量PCR技术在食源性致病微生物

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PCR技术在食品药品检测中的应用

PCR技术在食品药品检测中的应用PCR技术（聚合酶链反应技术）是一种基于DNA分子复制的技术。

它可以在短时间内扩增极微小的DNA片段，甚至只有几个分子。

由于这种技术的高灵敏度和高效性，它在食品药品检测中得到广泛应用。

PCR技术可用于检测食品中的病原微生物（例如细菌、病毒和寄生虫等）。

PCR方法可以很快、准确地检测到病原体，并且可以扩增微小的DNA片段以便于检测。

例如，PCR技术可用于检测肉类、海产品和饮用水中的沙门氏菌、大肠杆菌、弓形虫等病原微生物。

PCR技术可用于检测食品中的添加物。

使用PCR技术可以检测到添加到食品中的基因引导的检测系统，这些系统可以为食品中的添加物提供快速、准确和定量的检测。

例如，PCR技术可以用于检测转基因植物中的特定基因，以检测食品中是否含有转基因成分。

此外，PCR技术还可以用于检测合成色素、防腐剂、糖和脂肪等常见的食品添加物。

例如，PCR技术可以用于检测肉类中的瘦肉精等违禁药物残留。

此外，PCR技术还可以用于检测基因工程技术中使用的致癌物质，从而检测食品中是否存在致癌物质的残留。

PCR技术可以用于食品中的品种鉴定。

利用基因引导的高度特异性PCR技术，可以确定食品中的动物或植物物种。

PCR技术的高度特异性和灵敏性使得它可以检测特定物种的DNA序列。

例如，PCR技术可用于检测鱼类、花卉和果蔬中的不同种类。

这种技术提供了一种无损检测方法，有效地检测食品中非法或不合格的品种。

最后，PCR技术是一种灵活而多功能的技术，已经被广泛应用于食品、药品和生物技术领域。

通过检测食品中的病原体、添加物、药物残留和品种鉴定，PCR技术为保障食品安全提供了有效的手段。

在未来，PCR技术还将继续在食品药品检测中发挥重要作用。

实时荧光定量PCR在细菌性食源性疾病中的应用

Ｏｏｙｏｅｅ）是李斯特菌属的一个种，由于该菌具有耐热（０（）、耐ｎｃｔｇｎｓ６＂２低温（＂、耐化学试剂、易交叉污染等特性，很难消除［０。近年４Ｃ）１］来，单增李斯特菌引起的食源性疾病暴发频繁，引起了国际上的高度关注和广泛重视。闫冰等以单核细胞增多性李斯特菌的必要毒力基因ｈｙ为目ｌＡ的基因，设计引物和Ｔｑａ探针进行Ｒ－Ｃ检测。结果表明，所用引物和ａＭｎＴＰＲ探针能较好的扩增目的基因，而对其他食源性致病菌无交叉反应，此方法可应用于乳中单增李斯特菌的快速检测和污染状况调查［１。１］７）空肠弯曲菌。空肠弯曲菌（ａｐｌｂｃｅｊｊｎ）是一种重要的ｃｍｙｏａｔｒｅｕｉ人兽共患病病原体在发展中国家，该菌是引起婴幼儿感染性腹泻最常见的病原菌；在某些发达国家，该菌作为急性腹泻的致病菌甚至超过了沙门菌与志贺菌［２。沈小明等以其保守区域设计特异性引物与探针建立了基１］于Ｔｑａ探针的Ｒ－Ｃ技术，特异性好、敏感性高、能够稳定地对空肠弯ａＭｎＴＰＲ曲菌进行定性、定量分析检测，在检验、疾病控制等领域将有广泛的应用
前景［３。１］
从而实现对起始模板的定量及定性分析。Ｒ— Ｃ根据其化学原理可分为两ＴＰＲ类：一类为双链ＤＡ异的荧光染料，常用的是ＳＢＧｅｎＩ；第二类为荧Ｎ特ＹＲｒｅ

PCR技术在食品检测中的应用

T logy科技食品科技在社会经济快速发展的推动下，我国对食品质量的要求越来越高，因此食品安全部门加强了对食品来源和销售的管理和检查，避免出现采用不合格原料或过期售卖的行为，避免给人们的生命安全带来不良影响。

PCR 技术能够监测食品的成分以及病菌的含量，是相关部门检测食品安全性的关键技术，因此加强对PCR技术的研究和应用，能够保障现代社会食品产业的安全性，促进现代社会的安全发展。

食品安全关乎每个人的生命健康，能够保障人们基本社会活动、生产活动的正常开展。

PCR技术已经广泛应用于各个领域，PCR技术灵敏、便捷的特点，能够帮助国内相关食品企业的健康发展。

1　PCR技术概述PCR技术全称为聚合酶链式反应技术，该技术能够在体外实现对特定基因的扩增。

现代这种科学技术已广泛应用于基因克隆和转基因的检测中，因此加强对PCR技术的研究，对社会经济的发展具有重要作用。

2　关于PCR技术在食品检测的步骤食品检测中普遍应用PCR技术，能够保证食品的安全性和卫生性。

在食品检测的过程中，PCR技术主要是对转基因食品进行检测，或是对食品中的微生物进行检测。

具体操作流程是首先需要提取、纯化食品中的DNA，然后利用离心法和过滤法进行净化，最后利用PCR技术进行扩增[1]。

3　关于PCR在食品检测应用中的常见问题随着社会经济的不断发展，加强对检测技术的研究和研发，从而提高食品的安全性和卫生性，维护社会的健康发展。

PCR技术在应用过程中存在一些问题，从而降低了食品的安全性，比如检测过程中会受到温度、环境与引物等因素的干扰，容易对食品安全检测结果的准确度产生影响。

4　PCR技术在食品检测中的具体应用4.1　检测食源性病菌PCR技术能够检测食品中的大肠杆菌、沙门氏菌等细菌，从而降低人们受到病菌侵害的概率。

4.2　对食品成分进行检测PCR技术具有简便、快速的特性，可以对肉质类食品进行动物成分检测，因此相关部门可以利用这一特性，进行重点研究和发展，加强对市场的检测，避免出现假冒伪劣产品[2]。

PCR技术在常见食源性致病菌中的研究进展

PCR技术在常见食源性致病菌检测中的研究进展食品安全是直接关系到人民群众生命、健康和社会稳定的重大公共安全问题，而食源性致病菌是影响食品安全的主要因素，因此，检测食源性致病菌是食源性疾病预防与控制的关键环节。

传统的微生物检测方法主要包括细菌的分离培养和生化鉴定等，在实际检测中周期较长，步骤繁琐且工作量大，不能实现及时有效的监测。

因此，采用快速、准确而简便的食源性致病菌鉴定方法已成为食品安全质量控制中重要问题。

随着分子细菌学研究的不断进行，人们对细菌的毒素、侵袭素和毒力岛等毒力因子的认识不断深入，使细菌检测也从表型特征鉴定逐渐向遗传特征鉴定。

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）技术作为近年来发展起来的一种分子生物学技术，具有简便、快速、敏感性高和特异性强的优点，在食源性致病菌的检测方面正发挥着越来越重要的作用。

1 PCR技术简介及原理PCR技术是1985由Mullis等人创立的一项体外核酸扩增技术。

其基本原理就是在体外适宜条件下，以单链DNA为模板，以人工设计与合成的寡核苷酸为引物，利用热稳定的DNA聚合酶按5’~3’方向掺入单核苷酸来特异性地扩增DNA片段。

2 几种常见食源性致病菌的PCR研究进展2.1 沙门氏菌沙门氏菌属(Salmonella) 是肠杆菌科中最重要的病原菌属，在世界各地的食物中毒中，沙门菌食物中毒常占首位或第二位[1]，目前共发现2541个血清型。

很多学者从上个世纪90年代就开始尝试利用PCR技术检测食品中以及临床样品和环境中的沙门氏菌[2-3]。

目前，用于PCR检测的靶基因主要包括16S rRNA基因、invA、invB 、invC 、invD 、invE 、hilA、fimA、stn、rfb、agfA、viaB以及与质粒毒力相关的SPV基因等。

其中invA基因是毒力岛SP11基因之一，是产生致病性的关键因子，因此常用来作为PCR检测沙门氏菌的靶基因。

PCR技术在食品药品检测中的应用

PCR技术在食品药品检测中的应用
PCR技术，即聚合酶链反应技术，是目前食品药品检测中最为广泛应用的分子生物学
检测技术之一。

它可以快速、高效、准确地检测出极微小的目标基因序列，并且不需要耗
费大量时间和成本。

下面我们将重点介绍PCR技术在食品药品检测中的应用。

一、食品检测
1. 检测食品中的病原微生物：传统的病原微生物检测方法需要耗费大量的时间和成本，而PCR技术可以快速、高效地检测出食品中的病原微生物，例如：沙门氏菌、脆弱型
X氏杆菌、副溶血性链球菌等。

同时，PCR技术还可以将病原菌的数量测量出来，判断食
品是否达到标准。

2. 检测食品中的转基因成分：PCR技术可以检测出食品中含有的转基因成分，判断食品是否符合相关标准和法规。

3. 检测食品中的有害添加物：PCR技术可以检测出食品中的有害添加物，例如咖啡因、亚硝酸盐等，帮助监管部门确保食品安全。

1. 检测药品中的活性成分：PCR技术可以检测出药品中的活性成分，例如：对头孢菌素的检测，可以检测出头孢菌素的生产质量，保证药品的疗效。

2. 检测药品中的掺杂成分：PCR技术可以检测出药品中的掺杂成分，例如：利用PCR
技术检测阿司匹林中的对乙酰氨基酚，发现药品中的对乙酰氨基酚含量过高，提示可能存
在药品掺杂。

总之，PCR技术在食品药品检测中应用广泛，可以快速、高效地检测出病原微生物、
转基因成分、有害添加物、掺杂成分、活性成分、微生物等有关信息。

可以帮助保证食品
药品的品质和安全性，同时也成为监管部门的重要工具之一。

PCR技术在食品微生物检测中的应用研究

PCR技术在食品微生物检测中的应用研究作者：王迪来源：《食品安全导刊》2024年第05期摘要：PCR技术因具有高灵敏度、高特异性和快速性的特点，在食品微生物检测领域广泛使用。

本文阐述食品中常见的致病微生物、PCR技术的基本原理、食品中常见致病微生物的PCR检测方法，探讨PCR技术在食品微生物检测中的应用，并介绍PCR技术在食品微生物检测中的发展趋势。

关键词：PCR技术；食品微生物；致病微生物；实时荧光定量PCR；多重PCRStudy on the Application of PCR Technique in Food Microbiological DetectionWANG Di（Center for Disease Control and Prevention， Wujin District， Changzhou City， Jiangsu Province，Changzhou 213100， China）Abstract： PCR technology is widely used in the field of food microbiological detection because of its high sensitivity， high specificity and rapidity. This paper describes the common pathogenic microorganisms in food， the basic principle of PCR technology， the PCR detection method of common pathogenic microorganisms in food， discusses the application of PCR technology in food microbial detection， and introduces the development trend of PCR technology in food microbial detection.Keywords： PCR technology; food microorganism; pathogenic microorganism; real-time fluorescence quantitative PCR; multiplex PCR隨着食品工业的快速发展和人们生活水平的不断提高，食品安全问题日益受到政府和公众的高度关注。

PCR技术在食源性致病微生物检测中的应用

PCR技术在食源性致病微生物检测中的应用作者：余慧来源：《食品界》2018年第10期迄今为止，食源性致病微生物引起的中毒事件屡屡发生，也一直是困扰世界各地的食品安全问题之一，这不仅与致病性微生物本身的特性有关，同时更与致病性微生物的检测方法相关。

传统的致病性微生物检验步骤是前/增菌培养、分离纯化培养、形态学鉴定、生理生化鉴定及血清学鉴定，这个过程手续繁琐、需时较长、不能满足人们要求。

此时，PCR （Polymerase Chain Reaction）技术以灵敏度高、特异性强和时效高等特点凸显其优势，为各种有针对性致病微生物快速检测提供了技术支持。

本文将从近年来PCR技术在食源性致病微生物检测中的应用来展开论述。

国内食源性致病微生物检测技术现状目前，国内大部分标准采用的是传统方法，它是提供高重复性、国内外公认的方法，也是用于解决纠纷的标准方法，但其缺点也显而易见，近年来，商检行业标准率先采用PCR技术应用到食源性致病菌的检测中来，例如《SN/T1870- 2016出口食品中食源性致病菌检测方法实时荧光PCR法》采用的是实时荧光PCR技术；《GB4789.6- 2016食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验》的国家强制性标准中首次明确应用到了PCR技术。

这些标准的实施给外界释放出一个信号——PCR技术越来越广泛的在食源性致病菌中得到应用，也是未来食品微生物检测发展的主要趋势。

PCR技术在食源性致病微微生物检测中的应用PCR技术。

（1）PCR技术的原理、特点及应用。

PCR技术即聚合酶链式反应技术，是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法。

PCR经过十多年的发展与应用，现已成为生命科学领域最常用的PCR技术之一。

PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加，针对性强，配备预先设定特定程序的PCR仪，操作简单，快捷、准确性高。

蔡亦红等通过设计1对特异性引物，优化PCR扩增条件，建立了快速、稳定的检测福氏志贺菌的PCR方法，能够快速的实现对食品中的志贺菌的诊断和监控。

PCR技术在食源性病原微生物检测中的应用

综上所述，PCR技术在食源性病原微生物检测中发挥重要作用。然而，为了进一步提高PCR技术的准确性和可靠性以及降低检测成本，还需要开展更多的研究工作。未来的研究方向应包括优化PCR反应条件和引物设计方法，发展多重PCR技术和其他联用技术以提高检测效率，以及研究新的DNA测序技术以获得更准确的检测结果。随着科学技术的发展和人们食品安全意识的提高，相信PCR技术在食源性病原微生物检测中的应用将越来越广泛。
四、技术原理
四、技术原理
食源性病原微生物快速检测技术的主要原理是核酸探针杂交和生物芯片技术。核酸检测法是一种基于基因组DNA的检测方法，具有高特异性、高灵敏度等特点，可快速筛查出目标病原微生物。生物芯片技术则可将多个核酸检测反应集成在一张芯片上，实现高通量、高效率的检测。此外，还有一些新型的快速检测技术，如基于免疫磁分离技术和荧光定量PCR的联合方法等。
PCR技术在食源性病原微生物检测中的应用
01 引言
目录
02
食源性病原微生物感染的危害
03 PCR技术原理和应用
04 结论
05 参考内容
引言
引言
食源性病原微生物是指通过食物传播的病原体，包括细菌、病毒、寄生虫等多种微生物。这些微生物在食物中繁殖，可能导致人类食物中毒、传染病爆发等问题，对人类健康和公共卫生安全构成严重威胁。为了确保食品安全，食源性病原微生物的检测技术显得尤为重要。近年来，聚合酶链式反应（PCR）技术因其高灵敏度、高特异性等优点，在食源性病原微生物检测中发挥越来越重要的作用。
参考内容
内容摘要
随着食品安全意识的不断提高，食源性病原微生物的检测技术也日益受到。本次演示将介绍食源性病原微生物快速检测技术的核心主题、引入关键词、背景介绍、技术原理、应用发展以及结论与建议。

PCR技术在食品微生物检测中的运用

食品科技微生物的含量在食品安全分析中有十分重要的作用，近年来，部分地方环境的污染导致食物中含有一定量的污染成分，直接导致食品安全受到影响。

在这些食品当中，存在的有害菌群远远超出允许值，甚至有些食物中存在微量的致病微生物。

因此，食品安全也成为群众最为关心的问题，强化对食品的微生物检测工作，才能为国民饮食安全提供保障。

本文结合微生物检测工作的发展情况，深入探讨PCR 技术的应用作用与价值，对我国食品检测行业的稳定发展具有重要意义。

1　PCR技术在食品微生物检测中的应用优势方便性。

与传统检测方式相比，PCR技术具备一定的自动化程度，不需要大量劳动力进行支撑，由于不同微生物的生长环境、温度与pH值等存在差异，在对细胞特征、菌落特征等生理生化情况进行判定时，PCR技术可以快速对微生物含量进行检测，使整个流程愈加规范[1]。

快捷性。

应用PCR技术对菌落进行检测时，可以避免传统检测方式的复杂流程，而且传统检测方式通常需要2～5天，这也导致微生物检测结果存在滞后性，采用PCR技术可以在一天内确定微生物含量，进而有效满足工业生产需求。

准确性。

在应用传统检测技术时，针对各类食品都是采用单一的检测方式，检测中容易受到诸多因素的影响，而PCR技术可以根据不同种类的食品选择多种检测方式，例如对弱势菌群检测时，应用多重检测方式可以准确判定微生物含量，以此来保证检测结果的准确程度。

2　PCR技术在食品微生物检测中的常用方式2.1　常规PCR检测常规PCR技术方式原理比较简单，主要是在DNA模板与相应引物的混合物中加入聚合酶，同时对混合物进行催化反应，对其DNA片段变化情况进行检测，为保证微生物检测结果的准确性，还要对不同反应周期的变化情况进行分析。

这种检测方式最早应用于沙门氏菌的检测工作中，随着近年来检测技术与体系的不断完善，该方式可以对多种菌类进行检测，而且检出率在90%以上[2]。

2.2　多重PCR检测多重PCR检测技术针对食品微生物之间的互补关系进行检测，例如在聚合酶反应的基础上，针对不同DNA片段进行检测，该方式不仅可以提升常规PCR技术的测定速率，而且可以减少实验步骤。

PCR技术在食品检测中的应用和发展

PCR技术在食品检测中的应用和发展一、PCR技术在食品检测中的应用1.检测食品中的致病菌：PCR技术可以用于检测食品中的致病菌，如沙门氏菌、大肠杆菌等。

PCR技术在该领域的应用主要包括两个方面：一是快速检测方法的开发，能够在短时间内得到检测结果，提高检测效率；二是多重PCR技术的应用，能够同时检测多种致病菌，提高检测的准确性和可靠性。

2.检测食品中的转基因成分：PCR技术可以用于检测食品中的转基因成分，如转基因玉米、转基因大豆等。

通过PCR技术可以确定食品中是否含有转基因成分，并对其进行定量分析。

这对于食品质量的监管和食品安全的保障具有重要意义。

3.检测食品中的致敏成分：PCR技术可以用于检测食品中的过敏原分子，如鸡蛋、牛奶等。

通过PCR技术可以对食品中的致敏成分进行敏感、快速的检测，提高食品安全性。

4.食品品种的鉴别：PCR技术可以用于鉴别食品中的品种，如鉴别食用油中的橄榄油、花生油等。

通过PCR技术可以确定食品中包含的成分，避免食品欺诈行为。

二、PCR技术在食品检测中的发展1.快速检测技术的进一步改进：PCR技术在食品检测中的应用之一是快速检测方法的开发。

现有的PCR技术需要对样品进行DNA提取和准备，这些步骤都需要一定的时间和专业知识。

未来的发展方向是发展更为简化的快速检测方法，如发展直接检测方法，免去复杂的样品处理步骤。

2.高通量检测技术的应用：PCR技术在食品检测中可以应用于检测多种目标物。

目前已经有一些商业化的PCR芯片或PCR多孔板，可以同时对多个目标进行检测。

这些高通量检测技术的应用可以提高检测的效率，并降低检测的成本。

3.检测靶点的扩大：PCR技术在食品检测中一般针对特定的靶点进行检测，但随着PCR技术的不断发展，可以对多个靶点进行同时检测。

未来的发展方向是针对更多的靶点进行检测，从而更全面地评估食品的质量和安全性。

4.新一代测序技术的应用：PCR技术在食品检测中的应用可以结合新一代测序技术，如高通量测序。

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类是内源性参考基因，常选择相对恒定表达的管家基因
（ｕｅｅｐｇｅ，ｈｓｋｅｉｇｎ）进行双重ＰＲｏ－ｎｅＣ扩增，这种方法
的缺点是制约因素较多而影响定量的准确性；另一类是
利用分子生物学技术构建靶基因的突变型参考模板（差别仅在于靶基因内部序列有所缺失或延长），是当前采用
ｄｓｎｄｃｓｍｔ．Ｃｗｓｄｓｓｉ，ｅｆａｄｕｔｆｑａｔｔｅｒｉｔｎｎｌｙＩｔｄｅｇｅａｄｕａｄＱＰＲｒｉｅｉｅｓｃｃａｒｅｕｎｔｉｄｔｍｎｉｔｈｏｇ．ｃｕｉｎｏｍｅ－ａａ，ｔｐｉｎｃａｏｐｎｖｉｃｒｉｖｅａｅａｏｅｏｆｌｃｉｏｂｅｅｔｅｕｌｅ，ａｉｄｔｔｎｏｄｏｅｏｅｉｍｃｏａｉｗｕｍｋｏｖｕｐｇｓｅｃｖｌｔｚｄｔｒｄｅｉｏｆｂｒｐｔｇｎｉｏｒｎｍｌａｅｉｓｒｓｆｉｙｉｈｐｅｃｏｆｎａｆｉｅｏｈｃｒｇｓｏｄｂｏｒｅ．ｏ
ＲｖｗＡｐｃｉｏＱＰＲｔＤｔｔｎｏｄｏｅｏｅｉＭｉｏａｉｅｉｏｐｌａｏｆＣｏｈｅｃｏｏＦｏｂｒＰｔｇｎｃｒｎｍｅｎｉｔｎ－ｎｅｉｆｎａｅｈｃｒｇｓｏ
ＤＵｅＷｉ
具有重要的现实意义。
ＰＲ聚合酶链式反应）Ｃ（反应的基本原理为：在体外利用ＤＡ聚合酶活性，在引物的引导和脱氧核糖核普Ｎ酸（Ｔ）（Ｐ等参与下将模板ＤＡ在数小时内ｄＮＮ进行百万倍扩增。该酶促反应最基本的３个环节是：①模板ＤＡ的Ｎ变性，即在９ ℃下模板双链ＤＡ变为单链ＤＡ；② ４ＮＮ
中图分类号：８９０１
文献标识码：Ａ
文章编号：０２６００６４２０４１－３（０）－６－０６２０００
用研究重点，并作为食品中致病微生物快速定量检测研
发的一项关键技术。
由沙门氏菌、弯曲菌、大肠埃希氏杆菌、李斯特菌等食源性致病微生物引发的食品污染，是影响食品质量和安全的主要因素之一。因食源性致病微生物污染食品所导致的食源性疾病不仅会严重损害人体的健康，而且很容易引起食品贸易纠纷川。随着现代食品安全控制
Ｋｙｒｓｑａｔａｖｐｌｅｓｃａｒｃｏ（－Ｃ）ｐｔｇｎｍｃｏｇｎｍ；ｉｄｔｔｎｅｗｄ：ｎｔｉｏｍｒｅｉｅｔｎＱＰＲ；ｈｅｉｉｏｒａｉｒｄｅｉｏｕｉｔｅｙａｈｎｉａａｏｃｒｓａｅｃｏｐ
量，发现肉汤和脱脂乳中Ｅｏｉ５：７ｘ１０７的检测范围是１１１０＾１０，－ＣＸ＇－Ｘ８ＱＰＲ的细胞密度与可见细胞计数１１Ｃ
该技术在ＰＲＣ扩增时，加入一个特异性的ＴｇｎａＭａ
荧光探针，该探针一般由２＾３个核昔酸组成，两端００
分析（ＬＳ）只是一种定性试验，若加入内（ＩＡ，Ｅ标，作出标准曲线，也可以实现定量检测的目的‘。 “ ’
近年来，通过ＰＲ一ＥＩＡ技术建立了单核增生ＣＬＳ李斯特菌［和牡蜘中Ｅｃｌ等‘ ］９］．ｏｉ ’ 的定量检测方法。 “ Ｇｎａｚｏｚｅ等利用大肠杆菌ｌＢ基因的ＰＲ扩增和ＥＩＡｌａｍＣＬＳ联合技术，建立了牡蝠中Ｅｃｌ的直接计数方法，发现．ｉｏ
摘要：食源性致病微生物是影响质量和安主要因食品全的素之一，建立和完善食品中致病微生物快速定量检测
技术具有重要的现实意义。定量ＰＲ能快速、敏感、特异而准确定量，深入有效地利用该技术，必将有力促进Ｃ食源性致病微生物快速检测工作的发展。
关键词：定量ＰＲＣ；致病微生物；快速检测
法。目前，较常用的荧光探针是ＴｇｎａＭａ荧光探针和
Ｌｇｔｙｌ双探针。ｉＣｃｒｈｅ
２．Ｔｇｎ．１ａＭａ实时定Ｃ２量ＰＲＴｇｎａＭａ实时定量ＰＲ技术由Ｐ公司建立，ＣＥ是对
ＰＲ扩增产物进行定量的一种新方法。Ｃ
学院的工作人员应用Ｑ－Ｃ对Ｅｏ０５：７ＣＰＲｘ１１７进行定ｉ１
定量ＰＲ的基本原理Ｃ
技术如危害分析关键控制点（ＡＣ）微生物危险性评ＨＣＰ、估（ｉｏｉｏｉｌａｅｓｅｔＭＡ的ｍｃｂｌｃｒｋｓｎ，）发展，以ｒｏｇａｉｓｍｓｓＲ及依据ＭＲＡ建立的食品中致病微生物的限量标准等要求，建立和完善食品中微生物快速定量检测技术越来越
ｆｄＩａｂｅｏｒｌｔｓｎｉｎｅｔｒｉｄｔｔｎｎｌｙｏｄｏｅｏｅｉｍｃｏａｉｓｕｂｏ．ｓｆｓｃｉａｃｔｔａｄｃｏｔｈｏｇｏｆｂｒｐｔｇｎｉｏｒｎｍｌｅｏｔｅｅｉｉｉｆｗｎａｇｃｈｈｐｅｉｅｏｆｎａａｅｅｃｏｈｃｒｇｓｈｄｏ
较多的内标准参考模板‘ ６１
２．传统定量ＰＲ存在的问题．３１Ｃ定量竞争性ＰＲＰ－ＬＳＣ，ＲＥＩＡ等传统定量ＰＲＣＣ，在快速定量中被证明是成功的，但这一类定量ＰＲ方法是Ｃ终点检测，即ＰＲ达到平台期后进行检测，而ＰＲ经ＣＣ过对数期扩增到达平台期时，检测重现性相对较差，因此，传统定量ＰＲ只能算ＰＲ定量方法中较为粗略的ＣＣ一类方法［１。另外，这类定量方法需要ＰＲ后处理，相１２１］，Ｃ应增加了分析时间，而且还有造成实验室污染的可能性。２．实时定量ＰＲ２Ｃ实时定量ＰＲｒｌｉＰ，ＰＲ，是ＤＡＣ（ａｔｅＲＲ－Ｃ）ｅ－ｍＣＴＮ定量分析的新方法，指在ＰＲ反应体系中加入荧光基Ｃ团，利用荧光信号积累，实时监测整个ＰＲ过程，最Ｃ后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在整个实验的操作过程中，所有反应均在同一溶液中进行，而且不需要任何后处理过程。被测产物的数量与起始模板拷贝数直接相关，具体可以通过测量每次循环产生的荧光信号强度，并参照对照基因的标准曲线来定量〔］２，３
紧相［密关７１
２１ＰＲ一ＥＩＡ．２Ｃ．ＬＳ
分别标记一个荧光基团（Ａ６如ＦＭ，一梭基荧光素）和一个碎灭基团（ＡＡ６如ＴＭＲ，一梭基一四甲基若丹明），探
针完整时，荧光基团发射的荧光信号被碎灭基团吸收，
利用地高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上的特异探针所结合，再加入抗地高辛或生物素酶标抗体— 辣根过氧化酶结合物，最终酶使底物显色。常规的ＰＲ一ＥＩＡ法，即ＰＲ技术结合酶联免疫吸附ＣＬＳＣ
（ｔｅｏｍｔｎｎｒｔｃｒｅｃａｄｓａｈｒｓｔｎＢｉｎ１０４，ｎ）ＳａＩｆｒａｏＣｔＰｓｏｔＳｉｅＲｅｒＷｏｋｔｉ，ｉｔｎｉｅｅｏｄｏｃｎｎｅｃａｏｅｇ００５Ｃｉｊｈａ
ＡｓａｔＦｏｂｍｐｔｇｎｍｃｏａｉｗｓｏｔｉｐｒｎｆｔｓｃｕａｅｔｑａｔａｄｔｏｂｔｃ：ｏｄｏｅｏｅｉｉｏｒｎｍｏｅｈｍｏａｔｏｔｔｌｆｃｔｕｌｓｅｒａｈｃｒｇｓａｎｆｅｔａｒｈｏｄｈｃａｆｅｉｎａｙｆｙｆ
引物与模板链的特异性复性；③引物链的延伸。
聚合酶链式反应（Ｃ）（Ｒ技术问世２年来，在生物学Ｐ０基础研究领域得到了巨大的发展和完善，目前在疾病诊
断、病原体检测等方面也有了越来越广泛的应用。近几年，在对扩增产物定性鉴别的技术基础上，又发展了对模板ＤＡ片段进行定量研究的方法，即定量ＰＲＮＣ
不产生可检测的荧光；当ＰＲ开始扩增后，ａ酶的ＣＴｑ
５－外切酶活性将结合在ＤＡ模板上的Ｔｇｎ＇ ’ －３ＮａＭａ
荧光探针酶切降解，使荧光基团从探针上游离出来，与碎灭基团分离，不受碎灭基团影响，引起５８ｍ处荧１ｎ光强度增加，使荧光监测系统接收到荧光信号，即每扩增一条ＤＡ链，Ｎ就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与ＰＲ产物形成完全同步，应用序列检测仪Ｃ可持续测量每一轮循环荧光信号的强度，从而使反应得到实时监测【］前该方法已经用于单核李斯特菌【１。目３川、大肠埃希氏杆菌、沙门菌、Ｅｃｌ０１７Ｈ，．ｉ５：７Ｅ型肉毒梭ｏ菌等【， ‘的检测。５
２．传统定量ＰＲ１Ｃ这一类定量ＰＲ方法是终点检测，即ＰＲ达到平ＣＣ台期后进行定量检测。
２．．１１
定量竞争性ＰＲＣ
定竞争Ｃ（ａｉｔｅｐｉｅ，－量性ＰＲｑｎｔｉｃｅｔＰＲＱｕｔｖｏｔｖＣＣａｍｉ
ＰＲ技术，是利用逆转录酶的作用，将ｍＮＣ）ＲＡ转变为ｃＮＤＡ，然后在ｃＮＤＡ进行扩增时，加入己知浓度的竞争性参考模板，使两种模板在同一试管内竞争同一对引物，两者的产物因大小或酶切位点的不同而区别开来，通过对两者扩增产物（即凝胶电泳上电泳条带）的测量，达到对ｍＲＡ初始浓度的定量［Ｎ１５１竞争性ＰＲ的参考模板一般分为外标准参考模板和Ｃ内标准参考模板两类。内标准参考模板又分成两类。一
定量ＰＲＱ一ＰＲ就是在ＰＲＣ（Ｃ）Ｃ反应中应用化学标记
的引物或探针，对扩增的标记产物进行定量‘ ４２１－。近年来，在食源性致病微生物定量检测中研究和应用的定量ＰＲ方法主要有：传统定量ＰＲ即：定量竞争性ＰＲＣＣ（Ｃ．