组 肝 Ｂ组 肝 Ｃ组 组 织块 可连续切 片 ，镜 下 细胞无 收缩 ，肝索和 肝血窦分 布清 晰可 见 ，肝 小 叶 间无 裂 隙 。 与 Ａ组无 明显 区别 。 可连续 切片 ，镜下 组织结 构完 整 ，细 胞 收缩小 ，无裂 隙 。
１２６ 酸酒精分色，水洗。 ．．
１２７ 分 别人下 液 ３ ，２ ．． ０’ ｈ
天狼猩红染色法 ： ０１ ． ％天狼 猩红 １ｃ 苦 昧酸饱 和液 ９ ｃ ０ｃ＋ ０ｃ
Ｂ Ｖａｇｅｏ ． ｎｉ ｎ染色法 ： ｓ
苦昧酸饱和液 １０ｃ＋ ％酸性复红 ７５ ｅ ０ｃ ２ ．ｃ ＋冰
醋 酸 ０４ 一ｎ ３ｃ ．１ ７ ｃ
社 ．９ ８，２ １９ ２—２ ． ３
［ 北 京 ： 人 民卫 生 出版 杜 Ｍ］
１８ ９０
［ ］杜卓 民、实用组织学技术 ［ 第 二 版 ．北 京 ：人 民卫 生 出 版 ２ Ｍ］
胶 原 纤 维 的天 狼 猩 红染 色法 与 Ｖ ｎｉ ｏ 染 色法 的 比较 ａｇ ｓｎ ｅ
谢 美容 王 玮
１２ １ 取材 ：含胶原纤维多的组织。 ．．
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四川解 剖 学杂 志 ２０ ０ ２年 第 １ 卷 第 ２ 期 Ｏ
１２２ 固定 １％福尔马林或 Ｂ ｕ 液。 ．． ０ ｏｉ ｎ １２３ 常规脱水、包埋、切片 。 ．．
１２４ 切片常规脱蜡人水、双蒸水洗。 ．． １２５ 切片入 Ｈ ｎｅ 铁苏木素 ５ ，自 ．． ａｓｎ ’ 来水洗 １ ’ ０。
胶 原纤 维上 色 ，且 色 彩 呈 品 红 色 ，不 够 鲜 艳 ，无 法 将 胶原 纤维 的偏 振 光性 质 显 示 出来 ，而 天狼 猩 红 对 胶原 纤维 染色效 果较 好 ，它既有 Ｖ ｎｉ ｏ ａｇ ｓｎ染色法 的 ｅ
天狼星红偏振兴法——胶原纤维染色的一种理想方法
天狼星红偏振兴法——胶原纤维染色的一种理想方法西北国防医学杂志(MedJNDFNC)2001s印;22(3)289块变小或消失,腹膜刺激症状及体征明显.(2)巧克力囊肿一般都有进行性加重痛经史,妇科检查子宫后位活动受限.子宫后壁不平,附件区有粘连包块,后穹窿穿刺可抽出咖啡色涟体.③卵巢肿瘤扭转:(1)移动性包块史,体位突然改变后突发持续性绞痛.(2)妇查可发现患倒附件区有张力太压痛明显的肿块.④急性盆腔炎(1)多发生于月经,分娩,流产后或先期有附件炎,子宫炎或不洁性交史.(2)下腹两劁急性持续性烧灼痛,脓性或血性白带,高热.(3)子宫直肠窝压痛,饱满,附件区压痛,后穹窿穿刺可抽出脓液和渗出液.⑤卵巢滤泡或黄体破裂与月经周期关系密切,前者多发生在月经中期,后者多在月经后半期,破裂发生的诱因多为性交,妇科检查等腹部受外力挤压后.⑥子宫肌瘤嵌顿时太小便突感不畅,妇查可扪及圆形压痛包块,充满后盆腔,宫颈被推向耻骨后方;粘膜下肌瘤脱出有月经过多史.妇查明道的包块根在宫颈内且光滑可动;红色变性时子宫包块疼痛尉烈,增太快,软,张力太,B超对上述疾病诊断价值较高.⑦卵巢肿瘤感染:(1)下腹部包块史而后有腹痛.(2)高热,不等程度腹膜刺激症⑧阑尾炎:(1)全腹部或脐中之锐痛,固定于右下腹,(2)麦氏点压痛,妇查无异常.2.3本组无1侧死亡.我们的体会是积极有效的术前准备及选择恰当的手术时机.急腹症术前处理的重点在于防治休克,做好必要的实验室检查,输血,翰涟,纠正电解质紊乱,控制感染,纠正休克,以提高手术的安全性.有些紧急情况,术前处理可与手术同时进行,如严重内出血的异位妊娠破裂病侧,可一方面抢救体克,一方面立即手术止血,并利甩疲睦内出血作自体输血,往往能迅速使患者转危为安.参考文献:[1]刘振华,陈晓红.误诊学[M].济南:山东科学技术出版社,199395.天狼星红偏振光法——胶原纤维染色的一种理想方法贾赤字,陈壁',王德文(1.第四军医走学西京医院烧伤科,陵西西安710032;2.军事医学科学院基础所二所)美键词:实验室诊断;中国分类号:R446胶原纤维;染色文献标识鸸:D胶原是细胞外基质的主要成分之一,不仅起支架作用,且具有特殊的生理功能.尤其在创伤修复中,机体通过胶原合成和阵解,对组织刨伤愈台后的改建,使组织修复得以完成和完善.故研究胶原纤维的变化规律,对进一步揭示组织修复的机理裉有益处.但目前用于研究胶原纤维的组织转染和免疫组化法尚有很多缺陷,而天狼星红偏振光法可克服它们的不足.1材料与方法1.1材料:①常规HE染色试剂;②天狼星红染料(军事医学科学院放射病理研究所提供).1.2方法:将切片常规脱蜡至水后,在玻片上加8t30天狼星红染料,"℃温育lh后,苏木素复染,梯虚{酉精洗涤,二甲苯固定加mln.封片.在暗视野条件下,用偏光显徽镜观察.2结果在偏振光镜下,可清晰地观察到不同类型的胶原纤维具有不同的颜色和形态.I型腔原呈红黄两种颜色,Ⅲ型腔原呈绿色3讨论收薯日期:20O12-IO作者葡升:贾赤字(196卜),男,博士,剐教授经验交流?胶原纤维的变动贯穿于组织修复的全过程,对胶原纤维的研究可加深对倒伤愈合的认识.目前常采用组织特染和免疫组化两种方法.但特染仅能表达胶原总体的变化,不能同时区分I,Ⅲ型胶原的类型,且易褪色,不易长久保存和回顾性研究.免疫组化j缶,尽管特异性强,但操作程序繁琐,其染色效果受很多因素影响,如抗体效价,实验者经验等,结果不易稳定.且抗体较昂贵,不易保存,同时也不能在同一切片中反映两种胶原类型(I/Ⅲ型)的变化.天狼星红是一种与胶原分子中的碱性基因起反应的明离子强融性染料,是一种长型展开的分子,可与腔原分子特异性吸附,紧密结合【.天狼星红偏振光法操作简单(同HE染色相近),快速(<2h).结果十分稳定,可长期保存.且可在同一切片中诸地显示I/Ⅲ型胶原的形态和分布,结合图像分析技术还能进行定量分析.综上所述,该法不失为一种显示腔原纤维的理想方法.参考文献【1]付小兵,王德文.剖伤惨复基础【M].北京:人民军医出版社,1997.10o.[2]"ll8燃卧.M朗棚岫e吐of髑ua菪哺一pt,ote~ycaa血r搴耽i僵n 蛐:0pI娜[JJ.FhstlesadRec饵吼nlcSara~y,Z983,71(6):818,。
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天狼猩红染色
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已知胶原有四型（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）区分并定量这四种胶原纤维，对于研究病变的发生机理和演变过程有一定的意义。
利用胶原蛋白聚合及其缠绕螺旋排列不同的特点，使用天狼星红苦味酸染色法，在偏振光显微镜下，可以根据双折光性和着色的不同，分别显示出四型胶原纤维。
[组织固定与切片]
4%甲醛液固定组织，石蜡切片。
[试剂配制]
（1）天狼星红-饱和苦味酸液：0.5%天狼星红10ml，苦味酸饱和水溶液90ml。
（2）天青石蓝液：天青石蓝B1.25g，铁明矾1.25g，蒸馏水250ml。
溶解煮沸，冷却后过滤，加入甘油30ml，然后再加入浓硫酸0.5ml（注意硫酸一定要后加入）。
[操作步骤]
（1）石蜡切片厚4~6μm，脱蜡至水。
（2）入天青石蓝液5~10min。
（3）蒸馏水冲洗3次。
（4）天狼星红饱和苦味酸液15~30min；（可用Harris苏木素液淡染细胞核）。
（5）直接用无水乙醇分化与脱水。
（6）二甲苯透明、光学树胶封固。
[染色结果]
普通光镜观察：胶原纤维呈红色，细胞核呈绿色，其他成分呈黄色。
偏振光显微镜下观察：
Ⅰ型胶原纤维：红色或黄色，排列紧密，具强双折光性。
Ⅱ型胶原纤维：多种色彩，疏松网状、弱双折光性。
Ⅲ型胶原纤维：绿色、细纤维、弱双折光性。
Ⅳ型胶原纤维：淡黄色、弱双折光性（基膜成分）。
[注意事项]
为保持色彩鲜艳，应在染色后及时观察并照相。