家禽禽流感病毒AGID抗体定性检测及H5、H9亚型HI抗体定量检测能力验证结果分析
论文h5型高致病性禽流感免疫抗体检测及分析(论文)

本科生毕业设计(论文)题目h5型高致病性禽流感免疫抗体检测及分析学院动物医学院专业动物医学班级动医(061)班姓名如则·塔伊尔学号063631127指导教师加尔肯职称讲师2011年4月28日新疆农业大学教务处制目录摘要 (1)关键词 (1)前言 (1)1 材料和法 (2)1.1毒株 (2)1.2 疫苗 (2)1.3 试验动物 (2)1.4疫苗在1日龄无母源抗体商品鸡的免疫效力 (2)1.5疫苗在1日龄含母源抗体商品鸡的免疫效力 (2)1.6 血清学检测 (2)1.7保护率计算 (2)1.8统计分析 (2)2试验结果 (3)2.1 rFPV-HA和灭活疫苗诱导的HI抗体应答 (3)2.2 rFPV-HA与灭活疫苗的免疫效力 (4)3讨论 (5)3. 1 rFPV-HA与灭活疫苗诱导HI抗体应答能力 (5)3.2 rFPV-HA与油乳剂灭活疫苗免疫效力比较 (5)3.3 rFPV-HA与油乳剂灭活疫苗应用前景分析 (5)谢辞 (7)参考文献 (8)H5型高致病性禽流感免疫抗体检测及分析如则·塔依尔摘要:利用表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)的重组鸡痘病毒(rFPV-HA和全病毒灭活疫苗免疫商品鸡,比较两种疫苗的保护效力。
结果发现,利103PFU和106PFU的rFPV-HA免疫无母源抗体商品鸡和含母源抗体商品鸡,HI抗体应答水平均低于灭活疫苗免疫组.利用H5亚型禽流感病毒经肌肉注射攻毒后,rFPV-HA免疫的无母源抗体商品鸡获得了完全保护(100%),高于灭活疫苗保护率(94.7%);但rFPV-HA免疫含母源抗体商品鸡诱导的保护率(11.4%~15.8%)低于灭活疫苗免疫组的保护水平(68.45)。
结果表明,rFPV-HA诱导HI抗体的能力低于灭活疫苗;但rFPV-HA免疫无母源抗体商品鸡的保护率完全达到灭活疫苗保护水平,显示出了良好的应用前景;灭活疫苗和rFPV-HA均受到母源抗体的干扰,不适于在母源抗体处于高峰期时使用。
肉鸡与蛋鸡H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平调查

肉鸡与蛋鸡H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平调查作者:李家凯郭康康刘丽娜来源:《湖北农业科学》2020年第11期摘要:为了解养殖场家禽中H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平,通过血清学调查,应用血凝抑制试验(HI)的方法,对四川内江、山东济南、河南鹤壁、江苏扬州4个定点实验观测站负责的养殖场的鸡血液样本进行禽流感病毒抗体分析,其中包含2个肉鸡场和3个蛋鸡场。
研究发现蛋鸡场通常免疫了H5、H7、H9(或H5与H9)亚型禽流感疫苗,而肉鸡场只免疫了H9亚型禽流感疫苗;蛋鸡场和肉鸡场都存在免疫禽流感疫苗后抗体水平低和无抗体产生的情况,从而导致免疫不合格或免疫失败。
以上结果表明,应加强家禽养殖场对不同亚型禽流感疫苗的免疫以及免疫后的禽流感病毒抗体水平监测,以防免疫失败,从而预防禽流感的发生和流行。
关键词:肉鸡与蛋鸡;H5、H7、H9亚型禽流感疫苗;抗体水平;免疫合格率Abstract: In order to understand the immune antibody level of H5, H7 and H9 subtypes avian influenza virus in poultry, the blood samples of four experimental observation stations in Neijiang city of Sichuan province, Jinan city of Shandong province, Hebi city of Henan province and Yangzhou city of Jiangsu province were analyzed by serological investigation and hemagglutination inhibition test(HI),including two broiler farms and three layer farms. The research found that layers were immunized with H5, H7, H9(or H5 and H9) subtypes avian influenza vaccines,while broilers were only immunized with H9 subtype avian influenza vaccine. The layer farms and broilers farms had low antibody production after the immunization of avian influenza vaccine,leading to unqualified or immune failure. It is suggested that the immunization different subtypes of avian influenza vaccine and the monitoring of avian influenza antibody levels after immunization should be strengthened to prevent the occurence and prevalence of avian influenza.Key words: broilers and laying hens; H5, H7, H9 subtypes of avian influenza vaccine; antibody level; qualified rate of immunity1994年,张泽纪等[1]首次从中国广东某鸡场发病鸡体内分离到H9N2亚型病毒。
五例H9亚型禽流感病毒的分离与鉴定

·190·试验研究农业开发与装备 2022年第12期五例H9亚型禽流感病毒的分离与鉴定丁小丽,李 娜,陶宏卫*(江苏农牧科技职业学院,江苏泰州 225300)摘要:对苏北地区某鸡场疑似H9亚型禽流感病毒的5份病料样品,通过鸡胚接种、血清学试验和RT-PCR检测等方法对样品进行分离、鉴定和分析,确定分离的 5 个毒株为H9亚型禽流感病毒,虽然受感染后,并未造成鸡群的大规模死亡,但是使鸡场产蛋率的严重下降,并引起生长缓慢,给养鸡场造成了巨大损失。
本实验对该病例进行了诊断分析、分离和鉴定,为禽流感的诊断和预防提供了一定参考。
关键词:禽流感;H9亚型;分离;鉴定0 引言禽流感(Avian Influenza,AI)是禽流行性感冒的简称,是指由A型流感病毒引起的一种家禽、野鸟和部分哺乳动物发病的人兽共患传染病[1]。
禽流感病毒分为高致病性和低致病性两大类,低致病病毒感染家禽后症状不明显,容易被忽视,因此得以长期、广泛的分布,周而复始的循环及变异使其不断适应当下养殖环境,进而演化成为具有耐药性及跨种属感染的新型毒株[2]。
因此,在低致病性禽流感流行季节,对病毒的分离、鉴定能够正确诊断该病,从而有效地防控该病的发生。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 样品与毒株笔者在苏北地区某公司合作农户鸡场采集疑似 H9 亚型禽流感发病鸡群病料5份,分别为HF-1、HF-2、JT-1、JT-2、JT-3,采样时间为2022年春。
1.1.2 主要试剂标准抗原:H9禽流感诊断抗原,由国药集团扬州威客生物工程有限公司提供。
标准抗体:H9亚型禽流感病毒特异性血清、禽流感( H5、H7 亚型)阳性血清、鸡新城疫阳性血清、减蛋综合征阳性血清,均有由国药集团扬州威客生物工程有限公司提供。
相关试剂:SuperScript ™ Ⅱ Reverse Transcriptase 反转录酶及其Buffer和E.Z.N.A.TM Gel Extraction Kit购自OMEGA BIO-TEK公司;DL2000 Marker购自Takara 公司。
禽流感H5、H7和H9亚型多重PCR方法的建立

禽流感H5、H7和H9亚型多重PCR方法的建立胡凌; 张鹏; 陈有才; 张军; 戴悦涵; 胡卫杰【期刊名称】《《中国兽医杂志》》【年(卷),期】2019(055)004【总页数】4页(P40-43)【关键词】多重PCR; 禽流感; H5; H7; H9【作者】胡凌; 张鹏; 陈有才; 张军; 戴悦涵; 胡卫杰【作者单位】四川省自贡市动物疫病预防控制中心四川自贡643000【正文语种】中文【中图分类】Q939.47禽流感(AI)病是由正粘病毒科A 型流感病毒引起的一种急性人兽共患的传染病,根据其HA 基因的抗原性差异可分为16 个HA 亚型,被世界动物卫生组织(OIE)规定为A 类传染病[1-2]。
此外,高致病性禽流感(HPAI)主要是由H5 或H7 两种亚型引起的,潜伏期极短,且常不见任何临床症状而突然死亡的传染病。
HPAI的发病率和病死率高达100%,并可感染人导致人的死亡[3,4]。
H9 亚型的禽流感病毒为低致病力的毒株,分布范围十分广泛,使鸡群产生免疫抑制,如果与金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等其他的病原体同时感染则对家禽的产蛋率、死亡淘汰率和料肉比等生产性能有严重影响。
且近十几年来,我国的H9 亚型禽流感在呈上升趋势,严重的危害了我国的养禽业发展,威胁着人类的健康,同时还影响着畜产品的国际贸易,给我国带来严重的经济损失[5]。
禽流感H5、H7、H9 是我国当前主要流行的禽流感病毒亚型,其致病性极强,威胁着养禽业的健康发展,所以已在全国范围内引起各界学者的关注。
而早期快速确诊是预防和控制禽流感发生的先决条件,尤其是针对H5、H7 和H9 亚型的检测。
通过往年研究来看,对AI 的诊断和对AIV 的定型常用的方法仍是病毒的分离和血清学试验。
但这些方法操作繁琐复杂,效率低下,很难及时对AI 的防治提供理论支持。
聚合酶链式反应(PCR)是敏感性高、特异性强,且已成为分子生物学领域最重要也是最基本的技术手段之一[6],而多重PCR 是一种特殊的PCR 形式,即可以在一个反应中于短时间内同时鉴别出多种病原体[7],该方法缩短了AIV 的检出时间,提高了检测效率,为AIV 的早期快速诊断提供了敏感、快速、实用的方法。
禽流感病毒H5、H9亚型多重RTPCR检测方法的建立及初步应用

吉林农业大学硕士学位论文禽流感病毒H<,5>、H<,9>亚型多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用姓名:***申请学位级别:硕士专业:预防兽医学指导教师:***20030601吉林农业大学硕士学位论文禽流感病毒H,、H9亚型多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用中文摘要本研究根据GENBANK中查出的禽流感病毒H5亚型,禽流感病毒H9亚型的HA片段基因组序列,利用DNASIS软件分别对AIV的H5、H9亚型HA基因区域进行同源·胜比较,设计筛选出两对联合PCR反应的特异性引物,其中一对是H9亚型通用引物,扩增出HA片段695bP,N一对引物为H5亚型的通用引物,扩增出的HA区域部分目的片段约为448bP。
建立各自的单项RT-PCR,并用电泳鉴定PCR扩增产物,结果证明为各自的特异性核酸片段。
在单项RT-PCR基础上.优化引物浓度,Mgcl2浓度,Tag酶、dNTP浓度,循环次数等反应条件后,建立了H5、H9亚型的多重RT.PCR,同时扩增出禽流感病毒H5、H9两种亚型不同大小的特异性片段.并进行了反应条件的优化。
建立的多重RT.PCR扩增其它相关病毒未见阳性结果。
两个亚型的单项RT—PCR可以检测鸡胚尿囊液培养物10。
3稀释物,多重PCR可以检测到10。
稀释物。
初步应用四4ff-I-鸡胚尿囊液培养物,六份临床病料的检测,并与电镜负染、琼扩及病毒分离的结果进行比较,此诊断方法与病毒分离的结果一致,比琼扩和电镜负染检出率高,可用5-·11,床和试验室诊断。
关键词:多重RT—pcP,禽流感病毒RIgA的提取禽流感病毒H5亚型禽流感病毒H,亚型AIV的HA基因吉林农业大学硕士学位论文禽流感病毒H5、H9亚型多重RT—PCR检测方法的建立及初步应用AbstractAmultiplexreversetranscriptase-polymerasechainreactionwasoptimizedtOSimultaneouslydetectH5I-19subtypeforAvianInfluenzavirus.Thehemaglutinin(HA)ofAIVplaysthekeyroleindetermingthepathogenicity,cellreceptorbindingpropertyandhostrangeofthevirus.ThehomologyofTheHAsequencesreportedandregisteredinGenbankofdifferentstrainsofH5.1-19subtypewasrespectivelyanalyzedandcomparedwitheachother.TheconservativedominofHAseqenceofH5、H9subtypewasselectedforPCRamplification.TwosetsofspecificCanbeamplified448bp,H9subtypeCanbeprimersweredesigned.H5subtypeamplified695bp.ThedesignedprimerswereusetOPCRreaction.Theresultshowedthatthewas啦ht.ThentheoptimalconditionsofPCRfordesignofthetwosetsofprimerseachvirusweredeterminedbyorthongonalassay,twosetsofprimerswerecombinedandusedforamplicationtrials.TherudimentaryapplicationofthemultipexRT—PCRhasthesameresultswithSeprateCultivationofthevirus,thepositiveresultsacqiredishigherthenAGandEMThemethoddescribedisverypractable,sensitive,specific,simple.ItcouldbeusedindiagnosisofH5、H9subtypeofAIVKeyword:AIVmultiplex—PCRH,subtype地subtypeHA独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
禽流感H9 亚型毒株HI 血清交叉及HA基因同源性研究

禽流感病毒(AIV )属于正粘病毒科流感病毒属A 型流感病毒。
禽流感又称真性鸡痘或欧洲鸡瘟,被国际兽医局(OIE )列为A 类传染病[1-3]。
H9亚型禽流感病毒为低致病性禽流感病禽流感H9亚型毒株HI 血清交叉及HA 基因同源性研究杨沛沛,晋春霞,肖亚朋,王洋洋,赵坤坤,刘守川(洛阳中科基因检测技术有限公司业务室河南洛阳471800)来,我国养禽业经常出现H9亚型流感病毒疫苗免疫失败现象,笔者为此对近年来临床流行的H9亚型毒株变异情况进行研究。
本试验主要是通过对近两年临床分离到的H9亚型毒株HI 血清交叉试验和HA 基因同源性进行分析研究,为国内生物制品企业和科研单位疫苗的研制提供依据,对科学防控H9亚型禽流感病毒提供参考。
结果显示:同一基因分支的同一毒株血清不同分离株HI 交叉性相差甚大,即血清型与基因型之间没有相关性。
亚型;HI 血清交叉;同源性毒,主要引起禽类产蛋量下降,肉鸡和蛋鸡的复合型呼吸道疾病乃至死亡,给养禽业造成了严重的经济损失。
此外,国内外有多起人感染H9亚型流感病毒的病例报道,许多血清学调查显示我国有一定比例的人群已经感染过H9亚型流感病毒,血清阳性率高达13.7%~37.2%[4-7]。
因此,对H9亚型禽流感病毒的研究不仅为科学防控提供依据,也具有重要的公共卫生意义。
1目的通过对近两年临床分离到的H9亚型禽流感病毒毒株进行HI 血清交叉试验和基因序列分析,为筛选对当前临床主要流行毒株具有广泛保护作用的疫苗候选毒株提供依据。
2材料与方法2.1材料2.1.1H9亚型禽流感临床分离毒株共筛选7株H9亚型禽流感临床分离毒株,具体信息见表1。
2.1.2SPF 鸡和SPF 鸡胚1日龄SPF 鸡和SPF 种蛋均购自山东斯帕法斯公司。
SPF 种蛋由洛阳中科基因检测诊断中心自行孵化至10日龄,用于病毒增殖。
SPF 鸡饲养于本公司租用的普莱柯生物工程股份有限公司实验动物中心的8台隔离器中进行试验。
禽流感疫苗对禽类免疫效果的检测及分析

·46·疾防防治中国畜牧兽医2005 年第32 卷第1 期禽流感疫苗对禽类免疫效果的检测与分析金兰梅,伍清林,刘萍(金陵科技学院动物科学系, 南京210038)摘要: 禽流感大流行时, 在非疫区对禽类用H 5 亚型和H 5、H 9 二价禽流感油乳苗进行免疫接种试验, 并对其结果进行比较和分析。
得出不同日龄的蛋鸡免疫接种20 d 后其H I 抗体效价不同, 不同的饲养方式、不同种类的家禽及不同种类疫苗的免疫效果均不同。
85 日龄蛋鸡产生的H I 抗体效价达到7 l o g2, 鸡、鸭、鹅混养H I 抗体效价低于平养和笼养, H 5 亚型禽流感疫苗免疫鸡和鸽其H I 抗体效价达到了5 l o g2 以上, 而对鹌鹑和鸭为1 l o g2 和3. 2lo g2; 单价禽流感疫苗和二价苗对鸡群免疫的效果不同, 二价苗的免疫效果不如单价苗。
关键词: 禽流感; 免疫; 抗体; 检测中图分类号: S852. 65+ 9. 5文献标识码: B 文章编号: 1671 7236 (2005) 01 0046 02禽流感(A I) 是由正粘病毒科中A型流感病毒引起禽类的一种急性传染病。
按病毒粒子表面(HA ) 和神经氨酸(N A) 的糖蛋白进行分类, 可分为很多血清型, 在不同的血清型和同一血清型的不同毒株间致病性都不一样。
自1878 年在意大利发现流行以来, 在许多国家都有各种亚型、不同致病力禽流感的爆发和流行, 严重危害养禽业和经济的发展。
禽流感的迅速蔓延, 使疫苗接种成为必然的选择。
为了了解禽流感疫苗免疫的效果, 我们对疫苗免疫后H I 抗体水平进行测定, 并对不同日龄的鸡、不同的饲养方式、不同种类的家禽及不同种类疫苗的免疫效果进行比较和分析, 以了解影响抗体产生的因素, 为以后更有效地做好禽流感的预防免疫工作提供科学依据。
1材料和方法1. 1动物来源南京市郊部分大型养鸡场, 分别为青龙山蛋鸡场, 栖霞东阳蛋鸡场, 东庐集镇、禄口等肉鸡场及边防农场的种禽场。
H5亚型高致病性禽流感免疫抗体检测结果研究

㊀" 年免疫抗体检测结果 鸡抗体合格 5 7 9份, 抗体合格率 8 0 . 4 %。鸭抗体合格 1 7 0
份, 抗体合格率 7 0 . 8 %。
㊀" 年免疫抗体检测结果 鸡抗体合格 4 2 1份, 抗体合格率 8 2 . 1 %。鸭抗体合格 9 4
收稿日期: 2 0 1 7- 1 1- 3 1
1 ] 过油乳剂全病毒灭活疫苗来控制疫情 [ 。灭活疫苗具备免疫
份, 抗体合格率 7 2 . 3 %。
㊀分析与讨论
㊀分析 ( 1 ) 鸡的免疫抗体水平比鸭的要高, 原因是鸡的饲养时间
长, 规模场都二免, 肉鸭饲养时间短, 农户在整个养殖过程中只 进行一次免疫, 结果表明二免合格率高于一免。 ( 2 ) 活禽市场的家禽免疫抗体也低于养殖户的, 原因是到 销售环节的家禽距离免疫时间过长, 免疫抗体随着时间推移, 抗体水平有所降低。 ( 3 ) 无论是鸡或者鸭的免疫抗体合格率在逐年增加, 最后 全部达到整体合格率 7 0 %以上, 通过每年对免疫抗体不合格或 者抗体率低的原因分析, 最后给出一个合理的免疫程序, 以达 到7 0 %以上的免疫抗体水平。
2 0 1 7年第 1 2期( 总致病性禽流感免疫抗体检测结果研究
陈莹娟
( 宁明县动物疫病预防控制中心,广西 宁明 5 3 2 5 0 0 )
摘㊀要: 当高致病性禽流感大面积发生时, 需要通过接种疫苗来建立起相应的隔离带, 进而有效的控制疫情。文章主要 0 1 3- 2 0 1 6年数据, 对H 5亚型高致病性禽流感免疫抗体检测的方法, 结果进行分析, 旨在通过研 针对广西宁明县, 选择 2 究为今后更好的开展工作奠定基础。 关键词:高致病性禽流感;H 5亚型免疫抗体;检测结果 中图分类号: S 8 5 2 . 4 ㊀㊀㊀㊀㊀文献标识码: B ㊀㊀㊀㊀㊀D O I : 1 0 . 1 9 5 6 7 / j . c n k i . 1 0 0 8- 0 4 1 4 . 2 0 1 7 . 1 2 . 0 0 7 ㊀㊀疫苗接种是大面积发生禽流感时的有效控制措施之一。 比如在巴基斯坦和墨西哥发生了高致病性禽流感之后均使用