酪蛋白的制备
牛奶中酪蛋白的提取
实验五牛奶中酪蛋白的提取
一、实验目的
学习从牛奶中制备酪蛋白的方法
了解从牛奶中制取酪蛋白的原理
二、实验原理
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5/100ml。
酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，相对密度1.25~1.31，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。
三、实验材料与仪器
纯牛奶、白醋、滤纸、被子、锅等
四、实验步骤
将250ml或200ml牛奶置于锅中，隔水水浴小火加热，不断搅拌，加热至沸腾时停止搅拌和加热。
在牛奶中加入少量盐，并慢慢加入白醋，并轻轻搅拌，观察到牛奶中开始有白色絮状沉淀出现后，停止搅拌和加醋，静置10min。
待上述悬浮液冷却至室温，用滤纸过滤，得到滤渣。
用水清洗滤渣3次，每次都过滤得滤渣。
滤渣再用白酒清洗3次，每次都过滤得滤渣。
将滤渣摊在滤纸上风干，得酪蛋白制品
称重并品尝酪蛋白制品
五、实验结果记录与分析
酪蛋白（g/100ml）=（酪蛋白（g）/200ml或250ml ）*100
得率=测得含量/理论含量*100%
酪蛋白=（13.3g/200ml）*100=6.65 g/ml
结论：闻起来有较大的奶香味和酒精味。
在过滤的过程中，粘在滤纸上跟纱布，抠不下来，所以数据应该会偏小了。
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告一、实验目的本实验旨在通过化学合成法制备酪蛋白，了解酪蛋白的合成过程及影响因素，为进一步研究酪蛋白的性质和应用奠定基础。
二、实验原理酪蛋白是一种含磷蛋白质，广泛存在于哺乳动物的乳汁、骨骼和牙齿等组织中。
本实验采用化学合成法，以甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸和磷酸为原料，在一定条件下进行缩合反应，生成酪蛋白。
三、实验步骤准备试剂和仪器：甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、磷酸、pH试纸、烧杯、磁力搅拌器、温度计、滴定管等。
配制溶液：分别称取适量甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸和磷酸，溶解于去离子水中，配制成一定浓度的溶液。
调节pH：用NaOH或HCl溶液调节溶液的pH至7.0左右。
缩合反应：将甘氨酸溶液加入到缬氨酸和亮氨酸溶液中，置于磁力搅拌器上搅拌，并加热至一定温度（如60℃），滴加磷酸溶液，继续搅拌一定时间（如2小时）。
分离纯化：将反应液冷却至室温，用离心机进行离心分离，收集沉淀物。
然后用去离子水反复洗涤沉淀物，直至洗涤液的pH接近中性。
将洗涤后的沉淀物进行真空干燥，得到粗制酪蛋白。
检测与表征：采用红外光谱仪、紫外可见光谱仪等对粗制酪蛋白进行结构检测与表征。
四、实验结果与分析红外光谱分析：通过红外光谱分析，发现粗制酪蛋白在1650 cm-1附近出现了肽键的吸收峰，表明缩合反应成功生成了蛋白质。
此外，在3400 cm-1附近出现了-OH的伸缩振动峰，表明蛋白质分子中存在大量的亲水基团。
紫外可见光谱分析：通过紫外可见光谱分析，发现粗制酪蛋白在280 nm左右出现了特征吸收峰，表明蛋白质分子中存在共轭双键，具有较好的光学性质。
纯度与收率：通过滴定法测定粗制酪蛋白中目标产物的含量，计算出纯度和收率。
本实验中，所制备的酪蛋白纯度约为80%，收率约为60%。
影响因素分析：通过对实验过程中各因素的分析，发现pH值、温度、反应时间和原料配比对酪蛋白的合成具有重要影响。
当pH值为7.0、温度为60℃、反应时间为2小时、甘氨酸与缬氨酸和亮氨酸的摩尔比为1:1:1时，所制备的酪蛋白纯度和收率较高。
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白是一种重要的乳制品蛋白质，具有丰富的营养价值和广泛的应用价值。
本实验旨在通过酪蛋白的制备过程，掌握蛋白质的提取和分离技术，以及相关的实验操作技能。
首先，我们准备了酪蛋白的原料——牛奶。
将牛奶倒入一个干净的容器中，加
入适量的酸，如柠檬酸或醋酸，搅拌均匀后静置一段时间，待牛奶凝结成块状物质。
接下来，我们使用过滤纸和漏斗将凝结后的牛奶过滤，将固体和液体分离。
过
滤后的液体即为含有酪蛋白的乳清，而固体则是乳清中的酪蛋白。
然后，我们将得到的固体酪蛋白进行洗涤和纯化。
将酪蛋白固体放入洁净的容
器中，加入适量的蒸馏水，轻轻搅拌后静置，使酪蛋白充分溶解。
然后，用过滤纸和漏斗将酪蛋白溶液过滤，去除杂质。
过滤后的酪蛋白溶液即为纯化后的酪蛋白。
最后，我们对酪蛋白进行干燥和凝固。
将酪蛋白溶液倒入浅盘中，放置在通风
干燥的环境中，待其自然干燥凝固。
干燥凝固后的酪蛋白即可得到。
通过本次实验，我们成功地制备了酪蛋白，并掌握了相关的实验操作技能。
酪
蛋白在食品工业、生物工程等领域有着广泛的应用，本实验的成功对我们今后的学习和科研工作具有重要意义。
希望通过不断的实践和探索，能够进一步提高我们的实验技能，为将来的科研工作打下坚实的基础。
实验5酪蛋白的制备
实验5酪蛋白的制备
酪蛋白的制备方法：
(1)新鲜牛奶脱脂，加酸(乳酸、乙酸、盐酸或硫酸)，将pH调至4.8，使干酪素微胶粒失去电荷而凝固沉淀。
用这种方法得到的干酪素称为酸酪蛋白，加酸的种类不同得到的酸酪蛋白却几乎毫无区别。
酸酪蛋白是白色至淡黄色粉末或颗粒，稍有奶臭和酸味。
在水中只是溶胀，若加入氨、碱及其盐时，则可分散溶解于水中。
可溶于强酸、二乙醇胺、吗啉、尿素、甲酰胺、热苯酚和土耳其红油。
(2)将牛奶与粗制凝乳酶作用，形成凝固沉淀物，称为粗制凝乳酶酪蛋白，呈白色粒状，几乎无味无臭，加热灼烧会产生特有的臭味。
凝乳酶酪蛋白比酸酪蛋白的灰分含量高。
酪蛋白是一种含磷钙的结合蛋白，对酸敏感，pH较低时会沉淀。
酪蛋白是哺乳动物包括母牛，羊和人奶中的主要蛋白质，又称：干酪素、酪朊、乳酪素。
α-酪蛋白是哺乳动物的主要蛋白，人乳中没有α-酪蛋白，以β-酪蛋白为主要酪蛋白形式。
酪蛋白对幼儿既是氨基酸的来源，也是钙和磷的来源，酪蛋白在胃中形成凝乳以便消化。
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告
实验目的，通过酸性条件下酪蛋白的沉淀和洗涤，掌握酪蛋白的制备方法，并
对其纯度进行初步检测。
实验原理，酪蛋白是存在于乳制品中的一种蛋白质，它在酸性条件下会发生沉淀。
在本实验中，我们将利用这一特性来制备酪蛋白。
首先将乳清酸化至pH4.6以下，使酪蛋白发生沉淀，然后进行洗涤和干燥，最终得到酪蛋白的粗品。
实验步骤：
1. 准备工作，取适量乳清，准备醋酸和蒸馏水。
2. 酸化，将乳清倒入容器中，加入适量的醋酸，搅拌均匀，使其pH值降至4.6以下。
3. 沉淀，将酸化后的乳清静置一段时间，观察到白色沉淀物即为酪蛋白。
4. 洗涤，用蒸馏水将沉淀物洗涤数次，去除余酸和杂质。
5. 干燥，将洗涤后的酪蛋白沉淀放置于通风处自然干燥，直至完全干燥。
实验结果，通过上述步骤，我们成功地制备出了酪蛋白的粗品。
经过初步检测，得到的酪蛋白呈现白色粉末状，无异味，初步符合酪蛋白的特征。
实验结论，本实验通过酸化乳清的方法，成功制备出了酪蛋白的粗品，并进行
了初步检测。
制备过程简单，操作方便，得到的酪蛋白粗品可用于后续的纯化和分析。
实验注意事项：
1. 实验过程中需注意安全，避免醋酸溅入眼睛或皮肤。
2. 实验操作需在通风处进行，避免吸入醋酸蒸气。
3. 酪蛋白粗品需储存在干燥通风处，避免潮湿和阳光直射。
通过本次实验，我们成功掌握了酪蛋白的制备方法，并对其纯度进行了初步检测。
这对我们进一步深入了解酪蛋白的性质和应用具有重要意义。
希望本实验能为相关研究和应用提供一定的参考价值。
酪蛋白的制备
酪蛋白的制备目的和要求学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。
原理鲜乳中蛋白质的含量为3.4（W/V）%，但因地因时而异，蛋白质含量夏天最低，而秋冬季高。
牛乳总蛋白的80%为酪蛋白。
实际上酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.6，利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH值调至4.6，酪蛋白就沉淀出来。
酪蛋白不溶于乙醇，利用这个性质用乙醇洗涤沉淀物从酪蛋白粗制品中除去脂类杂质。
仪器与试剂恒温水浴，离心机，精密试纸，布氏漏斗，抽滤瓶，温度计。
鲜牛奶，95%乙醇，无水乙醚，0.2mol/l pH4.6醋酸-醋酸钠缓冲液，乙醇-乙醚混合液（1:1 V:V）操作方法1. 将20ml牛乳放到50毫升烧杯中加热到40℃，在搅拌下慢慢加入预热到40℃的pH4.6的醋酸缓冲液20毫升，用精密pH试纸调pH至4.6；2. 将上述悬浮液冷却至室温，5000转/分离心5分钟，弃去上清液，得酪蛋白粗制品；3. 用无离子水洗涤沉淀3次，5000转/分离心5分钟，弃去上清液；4. 在沉淀中加入20毫升95%乙醇，搅拌片刻，将全部旋浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇-乙醚混合液洗涤两次，最后用乙醚洗沉淀两次，抽干；5. 将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品；6. 准确称量，计算含量和得率。
含量：酪蛋白g/100毫升牛乳（g%）得率：，式中理论含量为3.4g/100毫升。
酪蛋白含量与季节有关，另外在热处理乳过程中也有一些乳清蛋白沉淀出来，其沉淀量依热处理条件不同而有差异，因此测定出来的酪蛋白值可能要高于相应的实际值或理论值。
醋酸盐缓冲液母液：A：0.2mol/L醋酸液（11.5 ml，稀释至1000ml）B：0.2mol/L醋酸钠溶液（16.4g C2H3O2Na或27.2g C2H3O2Na·3H2O容至1000ml）。
从牛奶中提取酪蛋白
实验二从牛奶中提取酪蛋白一、实验目的要求1.学习从牛乳中制备酪蛋白的方法。
2.了解从牛奶中制取酪蛋白的原理。
二、实验原理牛乳中的主要蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/100ml。
酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，相对密度1.25-1.31，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH值调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。
三、原料与器材鲜牛奶、恒温水浴锅、台式离心机、抽滤装置。
四、试剂1.95%乙醇2.无水乙醚3.0.2mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液A液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取NaAc.3H2O54.44g，定容至2000ml。
B液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取优级纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g，定容至1000ml。
取A液1770ml与B液1230ml混合即得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。
4.乙醇-乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（体积比）。
五、操作步骤1.将5ml牛奶置试管或小烧杯中，在水浴中加热至40℃，在搅拌下漫漫加入预热至40℃（应注意两种液体都应先预热至40℃再用），pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液5ml，用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7(用1%NaOH或10%醋酸溶液进行调整)。
观察牛奶开始有絮状沉淀出现后，保温一定时间使沉淀完全。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心分离8min（8000r/min）或15min（2000r/min），弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。
2.用蒸馏水洗涤沉淀3次（洗涤时将沉淀颗粒用干净吸管吹开或用毛细管的封闭一端搅开，充分洗涤），离心5min（12000r/min）或10min（3000r/min），弃去上清液。
3.在沉淀中加入3ml95%的乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次，最后用乙醚洗涤沉淀2次，抽干。
牛乳中酪蛋白的制备
思考题
1．制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？
ห้องสมุดไป่ตู้
牛乳中酪蛋白的制备
操作方法
1．将25mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、 pH4.7醋酸缓冲液25mL。用精密试纸调pH值至4.7。
2. 将上述悬浮液冷却至室温。离心10min(3000r/min)弃 去上清液，得酪蛋白粗制品。
3．用水洗沉淀两次，离心5min(3000r/min)，弃去上清液。
3．用乙醇洗沉淀1次，离心5min(3000r/min)，弃去上清 液。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀1次。最后用乙醚洗沉淀1次， 各离心5min(3000r/min) 。
4．将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。
5．准确称重，计算含量酪蛋白g/100mL牛乳（g%）,并和 理论含量为3.5g/100mL牛乳相比较，求出实际得率。
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上海大学生命科学实验中心
实验预习报告
课程：姓名：日期：
学号：同组者：指导老师：
实验时间：温度：湿度：
（一律用A4纸、钢笔书写或打印，不得涂改，经教师签字后方为有效，附在实验报告中一并交。
如无此原始记录或丢失，报告不批示成绩）
实验名称：酪蛋白的制备
1.目的：学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法，并依此加深对等电点概念的印象。
2.原理、仪器设备、材料和试剂：
原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质。
其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
酪蛋白是白色、无味的物质。
不溶于水、乙醇及有机溶剂，但溶于碱溶液。
牛乳在pH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称乳清蛋白。
乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水合能力强、分散性高，在乳中呈高分子状态。
在处于其等电点时，兼性离子/粒子在溶液中的溶解度降低；如果我们将牛奶的pH 调到4.7，就可获得酪蛋白沉淀；下一步，用乙醇、乙醇-乙醚混合物、乙醚来洗涤沉淀物，以去除脂溶性杂质，就可得到较纯的酪蛋白。
试剂：95%乙醇；无水乙醚；乙醇—乙醚混合液(V/V=1∶1) 。
0.2mol/L pH4.7醋酸—醋酸钠缓冲液3000mL：
A液：称取NaAc 3H2O 54.44g，定容至2000mL。
B液：称取优级纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000mL。
取A液1770mL，B液1230mL混合即得pH4.7的醋酸—醋酸钠缓冲液3000mL。
仪器：离心机；抽滤装置；研钵；布氏漏斗；容量瓶。
3.操作步骤及现象记录
1．将20mL pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液预热至40℃。
将20mL牛奶加热至40℃，在搅拌下缓慢地加入20mL预热的pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液。
2．用精密pH试纸调pH至4.7，可见溶液变为乳白色悬浮液。
待悬浮液冷却至室温，3000rpm离心
15min ，弃上清，得酪蛋白粗制品。
用6mL 水洗脱沉淀1次，3000rpm 离心10min ，弃上清 在沉淀中加入6mL95％乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤
3．用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀1次，最后用乙醚洗涤沉淀1次，抽干。
将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品。
准确称量，计算含量和得率
4.思考题
含量＝
酪蛋白
100mL 牛奶
（g ％）
得率＝
测得含量 ×100％
1. 制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？
答：1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液的等电点一定要准确。
最好用酸度计测定。
2、精制过程用乙醚是挥发性、有毒的有机溶剂，最好在通风橱内操作。
3、目前市面上出售的牛奶是经加工的奶制品，不是纯净牛奶，所以计算时应按产品的相应指标计算。
2. 试设计另一种提取酪蛋白的方法。
答：用盐析法，加重金属离子、有机酸、有机溶剂等，都可以使蛋白质沉淀下来。
蛋白质沉淀后，离心10分钟（3000r/min）。
水洗两次，离心10分钟（3000r/min）。
加入乙醇，搅拌，悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。
最后用乙醚洗沉淀两次，抽干。
沉淀风干，得酪蛋白纯品。
加入有机溶剂是除去脂类杂质。
采用3000g，30min离心的方法，最后酪蛋白沉到最下面。
3. 用乙醇、乙醇-乙醚和乙醚洗涤蛋白质的顺序是否可以变换？为什么？
答：不能颠倒次序。
经过这个次序以后，结晶吸附的溶剂改为乙醚，乙醚沸点低，容易挥散干净，得到纯的结晶。
乙醇和乙醚的溶解性能产很远，乙醇实际上介于水和有机溶剂之间，而乙醚是完全的有机溶剂，他们各自去洗涤各自能溶解的物质，从无机（水）到有机（乙醚）。
最后用乙醚是因为它会很快挥发掉不留痕迹，可得到纯粹的蛋白质。
4. 等电点沉淀蛋白质的原理是什么？
答：在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。