免疫荧光检测
免疫荧光检测肺组织步骤
免疫荧光检测肺组织步骤
嘿，朋友们！今天咱就来讲讲免疫荧光检测肺组织的那些事儿。
这可真是个有趣又重要的过程呢！
先来说说准备工作吧，就好比要去打仗，咱得先把武器弹药准备好不是？得把肺组织准备得妥妥当当的呀，这可是关键的第一步呢。
然后呢，就是选择合适的抗体啦，这抗体就像是我们的小助手，得找对了才能发挥大作用呀！
接下来，就到了染色这一步啦！这就好像给肺组织化个美美的妆一样。
把抗体和荧光染料结合起来，小心翼翼地让它们和肺组织来个亲密接触。
这过程可得仔细着点，可别马马虎虎的哟！
染好色啦，下面就得去观察啦！把肺组织放在显微镜下，哇哦，就好像进入了一个奇妙的微观世界。
你能看到那些漂亮的荧光信号，就像夜空中闪烁的星星一样。
你说神奇不神奇？
哎呀，你想想看，如果这一步没做好，那不就像走在黑夜里没有手电筒一样嘛，啥都看不清呀！所以每一步都得认认真真的呢。
在整个过程中，要保持耐心哦，可不能着急忙慌的。
就跟做饭似的，火急火燎的可做不出美味佳肴来。
得慢慢来，才能做出漂亮的结果呀。
而且呀，操作的时候要轻手轻脚的，别把肺组织给弄伤了呀。
这可都是宝贝呢，得好好对待它们。
总之呢，免疫荧光检测肺组织可不是一件简单的事儿，但只要咱认真对待，一步一个脚印地去做，肯定能得到满意的结果呀！大家可都要加油哦，让我们一起在这个微观世界里探索出更多的奥秘吧！。
免疫荧光检测实验步骤
免疫荧光检测实验步骤
嘿，朋友们！今天咱来聊聊免疫荧光检测实验步骤，这可真是个有
趣又重要的事儿呢！
首先，得准备好你的样本，就像厨师要准备好食材一样。
这样本可
得精心挑选，不然可就像做菜没选好材料，味道会大打折扣哦！
然后就是固定啦，把样本固定住，让它乖乖待在那儿，别乱跑。
这
就好比给它施了个魔法，让它安安稳稳的。
接下来就是通透啦，让那些抗体啊啥的能更容易地进入样本里面。
这就好像给样本打开了一扇门，让好东西能进去。
然后就该洗一洗啦，把那些不需要的东西洗掉，就像给屋子打扫卫
生一样，把垃圾都清理掉。
接着就是孵育抗体啦，这可是关键步骤呢！把合适的抗体放进去，
让它们和样本好好结合。
这就像是给样本穿上了一件特别的衣服，让
它变得不一样。
孵育完了还得再洗一洗哦，把没结合上的抗体洗掉，留下有用的。
之后就是加二抗啦，二抗就像个小助手，能帮我们更好地看到结果。
再洗一洗，把多余的二抗洗掉。
最后就是观察啦！哇，想象一下，你就像个探险家，要去发现样本里的秘密。
看看那些漂亮的荧光信号，是不是感觉特别神奇？就像在黑暗中突然看到了闪闪发光的宝藏一样！
做免疫荧光检测实验可不能马虎哦，每一步都要认真对待，就像走钢丝一样，要小心翼翼的。
要是哪一步出了差错，那结果可能就不那么准确啦！所以啊，大家一定要仔细仔细再仔细呀！这实验就像是一场冒险，充满了未知和挑战，但也有着无尽的乐趣和惊喜。
只要我们认真去做，肯定能得到满意的结果，就像努力付出后一定会有收获一样！怎么样，是不是对免疫荧光检测实验步骤有了更清楚的认识啦？赶紧去试试吧！。
免疫荧光实验步骤大全
免疫荧光实验步骤大全免疫荧光实验是一种常见的实验技术，用于检测特定抗原和抗体的相互作用。
本文将介绍免疫荧光实验的详细步骤，以供参考。
实验材料准备：- 试验样本（包括细胞或组织）- 抗原或抗体- 包含荧光素的二抗- PBS缓冲液- 荧光显微镜- 封片胶实验步骤：1. 样本制备- 如果是细胞样本，在培养皿中培养并观察细胞的形态和生长状态。
- 如果是组织样本，将组织切片并进行固定，然后反复用PBS缓冲液进行洗涤。
2. 抗原或抗体的固定- 将样本固定在载玻片上，可以使用正硫酸盐和乙醇来进行固定。
- 固定后用PBS缓冲液进行洗涤，以去除多余的固定试剂。
3. 孵育抗原或抗体- 在固定后的样本上加入适量的抗原、抗体或荧光素标记的二抗。
- 在室温下或4摄氏度下孵育一定的时间，以实现抗原和抗体的特异结合。
4. 洗涤- 使用PBS缓冲液洗涤固定后的样本，可多次洗涤以去除非特异性结合。
5. 荧光显微镜观察- 将载玻片放置在荧光显微镜上，调整荧光滤镜组合以观察荧光信号。
- 使用合适的放大倍率观察细胞或组织中特定的抗原或抗体信号。
6. 影像采集与分析- 使用相机或图像采集系统记录荧光显微镜观察到的图像。
- 使用图像分析软件对图像进行处理和分析，如测量荧光强度、定量特定抗原或抗体的表达水平等。
7. 结果和讨论- 分析实验结果，比较不同样本之间的差异。
- 讨论实验结果与研究假设的一致性，并可进行进一步的实验验证。
8. 结论- 总结实验结果，并得出相应的结论。
- 可以进一步讨论实验结果在相关领域的应用和意义。
9. 实验清理- 定期清洗和消毒实验室工作区域和仪器设备，以确保实验环境的卫生和安全。
以上是免疫荧光实验的基本步骤，每一步都需要仔细操作和控制实验条件。
在实验过程中，要注意遵守实验室安全操作规范，确保自己和他人的安全。
希望本文对您的科研工作有所帮助！。
免疫荧光层析法 化学发光
免疫荧光层析法化学发光免疫荧光层析法（Immunofluorescence Assay，简称IFA）和化学发光（Chemiluminescence）是两种常用的检测技术，广泛应用于生物医学研究、临床诊断和生物工程等领域。
本文将介绍这两种技术的原理、步骤和应用，以及它们之间的区别和优缺点。
免疫荧光层析法是一种利用抗体与特定抗原结合后可发出荧光信号的检测方法。
它的原理是将标记有荧光染料（如荧光素）的抗体与待检样品中的目标抗原结合，形成免疫复合物。
通过荧光显微镜观察，可以检测到目标抗原的存在与否。
这种方法具有高灵敏度、高特异性和无需放射性标记物的优点，被广泛应用于病原微生物的检测、抗体的定量和细胞蛋白的定位等研究领域。
化学发光是一种利用化学反应产生的光信号来检测目标物质的方法。
它的原理是将待检样品中的目标物与标记有化学发光底物的抗体结合，形成免疫复合物。
当加入特定的激发剂后，底物会发生化学反应，产生可见的光信号。
通过光电倍增管或摄像机的检测，可以定量地测量化学发光强度，从而判断目标物的含量。
化学发光方法具有高灵敏度、宽线性范围和较低的背景信号等优点，因此在临床诊断和生物工程领域得到广泛应用。
免疫荧光层析法和化学发光在实验步骤上存在一些差异。
免疫荧光层析法的步骤包括样品制备、抗体标记、免疫反应、洗涤和显微镜观察等。
而化学发光的步骤则包括样品制备、抗体标记、免疫反应、洗涤和化学反应等。
两种方法的原理都是基于抗体与抗原的特异性结合，但在标记物和检测信号的产生上有所不同。
免疫荧光层析法和化学发光在应用上也存在一些差异。
免疫荧光层析法常用于检测细胞表面标记物、病原微生物和抗体等，广泛应用于免疫学研究和临床诊断。
而化学发光常用于检测肿瘤标志物、药物残留和基因表达等，被广泛应用于药物研发和生物工程领域。
两种方法在不同领域有着各自的优势和适用范围。
总的来说，免疫荧光层析法和化学发光是两种常用的生物分析技术，具有高灵敏度、高特异性和广泛应用的特点。
免疫学检验
免疫学检验概述免疫学检验是一种通过检测人体免疫系统的功能和状态来评估健康状况的方法。
免疫学检验主要用于检测和诊断免疫相关疾病、监测免疫治疗效果和评估免疫功能。
在免疫学检验中，通常使用抗体和抗原相互作用的原理进行检测。
抗体是一种由免疫系统产生的特异性蛋白质，可以与抗原结合，形成免疫复合物。
通过检测免疫复合物的形成和浓度变化，可以获得相关信息和数据来评估免疫系统的功能和状态。
常见的免疫学检验方法免疫荧光检测免疫荧光检测是一种常用的免疫学检验方法。
它利用荧光标记的抗体与目标分子（如抗原、细胞表面分子等）发生特异性结合，然后使用荧光显微镜观察荧光信号的强度和分布情况。
免疫荧光检测具有高灵敏度和特异性的优势，可以用于检测抗体、抗原和免疫细胞的分布和表达情况。
在临床诊断中，免疫荧光检测常用于检测自身抗体、病毒抗体和细胞免疫功能等方面。
免疫酶联免疫吸附试验（ELISA）免疫酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常见的免疫学检验方法。
它基于酶标记的抗体与抗原特异性结合的原理，利用酶催化的反应产生可测量的信号。
ELISA具有高精确性和灵敏度的特点，可用于检测抗体、抗原和细胞因子的浓度。
在临床检验中，ELISA常用于检测病毒感染、风湿性疾病和免疫调节等方面。
流式细胞术流式细胞术是一种免疫学检验方法，可以同时检测和分析多种免疫细胞类型和功能的改变。
它基于细胞表面标志物的特异性结合和荧光标记的抗体的检测，通过流式细胞仪实现高通量的细胞检测和分析。
流式细胞术广泛应用于免疫学研究和临床诊断中。
它可以用于检测细胞表面分子的表达情况、分析细胞亚群的比例和功能状态，并可进行细胞分选和细胞功能实验等。
免疫学检验的临床应用免疫学检验在临床诊断和治疗中具有重要的应用价值。
它可以用于检测和诊断多种免疫相关疾病，如自身免疫病、感染性疾病和免疫缺陷病等。
在自身免疫病的诊断中，免疫学检验可以检测自身抗体的产生和水平变化，帮助确定疾病类型和活动度。
免疫荧光检测技术的原理及应用
免疫荧光检测技术的原理及应用原理介绍免疫荧光检测技术是一种基于免疫反应原理的检测方法。
其原理是通过将待检样品中的目标物与荧光标记的抗体结合，然后通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测。
免疫荧光检测技术能够高度灵敏地检测目标物，并且具有多样性、高通量性和高特异性的特点。
应用领域免疫荧光检测技术在许多领域中得到了广泛的应用。
1. 生命科学研究在生命科学研究中，免疫荧光检测技术被广泛应用于蛋白质定位、分析和定量。
通过将荧光标记的抗体与目标蛋白结合，可以在细胞或组织中精确定位目标蛋白，进一步研究其功能和作用机制。
此外，免疫荧光检测技术还可以用于检测细胞的分化状态、凋亡过程等。
2. 医学诊断免疫荧光检测技术在医学诊断中扮演着重要角色。
通过利用荧光标记的抗体与病原微生物或异常细胞结合，可以准确检测出有关疾病的相关指标。
例如，在临床诊断中，免疫荧光检测技术可以用于检测乙型肝炎病毒、艾滋病病毒等病原体，以及癌症标志物等。
3. 农业与食品安全监测免疫荧光检测技术在农业和食品安全监测中具有重要应用。
通过将荧光标记的抗体与农作物病原体、有害微生物或食品中的污染物结合，可以快速、高效地检测出潜在的食品安全风险。
这项技术对于保护农业生产和食品安全具有重要意义。
4. 环境监测免疫荧光检测技术可以应用于环境监测，用于检测空气、水、土壤等环境中的有害物质。
通过将荧光标记的抗体与目标分子结合，可以实现对污染物的高灵敏度和高特异性的检测，为环境保护和污染治理提供有力支持。
免疫荧光检测技术的优势免疫荧光检测技术具有以下优势：•高灵敏度：荧光标记的抗体可以非常灵敏地检测到目标物，具有较低的检测限度。
•高特异性：与其他方法相比，免疫荧光检测技术具有较高的特异性，可以准确识别目标物。
•多样性：免疫荧光检测技术可以用于多种类型的目标物检测，包括蛋白质、细胞、病原体等。
•高通量性：免疫荧光检测技术可以通过自动化设备实现高通量的检测，提高工作效率。
免疫荧光步骤
免疫荧光步骤免疫荧光就是利用特异性抗原与抗体相互结合的特性，通过标记抗原或抗体上荧光物质的方法，来检测和定位抗原或抗体在生物样本中的存在和分布情况。
免疫荧光技术已被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物开发等领域。
下面是免疫荧光的步骤：步骤一：制备标本免疫荧光的首要步骤是制备待检测的标本。
这可能涉及从活体中采集组织样本（如活检），或者培养细胞，并在适当的时间点收集细胞。
步骤二：固定标本固定是将标本固定在载玻片或离心管中的过程。
通常使用化学固定剂（如甲醛或乙醇）或特定的固定和渗透缓冲液来保持标本的形态完整性，并防止标本中的抗原或抗体被破坏或丢失。
步骤三：透化标本透化是为了使荧光染料能够渗透到被固定的细胞或组织中。
这可以通过使用洗涤剂（如Tween-20）或透明质酸酶等物质来达到。
透化可以提高荧光染料与标本中抗原或抗体的结合能力，从而提高免疫反应的灵敏度。
步骤四：抗体染色免疫荧光需要使用特异性抗体来标记待测的抗原。
在此步骤中，将特定的抗体与标本中的抗原结合。
有两种常用的方法可以实现这一步骤：1.原位染色：将标本与抗体混合，并在恰当的条件下孵育。
抗体将与标本中的抗原结合，形成抗原-抗体复合物。
这种方法可以用于检测细胞表面的分子或组织切片中的特定分子。
2.间接染色：在原位染色的基础上，引入第二抗体（标记抗体）。
标记抗体是与染料结合的抗体，通常是荧光染料。
该标记抗体与形成的抗原-抗体复合物结合，并形成二抗-抗原-抗体复合物。
步骤五：荧光显微镜观察完成抗体染色后，可以使用荧光显微镜来观察标本中荧光信号的存在和位置。
荧光显微镜配备有特殊的滤光片（荧光滤光片），可以选择性地捕捉特定荧光染料发出的荧光信号。
步骤六：图像捕获和分析使用相机或图像捕捉系统来记录荧光显微镜下观察到的图像。
这些图像可以进一步通过图像分析软件进行定量分析和图像处理，以评估抗原或抗体在标本中的分布和表达水平。
免疫荧光技术可以提供高灵敏度和高空间分辨率的分子生物学信息，并被广泛应用于癌症诊断、抗体研究、细胞成像和组织学研究等领域。
免疫荧光检测
免疫荧光技术（检测抗核抗体（ANA)的实验方案）荧光免疫技术是以荧光物质标记的特异性抗体或抗原作为标准试剂，用于相应抗原或抗体的分析鉴定和定量测定。
荧光免疫技术包括荧光抗体染色技术和荧光免疫测定两大类。
荧光抗体染色技术是用荧光抗体对细胞、组织切片或其他标本中的抗原或抗体进行鉴定和定位检测，可在荧光显微镜下直接观察结果，称为荧光免疫显微技术，或是应用流式细胞仪进行自动分析检测,称为流式荧光免疫技术。
荧光免疫测定主要有时间分辨荧光免疫测定和荧光偏振免疫测定等。
本次实验以荧光免疫显微技术检测抗核抗体（ANA)为例进行实习。
抗核抗体（antinuclear antibody，ANA)又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白（DNP)、DNA、可提取的核抗原(ENA)和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称,能与所有动物的细胞核发生反应，主要存在于血清中，也可存在于胸水、关节滑膜液和尿液中。
抗核抗体实验原理以小鼠肝细胞或某些培养细胞（如Hep—2)作抗原片，将病人血清加到抗原片上.如果血清中含有ANA，就会与细胞核成分特异性结合。
加入荧光素标记的抗人IgG抗体又可与ANA结合，在荧光显微镜下可见细胞核部位呈现荧光.试剂与器材1．抗原片现多用商品试剂.如需自行制备，方法如下：（1)肝印片制备：取4-8周龄小鼠，断颈杀死后，剖腹取肝。
将肝脏剪成平面块，用生理盐水洗去血细胞，用滤纸吸干渗出的浆液。
将切面轻压于载玻片上，使其在载玻片上留下薄层肝细胞.冷风吹干，乙醇固定，冰箱可保存1周。
(2）Hep—2细胞抗原片制备:Hep-2细胞是建株的人喉癌上皮细胞。
经适宜培养在载玻片上形成单层细胞抗原片,用洗涤洗去培养基.干燥后，用无水乙醇固定。
(3)肝切片制备：取小鼠肝组织作冰冻切片，厚4μl.-30℃保存备用。
2．异硫氰酸荧光素（FITC)标记的抗人IgG抗体（FITC—抗人IgG抗体)有商品供应，临用时按效价稀释。
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免疫荧光技术（检测抗核抗体（ANA）的实验方案）荧光免疫技术是以荧光物质标记的特异性抗体或抗原作为标准试剂，用于相应抗原或抗体的分析鉴定和定量测定。
荧光免疫技术包括荧光抗体染色技术和荧光免疫测定两大类。
荧光抗体染色技术是用荧光抗体对细胞、组织切片或其他标本中的抗原或抗体进行鉴定和定位检测，可在荧光显微镜下直接观察结果，称为荧光免疫显微技术，或是应用流式细胞仪进行自动分析检测，称为流式荧光免疫技术。
荧光免疫测定主要有时间分辨荧光免疫测定和荧光偏振免疫测定等。
本次实验以荧光免疫显微技术检测抗核抗体(ANA)为例进行实习。
抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、可提取的核抗原(ENA)和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称，能与所有动物的细胞核发生反应，主要存在于血清中，也可存在于胸水、关节滑膜液和尿液中。
抗核抗体实验原理以小鼠肝细胞或某些培养细胞(如Hep-2)作抗原片，将病人血清加到抗原片上。
如果血清中含有ANA，就会与细胞核成分特异性结合。
加入荧光素标记的抗人IgG抗体又可与ANA结合，在荧光显微镜下可见细胞核部位呈现荧光。
试剂与器材1．抗原片现多用商品试剂。
如需自行制备，方法如下：(1)肝印片制备：取4-8周龄小鼠，断颈杀死后，剖腹取肝。
将肝脏剪成平面块，用生理盐水洗去血细胞，用滤纸吸干渗出的浆液。
将切面轻压于载玻片上，使其在载玻片上留下薄层肝细胞。
冷风吹干，乙醇固定，冰箱可保存1周。
(2)Hep-2细胞抗原片制备：Hep-2细胞是建株的人喉癌上皮细胞。
经适宜培养在载玻片上形成单层细胞抗原片，用洗涤洗去培养基。
干燥后，用无水乙醇固定。
(3)肝切片制备：取小鼠肝组织作冰冻切片，厚4μl。
-30℃保存备用。
2．异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗人IgG抗体(FITC-抗人IgG抗体)有商品供应，临用时按效价稀释。
3．0.01mol/L pH7.2 PBS4．缓冲甘油取甘油9份加PBS 1份。
5.待测血清、阳性和阴性对照血清临床标本筛选获得。
6．器材荧光显微镜、孵箱、有盖湿盒、染色缸、吸管、试管等操作方法1．准备：检查加样板，生物载片恢复室温，标记。
2．稀释：PBS-Tween缓冲液稀释血清，设阴阳性对照。
3．加样：加样板放于泡沫塑料板上，加25μl稀释后血清，至加样板的每一反应区，避免气泡。
加完所有标本后开始温育。
4．温育：将生物薄片盖于加样板的凹槽里，反应开始，室温温育30分钟。
5．冲洗：用烧杯盛PBS-Tween缓冲液流水冲洗生物薄片，然后立即将其浸入盛有PBS-Tween缓冲液的小杯中至少1分钟。
不必混摇。
6．加样：滴加20μl荧光素标记的抗人球蛋白（结合物）至一洁净加样板的反应区，完全加完方可继续温育。
荧光素标记的抗人球蛋白用前需混匀并以PBS-Tween缓冲液稀释。
7．冲洗：用烧杯盛PBS-Tween缓冲液流水冲洗生物薄片，然后立即将其浸入盛有PBS-Tween缓冲液的小杯中至少1分钟。
不必混摇。
8．封片：将盖片直接放于泡沫塑料板凹槽中，滴加甘油/PBS至盖片：每反应区约10μl。
从PBS-Tween缓冲液中取出1张生物薄片，用纸擦干背面和四边。
还要擦拭反应区间隙。
将生物薄片面朝下放在已准备好的盖玻片上，立即查看并调整使盖片嵌入载片的凹槽中。
然后继续下1张。
结果判定荧光显微镜下观察1．细胞核发黄绿色荧光为阳性染色细胞，不发荧光为阴性。
抗原片中出现阳性染色细胞为ANA阳性，否则为阴性。
阳性待检血清可作进一步稀释后测定效价。
2．根据细胞核着染色荧光的图像，可区分为：①均质型：细胞核呈均匀一致的荧光；②周边型(核膜型)：细胞核周围呈现荧光；③斑点型(颗粒型)：细胞核内呈现斑点状荧光；④核仁型：核仁部分呈现荧光。
⑤混合型：两种以上核染色；⑥应用细胞片做抗原片可检出着点型(ACA)注意事项1．PBS-Tween缓冲液在4℃下可存放两周。
2．根据每次实验的标本量决定需要稀释的FITC标记的抗人球蛋白的量，稀释后可在4℃下可存放1周。
3．血清或FITC标记的抗人Ig应滴加至加样板上，不能直接滴到载片上。
4．载片盖到加样板上后，确保反应区与液滴完全接触后，才开始记时温育。
5．冲洗载片时水流要缓慢，以免冲洗掉基质。
载片上的反应区应保持湿润，不要将载片风干。
6．封片进不可用力挤压盖玻片，以免损坏基质。
可左右挪动盖玻片以使其正确嵌入载片凹槽里。
7．封片介质含有荧光稳定剂，应保存在2-8℃。
封好的载片可于4℃长期保存。
实验讨论方法评价间接免疫荧光技术是检测ANA最常用的方法。
该方法简便、敏感，且可根据核染色形态确定核抗原的类型。
鼠肝印片细胞分布不均匀，多有重叠，冲洗时易丢失。
Hep-2细胞具有核大、有丝分裂旺盛、核内细胞器较明显、具备人源性抗原的特征，对诊断和鉴别不同类型的自身免疫病十分有利。
检测抗核抗体(ANA）的实验方案ANA简介抗核抗体（antinuclear antibodies，ANAs）经典定义：针对细胞核成分的一大组抗体谱。
抗核抗体新概念（FANA）传统定义：顾名思义是指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称® 狭义定义现代定义：是指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。
对ANA的理解已不再局限于核成分，而是指抗核酸(nucleic acid)和核蛋白（nucleoprotein)抗体的总称® 广义定义靶抗原分布：细胞核细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期抗核抗体检测方法检测细胞内抗原自身抗体“金标准”－IIFANA检测方法进展：仅限于IIF改良法（底物选择、制备方法）试图将ELISA发推广为最基本的筛选方法未获成功复制细胞抗原全部成分极其困难® 抗原存在的相对浓度、自然抗原决定簇的二级结构及高级结构荧光染色模型可初步判断相应抗体性质范围或确定抗体特异性IIF 法：HEp-2细胞底物（90%以上实验室采用）# 完整的ANAs抗原谱（细胞核、浆、骨架、周期）# 可预测分析ANA靶抗原范围# 经验性强ELISA法：采用高度纯化抗原或全细胞抗原# 抗原谱有限（十余种）# 假阴性结果# 操作简单快速其他方法：金标法、比浊法ANA靶抗原多核苷酸：双链DNA、单链DNA、RNA组蛋白：H1，H2A，H2B，H3，H4，H2A-H2B复合物核浆的核糖核蛋白:U1-nRNP、Sm、SS-A(Ro)、SS-B(La)、Ku、 Mi-1、Mi-2、核点、增殖性细胞核抗原…核仁抗原：Scl-70、U3-nRNP/原纤维蛋白、RNA多聚酶I、PM-Scl(PM-1)、7-2-RNP(To)、4-6-S-RNA、核仁形成中心（NOR）…核膜抗原：板层素（层粘连蛋白）着丝点：着丝点蛋白……ANA检出率与年龄和性别有关与个体的免疫稳定性相关使用足够敏感的方法，每个人都可检测出一些ANA。
_________天然ANA_________生理性自身免疫维持机体内环境的生理稳定。
滴度较低，亲和力弱，大多为IgM型。
ANA检测方法初筛抗核抗体：IIF最佳基质：联合生物薄片(HEp-2 细胞/猴肝冰冻组织)区分抗核抗体的靶抗原：ELISA、印迹法和免疫印迹法ANA初筛IFT：HEp-2细胞/灵长类肝脏完整的抗原谱（细胞核及细胞浆）可预测靶抗原协助检测其它项目（如 ANCA、ENA）ELISA：采用高度纯化的抗原初筛ANA抗原谱有限操作简单快速采用滴定平板技术进行间接免疫荧光实验为了使实验操作标准化，欧蒙开发了滴定平板技术? :滴加标本或标记抗体至加样板的反应区，然后将生物薄片载片盖在加样板表面的凹槽里，这时，载片上的所有生物薄片均与液滴接触，反应同时开始。
系统的几何结构决定了液滴的位置和高度。
因为液体被局限在一封闭的空间里，所以不再需要传统的“湿盒”。
并且可在一致的反应条件下同时温育任何数量的标本。
准备：检查加样板是否反应区亲水而周边疏水？如果不是，可用湿纸巾擦拭，必要时可使用家用洗涤剂或Extran MA 01（默克公司），再用水彻底冲洗。
需要消毒时，可于3％的Sekusept Extra （汉高公司）中浸泡1小时。
只有当载片平衡到室温后方可打开袋子。
不要触及生物薄片。
按照要求用记号笔对玻片进行标记。
稀释：按照试剂盒使用说明稀释血清标本。
每次实验均需加入阳性和阴性对照。
对照血清使用前必须混匀。
加样：在加样板的每个反应区加入稀释血清，避免产生气泡。
滴加完所有待测标本后才开始温育（一次最多200份）。
使用聚苯乙烯加样板。
加样体积:10 µl/反应区(3 x 3 mm)25 µl/反应区(5 x 5 mm)70 µl/反应区(7 x 9 mm)温育：将载片盖在加样板对应的凹槽里，反应即开始。
确保每个标本均能够与生物薄片相接触，而标本之间不相互接触。
室温温育30分钟。
缓冲液的小杯中浸洗至少5分钟。
冲洗1秒钟小杯内浸洗5分钟加样：将荧光标记的抗人免疫球蛋白（酶结合物）加入洁净加样板的每个反应区。
完全加完所有的二抗后，方可继续温育（最多可加50个载片）。
使用连续加样器。
加样前应使用加样器混匀。
为节约时间，可在第一步温育的同时滴加酶结合物至另一个加样板的反应区中。
加样体积:10 µl/反应区(3 x 3 mm)20 µl/反应区(5 x 5 mm)60 µl/反应区(7 x 9 mm)温育：从PBS-Tween 清洗缓冲液中取出一张载片，5秒钟内用吸水纸擦一下背面和边缘后，立即将载片覆有生物薄片的一面朝下，盖在加样板的凹槽里。
注意：为防止破坏基质，不要擦拭反应区的间隙。
检查生物薄片是否与液滴接触良好，然后继续下一张。
从现在开始，注意避免阳光直射载片。
室温温育30分钟。
缓冲液的小杯中浸洗至少5分钟。
可在每150ml磷酸盐缓冲液中加10滴(150 µl)伊文氏蓝进行复染。
冲洗1秒钟小杯内浸洗5分钟封片：在盖玻片上滴加甘油/PBS。
使用聚苯乙烯封片板。
从PBS-Tween 清洗缓冲液中取出一张载片，用纸擦干背面和四边，注意不要擦拭反应区间隙。
将载片的生物薄片朝下置于准备好的盖玻片上，立即检查盖玻片是否放入载片的凹槽里，如有必要，需调整位置，正确放置。
然后再进行下一个载片的操作。
封片体积:10 µl/反应区(3 x 3 mm)10 µl/反应区(5 x 5 mm)20 µl/反应区(7 x 9 mm)结果判断：荧光显微镜下观察荧光。
具体操作荧光工作台的布置清洗载片的擦拭封片ANA的结果间接免疫荧光法的独特优势(一种基质–可筛查上百种不同的抗体 )用HEp-2细胞检测自身抗体ANA荧光模型核均质型核仁型核颗粒型胞浆型ANA确认实验（1）IFT:-HEp-2细胞/灵长类肝脏：特殊的荧光模型如着丝点、核膜型、核糖体P蛋白、肌动蛋白ELISA:-ANA分项(含ENA 谱):包被高度纯化抗原斑点法/ 印迹法-ENA 谱:采用各种高度纯化的抗原ELISA：抗ENA 谱印迹法：抗ENA 谱印迹法：抗ENA谱免疫印迹法ANA确认实验（2）Westernblot:HEp-2 细胞提取物- 定性- 适宜特别需要（如区分靶抗原Ro 52 或Ro 60）- 检测目前无法纯化的靶抗原的抗体（如PM-Scl、Ku）结论初筛实验：免疫荧光技术(HEp-2细胞/灵长类肝脏）ELISA （纯化的多种核抗原）确认实验：ELISA印迹法斑点法WesternblotANA谱与相关疾病相关疾病的ANA谱ANA的各种荧光模型、靶抗原及相关性高滴度的ANA仅出现在自身免疫性疾病中自身免疫性疾病 ANA阳性率（％）系统性红斑狼疮活动期 95－100 非活动期80－100药物诱导的红斑狼疮 100混合性结缔组织病100类风湿性关节炎 20－40进行性系统性硬化症20－50 多发性肌炎及皮肌炎 85－95 干燥综合征 30－50慢性活动性肝炎 70－80 溃疡性结肠炎 70－80其它风湿病26SLE抗核抗体的检出率靶抗原检出率（%）dsDNA 30-90Sm 5-30核糖体P蛋白5-15周期蛋白I （PCNA） 3ssDNA 70-95组蛋白 40-80U1-nRNP 15-40SS-A 20-60SS-B 10-20Ku 5-10心磷脂、b2-GP1 20-40抗细胞抗体荧光模型(immunofluorescent pattern)常见的荧光染色模型有6种：核均质型（homogeneous pattern，H）核颗粒型（Granulogus pattern，S）核仁型（nucleous pattern，N）核膜型（membranous pattern，M）着丝点型（centromert pattern，ACA）胞浆型（cytoplasmic pattern，ACYA）HEp-2细胞/灵长类肝脏：核均质型ssDNA / dsDNA靶抗原：单链、非天然DNA（嘌呤和嘧啶硷基对）双链、天然DNA （脱氧核糖核酸结构）相关性：ssDNA类风湿80.8%SLE 40.0%干燥综合征44.0%皮肌炎12.3%类风湿性关节炎 51.7%献血员 6.8%SLE 30% - 90%抗dsDNA：绿蝇短膜虫组蛋白靶抗原：组蛋白H1、H2A、H2B、H3、H4（主要抗原H1和H2B）功能：形成核小体相关性：药物诱导性LE:100%（唯一的标志抗体）SLE：40% - 80%其它风湿性疾病：少见HEp-2 细胞/灵长类肝脏：抗RNP/SmU1-nRNP靶抗原：与U1-nRNA 连接的3个蛋白分子（70K、A和C蛋白）功能：切割pre-mRNA相关性：MCTD: 95% - 100%SLE: 15% - 40%抗Sm抗体靶抗原：与U1-、U2-、U4-、U5- 或U6-nRNA 连接的6 种不同蛋白分子（core proteins B, B´, D, E, F, G）功能：切割pre-mRNA相关性：SLE: 5% - 30%HEp-2细胞/灵长类肝脏: 抗核糖体P蛋白抗核糖体P蛋白抗体抗原：核糖体的亚单位( 60S), 3个蛋白分子组成: P0、P1、P2 （38、19、17 kDa）。