AD小鼠模型介绍
AD小鼠模型介绍
AD小鼠模型介绍AD小鼠模型，即阿尔茨海默病小鼠模型，是一种用于研究阿尔茨海默病（Alzheimer's Disease, AD）的动物模型。
阿尔茨海默病是一种常见的神经退行性疾病，主要表现为认知功能障碍和记忆力丧失。
目前还没有有效的治疗方法，因此研究AD的机制和治疗方法变得至关重要。
AD小鼠模型是研究该疾病的重要工具之一AD小鼠模型通常通过基因工程技术构建，根据不同的基因突变或操纵来模拟AD发病机制和临床表现。
这些小鼠通常表现出与人类AD患者相似的一些病理特征，如神经元损伤、β淀粉样蛋白沉积、tau蛋白磷酸化等。
通过对这些AD小鼠模型的研究，科学家可以更好地了解AD的发病机制，寻找新的治疗方法和药物靶点。
目前，AD小鼠模型已经被广泛应用于AD病理生理学研究、新药筛选和临床药物评估等领域。
下面将介绍一些常见的AD小鼠模型及其特点：1. APP/PS1双转基因小鼠：这是最常见的AD小鼠模型之一，它通过表达人类APP（β淀粉样前体蛋白）和PS1（presenilin-1）基因，模拟AD的β淀粉样蛋白沉积和神经元损伤等特征。
这种模型通常表现出记忆力损失、神经退化等AD病理生理学特征。
2. 3xTg-AD小鼠：这是一种同时表达人类APP、PS1和tau蛋白P301L基因的三转基因小鼠。
该模型不仅模拟了β淀粉样蛋白和tau蛋白在AD发病中的作用，还表现出早期记忆障碍和晚期神经元损伤等表型。
3.Tg2576小鼠：这是一种表达人类APP基因的转基因小鼠模型。
该模型主要用于研究β淀粉样蛋白在AD发病中的作用，通常表现出大量的β淀粉样蛋白沉积和神经元损伤等特征。
4. 5xFAD小鼠：这是一种表达人类APP、PS1和tau蛋白基因的五转基因小鼠模型。
该模型不仅模拟了β淀粉样蛋白和tau蛋白在AD发病中的作用，还表现出更加严重的神经元损伤和认知功能障碍等表型。
除了以上几种常见的AD小鼠模型外，还有许多其他基因操纵小鼠模型被用于AD的研究。
APPPS1转基因小鼠（AD模型，老年痴呆模型）介绍
APPPS1转基因小鼠（AD模型，老年痴呆模型）介绍饲养特性：饲养一般，母性一般，代乳一般；该品系小鼠好斗，切勿将非同窝小鼠同笼饲养；该品系小鼠易发癫痫，易死亡。
品系描述：1. 老年痴呆症研究：双转基因的小鼠可表达突变的人类早老素1(PS1-dE9)和人鼠淀粉样前蛋白(APPswe)融合体，这两个基因的表达都由小鼠朊病毒蛋白启动子启动。
人类早老素基因的PS1-dE9突变是该基因的第九个外显子缺失产生的，此突变会导致早发性老年痴呆症。
同时发现人类早老素蛋白高水平地替代了可检测到的小鼠内源性蛋白，并且在脑匀浆中还检测到了人源淀粉样前蛋白。
据研究者报道，6-7月龄的小鼠脑内会形成beta淀粉状蛋白沉淀。
2. 癫痫研究：B6(N9代)背景的单阳性小鼠发生癫痫的概率比较高；实验中，3-3.5月龄的小鼠中有25%至少出现一次癫痫。
4.5月龄时，发生率提高至55%。
B6(N9代)背景的小鼠会出现10-15%的死亡率。
N13代B6背景的单阳性小鼠在17-18周时出现癫痫，并且在实验中会突发癫痫，死亡率高达38%(6/16)。
此外，由于背景的影响，小鼠尾巴可能出现弯曲。
应用领域：此品系可以用于研究阿尔兹海默症、淀粉形成之类的神经障碍类疾病和衰老等。
饲料：大小鼠繁殖料参考文献：1. Jankowsky JL., et al., 2004. Mutant presenilins specifically elevate the levels of the 42 residue beta-amyloid peptide in vivo: evidence for augmentation of a 42-specific gamma secretase. Hum Mol Genet 13(2):159-70.2. Jankowsky JL., et al., 2001. Co-expression of multiple transgenes in mouse CNS: a comparison of strategies. Biomol Eng 17(6):157-65.3. Reiserer RS., et al., 2007. Impaired spatial learning in the APP + PSEN1DeltaE9 bigenic mouse model of Alzheimer's disease. Genes Brain Behav 6(1):54-65.表型分析：(参考JAX)1. 神经系统表型b淀粉样蛋白沉积：1）9个月的时候，在海马区和皮层中出现丰富的斑块；2）在6个月的时候会偶尔出现沉积物；3）b淀粉样蛋白肽40:42比是0.50:1；4）在6个月时在海马区发现沉积物长期的增强作用减弱在转基因中瞬态长期势差现象（增强作用）是减弱的，并且跟年龄相关2. 行为、神经病学表型空间相关性记忆异常：1）在之前的实验中，4 - 5%的转基因小鼠表现出偏爱手臂摇臂水迷宫；2）13个月大的小鼠比对照组在水迷宫中会出现更多的错误，7个月的时候差不多协调能力受损：14个月大的小鼠在旋转棒上的平衡感降低3. 生长、大小表型体重降低：14个月的时候，转基因动物的体重比对照组降低饲养繁育注意点：1. APP/PS1小鼠好斗，客户在接到小鼠的第一时间按小鼠脚号将同窝小鼠一起饲养，非同窝小鼠分开饲养，同时饲养密度4只/笼；2. 饲养过程中需要多观察，如果遇到同笼小鼠有打架现象，将打架的小鼠分开饲养；如果打架严重出现咬伤，可以涂抹碘伏或抗生素药膏进行治疗；3. 可以给笼盒内放置消毒玩具，减少小鼠打架机率；4. C57BL/6背景下的APP小鼠，死亡率在10 - 15 %；5 %癫痫发作的小鼠可能会致死。
AD转基因小鼠的鉴定
转基因小鼠的鉴定、剪鼠尾1.剪鼠尾的时间当新生的小鼠年龄达到两到三周（耳朵已经长开）时剪鼠尾较好，此时鼠尾剪起来比较容易且小鼠的生命力比较强。
2.分辨小鼠的年龄a 当小鼠整个身体较红且腹部无奶时，此小鼠当天出生或前一晚出生；b 当小鼠腹部有奶（腹部有一小团白色物质），此小鼠出生2~3 天；c 当小鼠背部长出皮毛时，此小鼠出生3~4 天；d 当小鼠毛长全，但眼未开时，此小鼠出生10 天左右；e 当小鼠眼刚开，耳未开时，此小鼠出生12 天左右；f 当小鼠耳刚开时，此小鼠出生14 天左右。
3.剪鼠尾后对小鼠的标记：打耳孔法、从鼠尾中提取DNA采用鼠尾基因组DNA提取试剂盒（康为世纪：CW2094）提取DNA操作如下：1.剪取小鼠长度为0.4-0.6cm的尾巴，放入灭菌后的离心管中，加入180卩L Buffer GTT震荡混匀。
2.加入20卩L proteinase K ，涡旋震荡，彻底混匀。
3.置于56C水浴，直到组织溶液完全清澈，一般需消化6-8h，赋予过程中涡旋震荡,使样品均匀分离。
、，I •、、+ :注意：1）如果赋予和涡旋震荡后仍然有胶状物质，必要时过夜消化再加入20卩l proteinase K 消化，不会影响后续操作。
2）如需去除RNA可在上述步骤完成后，加入4卩l浓度为IOOmg/卩l的RNase A 溶液，震荡混匀，室温放置5-10min 。
4.14000rpm 离心1min ，以消除未消化的类似于鼠毛等组织，将上清转移到一个新的灭过菌的离心管中。
5.加入200卩l Buffer GL涡旋震荡，充分混匀，加入200卩l无水乙醇，涡旋振荡，充分混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
1）加入Buffer GL 和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
2）如果多个样品一起操作，Buffer GL 和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入样品。
3）加入Buffer GL 和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续操作。
ad转基因动物模型的建立与应用
一、概述近年来，转基因技术在生物学领域中得到了广泛的应用，其中转基因动物模型的建立和应用更是备受关注。
通过精准修改动物基因，科学家们可以模拟人类疾病，研究疾病发生的机制，筛选药物和治疗手段等。
本文将重点讨论转基因动物模型的建立与应用。
二、转基因动物模型的建立1. 转基因技术的原理介绍转基因技术是指通过基因工程技术将外源基因导入宿主细胞，使宿主细胞具有外源基因的特性。
在转基因动物模型的建立中，科学家们通常选择将与人类疾病相关的基因导入小鼠、斑马鱼等模式动物中，使其表现出与人类相似的疾病特征。
2. 转基因动物模型的建立过程a. 选择目标基因：科学家们首先需要确定研究的疾病类型，并选择与之相关的目标基因。
b. 基因编辑：通过CRISPR/Cas9等基因编辑技术，科学家们可以精准地编辑小鼠等模式动物的基因，将目标基因导入其基因组中。
c. 繁殖与筛选：经过基因编辑的模式动物需要进行繁殖，同时通过PCR、Western blot等技术对其后代进行筛选，确认目标基因已经成功导入。
3. 转基因动物模型的特点转基因动物模型具有模拟人类疾病的特点，可以为相关疾病的研究提供可靠的实验评台。
转基因动物模型还可以用于药物疗效的评估、基因治疗等领域。
三、转基因动物模型的应用1. 疾病研究转基因动物模型在疾病研究方面发挥着重要作用。
研究人员可以通过基因编辑技术将与帕金森病相关的α-突触核蛋白基因导入小鼠中，使其表现出类似于帕金森病的运动障碍等症状，从而研究帕金森病的发病机制。
2. 药物疗效评估转基因动物模型可以用于评估新药的疗效和安全性。
研究人员可以使用转基因小鼠模型，观察其对特定药物的反应情况，从而提高新药的研发效率和成功率。
3. 基因治疗转基因动物模型还可以用于基因治疗研究。
科学家们可以通过基因编辑技术将修复型基因导入转基因小鼠中，观察其治疗效果，为人类的基因治疗研究提供重要参考。
四、转基因动物模型的发展前景转基因动物模型的建立和应用为医学研究和临床治疗带来了新的可能性，然而目前还存在一些挑战和问题，如基因编辑技术的精准性、模型的可重复性等。
老年痴呆症(AD)小鼠模型的建立及中药金银花治疗效果的实验研究
能力降低；中药复方制剂通过排铝、提高抗氧化能力治疗后对老年痴呆症有明显疗效。
关键词：铝；老年痴呆症；乙酰胆碱酯酶；抗氧化能力
一、 引言
老年痴呆症（ ＡＤ） ，又称阿尔茨海默病，是一组病因未明
ｍｉｎｕｍ Ａｌ ３＋ ｉｎ ｍｉｃｅ （ ｘ±ｓ）
组别
谷丙转氨酶（ Ｕ ／ Ｌ）
脑铝 Ａｌ ３＋（ ｎｇ ／ ｍＬ）
正常组
４０．５８±２１．８２
１０９．００±２７．３３ ★★
５８．０６±２２．１１
模型组
治１组
１３．７０±２．３１
４４７．００±３７６．４３
６０．３３±１６．５０
治２组
１８５．７１±３１．５５
小鼠取脑，称脑重量，制成脑匀浆，离心取上清，分别测定脑中乙酰胆碱酯酶（ ＡｃｈＥ） 、超氧阴离子自由基（ ） 清除率、谷胱甘肽
等含量。 结果：正常组、模型组、治疗 １ 组、治疗 ２ 组依次为，脑乙酰胆碱酯酶（ ＡｃｈＥ） 活力：０．６０±０．０９、０．５５±０．１０、０．６７±０．１２、０．７８
±０．１４（ Ｕ ／ ｍｇ．ｐｒｏｔ ） ，Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１ 差异有统计学意义；模型组明显降低；超氧阴离子自由基（ ） 清除率％ ：２１．４５±６．０１、７．９６±
综 述
按试剂盒说明书；清除率测定利用比色法。 铝含量，用电极
法测定；丙二醛测定，硫代巴比妥酸（ ＴＢＡ） 反应比色测定其
含量，因此又称（ ＴＢＡ） 法。 具体操作按试剂盒说明书。
（ 三） 统计学处理
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阿尔兹海默病(AD)小鼠脑内P-糖蛋白(P-gp)的表达与功能分析
阿尔兹海默病(AD)小鼠脑内P-糖蛋白(P-gp)的表达与功能分析杜丽莎;杨青【摘要】目的研究P糖蛋白(P glycoprotein,P-gp)在APP/PS1双转基因阿尔兹海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠脑中的表达与功能情况.方法采用RT-PCR、real-time PCR和Western blot方法分析不同月龄的AD小鼠和野生型(wild type,WT)小鼠脑中P gp表达的差异;采用尾静脉注射罗丹明123 (Rhodamine 123,Rh123),HPLC检测脑及血清中Rh123的含量,计算脑血分配系数,分析不同月龄的AD小鼠和WT小鼠脑中P gp功能的差异.结果 3月龄时,AD 小鼠脑内P-gp的表达与功能均明显低于WT小鼠;6月龄时,AD小鼠与WT小鼠无明显差异;9月龄时,AD小鼠脑内P-gp的表达与功能均明显高于WT小鼠;12月龄时,AD小鼠脑内P-gp的表达高于WT小鼠,功能却低于WT小鼠.结论 AD小鼠脑内P-gp的表达与功能与WT小鼠明显不同,并随月龄而变化.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2014(041)004【总页数】6页(P441-446)【关键词】阿尔兹海默症(AD);P-糖蛋白(P-gp);APP/PS1双转基因小鼠;β淀粉样蛋白(Aβ)【作者】杜丽莎;杨青【作者单位】复旦大学生命科学学院生物化学系上海200433;复旦大学生命科学学院生物化学系上海200433【正文语种】中文【中图分类】R742.8+9;Q513阿尔兹海默病(Alzheimer′s disease，AD)是一种进行性发展的致死性神经退行性疾病，其发病机理复杂，目前尚无定论。
β淀粉样蛋白(β-amyloid，Aβ)的产生与清除失衡导致Aβ大量沉积是AD主要病理特征之一，有效减少Aβ在脑中的沉积是被广泛探索的AD治疗途径之一[1-3]。
P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)是MDE1基因的表达产物，相对分子质量(Mr)为170 000。
3xTg-AD小鼠海马突触可塑性与钙离子跨膜流动特征
中华行为医学与脑科学杂志 2020年 11 月第 29卷第 11 期Chin J Behav M e d Brain Sci，N o v e m b e r 2020，V〇1. 29，No. 11•971••基础研究•3xTg-AD小鼠海马突触可塑性与钙离子跨膜流动特征李奕颖1原丽2闫旭东1武美娜11山西医科大学生理学系，细胞生理学教育部重点实验室，太原 030001 ;2山西长治医学院生理教研室，长治 046000通信作者：武美娜，Email: wmna@ 163. com【摘要】目的观察3xTg-A D小鼠海马突触可塑性与钙离子跨膜流动特征。
方法根据基因型不同，将6月龄小鼠分为APP/P S l/t a u三转基因AD(3xTg-A D)模型小鼠和野生型（WT)对照组小鼠两组，每组13只。
每组随机选取6只小鼠进行在体电生理记录，给予测试刺激记录其海马CA1区场兴奋性突触后电位（field excitatory postsynaptic potential,fEPSP)、配对脉冲刺激记录双脉冲易化(paired-pulse facilitation，P P F)、高频刺激（high frequency stimulation,H FS)诱导长时程增强（long-termpotentiation，LTP)。
每组剩余的 7 只小鼠采用非损伤微测技术（non-invasive micro-test technology,陋T)，检测海马CA1区脑片神经元的跨膜钙内流和钙外排情况。
3xTg-A D小鼠在电生理和NM T实验中各损失1只,最终人组电生理实验5只,NM T实验6只。
采用SPSS 18.0对所有数据进行统计学分析，两组间比较使用两独立样本f检验。
结果（1)在体电生理实验中，给予测试刺激后30 min内，3xTg-A D小鼠和W T小鼠的fE P S P斜率均比较稳定，其平均fE P SP斜率分别为[(97. 8±2. 3)%]和[(92. 6± 12.6) %],两组之间差异无统计学意义（0.9105);给予配对脉冲刺激后,3xTg-A D小鼠和W T小鼠的P P F值分别为（1.58±0. 69)和（1.74±0. 17),两组间差异无统计学意义（t=0. 50,P>0.05);给予 HFS后 30 min和60 m in,3xTg-AD小鼠的 LTP值分别为[(104. 9±丨0. 9)%]和[(98. 0士10.8)%]，明显低于 WT小鼠的[(156. 5±21. 3)%] (j=4. 43，P<0. 01)和[(162. 5± 19.7)%] (« =5.92,P<0. 01)。
AD转基因模型研究进展
• ApoE基因位于19号染色体，具有多态性，有3种等 ApoE基因位于19号染色体，具有多态性， 基因位于19号染色体 位基因ε2、ε3、ε4，分别表达ApoE2、ApoE3、 位基因ε2、ε3、ε4，分别表达ApoE2、ApoE3、 ε2 ApoE2 ApoE4， ApoE3最常见 最常见， 78％。ApoE4是AD相关 ％。ApoE4 ApoE4，以ApoE3最常见，占78％。ApoE4是AD相关 联的危险因素，对含有APP突变的FAD有促进作用， APP突变的FAD有促进作用 联的危险因素，对含有APP突变的FAD有促进作用， 但对具有PS突变的FAD PS突变的FAD没有作用 但对具有PS突变的FAD没有作用[4]。
转早老蛋白（PS）基因小鼠
• PS基因位于14号染色体，中枢神经系统PS主要集 PS基因位于14号染色体，中枢神经系统PS主要集 基因位于14号染色体 PS 中在海马和皮层内。PS是一种跨膜蛋白，可在细 中在海马和皮层内。PS是一种跨膜蛋白， 是一种跨膜蛋白 胞中与APP形成复合物，参与APP APP形成复合物 APP转运 胞中与APP形成复合物，参与APP转运 及合成后加 已发现至少有35 PS基因突变与AD有关 35种 基因突变与AD有关， 工。已发现至少有35种PS基因突变与AD有关，野 生型PS有抗凋亡作用；突变型PS易裂解， PS有抗凋亡作用 PS易裂解 生型PS有抗凋亡作用；突变型PS易裂解，可诱导 神经元内Aβ增多。 Aβ增多 神经元内Aβ增多。
双转基因小鼠
• APPswe／PSl小鼠 APPswe／PSl小鼠 Wengennck等 制作了APPswe Wengennck等[5]制作了APPswe ／PS转基因小鼠，表达人突变的PS基因和APP基因， PS转基因小鼠，表达人突变的PS基因和APP基因， 转基因小鼠 PS基因和APP基因 12周后在转基因鼠皮质和海马发现Aβ沉积 周后在转基因鼠皮质和海马发现Aβ沉积， 12周后在转基因鼠皮质和海马发现Aβ沉积，此后 到第54 54周 Aβ沉积明显增加 此模型用于研究PS 沉积明显增加。 到第54周，Aβ沉积明显增加。此模型用于研究PS Aβ沉积中的作用 沉积中的作用。 在Aβ沉积中的作用。
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AD动物模型分类 5. APP/PS1转基因AD小鼠模型
该模型以C57BL/6J小鼠为背景,转入了含有瑞典型(Swedish) 突变位点的APP基因(K595N/M596L),同时还含有第9个外显子删 除的PS1突变基因
APP/PS1双转基因AD小鼠模型在3月龄时出现学习和记忆缺 陷,6月龄时脑内可见明显的老年斑沉积,12月龄时可见大量的老年 斑形成,具有和AD相似的病理表型
宗园媛, 王晓映, 王海林,等. APP/PS双转基因阿尔茨海默病小鼠模型的老年斑及行为学动态分析 [J]. 中国比较医学杂志, 2008, 18(9):8-12.
AD动物模型分类 6. 3xTg-AD小鼠模型
通过将APPSwe和tauP 301L同时显微注射进PS1M 146V 基因敲入小鼠的单细胞胚胎中,得到了携带APPSwe, tauP 301L, PS1M 146V基因的三重转基因小鼠—3x Tg-AD小鼠
AD动物模型分类 6. 3xTg-AD小鼠模型
3x Tg-AD小鼠是目前最接近家族型阿尔茨海默病的动物模型, 它具有AD的主要神经病理学特征—SP和NFT,脑中出现神经元死 亡、突触丢失等AD的重要病理变化,且该转基因动物模型由于认 知障碍出现、病理发生较早,使得研究过程更加经济快速
祝艳秋, 张兰. 基于3xTg-拟阿尔茨海默病小鼠模型的药理学研究进展[J]. 中国比较医学杂志, 2015, 25(2):61-66.
AD动物模型分类 3.腹腔注射东莨菪碱
东莨宕碱能选择性地阻断M受体，使突触后乙酰胆碱含 量变化，影响某些酶系变化，继而影响细胞内外钙离子含 量，导致神经细胞死亡，引起痴呆的病理生理变化。
董洪涛, 房繄恭. 多因素AD动物模型的建立及针刺对其学习记忆功能的影响[J]. 上海中医药杂 志, 2002, 36(5):43-46.
AD动物模型分类 1.侧脑室注射β-淀粉样蛋白
海马内或脑室内一次性注射 Ａβ１～４０或 Ａβ２５～３５，是一种急性损伤模型，能成功模拟 ＡＤ小鼠的 空间学习记忆障碍及部分病理特征，如突触丧失、乙酰胆碱能 神经元丢失等。
武强, 黎红华, 林琅,等. 神经干细胞移植对AD小鼠模型学习记忆及海马区超微结构的影响[J]. 华 南国防医学杂志, 2015, 29(5):339-342.
梨子制作
目录
3xTg-AD的诞生 特征 应用
对AD动物模型的需求
AD的研究有极大的医学、社会学意义 AD患者脑组织标本极难获得
AD动物模型分类 1.侧脑室注射β-淀粉样蛋白 2.饲喂AlCl3 3.腹腔注射东莨菪碱4. 2+3+Ｄ 半乳糖促衰老 5. APP/PS1转基因AD小鼠模型 6. 3xTg-AD小鼠模型
AD动物模型分类 2.饲喂AlCl3
铝选择性地蓄积在大脑受累及的神经元内导致NFP和SP 生成,并与AD所致的NFP具有完全相同的免疫染色
但这种模型没有明显的中枢胆碱能系统损害
董洪涛, 房繄恭. 多因素AD动物模型的建立及针刺对其学习记忆功能的影响[J]. 上海中医药杂 志, 2002, 36(5):43-46.
祝艳秋, 张兰. 基于3xTg-拟阿尔茨海默病小鼠模型的药理学研究进展[J]. 中国比较医学杂志, 2015, 25(2):61-66.
AD动物模型分类 6. 3xTg-AD小鼠模型
优点: *利于阐明Aβ、神经纤维缠结以及突触功能紊乱三者之间的关系； *适用于研究同时针对两种病理变化的AD疗法; *作为纯合子小鼠能得到基因型明确的后代,不需要大量的分析,且杂合 子同样发生神经病理改变(较纯合子晚),基因表现型的外显率为100%,雌 雄均同等表达; *相较于两种转基因小鼠杂交所得含有三种转入基因的动物模型,它具 有单一的基因背景,避免了生物学差异。
祝艳秋, 张兰. 基于3xTg-拟阿尔茨海默病小鼠模型的药理学研究进展[J]. 中国比较医学杂志, 2015, 25(2):61-66.
AD动物模型分类 6. 3xTg-AD小鼠模型
祝艳秋, 张兰. 基于3xTg-拟阿尔茨海默病小鼠模型的药理学研究进展[J]. 中国比较医学杂志, 2015, 25(2):61-66.