实验二.培养基的配制及灭菌
实验二.培养基的配制及灭菌
实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。
4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。
培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。
为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。
基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。
在配制母液时应注意防止沉淀产生。
绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。
各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。
通常使用的浓度单位是mg/L。
配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。
灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。
培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。
培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。
灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。
（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
培养基配置和灭菌的注意事项
培养基配置和灭菌的注意事项一、培养基配置1.选用适当的培养基组成：根据实验的需要选择适当的培养基成分，包括碳源、氮源、矿质盐、维生素等。
根据不同微生物的要求，可以选择不同的培养基，如富集培养基、选择性培养基等。
2.正确计量和混合培养基成分：根据实验需要和比例，精确地称取和混合培养基成分。
注意避免污染和交叉污染，使用干燥器、称重纸和清洁器具等进行操作。
3.正确调节培养基的pH值：根据不同微生物的偏好，调节培养基的pH值。
使用pH计和相应的酸碱溶液进行调节，确保培养基的pH值符合微生物的需求。
4.加热溶解和固化培养基：将培养基成分加入适量的蒸馏水中，加热搅拌溶解，然后分装到培养皿或试管中。
对于固化培养基，需要加入适量的琼脂或琼脂糖，在混合均匀后加热至溶解，然后分装到培养皿或试管中。
二、培养基灭菌1.选择合适的灭菌方法：有常见的三种灭菌方法，包括热处理（如蒸汽灭菌、热风灭菌）、化学灭菌和滤器灭菌。
根据实验需求和培养基的性质选择合适的灭菌方法。
2.准备合适的灭菌器具：根据实验需求和培养基的量，选择合适的灭菌器具，如蒸馏锅、高压灭菌器、紫外线灭菌箱等。
3.正确操作灭菌设备：根据灭菌设备的说明和操作指南，正确操作和调节灭菌设备。
4.合理选择灭菌时间和温度：根据不同培养基的特性和实验需求，合理选择灭菌时间和温度。
通常情况下，蒸汽灭菌的时间为15-30分钟，温度为121摄氏度；热风灭菌的时间为1-2小时，温度为160摄氏度。
5.注意灭菌后的处理：在灭菌后，及时关闭灭菌设备，避免灭菌后的污染。
将培养基冷却后，进行温度验证，然后保存在合适的温度和条件下。
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）n源：包括无机氮和有机氮。
（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。
微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
实验2培养基制备和灭菌技术_基础生物学实验(安徽大学研究生复试用,生物 生命科学)
实验二培养基制备和灭菌技术一、实验目的1．学习一般培养基的制备方法。
2．掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用的灭菌方法。
二、实验原理（一）培养基培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工的方法配制而成的一种基质。
它是微生物的生活环境，各种微生物对养分和培养基的物理、化学要求条件不一样，为了分离、培养、鉴定、保藏和研究不同种类的微生物，就应当根据它们的需要，配制合适的培养基。
微生物在培养基上生长发育，必须在一定的最适酸碱度范围才能表现出它们最好的生命活动力。
不同的微生物对酸碱度的要求不同，因此，我们在配制培养基时，必须调节培养基的pH值。
培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基。
1．天然培养基:主要成分是复杂的天然有机物质配制而成，如马铃薯、玉米粉、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等，这些复杂天然有机物质的成分不完全了解，每次所用的原料，其中各成分的数量也不恒定的天然有机物质配制成的培养基，如牛肉膏蛋白胨、马铃薯、麦芽汁培养基。
它适用于生产上大规模培养微生物。
2．合成培养基:合成培养基是用化学成分完全了解的纯化合物药品配制而成的培养基，也称化学成分明确的培养基，例如高氏一号培养基、查氏培养基等。
一般适用于在实验室范围内研究微生物的形态、代谢、分类鉴定、生物测定、菌种选育和遗传分析等工作。
3．半合成培养基:在以天然有机物作为微生物营养来源的同时，适当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基叫半合成培养基。
大多数微生物都能在此种培养基上生长，因此，应用广泛，如马铃薯葡萄糖(蔗糖)培养基，大多数霉菌都生长良好。
4．固体培养基:在液体培养基中加入凝固剂即为固体培养基，常用凝固剂有洋菜、明胶、硅胶，硅胶用于配制自养微生物的固体培养基；对于其他多数微生物来讲，洋菜最为合适，一般加入1.5～2.5%即可凝固成固体，如牛肉膏蛋白胨培养基等。
植物组织培养培养基的配制与灭菌
★★★★★实验二植物组织培养培养基的配制与灭菌一、实验目的1.培养基能够提供植物生长、繁殖所必须的各类营养物质，以及生长因子，是开展植物组织培养研究的基础和前提。
植物的种类不同，研究的目的不同，所需要的培养基的种类也各不相同。
2.学习并掌握植物组织常用培养基的组成、配制与灭菌方法。
二、实验用具和药品1. 实验用具：电子天平（1/10、1/1000）、烧杯（100ml、1000ml）、量筒（50ml、100ml）三角瓶或培养瓶、移液管、药匙、玻棒、pH试纸、吸耳球、牛皮纸、皮筋等。
2. 药品：蔗糖、琼脂、0.1mol/L NaOH、 0.1mol/L HCl、各种培养基母液、激素母液三、实验内容与步骤（一）分组配制培养基。
各类培养基组成如下：1. 水琼培养基。
2. MS0培养基。
3. 1/2MS培养基。
4. MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。
5. MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L。
6. MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 2.0mg/L。
7. MS+KT 0.5mg/L+6-BA0.5mg/L。
8. MS+NAA 1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L。
（二）湿热灭菌培养基1.称取规定数量的琼脂，加水到培养基最终容积的3/4，水浴或电炉使之加热溶解。
2.根据配方要求，把按顺序量取的各种母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定容。
3.用0.1mol/L的NaOH或者HCl调pH。
4.分装培养基，包好或盖好，标明编号。
5.121℃(103kPa)灭菌15-20min。
（三）作好植物组织培养的各项准备工作1. 制备无菌水：121℃(103kPa)灭菌40min 。
2. 配制 0.1%HgCl2溶液（放置棕色瓶中）。
3. 准备接种用培养皿、金属器械等用具。
四、注意事项1. 实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。
2. 用电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放置在小烧杯中称量。
实验二 培养基的配制及器材的灭菌
实验二培养基的配制及器材的灭菌（3课时）一、实验目的要求1、进一步学习并熟练培养基的制备的方法、步骤和技术。
2、进一步学习和掌握高压蒸汽灭菌的具体操作方法和技术。
3、为下一次实验做好实验前的准备。
二、原理培养基是人工配制的适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，它是进行科学研究，生产微生物制品及应用等方面的基础。
由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多，要根据培养目的和检测需要不同，选择配制不同的培养基。
从培养基的用途来区分，培养基可分为选择培养基、增殖培养基、鉴别培养基等。
●选择培养基在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长的培养基，称之为选择培养基。
如链霉素、氯霉素等抑制原核微生物的生长；而制霉菌素、灰黄霉素等能抑制真核微生物的生长；结晶紫能抑制革兰氏阳性细菌的生长等。
●增殖培养基在自然界中，不同种的微生物常生活在一起，为了分离我们所需要的微生物，在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物，这种培养基称为增殖培养基，这种培养基常用于菌种筛选和选择增菌中。
在某种程度上讲，增殖培养基也是一种选择培养基。
●鉴别培养基在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助于快速鉴别某种微生物。
这样的培养基称之为鉴别培养基。
例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝培养基就是一种常用的鉴别性培养基。
有些培养基是具有选择和鉴别双重作用。
例如食品检验中常用的麦康凯培养基是一例。
它含有胆盐、乳糖和中性红。
胆盐具有抑制肠道菌以外的细菌的作用（选择性），乳糖和中性红（指示剂）能帮助区别乳糖发酵肠道菌（如大肠杆菌）和不能发酵乳糖的肠道致病菌（如沙门氏菌和志贺氏菌）。
灭菌原理：高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
实验二 MS培养基的配制与灭菌
实验二 MS培养基的配制与灭菌一、实验目的学会配置MS+I mg/L2.4-D+蔗糖 3% + 琼脂 0.8%二、实验原理2,4-D（二氯苯氧乙酸）属生长素的范畴。
在自然界中，生长素可影响到茎和节间的伸长向性顶端优势叶片脱落和生根等现象，在组织培养中，生长素被用于诱导细胞的分裂和根的分化，其中2,4-D（二氯苯氧乙酸）被广泛用于愈伤组织的诱导。
三、实验材料1.实验器械：灭菌锅，电磁炉，三角瓶量筒，酒精灯，镊子，解剖刀，超净工作台， pH，试纸，电子天平等。
2.实验药品：MS母液，蒸馏水， 2,4-D，升汞，乙醇，无菌水等。
四、（一）配置培养基（1L MS培养基的配置）1.瓶塞制作2.盖纸的准备及配置100mg/L（100ml）的2,4-D（二氯苯氧乙酸）3.称取8g/L（0.8%）的琼脂置于不锈钢的锅中，加蒸馏水直到培养基最终容积的3/4，在电炉上加热溶解。
待琼脂溶解后再加30/L(3%)的蔗糖，用玻璃棒搅拌均匀。
4.分别加入一定量的各种贮备液，包括生长调节物质和其他的特殊补加物。
5.加蒸馏水定容。
6.分均匀后，用1.0或0.1mol/LNaOH或HCl调节培养基的pH (5.4~7.0)。
7.把培养基分装到所选用的培养容器中（约25~30mL）。
8.用包在纱布中的棉塞（它不仅能阻止微生物污染，而且还可以使气体自由交换），然后再用牛皮纸套在棉塞上（防止棉塞在高温灭菌时吸湿）。
（二）培养基的灭菌1.把已经装入了培养基的培养容器置于灭菌锅中进行灭菌（在灭菌之前，必须注意水至吃水线，防止烧干，接通电源升温后，首先要排净锅内的冷空气，然后在121℃ 1.06kg/cm2或者0.105MPa的条件下灭菌15至20min）。
2.灭菌结束后，切断电源，让锅内气体自然下降，待压力表指针回到零后，再打开放气阀，排除剩余蒸汽，打开锅盖取出培养基（过早开阀放气会造成锅内气压骤降，引起培养基沸腾外溢）。
（三）最后清理实验室。
实验二、常用培养基的制备、消毒与灭菌
实验二常用培养基的制备、消毒与灭菌一、实验目的1.了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2.学习几种常用培养基的配制、分装和灭菌的操作方法。
3.掌握玻璃器皿的包扎与洗涤。
4.了解常用灭菌方法的基本原理及应用范围，掌握高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、实验原理培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。
一般培养基中应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子等。
在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。
配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将培养基的pH 调到合适的范围。
灭菌是指杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子。
常用灭菌方法很多，一般可分为加热、照射和使用化学药品等方法。
加热灭菌法分为干热灭菌和湿热灭菌两类。
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（160-170℃），时间要长（1-2h），但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸气急剧的将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
三、实验材料蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、琼脂试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、纱布、胶头滴管、全自动灭菌锅四、实验方法与步骤1、玻璃器皿的清洗——注意事项和方法（1）用过的器皿应立即洗涤（2）含有琼脂培养基的器皿可先将培养基刮去，或用水蒸煮，至培养基融化后倒出，然后再用洗洁精清洗。
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实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。
4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。
培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。
为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。
基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。
在配制母液时应注意防止沉淀产生。
绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。
各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。
通常使用的浓度单位是mg/L。
配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。
灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。
培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。
培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。
灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。
（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。
而钙、钠、镁的需要则较少。
培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。
培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。
因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。
蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。
3.维生素在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。
培养基中的维生素属于B族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。
4.有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。
最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。
另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。
5.生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类：(1)植物生长素类。
如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。
(2)细胞分裂素。
如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。
(3)赤霉素。
组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸(GA3)。
（二）、几种常用培养基特点组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。
不同培养基有不同特点，适合于不同的植物种类和接种材料。
开展组织培养活动时，应对各种培养基进行了解和分析，以便能从中选择使用。
下面介绍组织培养几种常用培养基的配方见表9－1。
培养基中的激素种类和数量，随着不同培养阶段和不同材料而有变化，因此各配方中均不列入。
(1) MS培养基：MS培养基是目前普遍使用的培养基。
它有较高的无机盐浓度，对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利。
由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存、消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不致影响离子间的平衡。
MS固体培养基可用来诱导愈伤组织，或用于胚、茎段、茎尖及花药培养，它的液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显成功。
这种培养基中的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。
因此，一般情况下，无须再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。
与其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的明显特点。
(2) B5培养基：B5培养基的主要特点是含有较低的铵，这是因为铵可能对不少培养物的生长有抑制作用。
经过试验发现，有些植物的愈伤组织和悬浮培养物在MS培养基上生长得比B5培养基上要好，而另一些植物，在B5培养基上更适宜。
（3） White培养基1943年由White设计，1963年做了改良，是一个无机盐类浓度较低的培养基。
其使用也很广泛，特别适合生根培养和幼胚培养。
(4)SH培养基1972年由Schenk和Hidebrandt设计，主要特点与B5相似，不用（NH4）2SO4，而改用NH4H2PO4，无机盐浓度较高的培养基。
在不少单子叶和双子叶植物上使用效果好。
(5) N6培养基：N6培养基特别适合于禾谷类植物的花药和花粉培养，在国内外得到广泛应用。
在组织培养中，经常采用的还有怀特(While，1963)培养基、尼许(Nitsch，1951)培养基等。
它们在基本成分上大同小异。
怀特培养基由于无机盐的数量比较低，更适合木本植物的组织培养。
三、实验材料：1.MS培养基母液、植物生长调节剂母液、蔗糖、琼脂、蒸馏水、0.1mol/L NaOH 、0.1mol/LHCL。
2.仪器与用具：天平（电子天平和粗天平）、酸度计或精密pH试纸、水浴锅、电磁炉、高压蒸汽灭菌器、量筒、胶头滴管、移液管及移液管架、吸耳球、烧杯、培养瓶、铝锅、分装器、标签纸或记号笔、剪刀、镊子等。
四、实验步骤（一）、培养液的配制1.制备母液为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。
这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。
现将培养液中各类物质制备母液的方法说明如下。
(1) 大量元素。
大量元素包括硝酸铵等用量较大的几种化合物。
制备时，按表中排列的顺序，以其10倍的用量，分别称出并进行溶解，以后按顺序混在一起，最后加蒸馏水，使其总量达到1升，此即大量元素母液。
(2) 微量元素。
因用量少，为称量方便和精确起见，应配成100倍或1000倍的母液。
配制时，每种化合物的量加大100倍或1000倍，逐次溶解并混在一起，制成微量元素母液。
(3) 铁盐。
铁盐要单独配制。
由硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)5.57克和乙二胺四乙酸二钠(Na—EDTA)7.45克溶于1升水中配成。
每配1升培养基，加铁盐5毫升。
(4) 有机物质。
主要指氨基酸和维生素类物质。
它们都是分别称量，分别配成所需的浓度(0.1～1.0毫克/毫升)，用时按培养基配方中要求的量分别加入。
(5) 植物激素。
最常用的有生长素和细胞分裂素。
这类物质使用浓度很低，一般为0.01～10毫克/升。
可按用量的100倍或1000倍配制母液，配制时要单个称量，分别贮藏。
配制植物生长素时，应先按要求浓度称好药品，置于小烧杯或容量瓶中，用1～2毫升0.1N(克当量浓度)氢氧化钠溶解，再加蒸馏水稀释至所需浓度。
配制细胞分裂素时，应先用少量0.5或1N的盐酸溶解，然后加蒸馏水至所需量。
以上各种混合液(母液)或单独配制药品，均应放入冰箱中保存，以免变质、长霉。
至于蔗糖、琼脂等，可按配方中要求，随称随用。
试剂配方：1、大量元素(母液Ⅰ) mg／LNH4NO3 16500KNO3 19000CaCl2·2H2O 4400MgSO4·7H2O 3700KH2PO4 17002、微量元素(母液Ⅱ)KI 83H3BO3 620MnSO4·4H2O 2230ZnSO4·7H2O 860Na2MoO4·2H2O 25CuSO4·5H2O 2.5CoCl2·6H2O 2.53、铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 2780Na2-EDTA·2H2O 37304、有机成分(母液Ⅳ)肌醇10000烟酸50盐酸吡哆醇(维生素B6) 50盐酸硫胺素(维生素B1) 10甘氨酸200注意：以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。
母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。
母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。
各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。
MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）、萘乙酸（NAA）、6 苄基嘌呤（6-BA）等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0.1 mg/mL)。
其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液。
配制培养液：用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为50 mL，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL。
再取2，4-D 5 mL、NAA 1 mL，与各种母液一起放入烧杯中。
2.配制培养基的具体操作(1)、根据配方要求，用量筒或移液管从每种母液中分别取出所需的用量，放入同一烧杯中，并用粗天平称取蔗糖、琼脂放在一边备用；(2)、将①中称好的琼脂加蒸馏水300～400毫升，加热并不断搅拌，直至煮沸溶解呈透明状，再停止加热；(3)、将①中所取的各种物质(包括蔗糖)，加入煮好的琼脂中，再加水至1000毫升，搅拌均匀，配成培养基；(4)、用1N的氢氧化钠或盐酸，滴入③中的培养基里，每次只滴几滴，滴后搅拌均匀，并用pH试纸测其pH值，直到将培养基的pH值调到5.8；(5)、将配好的培养基，用漏斗分装到三角瓶(或试管)中，并用棉塞塞紧瓶口，瓶壁写上号码。