胆固醇含量检测
血清总胆固醇的测定
实验原理
• 第一步：血清胆固醇酯可被胆固醇酯酶水 解为游离胆固醇和游离脂肪酸 。
• 第二步：胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作 用下生成△4-胆甾烯酮和H2O2。
• 第三步：H2O2在4-氨基安替比林和酚存在 时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚 胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅 与标本中TC含量成正比。
• 鱼类。乌鱼又称黑鱼性寒味甘，能补脾利水同时 它又是一种高蛋白低脂肪食品。青鱼性平味甘， 能补气健脾化湿。鳆鱼又称鲍鱼，肉性平味甘咸， 蛋白质含量极高，而脂肪含量很低的清补营养品。 黄鳝甘温，古代医家认为它有添精益髓，又有通 血脉、壮筋骨的作用同时它又是一种低脂食品。 另外，如黄瓜、海带、羊栖菜、海藻、槐花等食 物，均有降低血中胆固醇的效果。
试剂
• 基础液：100ml 0.1mol/L 磷酸缓冲液 （pH=6.7）(含胆酸钠129mg),4-氨基安替 比林16mg,苯酚132mg,TritionX-100 0.2ml
• 酶试剂应用液：临用前取商品三酶（胆固 醇酯酶，胆固醇氧化酶，过氧化物酶）合 剂1ml,加基础液30ml,混匀既得
• 胆固醇标准液（5.17mmol/L）:精准称取胆 固醇200mg,用纯无水乙醇溶解，用乙醇定 容至100ml，分装4ºC保存，临用时取出
注意事项
• 1、最后加酶试剂，各管反应时间应一致； • 2、比色应在30min内完成； • 3、试管在操作前尽量保持干燥； • 4、试剂中酶的质量影响测定结果 ； • 5、若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成
分中去掉胆固醇酯酶即可。
• 此法中血红蛋白高于2g/L时引起正干扰；胆 红素高于0.1g/L时有明显负干扰；血中维生 素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使 结果降低。高TG血症对本法无明显影响。 检测TC的血清(浆)标本密闭保存时，在4℃ 可稳定1周，－20℃可稳定半年以上。
临床医学检验总胆固醇(TC)
临床医学检验总胆固醇(TC)胆固醇是脂质成分之一，机体中胆固醇80％～90％由肝和肾上腺自身合成，而多种因素可影响体内TC的水平，包括：①年龄与性别，TC水平往往随年龄上升，但到70岁或80岁以后有所下降，中青年期女性低于男性，50岁以后女性高于男性；②长期的高胆固醇，高密度饱和脂肪和高热量包含可使TC增高；③遗传因素；④其他，如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。
胆固醇的增高与多种疾病有关，所以胆固醇的检验是临床检验的主要项目之一。
(一)酶法1.原理血清中的胆固醇酯(CE)被胆固醇酯水解酶(CEH)水解成游离胆固醇(Cho1)，后者被胆固醇氧化酶(CHOD)氧化成△4-胆甾烯酮并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化4-氨基安替比林与酚(三者合称PAP)，生成红色醌亚胺色素(Trind er反应)。
醌亚胺的最大吸收在500 nm左右，吸光度与标本中TC含量成正比。
反应式如下：2.计算TC(mmol／L)=A测定／A标准×定标血清TC浓度(mmol／L)。
速率法测定根据仪器性能及所用试剂的反应速度设计操作程序，一般要求试剂中酶用量较高。
3.技术指标(1)精密度：终点法批内CV<1.5％，批间CV≤2.5％。
(2)准确性：以参考方法(ALBK法)定值的血清为标准液时，本法测定结果与ALBK法基本一致。
以Chol水溶液为标准时，结果往往比AL-BK法低，故不宜采用Chol水溶液。
(3)灵敏度：显色剂用酚时，TC 5.2 mmol／L(200 mg／d1)时的吸光度A500nm0.30-0.35，故A500nm=0.005时的TC浓度约0.08 mmol／L(3 mg／d1)。
(4)测定范围：血清与酶试剂用量之比为1：100时，测定上界为13 mmol／L(500 mg／d1)。
(5)特异性：血清中多种非胆固醇甾醇会不同程度地与本试剂显色。
正常人血清中非胆固醇甾醇约占TC的l％，故在常规测定时这种影响可以不计。
胆固醇测定分析
3学时
临床意义
【参考值】：3.10mmol/L～5.70mmol/L
血清胆固醇浓度增高见于动脉粥样硬化，肾 病综合症，胆总管阻塞，黏液性水肿和糖尿病。 其他如肥大性骨关节炎、老年性白内障及牛皮 癣等血清胆固醇有增高。
血清胆固醇浓度降低常见于恶性贫血、溶血 性贫血及甲状腺功能亢进时，血清胆固醇降低， 其他如感染和营养不良等情况。
3、登录
4、清洗
▪ 10次左右。
5、参数设置
6、生化项目检测 （1）编号
6、生化项目检测 （2）测定
7、样本结果登记
8、样本查询
9、系统注销
10、工作结束 清洗仪器，退出系 统、关闭仪器，关闭计算机，切 断电源，处理试剂。
少，是否在人体的正常范围内（空腹胆固醇 浓度为3.10mmol/L～5.70mmol/L ）。
URIT-800半自动生化分析仪使用 介绍
▪ 1、开机 打开计算机显示器、主机、 分析仪主机；运行系统管理程序并进 入操作主界面。
▪ 2、工作前准备 检查废液瓶；清洗 管路；设置吸收池温度；待机30min； 清洗管路；调整A/D初始值”对仪器 进行自动调整；确认仪器是否需要校 准。
1.将吸嘴套在移液器头上轻轻转动，以保证密封。
2.使用前应先将移液器吸液和排液几次，润洗吸嘴和保持 腔内外气压一致。
3.选择量程。
4.垂直地握住移液器，将按钮按到第一停止点，然后把吸 嘴浸入到液面下2～3mm，再缓慢放松按钮，使之复位，等 待1～2秒后，从液体中取出，并避免碰撞任何物体。
5.将吸液嘴移至加样容器壁上，缓慢地把按钮按到第一停 止点，等待1～2秒，再把按钮全部按下去，排尽液体后，吸液
嘴应沿容器壁上滑动取出，再放松按钮，使之复位，即完成。
食品安全检测综合实验
实验一：食品中胆固醇的测定实验一：食品中胆固醇的测定一、实验目的1． 通过本实验的学习，使学生了解测定食品中胆固醇的意义。
通过本实验的学习，使学生了解测定食品中胆固醇的意义。
2． 通过本实验的学习，使学生掌握紫外－可见分光光度检测方法。
二、实验内容1． 样品制备。
样品制备。
2． 分光光度法检测。
三、实验要求采用集中授课形式组织教学。
采用集中授课形式组织教学。
四、实验准备 1． 样品制备及操作。
样品制备及操作。
2． 紫外－可见分光光度仪的使用方法。
紫外－可见分光光度仪的使用方法。
五、实验原理、方法和手段1． 实验原理实验原理当固醇类化合物与酸作用时，当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合发应，可脱水并发生聚合发应，可脱水并发生聚合发应，产生有颜色的物质。
产生有颜色的物质。
产生有颜色的物质。
据据此可先对食品样品进行提取和皂化，而后用硫酸铁铵试剂作为显色剂，测定食品中胆固醇的含量。
胆固醇的含量。
2． 实验方法和手段实验方法和手段食品样品的制备，分光光度计的使用。
食品样品的制备，分光光度计的使用。
六、实验条件1． 主要仪器主要仪器 A ． 电子天平（1/10000）B ． 电热恒温水浴电热恒温水浴C ． 电动振荡器电动振荡器D ． 具塞比色管：10 mL 、25 mL E ． 吸量管：2.0 mL2． 试剂试剂A. 石油醚石油醚B. 无水乙醇无水乙醇C. 浓硫酸浓硫酸D. 冰乙酸：优级纯冰乙酸：优级纯E. 磷酸磷酸F . 胆固醇标准物质胆固醇标准物质G . 胆固醇标准液。
胆固醇标准储备液（1 mg/mL ）：准确称取胆固醇100 mg ，溶于冰乙酸中，并定容至100 100 mLmL 。
此溶液至少在2个月内保持稳定。
胆固醇标准使用液（100 m g/mL ）：吸取胆固醇标准储备液10 mL ，用冰乙酸定容至100 mL 。
此液用时临时配制。
液用时临时配制。
H. 铁矾显色剂。
铁矾储备液：溶解4.463 g 硫酸铁铵[FeNH 4(SO 4)2•H 2O]于100 mL 85％磷酸中，贮于干燥器内，此液在室温下稳定。
胆固醇检测
胆固醇检测
胆固醇（Cholesterol），又称为胆甾醇，普遍存在于动物体内，而植物中一般不含或只含微量。
胆固醇与植物甾醇在结构上十分相似，因此传统的比色法和酶催化法无法满足检测需求。
迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)配备蒸发光散射检测器(ELSD)或二极管阵列检测器(DAD)，可高效、精准地检测样品中胆固醇含量变化。
此外，我们还提供其他多种甾醇检测服务，以满足您的不同需求。
送样要求和检测周期
HPLC测定胆固醇样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周
项目报告
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关参数（中英文）
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 胆固醇含量信息
相关服务
甾醇检测
麦角甾醇检测
豆甾醇检测
β-谷甾醇检测。
血浆胆固醇含量测定实验报告
一、实验目的1. 掌握血浆胆固醇测定的原理和方法。
2. 了解胆固醇在人体内的生理功能及其异常与疾病的关系。
3. 培养实验操作技能，提高对实验数据的分析和处理能力。
二、实验原理胆固醇是人体内一种重要的脂质物质，主要存在于细胞膜中，参与细胞膜的结构和功能。
血液中的胆固醇分为总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），其中LDL-C又被称为“坏胆固醇”，过高水平的LDL-C与心血管疾病的发生密切相关。
高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）则被称为“好胆固醇”，具有清除血管内胆固醇的作用。
本次实验采用酶法测定血浆总胆固醇含量。
三、实验材料1. 试剂：胆固醇氧化酶试剂盒、胆固醇酯水解酶试剂盒、过氧化氢溶液、显色剂等。
2. 仪器：自动生化分析仪、离心机、恒温水浴箱、移液器等。
3. 样品：健康志愿者血浆。
四、实验步骤1. 样本处理：将采集的血浆样品在室温下放置30分钟，使红细胞充分沉降，取上层血浆，离心分离血浆。
2. 试剂配制：按照试剂盒说明书配制胆固醇氧化酶、胆固醇酯水解酶等试剂。
3. 测定：将分离好的血浆样品按照试剂盒说明书进行测定，包括加样、孵育、显色、测定吸光度等步骤。
4. 数据处理：将测定的吸光度值输入自动生化分析仪，进行数据处理，得到血浆总胆固醇含量。
五、实验结果与分析1. 实验结果：本次实验共测定了10名健康志愿者的血浆总胆固醇含量，结果显示，男性志愿者血浆总胆固醇含量均值为（5.12±0.85）mmol/L，女性志愿者血浆总胆固醇含量均值为（4.98±0.76）mmol/L。
2. 结果分析：本次实验结果显示，男女志愿者的血浆总胆固醇含量差异不显著（P>0.05）。
这与相关文献报道一致，说明在正常人群中，男女志愿者的血浆总胆固醇含量没有显著差异。
六、实验讨论1. 实验原理：本次实验采用酶法测定血浆总胆固醇含量，该方法具有较高的准确性和重复性，是临床常用的检测方法。
2. 实验操作：实验操作过程中，严格按照试剂盒说明书进行操作，确保实验结果的准确性。
血清总胆固醇测定法
血清总胆固醇测定法1.实验原理胆固醇酯被胆固醇酯酶水解酶(CEH)水解成游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化，使4-氨基安替比林与酚（三者合称PAP）反应，生成红色醌亚胺色素（Trinder反应）。
醌亚胺的最大吸光度在500nm左右，吸光度与标本中TC含量成正比。
反应式如下：CEH胆固醇酯+ H2O 胆固醇＋脂肪酸COD胆固醇＋O2Δ4-胆甾烯酮＋H2O2POD2H2O2+ 4-AAP +酚苯醌亚胺(显色) + 4H2O 2. 标本：2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清，肝素或EDTA抗凝血浆。
3. 标本存放：血清稳定性：20～25℃保存可稳定1周；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存可稳定3个月。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。
6. 实验材料6.1 试剂欧泰克总胆固醇试剂盒（货号：112 1307170 1 试剂8×70ml）6.1.1 试剂组成Tris缓冲液pH7.3 50mmol/L酚20mmol/L4-氨基安替比林 1.0mmol/L 胆固醇酯酶(CHE) ≥400U/L 胆固醇氧化酶(CHO) ≥200U/L 过氧化物酶(POD) ≥4000U/L 6.1.2 试剂准备试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。
不可入口！避免接触皮肤及粘膜。
应采取必要的预防措施使用试剂6.2 校准品：使用罗氏复合校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
血清总胆固醇的测定实验报告
血清总胆固醇的测定实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过测定血清中的总胆固醇水平，了解被检测者的心血管健康状况，为预防和治疗心血管疾病提供参考依据。
二、实验原理。
血清总胆固醇是指血液中所有脂蛋白和游离胆固醇的总和，通常以毫摩尔/升（mmol/L）为单位进行测定。
在实验室中，我们采用酶法测定血清总胆固醇，即通过酶的催化作用将胆固醇氧化成酮醇，然后通过比色法测定产生的色素来确定总胆固醇的浓度。
三、实验步骤。
1. 采集被检测者的静脉血样本，放置于离心管中，离心10分钟后取上清液。
2. 将上清液放入试剂盒中，按照说明书的操作步骤进行样本处理和试剂添加。
3. 使用分光光度计测定样本吸光度，根据标准曲线计算出血清总胆固醇的浓度。
四、实验结果。
根据实验测定，被检测者的血清总胆固醇水平为X mmol/L。
五、实验分析。
根据血清总胆固醇的测定结果，结合被检测者的年龄、性别、生活方式等因素，可以初步判断其心血管健康状况。
若总胆固醇水平偏高，可能存在心血管疾病的风险，需要进一步进行相关检查和干预措施。
若总胆固醇水平正常，被检测者的心血管健康状况良好。
六、实验注意事项。
1. 在采集血样和进行实验操作时，要严格遵守无菌操作规范，确保实验结果的准确性和可靠性。
2. 实验过程中要注意化学试剂的使用安全，避免接触皮肤和吸入气体，必要时戴上防护手套和口罩。
3. 实验设备的使用和维护要符合相关规定，保证设备的正常运转和数据的准确性。
七、实验结论。
通过本次实验测定，我们成功得出了被检测者的血清总胆固醇水平，并对其心血管健康状况进行了初步分析。
实验结果对于预防和治疗心血管疾病具有一定的参考价值。
八、实验展望。
在今后的实验中，我们将进一步完善实验方法，提高测定精度和准确性，为更多人群的心血管健康提供更多的数据支持和科学依据。
以上就是本次血清总胆固醇的测定实验报告，希望对大家有所帮助。
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法测定鸡蛋中胆固醇含量
一、原理
当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。
因此可先对食品样品进行皂化和提取，用硫磷铁试剂作为显色剂，测定食品中胆固醇的含量。
在样品的冰乙酸提取液中加磷硫铁试剂，胆固醇与试剂反应产生紫红色化合物，颜色的深浅与胆固醇的量成正比，可用分光光度计在波长560nm•处测定。
二、实验仪器及试材
1.仪器：分光光度计、水浴锅
2.试剂：本实验用水均需用蒸馏水或去离子水。
试剂纯度均为分析纯。
（1）石油醚（沸点30-60℃）、无水乙醇、冰乙酸。
（2）50%氢氧化钾溶液：称取50g氢氧化钾，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。
（3）25%氯化钠溶液：称取25g氯化钠，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。
（4）10% 三氯化铁溶液：将10g FeCl3·6 H2O溶于磷酸中，定容至100 mL，储于棕色瓶中，冷藏保存。
（5）磷硫铁试剂：取10% 三氯化铁溶液1.5mL于100mL棕色容量瓶内，加浓硫酸定容至刻度。
（6）胆固醇标准储液：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，定容至100mL。
（7）胆固醇标准溶液：临用前将储液用冰乙酸稀释10倍。
三、实验方法与步骤
1.样品胆固醇提取
准确称取充分混匀的鸡蛋约0.20g于25mL具塞比色管中，加入0.5mL50%氢氧化钾溶液和4.5mL无水乙醇，振荡混匀，在80℃恒温水浴中皂化20min。
皂化时每隔5min振摇一次使皂化完全。
皂化完毕，取出比色管，冷却。
加入
3mL 25%氯化钠溶液后再加入10mL石油醚，盖紧玻璃塞，振摇1min，静置分层。
取上层石油醚液1mL，置于25mL具塞比色管内，在65℃水浴中让石油醚自然挥发干，加入4mL冰乙酸，轻摇使胆固醇溶解，待测。
2.样品和标准胆固醇含量测定
另取两支25mL具塞比色管，一支（空白管）加入4mL冰乙酸，一支（标准管）加入1mL胆固醇标准溶液（0.1mg/mL）和3mL冰乙酸。
包括样品管，各
管分别加入2mL磷硫铁试剂，混匀，25℃放置20min后在560nm波长下比色。
以空白管调零，测得吸光度。
四、计算
鸡蛋胆固醇（mg/100g）= A
样/A
标╳
0.025mg/mL╳4mL╳10mL/1mL╳100/M
样
g
= A样/A标╳100/M样（mg/100g）五、实验注意事项
浓硫酸、强碱溶液具有腐蚀性，小心操作。
六、思考题：
1.举例说明胆固醇测定的其它方法。
2.实验中样品皂化的作用是什么？。