生物化学实验四 酪蛋白的制备

实验四酪蛋白的制备

一、目的要求

学习和掌握从牛乳中制备蛋白的原理和方法；掌握等电点沉淀法提取蛋白质的原理和方法；掌握离心方法。

二、实验原理

牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。

三、材料、器材与试剂

1〉材料

鲜牛奶。

2〉器材

离心机、抽滤装置、精密pH试纸、电炉、烧杯、温度计、玻棒、漏斗、滤纸、滴管。3〉试剂

(1) 95%乙醇。

(2) 无水乙醚。

(3) 0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液。

A液：0.2mol/L醋酸钠溶液，称取CH3COON a·3H2O 54.44g，用蒸馏水定容至2000ml。

B液：0.2mol/L醋酸溶液，称取优级纯醋酸(含量大于99.8%)24.0g，定容至2000ml。

取A液1770ml，B液1230ml混合即可得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。

(4)乙醇-乙醚混合液的配制：乙醇-乙醚=1:1(体积分数)。

四、实验步骤

(1)将20ml牛奶加热至40°C，在搅拌下慢慢加入预热至40°C、pH4.7的醋酸缓冲液20ml。用精密pH试纸调pH至4.7，将上述悬浮液冷却至室温，离心15min(3000r/min)，弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。

(2)用水洗1次，离心10min，弃去上清液。

(3)在沉淀中加30ml乙醇，搅拌片刻，将全部悬浮液转移至布氏漏斗中离心10min，弃上清液，用乙醇-乙醚混合液洗1次。最后用乙醚洗沉淀1次，抽干或滤纸过滤得到湿的酪蛋白。

(4)将沉淀摊开，风干；得到酪蛋白纯品。

五、结果及处理

准确称重，得20ml牛乳中酪蛋白含量(g)，按下式计算酪蛋白的得率：

测得含量

得率(%)= 理论含量×100

式中，理论含量为3.5g/100ml牛乳。

实验结果：

(1.426-0.795) ×5

得率(%)= 3.5 ×100=90.14%