实验二 酪蛋白的制备
酪蛋白的制备实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除酪蛋白的制备实验报告篇一：酪蛋白的制备----生化实验酪蛋白的制备一、目的1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。
2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
二、原理牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。
酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。
利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的ph调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。
三、材料、试剂与器具（一）材料新鲜牛奶（一）试剂1、95%乙醇1200mL2、无水乙醚1200mL3、0.2mol/Lph4.7醋酸——醋酸钠缓冲液300ml先配A液与b液A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称naAc·3h2o54.44g，定容至2000ml。
b液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。
取A液1770ml，b液1230ml混合即得ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。
4、乙醇——乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（V/V）（二）器具1、离心机2、抽滤装置3、精密ph试纸或酸度计4、电炉5、烧杯6、温度计四、操作步骤（一）酪蛋白的粗提100mL牛奶加热至40℃。
在搅拌下慢慢加入预热至40℃、ph4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密ph试纸或酸度计调ph至4.7。
将上述悬浮液冷却至室温。
离心15分钟（3000r/min）。
弃去清液，得酪蛋白粗制品。
（二）酪蛋白的纯化1、用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3000r/min），弃去上清液。
2、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。
最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。
3、将沉淀摊开在表面上，风干；得酪蛋白纯品。
（三）准确称重，计算含量和得率。
含量：酪蛋白g/100mL牛乳（g%）式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。
五、注意事项1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液的等电点一定要准确。
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告一、实验目的本实验旨在通过化学合成法制备酪蛋白，了解酪蛋白的合成过程及影响因素，为进一步研究酪蛋白的性质和应用奠定基础。
二、实验原理酪蛋白是一种含磷蛋白质，广泛存在于哺乳动物的乳汁、骨骼和牙齿等组织中。
本实验采用化学合成法，以甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸和磷酸为原料，在一定条件下进行缩合反应，生成酪蛋白。
三、实验步骤准备试剂和仪器：甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸、磷酸、pH试纸、烧杯、磁力搅拌器、温度计、滴定管等。
配制溶液：分别称取适量甘氨酸、缬氨酸、亮氨酸和磷酸，溶解于去离子水中，配制成一定浓度的溶液。
调节pH：用NaOH或HCl溶液调节溶液的pH至7.0左右。
缩合反应：将甘氨酸溶液加入到缬氨酸和亮氨酸溶液中，置于磁力搅拌器上搅拌，并加热至一定温度（如60℃），滴加磷酸溶液，继续搅拌一定时间（如2小时）。
分离纯化：将反应液冷却至室温，用离心机进行离心分离，收集沉淀物。
然后用去离子水反复洗涤沉淀物，直至洗涤液的pH接近中性。
将洗涤后的沉淀物进行真空干燥，得到粗制酪蛋白。
检测与表征：采用红外光谱仪、紫外可见光谱仪等对粗制酪蛋白进行结构检测与表征。
四、实验结果与分析红外光谱分析：通过红外光谱分析，发现粗制酪蛋白在1650 cm-1附近出现了肽键的吸收峰，表明缩合反应成功生成了蛋白质。
此外，在3400 cm-1附近出现了-OH的伸缩振动峰，表明蛋白质分子中存在大量的亲水基团。
紫外可见光谱分析：通过紫外可见光谱分析，发现粗制酪蛋白在280 nm左右出现了特征吸收峰，表明蛋白质分子中存在共轭双键，具有较好的光学性质。
纯度与收率：通过滴定法测定粗制酪蛋白中目标产物的含量，计算出纯度和收率。
本实验中，所制备的酪蛋白纯度约为80%，收率约为60%。
影响因素分析：通过对实验过程中各因素的分析，发现pH值、温度、反应时间和原料配比对酪蛋白的合成具有重要影响。
当pH值为7.0、温度为60℃、反应时间为2小时、甘氨酸与缬氨酸和亮氨酸的摩尔比为1:1:1时，所制备的酪蛋白纯度和收率较高。
牛奶中酪蛋白含量的测定
牛奶中酪蛋白的提取及含量测定一、实验原理1、牛乳的主要成分：碳水化合物（5%）、脂类（4%）、蛋白质（3.5%）、维生素、微量元素（Ca、P等矿物质）、水（87%）牛奶中的糖主要是乳糖。
乳糖是一种二糖，它由D-半乳糖分子和D-葡萄糖分子通过β-1,4-糖苷键连接而成。
乳糖溶于水，不溶于乙醇，当乙醇混入乳糖水溶液中时，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。
牛奶中的蛋白质主要是酪蛋白和乳清蛋白两种，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。
而乳清蛋白水合能力强，分散性强，在牛乳中呈高分子状态。
2、等电点沉淀法：在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。
酪蛋白的等电点为4.7左右（不同结构的酪蛋白等电点有所不同），本实验中将牛乳的pH调值4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
市售牛奶通常会添加耐酸碱稳定剂来增加粘稠度，以致即使pH调至等电点酪蛋白也沉淀的很少，故实验时可将pH稍微调过多一点再调回等电点。
同时，市售牛奶由于生产过程通常导致酪蛋白组分发生变化，因而使pI偏离了4.7，通常偏酸。
3、酪蛋白的提纯根据乳糖、乳清蛋白等和酪蛋白的溶解性质差异，可以用纯水洗涤来除去乳糖、乳清蛋白等溶于水的杂质，再用乙醇除去脂类，然后过渡到用乙醚洗涤，由于乙醚很快挥发，最终得到纯粹的酪蛋白结晶。
4、蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝结合法）考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区结合，这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G520的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。
当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰变为595nm。
在一定范围内，考马斯亮蓝G520-蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以测定蛋白质浓度。
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酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白是一种重要的乳制品蛋白质，具有丰富的营养价值和广泛的应用价值。
本实验旨在通过酪蛋白的制备过程，掌握蛋白质的提取和分离技术，以及相关的实验操作技能。
首先，我们准备了酪蛋白的原料——牛奶。
将牛奶倒入一个干净的容器中，加
入适量的酸，如柠檬酸或醋酸，搅拌均匀后静置一段时间，待牛奶凝结成块状物质。
接下来，我们使用过滤纸和漏斗将凝结后的牛奶过滤，将固体和液体分离。
过
滤后的液体即为含有酪蛋白的乳清，而固体则是乳清中的酪蛋白。
然后，我们将得到的固体酪蛋白进行洗涤和纯化。
将酪蛋白固体放入洁净的容
器中，加入适量的蒸馏水，轻轻搅拌后静置，使酪蛋白充分溶解。
然后，用过滤纸和漏斗将酪蛋白溶液过滤，去除杂质。
过滤后的酪蛋白溶液即为纯化后的酪蛋白。
最后，我们对酪蛋白进行干燥和凝固。
将酪蛋白溶液倒入浅盘中，放置在通风
干燥的环境中，待其自然干燥凝固。
干燥凝固后的酪蛋白即可得到。
通过本次实验，我们成功地制备了酪蛋白，并掌握了相关的实验操作技能。
酪
蛋白在食品工业、生物工程等领域有着广泛的应用，本实验的成功对我们今后的学习和科研工作具有重要意义。
希望通过不断的实践和探索，能够进一步提高我们的实验技能，为将来的科研工作打下坚实的基础。
酪蛋白的制备实验报告
酪蛋白的制备实验报告
实验目的，通过酸性条件下酪蛋白的沉淀和洗涤，掌握酪蛋白的制备方法，并
对其纯度进行初步检测。
实验原理，酪蛋白是存在于乳制品中的一种蛋白质，它在酸性条件下会发生沉淀。
在本实验中，我们将利用这一特性来制备酪蛋白。
首先将乳清酸化至pH4.6以下，使酪蛋白发生沉淀，然后进行洗涤和干燥，最终得到酪蛋白的粗品。
实验步骤：
1. 准备工作，取适量乳清，准备醋酸和蒸馏水。
2. 酸化，将乳清倒入容器中，加入适量的醋酸，搅拌均匀，使其pH值降至4.6以下。
3. 沉淀，将酸化后的乳清静置一段时间，观察到白色沉淀物即为酪蛋白。
4. 洗涤，用蒸馏水将沉淀物洗涤数次，去除余酸和杂质。
5. 干燥，将洗涤后的酪蛋白沉淀放置于通风处自然干燥，直至完全干燥。
实验结果，通过上述步骤，我们成功地制备出了酪蛋白的粗品。
经过初步检测，得到的酪蛋白呈现白色粉末状，无异味，初步符合酪蛋白的特征。
实验结论，本实验通过酸化乳清的方法，成功制备出了酪蛋白的粗品，并进行
了初步检测。
制备过程简单，操作方便，得到的酪蛋白粗品可用于后续的纯化和分析。
实验注意事项：
1. 实验过程中需注意安全，避免醋酸溅入眼睛或皮肤。
2. 实验操作需在通风处进行，避免吸入醋酸蒸气。
3. 酪蛋白粗品需储存在干燥通风处，避免潮湿和阳光直射。
通过本次实验，我们成功掌握了酪蛋白的制备方法，并对其纯度进行了初步检测。
这对我们进一步深入了解酪蛋白的性质和应用具有重要意义。
希望本实验能为相关研究和应用提供一定的参考价值。
酪蛋白的制备
酪蛋白的制备目的和要求学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。
原理鲜乳中蛋白质的含量为3.4（W/V）%，但因地因时而异，蛋白质含量夏天最低，而秋冬季高。
牛乳总蛋白的80%为酪蛋白。
实际上酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.6，利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH值调至4.6，酪蛋白就沉淀出来。
酪蛋白不溶于乙醇，利用这个性质用乙醇洗涤沉淀物从酪蛋白粗制品中除去脂类杂质。
仪器与试剂恒温水浴，离心机，精密试纸，布氏漏斗，抽滤瓶，温度计。
鲜牛奶，95%乙醇，无水乙醚，0.2mol/l pH4.6醋酸-醋酸钠缓冲液，乙醇-乙醚混合液（1:1 V:V）操作方法1. 将20ml牛乳放到50毫升烧杯中加热到40℃，在搅拌下慢慢加入预热到40℃的pH4.6的醋酸缓冲液20毫升，用精密pH试纸调pH至4.6；2. 将上述悬浮液冷却至室温，5000转/分离心5分钟，弃去上清液，得酪蛋白粗制品；3. 用无离子水洗涤沉淀3次，5000转/分离心5分钟，弃去上清液；4. 在沉淀中加入20毫升95%乙醇，搅拌片刻，将全部旋浊液转移至布氏漏斗中抽滤。
用乙醇-乙醚混合液洗涤两次，最后用乙醚洗沉淀两次，抽干；5. 将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品；6. 准确称量，计算含量和得率。
含量：酪蛋白g/100毫升牛乳（g%）得率：，式中理论含量为3.4g/100毫升。
酪蛋白含量与季节有关，另外在热处理乳过程中也有一些乳清蛋白沉淀出来，其沉淀量依热处理条件不同而有差异，因此测定出来的酪蛋白值可能要高于相应的实际值或理论值。
醋酸盐缓冲液母液：A：0.2mol/L醋酸液（11.5 ml，稀释至1000ml）B：0.2mol/L醋酸钠溶液（16.4g C2H3O2Na或27.2g C2H3O2Na·3H2O容至1000ml）。
酪蛋白的提取与测定
牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定一、实验目的1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使用4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度二、实验原理1、准备酪蛋白原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。
牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。
酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。
乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水和能力很强，分散性高，在乳中呈高分子状态。
本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。
用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。
2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理：大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。
但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。
3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。
考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。
当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。
在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。
三、实验器材与试剂1、制备酪蛋白：烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚2、紫外光吸收法：紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液3、考马斯亮蓝法：紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿牛血清白蛋白（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl四、实验步骤制备酪蛋白1、将20mL pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液预热至40℃2、将20mL牛奶加热至40℃，在搅拌下缓慢地加入20mL预热的pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3、用精密pH试纸调pH至4.7，可见溶液变为乳白色悬浮液4、待悬浮液冷却至室温，4000rpm离心5min，弃上清，得酪蛋白粗制品5、用蒸馏水洗沉淀3次，3000rpm离心5min，弃上清6、在沉淀中加入20mL95％乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤7、用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次（10ml/次），最后用乙醚洗涤沉淀2次（10ml/次），抽干8、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白纯品9、准确称量，计算含量和得率紫外光吸收法1．取待测样品溶液置于的石英比色皿中，于分光光度计波长280nm和260nm，分别读取A280nm和A260nm，用生理盐水为比色空白对照。
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酪蛋白的制备
实验目的
掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法
学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法
实验原理
牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，它是一
些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7利 用蛋白质在等电点时溶解度最低的性质， 将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出 来，用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质 后便可得到纯化的酪蛋白。
清液
沉淀
95%乙醇4ml洗涤离心， 10000转/分，5分钟(除脂)
清液
沉淀
乙醚 4ml 洗涤离心， 10000 转 / 分，5分钟(脱水)
清液
沉淀 0.1NNaOH2ml 加 水 至10ml
待测
思考题
请问用醋酸缓冲液、蒸馏水、乙醇、丙
酮洗涤沉淀的目的分别是什么？ 最后所得的沉淀中加入0.1N NaOH的作 用是什么？ 制备高产率 酪蛋白的关键是什么？ 请设计另一种提取酪蛋白的方法。
器材
离心机
水浴锅
试剂
牛乳
醋酸钠缓冲液0.2M,PH４.6
乙醇
乙醚 氢氧化钠
牛乳2ml 40℃水浴预热10分钟（HAC缓冲液同时预热）用滴管 加入HAC缓冲液约2ml（PH4.8）离心，10000转/分， 5分钟
清液
沉淀
用 4 m l 蒸 馏 水 洗 涤 离 心 ,10 0 0 0 转 / 分,5分钟(除沉淀中可溶物)
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