微生物分布与消毒灭菌
细菌的分布与消毒灭菌
第2章细菌的分布与消毒灭菌学习要点一、细菌的分布1. 土壤主要存在一些自营菌和腐物寄生菌，在自然界物质循环中起重要作用。
土壤中也有一些随着人及动物的分泌物、排泄物及尸体、残骸进入土壤的致病菌，但只有能形成芽胞的致病菌，如破伤风梭菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌、炭疽芽胞杆菌等可长时间存活。
处理被泥土污染的创伤时要特别注意防止破伤风梭菌、产气荚膜梭菌等的感染。
2.水如被人和动物粪便污染，就可能带上伤寒沙门菌、痢疾志贺菌、霍乱弧菌、致病性大肠埃希菌、钩端螺旋体等。
通过水源易引起各种感染，特别是消化道传染病的暴发流行。
3.空气空气中的细菌是吸附在尘埃微粒上，常见的致病菌有结核分支杆菌、白喉棒状杆菌、百日咳鲍特菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、脑膜炎奈瑟菌、军团菌等，可引起呼吸道传染病或伤口感染。
4.有生命物体的表面和与外界相通的腔道中这些部位能为细菌生长繁殖提供条件，存在着复杂的细菌群及其它微生物，包括致病菌和非致病菌。
5.无生命物体的表面和与外界相通的内表面其细菌均来源于土壤、水、空气以及人和动物的污染。
二、消毒与灭菌是指用物理或化学方法来抑制或杀死外环境中及机体体表的微生物，以防止微生物污染或病原微生物传播的方法。
以下术语常用来表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度。
消毒指杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀灭芽胞或某些非23 病原微生物。
用以消毒的药品称为消毒剂(disinfectant )。
灭菌指杀灭物体上所有微生物的方法。
包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。
经过灭菌的物品称“无菌”物品。
需进入人体内部的医用器材要求绝对无菌。
防腐防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。
细菌一般不死亡。
无菌不存在活菌的意思。
防止细菌进入人体或其它物品的操作技术，称为无菌操作。
清洁是指通过除去尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过程。
是物品消毒、灭菌前必须经过的处理过程，有利于提高消毒、灭菌的效果。
1.物理消毒灭菌法热力灭菌法高温对细菌具有明显的致死作用。
微生物实验报告(微生物形态观察、分布、灭菌消毒)
FOR PERSONAL USE ONLY IN STUDY AND RESEARCH; NOT FOR COMMERCIAL USE微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护2.掌握细菌的三种形态3.掌握临床常见细菌的形态及染色4.掌握细菌的特殊结构5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1. 普通光学显微镜（油镜）的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰3. 根据需要调节显微镜亮度2. 普通光学显微镜的维护1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内4.做好使用记录3．微生物知识1．细菌按形态分类：球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等）杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等）螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等）2．细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3．细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。
如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。
原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类：真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5．真菌单细胞：圆形、芽生孢子。
如：酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。
如：霉菌6．白假私酵母菌（白念）生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝7．新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜（比菌体大1-3倍）致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个四、实验内容1. 观察细菌三种形态1）球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌（子弹形）、脑膜炎双球菌（蚕豆形）、四联菌2）杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌（异染颗粒）、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌3）螺形菌弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观察细菌的特殊结构芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图葡萄球菌(staphyloccocus)；肺炎双球菌(pneumo coccus)；脑膜炎球菌(meningococcus)；破伤风杆菌（Clostridium Tantenus）；霍乱弧菌（vibrio cholera)；芽胞(spore)；鞭毛（flagellum)；荚膜(capsule)；钩端螺旋体(leptospira)五、实验结果绘8幅细菌镜下图，已交。
第3章细菌的分布与消毒灭菌
消毒剂的应用（二）
手：一般用2%来苏；0.2%-0.4%过氧乙酸浸泡 1min～2min后流水冲洗；2%碘酊涂擦后用70%酒 精擦洗。
厕所、阴沟：生石灰。 空气：甲醛（实验室）12.5～25ml/m3加热熏蒸12～
24hr或甲醛40ml+高锰酸钾30g/m3混合熏蒸12～ 24hr，肝炎病房用过氧乙酸3g/m3熏蒸90min。
菌
营养作用
群
的
免疫作用
生 理
抗衰老作用
作
抗肿瘤作用
用
12
生物拮 即作为生理屏障阻止外来病 抗作用 菌的侵入。
机制
竞争黏附作用（占位性保护） 产生有害代谢产物 营养竞争作用
13
营养作用
即参与机体的物质代谢、营 养物质的转化与合成
免疫作用
即作为抗原既促进免疫器官 的发育，又可刺激免疫应答 增强机体的免疫力
16
件条 件 致 病 菌 的 致 病 条
机体免疫力降低：如大面积烧伤 患者，慢性消耗性疾病患者等。
寄居部位发生改变：如外伤、手 术、留置导尿管等。
不适当的抗菌药物治疗导致的菌 群失调。
17
第二节 消毒灭菌
一、概念： 消毒(disinfection)：杀死物体上或环境中病原微
生物的方法，并不一定能杀死细菌芽胞或非病原微 生物。 灭菌( sterilization)：杀灭物体上所有微生物的方 法，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非 病原微生物。 无菌(asepsis)：不存在任何活菌的意思。
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(二)、化学消毒灭菌法
机制 1. 促进菌体蛋白质变性或凝固，如酚类（高浓
度）、醇类、重金属盐类（高浓度）等； 2. 干扰细菌的酶系统和代谢，破坏蛋白与核酸
细菌分布与消毒灭菌实验报告
细菌分布与消毒灭菌实验报告实验目的：探究细菌在不同环境中的分布情况，并了解消毒灭菌方法的效果。
实验材料：- 细菌培养基- 培养皿- 无菌棉签- 酒精- 消毒液（如漂白粉溶液）- 显微镜实验步骤：1.准备工作：(a) 确保实验环境干净、无菌。
(b) 在净化柜中消毒培养器具，确保无菌。
(c) 配制细菌培养基。
2.取一块无菌棉签，在实验环境的空气中拭取样本，将棉签悬浮于细菌培养基中。
3.将培养皿分为三组，标记为对照组、酒精处理组和消毒液处理组。
4.将无菌棉签均匀地在对照组的培养皿上擦拭。
5.用含有70％酒精的棉签将酒精处理组的培养皿表面擦拭。
6.用含有消毒液的棉签将消毒液处理组的培养皿表面擦拭。
7.将分别进行处理的培养皿密封，放置于恒温箱中进行培养。
8.观察培养皿中菌落的生长情况，并记录每组的菌落数量。
9.对于菌落数量较多的培养皿，可以取一部分菌落进行涂片染色，并在显微镜下观察细菌的形态特征。
10.对实验结果进行分析和总结。
实验结果：根据观察，可以得出下列结果：- 对照组中，培养皿上有较多菌落生长，说明环境中存在细菌。
- 酒精处理组中，培养皿上的菌落数量明显减少，但仍有个别菌落生长。
- 消毒液处理组中，培养皿上几乎没有菌落生长，表明消毒液能有效杀灭细菌。
实验结论：- 本实验的结果表明，细菌分布广泛存在于我们的日常环境中。
- 酒精能够对细菌进行一定程度的抑制，但并不能完全杀灭细菌。
- 消毒液具有较强的杀菌作用，能够有效灭菌，具有消毒和净化环境的能力。
实验的局限性和改进方向：- 实验中只观察了细菌的数量和生长情况，没有进行细菌种类的鉴定。
- 实验中只使用了一种消毒液，可以尝试使用其他不同种类的消毒液来对比效果。
- 实验需要进一步复制和扩大样本数量，以提高实验结果的可靠性和代表性。
总之，这项实验为我们了解细菌的分布情况和消毒灭菌方法的效果提供了基础数据，对我们的生活和卫生保健具有一定的指导意义。
14-细菌的分布与消毒灭菌
5.挥发性消毒液应存放有盖容器内。
（三）生物学方法
抗生素 噬菌体
思考题
解释：正常菌群、条件致病菌、菌群失调 菌群失调症、消毒、灭菌、无菌？
常用的湿热消毒灭菌方法有哪几种及主要 用途？
紫外线杀菌的原理及用途？ 化学消毒灭菌剂使用注意事项?
（三）空气中的细菌 真菌孢子、结核杆菌、白喉杆菌、脑膜炎
球菌、金葡菌、链球菌等
二.细菌在人体的分布 正常菌群： 存在于正常人体，在人体免疫功能正常时
对人体无害的微生物。
正常成人机体由1013细胞组成，人体携带的细菌 相当于人体细胞的10倍即，达1014。
眼结膜
白色葡萄球菌、干燥杆菌
人 体 内 正 常 菌 群 的 分 布
紫外线：波长200~300nm有杀菌作用。 265~266nm杀菌作用最强。机制：破坏细 菌的DNA结构致细菌死亡
过滤除菌：只能除掉大的细菌，病毒、支 原体等小的微生物不能除掉。常用于不耐 热的血清，抗毒素，生物药品等的除菌。
干燥与低温抑菌法： 低温可使细菌的新陈代谢减慢，故常用于
保存菌种。如冷冻真空干燥法是目前最好 的保存菌种的方法。
阴道
大肠杆菌、乳杆菌 白念珠菌、类白喉杆菌
非致病性分枝等
外耳道
葡萄球菌、类白喉杆菌 绿脓杆菌、非致病性分枝杆菌
鼻咽腔
葡萄球菌、甲，丙型链球菌 肺炎球菌、奈氏菌、类杆菌等
表皮葡萄球菌 口腔
甲，丙型链球菌 类白喉杆菌、肺炎球菌 奈氏菌、乳杆菌、梭杆菌 螺旋体、放线菌、白念珠菌
皮肽
葡萄球菌、绿脓杆菌、白念珠菌 丙酸杆菌、类白喉杆菌、 非致病性分枝杆菌
一.概念：消毒、灭菌、无菌、防腐
细菌的分布与消毒、灭菌
★了解学细菌的分布，树立有菌观念、无菌
观念，严格无菌操作
★掌握目正常菌群、灭菌等概念
★掌握热力灭菌法，了解其他物理灭菌法
★掌握标常用化学消毒剂的种类及其用途
第一章
一、细菌的分布
（（
二一
））
人细
体菌
正 常 菌
在 自
群然
及界
其的
意分
义布
微生物 的分布
土壤
伤寒杆菌 痢疾杆菌 破伤风杆菌 结核杆菌等
室内空气消毒、浸
环氧乙烷 有毒易爆 皮毛、食品、医药、 敷料
食醋
5~10ml/m3
手术醋器械酸等消毒
生石灰 1:4或1:8
熏蒸空气消毒 排泄物、地面消毒
尼泊金 0.05~0.1%
生物制品、中药、
滴眼
乙龙酯胆）紫 2%~4%
浅表创伤消毒剂防腐
3. 影响消毒剂作用的因素
消毒剂 种
类 浓 度
作用时间
环境
(三) 方法— 化 学消毒法
1.消毒剂的作用原理 (1) 使菌体蛋白质变性或凝固。 如红汞、酒精、福尔马林、醋酸等。
(三) 方法— 化学消毒法
(2) 破坏细菌的 酶系统如双氧水、 碘液。
(三) 方法— 化学消毒法
(3) 改变细菌细 胞壁或细胞膜的通 透性，如新洁尔灭、 肥皂等
2. 常用消毒剂的种类和用途
凡能耐高热和潮湿的物品，如普通培养 基、生理盐水、手术器械、敷料、手术 衣、橡皮手套、注射器、玻璃器材等， 都可应用高压蒸气灭菌法灭菌。
(三) 方法— 物理灭菌方法
⑤ 巴氏消毒法： 加热62℃经30min或 71.7℃经15～30秒，可杀死物品中的无 芽胞病原菌。
第七章消毒灭菌
教学目标
• 1、熟悉微生物的分布情况； • 2、掌握消毒灭菌的几个概念； • 3、掌握高压蒸汽灭菌法。 • 4、了解化学消毒灭菌法和生物抗菌法。
重点：物理灭菌法。
第一节 微生物的分布
• 一、土壤中的微生物
二、水中的微生物
• 水环境：地球的70%左右由水覆盖，其中 溶解和悬浮有机、无机物，流动水有氧 渗入可供微生物生长。
四、人体的微生物
第二节 消毒与灭菌
一、消毒与灭菌的重要性
• 外科医院：麻醉、止血和抗感染三大技术
尚未建立。为了拯救生命，医生只能不顾 病人的极大痛苦去切割肢体，用炽热的铁 器烙印切口来止血，再缠上一条条“脏” 布，或让血肉模糊的伤口直接暴露在空气 中。
• 病人如果侥幸不死于鲜血淋漓、痛不可忍 的“手术”，那么，绝大多数也要死于一种具有 杀菌作用的蛋白质，只能作用于与它 同种不同株的细菌以及与它亲缘关系 相近的细菌。
• 如大肠菌素，可作用于大肠杆菌及近 缘的志贺菌、沙门氏菌、克雷伯氏菌 和巴氏杆菌等。
• 植物杀菌素：某些植物中存在的杀菌 物质一般称为植物杀菌素。
• 如黄连、黄柏、黄芩、大蒜、金银花 、连翘、鱼腥草、穿心莲、马齿苋、 板蓝根等都含有杀菌物质。
• 7.其他因素 湿度、穿透力、表面张力等。
五、生物抗菌法
• 自然界中，各种微生物之间，或微生 物与动植物之间，经常呈现相互影响 的作用，如寄生、共生和颉抗等现象 。
• 导致颉抗的原因有抗生素和细菌素、 植物杀菌素、噬菌体等。
• 噬菌体是寄生于细菌、霉形体、螺旋 体、放线菌及真菌等的一类病毒，也 称微生物病毒。
光感作用:指可见光具有微弱的杀菌作用，若将 某些染料如结晶紫、美蓝、汞溴红、伊红、沙黄 等加到培养基或涂在外伤表面，能增强可见光的 杀菌作用 。
实验三细菌的分布与消毒灭菌
实验三细菌的分布与消毒灭菌实验三细菌的分布与消毒灭菌【⽬的】①了解细菌⼴泛分布于⾃然界及正常⼈体，树⽴“有菌观念”，从⽽认识⽆菌操作对于微⽣物学及医学实践的重要性。
②了解正常⼈体中寄居着种类繁多的细菌，正常情况下不引起⼈类疾病，称为正常菌群。
③熟悉外界因素对细菌的影响，学习常⽤的消毒灭菌⽅法。
④了解不同细菌对外界因素具有不同的抵抗⼒。
⼀、细菌的分布检查（⼀）空⽓中的细菌检查【材料】普通琼脂平板培养基。
【⽅法】①取普通琼脂平板⼀只开启⽫盖，培养基⾯向上放于实验桌上，暴露5～30min后盖好。
②置37℃培养18～24⼩时后观察结果。
【结果】（填表10-1）平板培养基表⾯或多或少有菌落⽣长。
（⼆）地⾯⽔中的细菌检查【材料】地⾯⽔(河⽔、井⽔或池⽔)、⾼层琼脂培养基、1ml⽆菌吸管、灭菌培养⽫。
【⽅法】①以⽆菌吸管吸取1ml地⾯⽔，加⼊灭菌平⽫中。
②将已溶化且冷⾄45℃左右的⾼层琼脂倾注⼈上述平⽫中，加盖后轻轻摇动，使⽔与琼脂充分混匀，静凝。
③37℃24⼩时后取出观察，计数菌落。
【结果】（填表10-1）（三）⾐服、票证、头发、⼿指⽪肤上的细菌检查【材料】普通琼脂平板培养基。
【⽅法】取普通平板⼀个，⽤蜡笔在平板背⾯玻璃上划成四等分，并贴上标签(图10-1)。
然后以⽆菌操作法，⽤⾐袖⾓、票证、头发及⼿指或指甲内污物，在平板培养基表⾯相应部位轻轻涂抹，置37℃培养24【结果】填表培养基表⾯涂抹处有菌落⽣长。
⾐服、票证、头发、⼿指⽪肤上的细菌检查（四）正常⼈体咽喉部的细菌检查⾎液琼脂平板培养基、灭菌棉拭、接种环、酒精灯。
【⽅法】取灭菌棉拭⼀⽀，在被检查者咽喉部轻轻涂擦后，再涂于⾎液琼脂培养基—侧，然后改⽤灭菌接种环作分离划线接种。
盖上⽫盖，37℃孵育24⼩时（或者采⽤咳喋法）。
【结果】（填表10-1）琼脂平板表⾯有菌落⽣长。
其中占优势的是⼀种细⼩菌落，其周围有草绿⾊的不完全溶⾎环。
此为咽喉部的正常菌群—甲型链球菌。
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实验目的
1 了解培养基的种类与细菌的生长现象。 2 掌握空气及咽喉部的微生物检查方法。 3 掌握皮肤上的微生物检查与皮肤消毒试验。 4 掌握紫外线杀菌试验的原理及方法。 5 掌握细菌药敏试验的原理意义及结果判定。
实验内容
1.培养基的种类与细菌的生长现象 2.细菌分布（空气及咽喉部的微生物检查,操作，每
定病原细菌对哪种药物敏感
药物敏感实验的临床意义 指导临床用药、及时控制感染
K-B（纸片扩散）法
原理
药物可干扰细菌的代谢，阻碍 和影响细菌细胞壁的合成、膜 的通透性及核酸和蛋白质的合 成，不同的细菌种类或菌株， 对同一药物的敏感性不同，通 过将药敏纸片放于已接种细菌 的培养基上，测量其抑制细菌 生长所产生的抑菌圈的大小来 判定病原菌对抗菌类药物的敏 感性
养基 4 紫外线杀菌试验时划线接种不要划烂培养基，
照射时间要充分 5 药敏试验要把药敏纸片贴牢固
皮肤上的微生物检查与皮肤消毒 试验
1 原理：消毒剂对细菌有毒性作用，使菌体蛋白质变性 或凝固等。主要用于人体表面和医疗器械、周围环境的
消毒。
2 方法：(1)把无菌固体培养基底面外用蜡笔划成10格并
记号 (2)5个同学每人两格，单号格用未消毒的右手食指
在培养基上按手印，双号格，用75﹪酒精棉球消毒的 手指按手印
紫外线杀菌实验
方法：
1.涂板（先用无菌接种环取葡萄球菌菌种少许在 无菌固体培养基上划线接种） 2.将涂有细菌的平板用黑纸片遮住平板中央，放 置在距紫外线60-100cm处，直接接受紫外线照 射30min； 3.照射完毕，取出黑纸片，盖好琼脂平板，放 37℃温箱孵育24h，观察结果。
药敏试验
药敏试验的目的： 检出细菌对药物的敏感性，以确
(3)盖好标记，底部朝上放入37℃培养箱培养24h。
紫外线杀菌实验
原理
紫外线中波长为200-300nm者具有杀菌能力， 其中265-266nm的杀菌作用最强。其杀菌作用 主要是因为DNA吸收了紫外线引起胸腺嘧啶形成 二聚体，从而干扰了DNA的复制，轻则发生突变， 重则导致死亡。紫外线杀菌力强而稳定，但穿透 力弱，不能通过玻璃和纸张，因此，只适用于直 接照射的物体表面消毒或空气消毒。
固体培养基(2-3%) 半固体培养基 (0.2-0.5%) 液体培养基
培养基按பைடு நூலகம்途可分为
基础培养基 营养培养基 选择培养基 鉴别培养基 厌氧培养基
细菌在固体培养基上形成的菌落
金黄色葡萄球菌菌落 （S型菌落）
结核分枝杆菌菌落 （R型菌落）
肺炎链球菌 （M型菌落）
菌 苔
半固体培养基：观察细菌动力
液体培养基：可观察到细菌不同的生长现象
组一份） 3.皮肤上的微生物检查与皮肤消毒试验 4.紫外线杀菌试验（操作，每组一份） 5.细菌药敏试验（操作，每组一份）
实验用品
固体、半固体、液体培养基及培养物，菌 种，接种环，酒精灯，蜡笔，37℃培养箱， 75﹪酒精棉球，紫外线灯，黑纸片，药敏 纸片，镊子等。
培养基的种类及细菌的生长现象
培养基按物理性状分为
抑菌圈
K-B(纸片扩散）法
方法
无菌接种环取菌
固体培养基上划线接种
放置含药纸片 37℃温箱孵育24h
>24mm >15mm
K-B法
结果
用毫米尺量取 抑菌圈直径, 根 据参照表判断 结果
抑菌圈直径
>24mm >15mm
K-B法
实验注意事项：
1 观察液体培养基中细菌的生长现象时不要摇动 试管
2 培养基放入温箱时要底部朝上 3 皮肤上微生物检查时食指要轻按，不要压烂培
细菌的分布
1.原理：细菌无处不在，在空气、自来水、土壤、 手指、桌面、货币、手机、毛巾等都有细菌的存 在；有普遍或特殊、相同或不同的生长条件
2.方法：(1)空气（把无菌固体培养基打开在空气中 暴露15min，盖好标记，底部朝上放入37℃培养 箱培养24h） (2)咽喉（把无菌固体培养基打开，对准，用力 咯三下，盖好标记，底部朝上放入37℃培养箱培 养24h）