实验一微生物培养基的制备与灭菌
实验一微生物培养基的制备与灭菌
实验一微生物培养基的制备与灭菌〔8 课时〕一、目的要求1、学习配制微生物培养基的一般方法和步骤。
2、掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。
二、根本原理正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要根底。
由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异，但一般培养基的配制程序却大致一样，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等根本环节大致一样。
三、实验材料1、药品：牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂粉、1mol/L 的 NaOH和 1mol/L HCl 溶液。
2、仪器及玻璃器皿：电子天平、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、酒精灯、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿和玻璃棒等。
3、其他物品：药匙、称量纸、pH 试纸、记号笔、棉花、报纸、线绳和注射器等。
四、操作步骤〔一〕玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须用洗涤剂洗刷干净，然后用自来水冲净，置于烘箱中烘干后备用。
〔二〕牛肉膏蛋白胨培养基的配制1、培养基配制（1〕称量：按培养基配方计算出各成分的用量，然后用电子天平进展准确称量后倒入一烧杯中。
注意：称量药品时，一定要用称量纸而不能用滤纸。
称药品用的药匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖。
（2〕溶解：用量筒称量所需体积的水〔根据实验需要可用自来水或蒸馏水〕，倒入烧杯中，用玻璃棒搅动溶解即可。
（3〕调 pH：一般用 pH 试纸测定培养基的 pH，可用 1mol/L NaOH或 1mol/L HCl 溶液进展调节。
调节 pH时，应逐滴参加 NaOH或 HCI 溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。
边加边搅拌，并不时用 PH试纸测试，直至到达所需 pH为止。
注意： pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
2、制备液体培养基（1〕用量筒准确量取 20ml 培养基，倒入 100ml 三角瓶中，塞好棉塞，用报纸包好瓶口并用棉线包扎好，灭菌。
微生物工程实验报告
实验1 培养基的配制和灭菌一、目的要求1.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。
2.了解几种灭菌方法，掌握高压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
3.熟悉菌种分离筛选的前期准备工作及操作方法。
4.每2人一组，每人一份实验报告。
二、实验材料1.药品：酵母粉、蛋白胨、氯化钠、琼脂、葡萄糖、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、1N HCl、1N NaOH2.设备：高压蒸汽灭菌锅、紫外线灭菌灯、75%酒精棉。
3.材料：天平、药匙、电炉、pH 试纸、烧杯、量筒、5mL、10mL 注射器、玻璃棒、试管、培养基、吸管、移液器（1mL 0.2mL）、牛皮纸、线绳、标签等。
三、实验内容(一) 培养基的配制1．培养基的配制方法和步骤1)称量：按照配方正确称取所需药品放于烧杯中。
2)溶化：在烧杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。
3)调pH 值：用1N NaOH 或1N HCl 调pH，用pH 试纸对照。
4)加琼脂溶化：加热过程要不断搅拌，可适当补水。
5)分装：注意不要污染试管塞或纱布。
6)包扎成捆：用记号笔注明何种培养基。
7)灭菌：在高压锅中， 115 °C 高温灭菌30min。
2．培养基的配制A.富集培养基（液体）：海水2216E 液体培养基（g/L）：蛋白胨5.0，酵母粉1.0，海水1L，pH 8.0。
取50mL 分装250mL 三角瓶后，8 层纱布封口，外包1层牛皮纸，121℃，高温灭菌20min。
B. 2216E 斜面（固体）：海水2216E 液体培养基中加入2%的琼脂粉，加热溶化琼脂，每支试管内。
加入3mL，121℃高温灭菌20min，灭菌后摆斜面。
C. 无菌生理盐水和保种液：生理盐水： NaCl 0.85% 蒸馏水配制。
每支试管加入5mL，盖上试管帽、包扎、121°C 高温灭菌20min。
保种液：生理盐水，加25%甘油D. 碳源优化培养基：以海水2216E 液体培养基（蛋白胨0.5%，酵母粉0.1%，磷酸铁0.01%，人工海水，pH7.6）为基础，碳源分别是：葡萄糖、蔗糖、甘油、柠檬酸钠、乳糖，每种碳源的添加量为1%。
实验一 培养基的制备消毒灭菌
(2) 装放待灭菌物品：将已包扎好的物品放入内桶。盖上锅盖，以两
两对称方式同时旋紧螺栓，勿使漏气。
(3) 加热排气：接通热源，同时打开排气阀，待见有大量水汽排出时，
维持3---5min，锅内空气排尽，关上排气阀。另外一种排气方法：先将排气 阀关闭，待加热升温内压达到5磅时再打开排气阀，等到压力表指针回到零， 关闭排气阀。
培养基的作用：微生物分离、培养、增殖、保藏及鉴定。
培养基配制原则
◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆
选择适宜的营养物质 营养物质浓度及配比合适 控制pH条件 控制氧化还原电位
原料来源的选择
根据培养目的不同调配
灭菌处理
2 消毒和灭菌的原理
★ 消毒与灭菌是确保 微生物纯培养 （由一个菌体
生长繁殖的群体）的最基本的实验技术。
高 压 蒸 汽 灭 菌 锅
a 方法：一般121℃（1kg/cm2或15磅/英寸2） 20-30min。 b 适用：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。 c 注意事项：灭菌开始排净冷空气；
灭菌终了，自然缓慢降压回零；
灭菌结束，趁热取出物品。
三 实验操作步骤
分组操作：分6组，5人1组。
◆ ◆ ◆
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（第1~2组做，每组600ml） 马铃薯糖琼脂培养基（第3~4组做，400ml） 高氏1号培养基（第5~6组做，200ml）
每组需要做的其它工作
（1）每组包1ml吸管5支（塞棉花）（示范） 。 （2）每组包培养皿2包（每包6个） （示范）。 （3）每组装9ml无菌水5管。 （4）每组装20ml无菌水2瓶（50ml三角瓶，内有玻璃珠）。
（5）装锅灭菌。
高压蒸汽灭菌
(1) 灭菌前的准备：将高压蒸汽灭菌锅的内桶取出，向外锅内加入适
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）n源：包括无机氮和有机氮。
（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。
微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
微生物实验
微生物学实验实验一一、目的要求二、基本原理➢➢➢三、实验材料每组同学需要准备以下材料（2人/组）：●●●●●●●●●●●●●●四、实验内容（一）、培养基的配制：注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。
操作图示：四、实验内容培养基配方：1．配制肉汤斜面培养基50 mL 2．配制麦芽汁斜面培养基3．注意事项：◆◆◆◆（二）培养基灭菌四、实验内容（三）包扎1．培养皿：2．吸管：3．三角玻扒：五、实验报告思考题：◆◆◆◆◆◆◆◆实验二一、目的要求➢➢二、基本原理三、实验材料1．各组所需的物品●●●●2．注意事项：①②①②③④四、实验内容1．微生物的斜面接种技术：斜面接种的操作方法：转下页接种菌名及接种划线方式、接种工具：细菌：霉菌：酵母菌：图2-1 各种无菌操作接种技术示意图图2-2 穿刺接种操作过程示意图2．生物的培养技术——培养箱恒温培养法3. 为下次实验准备平板培养基：注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。
培养基配方：(1)配制肉汤平板培养基100 mL(2)配制麦芽汁平板培养基配制好的培养基进行灭菌！五、实验报告1．观察记录实验结果:微生物琼脂斜面上的生长状况。
2．思考题:◆◆实验三一、目的要求●●二、基本原理三、实验材料1、各组所需物品：•••••2、平板的制备：四、实验内容1. 平板混合分离法：大肠杆菌，枯草杆菌，单球菌（3皿）图3-1 混合倒平板操作法示意图四、实验内容2. 平板划线分离法：（3皿）图3-2 平板划线分离操作法示意图图3-3 平板划线菌落分离效果图四、实验内容3. 平板涂布分离法(3皿)：图3-4 涂布平板操作法示意图四、实验内容4. 平板点殖：黑曲霉，黄曲霉，根霉（3皿）四、实验内容5. 生物的培养技术：培养箱恒温培养法➢➢五、实验报告1、观察记录实验结果：微生物的菌落特征注:菌落特征描写方法参考如下：五、实验报告2、思考题:实验四一、目的要求二、基本原理转下页二、基本原理三、实验材料1. 菌种：2. 每组制片用具：3. 染色剂1套：四、实验内容四、实验内容3.细菌、酵母菌、霉菌的制片技术及个体形态观察：●●●图4-10 涂片制备过程四、实验内容4 注意事项：●●●●。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌一、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
三、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。
微生物实验
①标 本
③ 孔径 光栏
⑤ 光轴中心调节 螺钉
③ 视场 光栏
N.A聚=(0.6-0.8)N.A物
操作步骤如下: (1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水
平是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果可 变光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的 中心孔对准聚光镜下方的透镜中心。
实验一培养基的配置、灭菌与无菌操 作技术
1、明确培养基的配制原则，掌握配制培养基的一般方法 和步骤； 2、掌握玻璃器皿的洗涤和包扎方法，了解玻璃器皿的灭 菌方法和原理； 3、了解几种常用灭菌方法的基本原理及应用范围； 4、掌握高压蒸汽灭菌技术，。
微生物学实验所用的器皿，大多要进行消毒、灭 菌和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包 装方法均有一定的要求。清洁的玻璃器皿是实验 得到正确结果的先决条件，包扎方法要能保证防 止污染杂菌。空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若 用湿热灭菌，则要多用几层报纸包扎。
为什么要将培养基倒置培养？
显微镜概述 微生物的个体微小，必须借助显微镜才能观察到。因
此，显微镜就成为微生物学研究工作者不可缺少的基本工 具。所以，了解显微镜的种类、结构、功能和正确地掌握 不同显微镜的使用方法是很有必要的。
显微镜可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。光学 显微镜有普通光学显微镜、相差显微镜、微分干涉差显微 镜、暗视野显微镜、紫外光显微镜、偏光显微镜和荧光显 微镜。下面主要介绍普通光学显微镜。
一、目的要求 1.学习显微镜的结构、功能和使用方法。 2.学习并掌握油镜的原理和使用方法。 3.学习微生物涂片、染色的操作技术；
4.掌握细菌单染色和革兰氏染色的方法；
5.掌握革兰氏染色反应原理、操作步骤和意义。
《微生物学实验》操作步骤
实验一培养基的制备与灭菌实验步骤：（一）伊红美蓝培养基（EMB，用成品，分离大肠杆菌用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基。
按成品说明称量、放入搪瓷杯，加水，加热完全溶化，倒入三角瓶，塞棉花塞，牛皮纸封口，包扎，作标记（培养基名称、批次组别、日期，下同），灭菌。
（二）营养琼脂培养基（即牛肉膏蛋白胨培养基，用成品，分离芽孢杆菌用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基，方法同上，灭菌。
（三）PDA培养基（即马铃薯蔗糖培养基，分离酵母菌、根霉用）每组1瓶，250 ml三角瓶×200 ml培养基。
培养基配方：马铃薯20%、蔗糖（白砂糖）2%、琼脂 2%，加水至所需体积，pH自然。
配制方法：马铃薯去皮，称量，切成小方块，放入搪瓷杯，加水适量，煮沸20 min，取汁液，补水至所需体积，加入蔗糖（白砂糖），加热溶化，最后加入琼脂（琼脂要预先单独用水浸泡，然后挤干再加入），加热至琼脂完全溶化，分装三角瓶，塞棉花塞，牛皮纸封口，包扎，灭菌。
培养基统一高压蒸汽灭菌（121℃25 min）。
（四）无菌平皿准备（下次实验倒平板用）每组10套，报纸包扎，高压蒸汽灭菌（121℃25 min）后，置干燥箱80℃烘干1 h。
（五）枯草样预处理及预培养（下次实验分离芽孢杆菌用）枯草样预处理：每组1瓶。
100 ml三角瓶＋自来水约50 ml，加5%可溶性淀粉，溶解。
枯草若干，剪短，浸入三角瓶水中，牛皮纸封口，包扎，置水浴中煮沸10 min，然后置培养箱30℃预培养3～7 d。
（六）葡萄样（或其它水果）酵母菌预培养（下次实验分离酵母菌用）每组1瓶。
葡萄（或其它水果）适量，捏碎，皮渣与汁液一起放入250 ml 三角瓶（装量1/2～2/3），封口，置培养箱25℃预培养3～7 d，观察自然发酵过程。
实验二微生物的分离与纯化实验步骤：（一）污水中大肠杆菌的分离（稀释倒平板法）1）用三角瓶取污水样适量。
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实验一微生物培养基的制备与灭菌（8课时）
一、目的要求
1、学习配制微生物培养基的一般方法和步骤。
2、掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。
二、基本原理
正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础。
由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而用于培养微生物的培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异，但一般培养基的配制程序却大致相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。
三、实验材料
1、药品：牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂粉、1mol/L的NaOH和1mol/L HCl溶液。
2、仪器及玻璃器皿：电子天平、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、酒精灯、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿和玻璃棒等。
3、其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、报纸、线绳和注射器等。
四、操作步骤
（一）玻璃器皿的洗涤
玻璃器皿在使用前必须用洗涤剂洗刷干净，然后用自来水冲净，置于烘箱中烘干后备用。
（二）牛肉膏蛋白胨培养基的配制
1、培养基配制
（1）称量：按培养基配方计算出各成分的用量，然后用电子天平进行准确称量后倒入一烧杯中。
注意：称量药品时，一定要用称量纸而不能用滤纸。
称药品用的药匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖。
（2）溶解：用量筒称量所需体积的水（根据实验需要可用自来水或蒸馏水），倒入烧杯中，用玻璃棒搅动溶解即可。
（3）调pH：一般用pH试纸测定培养基的pH，可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl溶液进行调节。
调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。
边加边搅拌，并不时用PH试纸测试，直至达到所需pH为止。
注意：pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
2、制备液体培养基
（1）用量筒准确量取20ml培养基，倒入100ml三角瓶中，塞好棉塞，用报纸包好瓶口并用棉线包扎好，灭菌。
注意：倒溶液时不要把瓶口沾湿。
包扎时不要把瓶子弄倒而把棉塞弄湿。
3、制备固体培养基
（1）平板培养基
A、用量筒准确量取100ml培养基，倒入250ml三角瓶中，加入2g琼脂粉，塞好棉塞，用报纸包好瓶口并用棉线包扎好，灭菌。
B、将洗净烘干的培养皿用报纸包扎好，灭菌。
C、在超净工作台中，将装在三角瓶中已灭菌的琼脂培养基冷至50℃左右倾入无菌培养皿中。
温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于50℃，培养基易于凝固而无法制作平板。
平板的制作应在火旁进行，左手拿培养皿，右手拿三角瓶的底部，左手同时用小指和手掌将棉塞打开，灼烧瓶口，用左手大拇指将培养皿盖打开，倾入10-15ml培养基，迅速盖好皿盖，置于桌上，轻轻旋转平皿，使培养基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。
（2）斜面培养基
A、用量筒量取100ml培养基，倒入一个烧杯中，加入2g琼脂粉，置于石棉网上加热，用玻璃棒搅动溶解至琼脂粉溶解。
B、将洗净烘干的试管放置在试管架上，用注射器将融化琼脂粉的培养基倒入试管至试管高度的1/4处。
注意：不要将试管口弄脏。
C、待培养基冷却凝固后，塞上棉塞，以2支或4支为一组，用报纸将试管口包扎好，灭菌。
D、灭菌后，趁热将试管口端搁在一根长木条上，并调整斜度，便斜面的长度不超过试管总
长的1/2。
10．无菌检查将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h，无菌生长即可使用，或贮存于冰箱或清洁的橱内，备用。
（三）培养基的灭菌
培养基经分装包扎后，应立即按配制方法规定的灭菌条件进行进行高压蒸汽灭菌。
（四）培养基的灭菌检查
灭菌后的培养基，一般需进行无菌检查。
最好取出1-2管（瓶），置于37℃温箱中培养1-2天，确定无菌后方可使用。
五、实验内容
1、根据要求清洗各种玻璃器皿，并进行烘干和包扎。
2、根据要求配制微生物培养基。
3、掌握用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌。
4、掌握液体培养基、平板培养基和斜面培养基的制备。
六、实验报告
1、记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。
2、记录所做培养基的无菌检查结果。
七、实验思考题
1、为什么微生物实验室所用的三角瓶口或试管口都要塞上棉塞才能使用？能否用木塞或棉皮塞代替？
2、配制培养基时为什么要调节pH？
3、高压蒸汽灭菌为什么比干热灭菌要求温度低、时间短？
4、高压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度？为什么？
5、培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌？若不能及时灭菌应如何处理？已灭菌的培养基如何进行无菌检查?
6、请设计实验对饮料进行无菌检查。
附录高压蒸汽灭菌技术
一、目的要求
了解消毒和灭菌的原理，并掌握各种灭菌方法的操作步骤。
二、实验材料
上述配制的培养基，包扎的培养皿、试管，高压蒸汽灭菌锅，注射器，镊子，玻璃涂棒。
三、基本原理
在微生物实验中，需要进行纯培养，不能有任何杂菌污染，因此必须对所用器材、培养基和工作场所进行灭菌和消毒。
灭菌是指杀死一定环境中的所有微生物，包括微生物的
营养体、芽孢和孢子。
实验室常用的灭菌方法包括直接灼烧、恒温干燥箱灭菌、高压蒸汽灭菌、间歇灭菌、煮沸灭菌等方法。
这些方法的基本原理是通过加热使微生物体内蛋白质凝固变性，从而达到灭菌的目的。
四、操作步骤
高压蒸汽灭菌是将物品放在密闭的高压蒸汽灭菌锅内，在一定的压力下保持15-30分钟进行灭菌。
此法适用于培养基、无菌水、工作服等物品的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。
将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅夹套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中排尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，获得高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
在相同的温度下，湿热灭菌的效果好于干热灭菌。
有三点原因：1、在湿热灭菌中菌体吸收水分，蛋白质容易凝固变性，蛋白质随着含水量的增加，所需凝固温度降低；2、湿热灭菌中蒸汽的穿透力比干燥空气大；3、蒸汽在被灭菌物体表面凝结，释放出大量的汽化潜热，能迅速提高灭菌物体表面的温度，从而增加灭菌效力。
实验室常用的灭菌锅有非自控手提式高压蒸汽灭菌锅和自控式灭菌锅，其结构和工作原理是相同的。
本实验介绍的是半自控高压蒸汽灭菌锅，自控式灭菌锅的使用可参考厂家说明书。
具体操作步骤如下：
1、加水：首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面没过加热蛇管，与三角搁架相平为宜。
切勿忘记检查水位，加水量过少，灭菌锅会发生烧干引起炸裂事故。
2、装料：放回内层锅，并装入待灭菌的物品。
注意不要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。
装有培养基的容器放置时要防止液体溢出，三角瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包扎的纸而透入棉塞。
3、加盖：将盖上与排气孔相连的排气软管插入内层锅的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以对称方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气，并打开排气阀。
4、排气：打开电源加热灭菌锅，将水煮沸，使锅内的冷空气和水蒸汽一起从排气孔中排出。
一般认为当排出的气流很强并有嘘声时，表明锅内的空气已排尽，沸腾后约需3分钟。
5、升压：冷空气完全排尽后，关闭排气阀，继续加热，锅内压力开始上升。
6、保压：当压力表指针达到所需压力时，控制电源，开始计时并维持压力至所需的时间。
如本实验中采用0.1Mpa，121.5℃，20分钟灭菌。
注意：灭菌的主要因素是温度而不是压力，因此锅内的冷空气必须完全排尽后，才能关闭排气阀，维持所需压力。
7、降压：达到灭菌所需的时间后，切断电源，让灭菌锅温度自然下降，当压力表的压力降至“0”后，方可打开排气阀，排尽余下的蒸汽，旋松螺栓，打开锅盖，取出灭菌物品。
压力一定要降到“0”后，才能打开排气阀，开盖取物。
否则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基或试剂由于内外压力不平衡而冲出容器口，造成瓶口被污染，甚至灼伤操作者。
8、无菌检查：将已灭菌的培养基放入37℃恒温培养箱培养24h，无杂菌生长后即可使用。