06消毒灭菌与生物安全
生物安全实验室常规消毒灭菌
生物安全实验室常规消毒灭菌一、室内空气消毒具备排风净化功能的负压实验室，根据所操作的微生物因子不同，空气可以经高效过滤器过滤后排放，但应采取通风控制系统来防止实验室出现正压。
室内空气经高效过滤器过滤后排到建筑物以外并远离该建筑的进气口。
无排风净化功能的常压实验室，使用可汽化过氧化氢、气体二氧化氯对空间进行气体熏蒸或气溶胶喷雾等方法消毒，同时需做好个人防护与消毒后消毒剂残留的去除处理。
二、室内环境表面消毒若地面、实验台面等被明显污染，应立即用吸液布覆盖，喷洒消毒剂（从外向内）于吸液布上，使吸液布湿透，作用60min 后用清水擦拭干净。
实验台面、桌椅、门把手、生物安全柜和解剖柜台面、侧壁等可用消毒剂喷洒、擦拭。
表面消毒可使用含氯消毒剂，含有500～1 000mg/L有效氯溶液适于普通的环境表面消毒。
当处理高危环境时建议使用5 000mg/L有效氯溶液。
用于金属表面消毒处理时，消毒结束后应尽快使用清水清除表面残余消毒剂。
三、生物安全防护设备的消毒（一）生物安全柜消毒在每次使用前后清除生物安全柜内表面的污染，工作台面和内壁要用中高效消毒剂进行擦拭，不触及送风滤器的扩散板。
75%乙醇消毒后需及时擦净水痕。
采用含氯消毒剂处理后，须用水擦拭干净，防止对生物安全柜的腐蚀。
试剂溢漏或泼洒后，立即消毒污染物及污染的表面。
生物安全柜在移动或更换过滤器之前，要使用汽化过氧化氢、二氧化氯气体或甲醛蒸汽对生物安全柜进行终末消毒。
（二）高效过滤器的消毒采用汽化过氧化氢消毒法或甲醛熏蒸法进行消毒。
消毒器应与排风过滤器排风箱体的消毒接口连接，利用循环气流带动蒸汽循环实现原位消毒。
消毒后可将滤器卸载，装入医用废物塑料袋中，进行压力蒸汽灭菌。
操作时做好个人防护。
（三）个体防护装备的消毒一次性帽子、口罩、手套，使用后应放入废物袋内高压灭菌。
防护鞋、防护眼罩、防护面具（半面具）、防护面罩（含正压面罩）表面用消毒剂喷雾或擦拭消毒，作用到预定时间后清洗晾干备用。
消毒灭菌和病原微生物实验室生物安全
（三）低效消毒剂 1.季铵盐类消毒剂 （苯扎溴铵） 2.氯已定 3.高锰酸钾
第二节 消毒灭菌旳利用
医疗器械物品旳消毒灭菌 室内空气消毒灭菌 手和皮肤旳消毒 黏膜旳消毒 病人排泄物与分泌物旳消毒灭菌 病人污染物品旳消毒 饮水旳消毒 环境旳消毒
过程。 无菌(asepsis)和无菌操作：无菌是无活菌旳意思，多是灭菌旳成果。
预防细菌进入人体或其他物品旳操作技术，称为无菌操作。
第一节 消毒灭菌旳措施
物理消毒灭菌法 化学消毒灭菌法
热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 干燥与低温抑菌法
干热灭菌法 湿热灭菌法
高效消毒剂 中效消毒剂 低效消毒剂
（一）热力灭菌法
菌种保存管
（五）化学消毒灭菌法
杀菌机制 增进菌体蛋白质变性或凝固。 干扰细菌旳酶系统和代谢。 损伤细菌旳细胞膜，使细胞膜通透性增长，胞外液内渗，
细菌裂解。
化学消毒剂旳种类
（一）高效消毒剂 1.含氯消毒剂 （次氯酸钠、漂白粉） 2.过氧化物消毒剂 （过氧化氢、过氧乙酸） 3.醛类消毒剂 （戊二醛、甲醛） 4.环氧乙烷
➢ 高压蒸汽灭菌法
在103.4kPa蒸气压下，温度到达121.3℃，维持15~20min
高压蒸汽灭菌器 用于一般培养基、生理盐水、耐热药物、手术敷料等。
（二）辐射灭菌法
非电离辐射: 紫外线 电离辐射: 、、γ、χ射线以及高能质子、 中子等
紫外线(ultraviolet ray, UV)
作用于DNA，使相邻旳胸腺嘧啶共价结合形成二聚体，干 扰DNA复制。
1. 干热灭菌法 2. 湿热灭菌法 在同一温度下，湿热效力比干热大。 原因：（1）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固；
消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全
病原微生物所致的安全问题，如病原微 生物实验室的安全隐患、生物武器、生物恐 怖、重大传染病的暴发流行等，也是人类社 会所面临的最现实的生物安全问题。
病原微生物实验室生物安全的核心是防 扩散和防感染。
关于病原微生物实验室生物安全，我国 法令包括对病原微生物的分类管理，对实验 室的分级管理 ， 实验室感染的控制以及监督 和法律责任等。
实验室概况—布局及流程 ☜☜
一、二级实验室不得从事高致病性 病原微生物实验活动。三级、四级实验 室从事高致病性病原微生物实验活动。
从事高致病性病原微生物相关实验 活动应当有２名以上的工作人员共同进 行。在同一个实验室的同一个独立安全 区域内，只能同时从事一种高致病性病 原微生物的相关实验活动。应有健全安 全保卫制度 。
实验室相关感染的原因
接触感染材料（倾倒、溅开） 针头刺伤 破碎玻璃器皿损伤 被感染的动物或昆虫咬伤、抓伤 感染微生物气溶胶
气溶胶
是指悬浮于气体介质中粒径一般为 0.001-100μm的固态或液态微小粒子形 成的相对稳定的分散体系。
微生物气溶胶特点：
◙ 无色无味，无孔不入，不易发现，难以预防; ◙ 容易发生病原体在人与人、人与动物、动物与
坡、我国台湾和北京先后发生实验室SARS冠 状病毒感染。
实验室感染的历史与现状
实验室感染可间接传播至社区人群：
◙ 1992年，荷兰从1名儿童体内分离出1株脊髓 灰质炎疫苗病毒,该儿童的父亲在工作中曾意 外接触过大量脊髓灰质炎疫苗病毒。
◙ 2002年11月至2003年3月，印度西部地区从7 例脊髓灰质炎患者体内分离到Ⅱ型实验室标 准株,推测可能为实验室感染。
消毒灭菌与生物安全
高压蒸汽灭菌法
基本方法:103、4kPa(15磅)压力下,温度 达到121、3℃,维持20分钟。
灭菌效果:杀灭包括芽胞在内得所有微生物。 适用范围:耐高温、不怕潮湿得物品,如基础
培养基、手术敷料等。
高压蒸汽灭菌器
辐射杀菌法一
紫外线:波长265-266nm杀菌作用最强。 原理:作用于DNA,形成胸腺嘧啶二聚体,
特性:不进入无菌组织,但需接触黏膜得器械。 种类:胃镜、阴道窥器、体温计等。 处理:采用消毒即可,如合适消毒剂得浸泡(使
用前彻底去除消毒剂)、最好采用高压蒸 汽灭菌法灭菌(器械允许)。
低危器械物品得消毒灭菌
特性:只接触未损伤得皮肤,不进入无菌 组织或不接触黏膜得物品。
种类:治疗盘、治疗车、食品器皿等。 处理:使用后清洗、消毒处理即可。
滤过除菌法
机理:机械阻挡,获得无菌得液体或气体,但 就是不能除去小型得微生物,如病毒等。
用具:滤菌器、滤膜孔径0、22-0、45微米。 应用:不耐高温灭菌得液体(血清、抗生素等)、
超净台(层流工作柜)、无菌病房等。
大家学习辛苦了，还是要坚持
继续保持安静
滤过除菌法得常用器具
其她物理消毒灭菌法
消毒与灭菌得方法
物理消毒灭菌法:热力灭菌法、辐射杀菌法、 滤过除菌法、干燥与低温抑菌法
化学消毒灭菌法:消毒剂得杀菌机制、消毒剂 得主要种类、使用范围。
热力灭菌法一
原理:高温对细菌得致死效应(蛋白凝固变性)。 分类:干热灭菌法、湿热灭菌法。 效果:湿热灭菌效果好,原因就是含水量多得蛋白质
化学消毒剂得种类
高效消毒剂:可杀灭所有种类得微生物;包括含 氯消毒剂、过氧化物消毒剂、醛类消毒剂、 环氧乙烷等。
中效消毒剂:能杀灭除芽胞以外得微生物,包括 含碘消毒剂、醇类消毒剂等。
《医学微生物学》第3章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全练习题及答案
《医学微生物学》第3章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全练习题及答案【知识要点】1.掌握：（1）消毒、灭菌、清洁、防腐、无菌及无菌操作的概念。
（2）消毒灭菌的运用（3）病原微生物实验室的分级2.熟悉：常用的高压蒸气灭菌法、巴氏消毒法等热力杀菌法日光与紫外线杀菌机理及其应用；常用的化学消毒剂的种类及其应用。
实验室感染的控制以及监督和法律责任。
3.了解：热力灭菌法的种类和应用范围；常用化学消毒剂的作用机制及影响作用的因素。
【课程内容】第一节消毒灭菌常用术语第二节消毒灭菌的方法一、物理消毒与灭菌（一）热力灭菌法（二）辐射杀菌法（三）滤过除菌法（四）超声波消毒法（五）干燥与低温抑菌法二、化学消毒灭菌法（一）化学消毒灭菌法的原理（二）消毒剂的主要种类第三节消毒灭菌的运用一、医疗器械物品的消毒灭菌二、室内空气消毒灭菌三、手和皮肤的消毒四、黏膜消毒五、病人排泄物与分泌物的消毒灭菌六、病人污染物品的消毒七、饮水的消毒八、环境的消毒第四节影响消毒灭菌效果的因素一、微生物的种类二、微生物的物理状态三、微生物的数量四、消毒剂的性质、浓度与作用时间五、温度六、酸碱度七、有机物第五节病原微生物实验室生物安全一、病原微生物的分类二、病原微生物实验室的分级实验室感染的控制以及监督和法律责任【应试习题】一、名词解释1．防腐2．高压蒸气灭菌法3．灭菌4．无菌5．消毒6．抑菌7．巴氏消毒法8. 清洁二、填空题1．化学消毒剂杀菌或抑菌的作用机理是_______、_______和。
2．高压蒸气灭菌法的蒸气压力为_______kg／C㎡，温度达_______℃，维持时间是_______min。
3．紫外线杀菌力最强的波长为_______，常用于无菌室的_______消毒。
4．预防新生儿淋病奈瑟菌感染常用的滴眼剂是_______。
5．消毒手术包常采用的方法是______________________，其温度达到______________，维持时间是_____________________，可去除细菌及___________________。
医学微生物学消毒与灭菌和生物安全
微生物的分布
❖ 1、土壤中的微生物： ❖ 多为非致病菌，少数有致病性。 ❖ 芽孢菌致病；药材霉变。 ❖ 2、水中的微生物： ❖ 主要来自人和动物的排泄物、污物。 ❖ 常引起消化道传染病。 ❖ 3、空气中的微生物： ❖ 来源于人畜呼吸道的飞沫及飘扬的尘埃； ❖ 常引起呼吸道传染病。
Carbolic Steam
uW/cm2
紫外线杀菌车
（二）电离辐射
包括高速电子、X射线、β、和 射线：60Co－
尤其是γ射线穿透力强，不升高温度，对各种细菌均有致死作用
杀菌机理： 细胞中的水分被电离成H+和OH-，这些游 离基是强烈的氧化剂和还原剂，能破坏微 生物的核酸、蛋白质、酶，使微生物死亡
应用范围：
不耐热的一次性医用塑料制品的 消毒， 食品、药品、生物制品的消毒， 不破坏其营养成分
净台（层流工作柜）、无菌病房。
特点 仅能除去细菌，不能去除病毒、支原体、 衣原体和有些L型细菌等。
滤菌器的种类
➢ 薄膜滤菌器：孔径0.22～0.45m时，可 除去细菌；20～100nm时可除去病毒
➢ 玻璃滤菌器 ➢ 石棉滤菌器 ➢ 素陶瓷滤菌器
滤过除菌法的常用器具
滤菌器
六. 渗透压
主要用于防腐
相互比较
灭菌与消毒的比较：杀菌更彻底。 消毒与防腐的比较：浓度和时间。 无菌：本身无菌或灭菌处理。 无菌操作：保持着原生态的环境。
第一节 物理消毒灭菌法
❖ 一热力消毒灭菌法
干热灭菌法 湿热灭菌法
❖ 二 干燥和低温抑菌法
❖ 三辐射杀菌法
❖ 四超声波杀菌法
❖ 五 滤过除菌法——用物理阻留 方法除去细菌。
第二节 化学消毒灭菌法 用于防腐、消毒甚至灭菌的化学药物称 为化学消毒剂。只能外用或用于环境的消毒。
消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全(ppt)
含碘消毒剂： 碘伏、碘酊 氧化作用，但有刺激性
醇类消毒剂 乙醇、异丙醇 脱细胞膜的脂类，并使菌体蛋白变性 70-75%乙醇作用最强
（三）低效消毒剂：
杀多数细菌繁殖体，不能杀芽孢和结核杆菌以及 一些真菌和病毒
新洁尔灭
皮肤、粘膜、地面、物品表面（不与阴离子表面活性剂合用）
洗必泰
皮肤、粘膜、地面、物品表面（不与阴离子表面活性剂合用）
高锰酸钾
氧化作用 皮肤、粘膜、蔬菜、水果的消毒
第二节 消毒灭菌的运用
（一）、医疗器械物品的消毒灭菌
1、高危器械物品 用时需进入无菌组织的物品。所有这些物品 都应该灭菌。
2、中危器械物品 用时不进入无菌组织但接触黏膜的器械。采 用消毒即可。
煮沸法
煮沸温度为100℃，一般细菌繁殖体5分钟就 杀死了，芽胞需要1-2小时才可被杀灭。
流动蒸气消毒法
利用一个大气压下100℃的水蒸气进行消毒， 细菌繁殖体15-30分钟杀灭。蒸笼具有类似的原 理。
间歇蒸气灭菌法
利用反复多次的流动蒸气间歇加热以达到灭菌 消毒的目的。
高压蒸气灭菌法
一种最有效的灭菌方法。灭菌的温度取决于 蒸气的压力。在103.4kPa蒸气下，温度达到 121.3℃，维持15-20分钟，可杀灭包括细菌芽 胞在内的所有微生物。
紫外线灯管
2. 电离辐射 常用γ射线(钴-60)和β射线。
原理：
干扰代谢和DNA合成，破坏细胞膜、酶，产生 H2O2、游离羟基杀菌。
特点： 具有较高的能量与穿透力，可在常温下对
不耐热的物品灭菌，故又称“冷灭菌”。
运用： 可用于消毒不耐热的塑料注射器和导管等，
亦能用于食品、药品、生物制品等的消毒灭 菌。
临床微生物与检验 第3章 消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全
（4）环氧乙烷
作用机理：对细菌蛋白质和核酸的烷化作用。 特点：
①为杂环类化合物，沸点10.8℃，易蒸发。气体消毒剂。
②有穿透力，杀菌广谱高效，杀灭芽胞能力强。 ③对多数物品无损害作用。 ④易燃，对人有一定毒性。空气中浓度不得超过1ppm。 用途：现已有特制的环氧乙烷灭菌箱。使用安全方便。
2.中效消毒剂—能杀灭微生物的繁殖体，结核分枝杆菌、某些
辐射杀菌法
日晒和紫外线
[原理] 日光中杀菌的成分主要是紫外线。紫外线的波长在 200～300nm时，具有杀菌作用，其中以265～266nm杀菌 力最强，易被DNA吸收。细菌DNA吸收紫外线后，其生物学 活性发生改变，同时蛋白质也光解变性，导致细菌死亡。 [特点] 紫外线穿透力弱，玻璃、尘埃、纸张、水蒸气均能阻 挡紫外线。 [应用范围] 日晒是有效的杀菌方法，用于病人的衣服、被褥、 书报等的灭菌。紫外线仅适用于手术室、婴儿室、烧伤病房、 传染病房和无菌室的空气消毒，亦可用于不耐热物品的表面 消毒。
2.熏蒸
3.二氧化氯溶液 4mg/m3
4.中草药
三、手和皮肤的消毒
（一）肥皂和流动水经常正确洗手是预防多种病原微生物感染的有效方法。 （二）被病原微生物污染时
1. 75%酒精 2. 氯己定溶液 3. 过氧乙酸 4. 次氯酸钠溶液 5. 碘伏
四、黏膜的消毒
（一）口腔黏膜 3%H2O2 （二）冲洗尿道、阴道、膀胱0.1%~0.5%氯己定溶液；1g/L高锰酸钾溶液
（1）含氯消毒剂
次氯酸钠
常用种类
二氯异氰酸尿酸钠
漂白粉
作用机理：
这类制剂遇水可产生氯（Cl2）、次氯酸（HClO）及新生态氧。 氯可氧化细菌的-SH、次氯酸（HClO）可与胞质成分作用，形成氮 -氯复合物，干扰细胞代谢。 特 点：（1）具有强大的杀菌作用。
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二、突发公共卫生事件
（一）突发公共卫生事件的特点与危害 （二）常见的突发公共卫生事件 （三）突发公共卫生事件的处理
第三节 灾害后微生物感染的控制
一、灾害医学概述
（一）灾害的分类 （二）重大灾害对人类生存的影响
二、灾害后的医学救援原则 三、灾害后感染的控制
（一）医学急救措施 （二）灾害后现场的卫生防疫
适用范围 血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌
滤 菌 过 程
（四）超声波杀菌法
（五）干燥与低温抑菌法
冷冻真空干燥法： 在低温状态下真空抽去水分
用途：保存菌种
三、化学消毒灭菌法
常用消毒剂种类
类别
作用机制
酚类 蛋白变性，细胞膜损伤
醇类
蛋白变性
氧化剂
氧化、蛋白沉淀
重金属盐 氧化、蛋白酶变性
氧化剂
氧化、蛋白沉淀
表面活性剂 蛋白变性，细胞膜损伤
染料
干扰氧化、抑制繁殖
常用种类 石炭酸 乙醇
高锰酸甲 红汞、硫柳汞 过氧乙酸、碘酒
新洁尔灭 龙胆紫
各种消毒剂的应用
种类 石炭酸
乙醇 高锰酸甲
红汞 硫柳汞 过氧乙酸
碘酒 新洁尔灭
龙胆紫
使用浓度
3%~5% 70%~75%
0.1% 2% 0.1% 0.2%~1% 2%~2.5% 0.05%~0.1% 2%~4%
干烤——加热160-180℃ 2小时 红外线 ——产生高热
湿热灭菌法
★高压蒸汽灭菌法 最有效的灭菌方法 121 ℃ 15~ 20 分钟
煮沸消毒法
水煮100 ℃ 5分钟(繁殖体)~2小时(芽胞)
流通蒸汽消毒法
水蒸汽100 ℃ 15~30分钟(繁殖体）)
间歇蒸汽灭菌法
反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌
巴氏消毒法
较低的温度（72℃ 15s）杀灭致病菌
★湿热灭菌与干热灭菌的比较
同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好
原 1、湿热中细菌菌体蛋白较易凝固 因 2、湿热的穿透力比干热大
3、湿热的蒸汽有潜热
二、辐射杀菌法
★紫外线 波长200~300m的紫外线具有杀菌作用 杀菌机理：干扰DNA的复制与转录 特 点： 紫外线穿透力较弱 应用范围： 空气消毒 手术室、传染病房、细菌实验室 不耐热物品的表面消毒
低破坏 方便
价廉
易贮藏
有效
第二节 实验室生物安全
一、病原微生物实验室生物安全 （一）病原微生物危害程度分类
二、生物安全实验室防护水平分级
Biosafety level，BSL 定义：
按美国国立卫生研究院(National Institutes of Health, NIH)和 疾病控制预防中心(Centers for Disease Control and Prevention, CDC) 对生物危害物质规定的防护措施。分为四级： Ⅰ级涉及非致病生物物质； Ⅱ级涉及致病生物物质，但无传染性； Ⅲ级涉及那些易形成气溶胶因而能通过空气传播的致病病原； Ⅳ级涉及的病原物质在性质上同Ⅲ级，但无疫苗或特效药可控 制。
用途 地面、器具表面、皮肤消毒
皮肤、体温计消毒 皮肤、尿道、蔬菜、水果消毒
皮肤、粘膜、小创伤消毒 皮肤消毒、手术部位消毒
塑料、玻璃器材消毒 皮肤消毒
手术洗手、浸泡手术器械 浅表创伤消毒
（三） 影响消毒剂作用的因素
种类
消毒剂
浓度 作用时间
有机物
数量
细菌
环境
温度
种类 酸硷度
（四）消毒灭菌的实际应用
低毒
四、建立应急预案体系 五、加强灾害医学教育和专业培训
电离辐射 包括高速电子、X射线和 γ 射线、微波
杀菌机理： 产生游离基,破坏DNA。 应用范围： 一次性医用塑料制品的消毒 食品的消毒不破坏其营养成分
★（三）过滤除菌法
用物理阻留的方法 将液体或空气中的细菌除去,以达到除菌目的
滤菌器 含有微细小孔<0.22微米,只允许液体或气体过, 而大于孔径的细菌等颗粒不能通过
无菌(asepsis)——不存在活菌 抑菌(bacteriosห้องสมุดไป่ตู้asis)——抑制体内或体外细菌
的生长繁殖。
防腐(antisepsis)——防止 或抑制体外细菌生
长繁殖的方法。
卫生处理（Sanitation）
二、物理消毒灭菌法
（一）热力灭菌法
高温杀灭細菌
干热灭菌法
焚烧——最彻底的灭菌方法 烧灼——直接用火焰灭菌方法