Waters 600 Controller高效液相色谱仪维护保养规程
高效液相色谱仪器维护和保养
HPLC故障诊断
保留时间不稳定。 首先观察保留时间是否有规律的变化，并同时观察压力是否稳定 若压力稳定而保留时间呈有规律变化，多数是色谱柱未平衡好，特别
HPLC日常维护
5. 安装有seal wash组件的，无论是否使用缓冲盐，开泵之前都应该使之 充满流动的液体（10%IPA水溶液）并调流速为20滴/分钟。
6. 正相色谱、反相色谱切换时应使用IPA过渡，长期使用正相，应更换正 相柱塞密封垫
7. 样品进样之前最好过滤，如果样品量太少，可以适当抬高进样针的位 置
Agilent 1100四元泵中使用盐溶液和有机溶剂时，建 议将盐溶液接到下面的 口上，有机溶剂接到上面的梯度阀口 上。有机溶剂通道最好直接在盐溶液通 道的上面。建议定期 用水冲洗所有MCGV通道，以去除在阀口上可能出现的盐 沉淀 。
四元／二元/单元泵日常维护
更好地使用四元泵
将装有溶剂瓶的溶剂箱放在泵上面(或较高处)。
流程
检测器使用注意事项及日常维护
可变波长紫外检测器使用注意事项. 如果流动池被污染可先用以下方法处理:在不连接色谱柱的情
况下先用高纯水冲洗20分钟，然后用5％硝酸冲洗2小时，最后再 用高纯水冲洗至流出液中性即可。 如上述方法不果，就需更换流动池的检测窗。
上述处理方法也适用于DAD的流动池。
检测器使用注意事项及日常维护
关闭泵，拧开脱气机出口或比例阀入口管线 ,此时溶剂会因为重力流出，脱气机或溶剂过 滤头堵塞时，溶剂会流出不畅或不流出。
Agilent 1100 泵头(Pump Head)结构图
5
Holding/Lock Screw (PEEK)
2 34 6
1
7
带有Seal Wash的泵头结构图
Waters高效液相色谱维护与保养
Waters高效液相色谱维护与保养
钙柱再生的时间
3、柱子再生的时间：根据相关的样品含有较 多重金属和过渡金属元素或是有机酸的样 品越是需要经常地对柱子进行再生，因为 它们会与柱子发生转换。 检测是否需要再生可以通过注射蔗糖来测 试柱子的置换，如果蔗糖的峰有明显拖尾， 那么柱子需要做以下处理：
Waters高效液相色谱维护与保养
术语
8、色谱峰：色谱柱流出组分通过检测器时产生的 响应信号的微分曲线。
9、峰底：峰的起点与终点间的直线 10、峰高：在峰的两侧拐点处所作切线与峰底相
交两点之间的距离。 11、半峰宽（W1/2）：通过峰高的中点做平行与 峰底的直线，与其峰两侧相交两点间的距离。 12、峰面积（A）：峰与峰底间的面积，又称作 响应值。 13、拖尾峰：后沿较前沿平缓的不对称峰。 14、前伸峰：前沿较后沿平缓的不对称峰
Waters高效液相色谱维护与保养
术语
21、排阻色谱又称凝胶色谱或凝胶渗透色谱，是 利用被分离物质分子量大小的不同和在填料上渗 透程度的不同，以使组分分离。它类似于分子筛 的作用，按分子大小进行分离。试样进入色谱柱 后，随流动相在凝胶外部间隙以及孔穴旁流过。 在试样中一些太大的分子不能进入胶孔而受到排 阻，因此就直接通过柱子，首先在色谱图上出现， 一些很小的分子可以进入所有胶孔并渗透到颗粒 中，这些组分在柱上的保留值最大，在色谱图上 最后出现。例如：我们常用的 ks-802色谱柱
Waters液相色谱维护保养
以下课件是我在使用、操作、高效液 相色谱仪十年中积累的经验，以及集 合外部学习的经验所写，如有讲的不 好、错误之处，请大家及时指出，我
Waters 液相色谱仪预防性维护检修程序
文件制修订记录建立一个对液相色谱仪预防性维护检修程序，以保证仪器和部件的操作性能，延长其寿命。
保证某些仪器和系统长期的可靠性。
【范围】适用于 Waters 液相色谱仪。
【职责】质量控制部负责起草、修订、审核本程序，质量控制部相关人员负责执行本程序。
技改设备部经理负责本规程的批准。
【程序】1 预防维护检修周期1.1 每三个月进行一次仪器预防维护。
1.2 新购仪器 IQ/OQ/PQ 确认完毕一年以后开始预防维护工作。
2 预防维护检修内容2.1 对仪器进行一般性检查。
2.1.1 清洁仪器的外表面、键盘，是否在有效状态。
2.1.2 把系统断电，打开仪器泵的舱门清理的灰尘。
2.1.3 在超声波浴中用溶剂清洗过滤部件，如果被腐蚀了就要更换。
2.1.4 清洗再线过滤器和单向阀。
2.1.5 给仪器通电并观察通电后的自检，此时确认固件的可用性。
2.1.6 准备一个异丙醇的烧杯，清洗所有的溶剂进口过滤部件，并灌注所有的通道。
2.1.7 检查氘灯的使用时间。
2.1.8 检查柱箱运转情况。
2.1.9 检测器流通池的清洁。
3 维护检修程序3.1 准备工作3.1.1 提前通知岗位仪器停止分析。
3.1.2 对仪器进行一般性检查，把仪器表面擦干净。
接通电源，打开仪器和电脑，启动工作站，看是否通过自检。
3.2 部件的拆卸3.2.1 再线过滤器和单向阀拆下后用纯化水超声清洗。
3.2.2 其它如果对仪器结构不熟悉，禁止随意拆卸。
4 维护检修标准4.1 仪器性能测试应通过各技术指标要求（见液相色谱仪检定/测试操作程序）4.2 如不能通过，查找原因，排除故障，继续测试；如不能排除故障，则拨打 800请求 Waters 工程师技术支持。
4.3 仪器性能测试失败时，则仪器不得进行分析化验。
5 做好年度和季度预防性维护检修计划。
【相关文件】《实验室仪器、设备管理制度》《液相色谱仪检定/测试操作程序》【相关记录】《Waters 液相色谱仪预防性维护检修记录》Waters液相色谱仪预防性维护检修记录表《年度液相色谱仪预防性维护检修计划》《季度液相色谱仪预防性维护检修计划》。
WATERS 600 高效液相色谱仪使用说明书
WATERS 600高效液相色谱仪使用说明书（用前必读）青岛科技大学化工测试中心2009-07-17安全指南遵守安全指南可以防止对系统或设备造成损害。
注意：不要将设备置于阳光直射的地方或靠近空调通风口。
注意：在不确定的情况下，不要删除工作站中的任何文件。
注意：为了避免损坏检测器的流动池，不要触摸流动池窗口。
小心：为避免被灼伤，在拆下灯泡进行更换或调整前，请至少提前30 分钟关闭灯泡。
小心：为避免电击事故和人身伤害，请务必在执行维护工作前关闭高压泵、检测器并拔下电源下电源线。
小心：为避免化学或电气危险，在操作系统时，请务必遵守实验室的安全规定。
目录第一章WATERS 600 简介 (1)第二章基本操作要领 (2)2.1 操作规程 (2)2.2 运行分析样品 (2)第三章数据的处理 (15)3.1 创建方法组定量分析 (15)外标法：单点校正 (15)未知样结果计算 (26)外标法：多点校正 (29)内标法校正 (32)3.2 定性结果 (39)3.3 打印报告 (42)第四章文件管理 (46)第五章Millennium 32 4.02版本（中文版）安装要点及有关事项 (47)第一章WATERS 600 简介该高效液相色谱系统是由Waters600高压泵及控制器、氦气脱气系统、Waters 2996二极管阵列检测器和Millennium324.02版本（中文版）工作站构成。
该系统所有的控制指令和数据处理都可以通过计算计完成。
该系统是分析实验室不可缺少的仪器设备，是有机物定量分析的最佳手段之一，另外的突出优点是可以对色谱峰的纯度进行判断。
建立色谱库后可以实现定性分析。
第二章基本操作要领2.1 操作规程2.1.1 制备标样和样品：配置合适浓度的标样；制备的样品进样前要过滤。
2.1.2使用HPLC级流动相，必要时自行制备；水为实验室2级水。
用前均需过0.45µm 滤膜。
2.1.3 流动相脱气：打开氦气(99.999%)钢瓶，调节减压阀输出压力0.3~0.6MPa。
(整理)液相色谱仪保养
一、LC-600高效液相色谱仪保养1．LC-600高效液相色谱仪的日常操作条件：温度：10—30℃；相对湿度<80％；最好是恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。
2．泵的保养：1)使用流动相尽量要清洁；2)进液处的沙芯过滤头要经常清洗；3)流动相交换时要防止沉淀；4)避免泵内堵塞或有气泡;3．进样器的保养：1)每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染；4．柱的保养：1)柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动；2)当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净；3)要注意流动相的脱气；4)避免使用高粘度的溶剂作为流动相；5)进样样品要提纯；6)严格控制进样量；7)每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品；8)每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱；9)若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭；5．检测器(UV)的保养：1)紫外灯的保养：在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成后，马上关闭检测器。
2)样品池要保养。
二、高效液相色谱输液泵常见故障的判断和排除LC-600高效液相色谱输液泵常见故障的判断和排除现象原因排除方法1、压力高于正常值（1）流量设定位有误（2）泵出口过滤器堵塞（3）柱头被杂质堵塞（4）柱前过滤器阻塞（1）重新调整（2）拆下过滤器用硝酸超声清洗（3）拆开柱头，清洗柱头过滤片；如杂质颗粒已进入柱床堆积，应小心翼翼地挖去沉积物和已被污染的填料，然后用相同类型的凝胶填料补平，切勿使柱头留下空隙。
（4）清洗柱前过滤器，清洗后如压力还高可换上新的过滤器 2、压力低于正常值或者流量小于设定值（1）某联接处泄漏 （2）柱塞密封处泄漏 （1）将泄漏处重新拧紧或更换密封环，也可缠一点聚四氟乙烯薄膜临时解决问题，待以后再作处理 （2）更换新柱塞密封圈 3、在无流速时，压力表高于或低于零点压力传感器输出未调好 用小螺丝刀调节压力传感器螺丝，直到指示表头为零 4、柱压升高柱流量减少（1）柱子、保护柱或预柱部分堵塞 （2）检测池或检测器的入口管，部分堵塞 （1）清洗或更换柱入口过滤片；更换柱子 （2）拆卸并清洗检测池和（或）管路 5、柱压波动（1）高压系统中有泄露（入口隔膜、进样阀、入口紧固件等） （2）单向阀被污染，部分堵塞 （1）查出并修理泄漏 （2）观察柱塞推杆的动作，向前推压力下降，入口阀有问题；向后退压力下降，出口阀有问题。
高效液相色谱仪维护规程
1 目的建立本实验室高效液相色谱仪的保养维护操作，确保仪器能正常使用。
2 适用范围适用于本实验室高效液相色谱仪的保养维护操作。
3 责任者本实验室所有操作高效液相色谱仪人员。
4 操作规程高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
4.1 对仪器的一般要求和色谱条件所用的仪器为高效液相色谱仪。
仪器应定期检定并符合有关规定。
4.1.1 色谱柱反相色谱系统使用非极性填充剂，常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷相等）也有使用。
正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。
离子交换色谱系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含炭量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。
分析分子量小于2000的化合物应选择孔径在15nm（1nm=10A）以下的填料，分析分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。
除另有规定外，普通分析柱的填充剂粒径一般在3~10um之间。
粒径更小（约2um）的填充剂常用于填装微径柱（内径约2mm）。
使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。
当对其测定结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。
以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40℃，为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度，但不宜超过60℃。
流动相的PH值应控制在2~8的。
当PH大于8时，可使载体硅胶溶解；当PH 小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。
Waters液相色谱仪的日常维护与保养
Waters液相色谱仪的日常维护与保养
1.分析检测前，至少须让检测器或D2灯源“热机”30分钟以上。
2. 所使用的流动相需先过滤，再超声5分钟，方可使用。
3. 当使用盐类流动相后，须以超纯水冲洗30分钟，再以甲醇冲洗30分钟。
4.每周日定期冲洗检测池：把色谱柱卸下，将管路A、B、C、D捆绑抽液，在流速1.0ml/min的状态下先用超纯水冲洗30分钟，然后用30%磷酸（色谱级）冲洗30分钟，再用超纯水冲洗至流出液为中性，最后用甲醇冲洗30分钟。
5. 每周日定期清洗在线过滤器：把在线过滤器卸下，先用甲醇超声30分钟，最后用超纯水超声30分钟。
6. 每月一号定期交换流动相的管路：管路A、B、C、D互换使用，以防管路堵塞。
Waters高效液相色谱仪使用及维护
• 待系统平衡后，单击“中断” 监视基线。
，终止
单进样
• 待系统平衡好，在此页面输入进样信息，
点击
进样
序列进样
确认样品组名称正确，其他选项保持默认值，点击运行
• 跳出该窗口，点击确定，进行修改序列。
• 修改完毕点击
继续运行样品组。
•
图谱处理
•
图谱打印
图谱处理
• 选择所要处理的项目名称，点击确定
• 30%磷酸溶液，超声30分钟
一、每周一次，仪器面板操作。
• Purge Injector：面板操作: 打开状态 (Statas)画面→ →按右下角Direct Function功能键→ →选Purge Injector命令 → →选OK即可进行注射器的排气。
• Seal Wash：面板操作: 打开状态(Statas) 画面→ 按下面板上Menu/ Statas 键→按右 下角Diiag功能键→ →选Prime Seal Wash 命令→ →选Start即可，默认运行10分钟。
出现如下窗口
• （2.）编辑仪器方法 • （3.）保存方法：
• （4.）关闭“仪器方法编辑器”窗口
• 6.创建方法组：①选中所要的仪器方法，单 击“下一步” ②出现如下窗口选择处理方法、
报告方法以及导出方法，单击“下一步”
• ③命名
方法调用及平衡基线
•在
选择仪器方法，并点击
“监视器”，平衡系统监视基线
创建项目
• 在此对话框下需要确定项目根目录下还是项目层次结构的 一部分（作为父项目的一个子项目）。这种层次结构允许 将多个项目组织在一个公用项目结构中。
• 注：要将项目创建为新的顶级项目（父项目），单击“项 目”文件夹；要将项目创建为现有项目的子项目，单击现 有父项目的文件夹。
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1 使用前
1.1 保持贮液瓶清洁，对专用贮液瓶应定期清洁；用试剂瓶作贮液瓶时，要经常更换。
1.2 定期（如半个月）在稀硝酸溶液中超声、清洁过滤器，保持过滤器畅通无阻。
1.3 使用HPLC试剂和新蒸二次蒸馏水作流动相，所使用的溶剂其截止波长一定要低于检测波长，对不是HPLC级的试剂要进行过滤（HPLC试剂出厂前已用0.02µm滤膜过滤）。
对流动相一定要脱气。
1.4 每天开始使用仪器，注意放空排气，确保泵头、流动池以及其它流路系统中无气泡存在。
1.5 保持仪器使用环境20℃-30℃，湿度30%-70%。
2 使用中
2.1 珍惜保护色谱柱，避免柱头突然产生大的波动，扰动损伤柱床。
如避免泵启动过速、升压过快、样品阀搬动过慢所造成的柱压力的波动。
2.2 采用保护（警戒）柱，延长柱寿命。
如污染物堆积于保护柱柱头，造成柱压升高，柱效下降，峰型变差时，卸下用强溶剂反冲后再用或更换新保护柱。
2.3 避免超负荷进样，对250*4.6mm的柱子，绝对进样量应不超过100µg。
在灵敏度允许的前提下，应尽量将试样浓度降低，减少绝对进样量（进样体积可保持不变），这是保持HPLC 柱性能持久良好的重要举措之一。
2.4 经常用强溶剂冲洗柱子，将柱内强保留组分及时洗脱出。
反相柱用异丙醇-二氯甲烷（1:1）冲洗，正相（硅胶柱）用纯甲醇或异丙醇冲洗，时间均不少于1h。
2.5 以硅胶为基质的柱子，如C-18、C-8等，要控制好流动相的pH值，一般不要低于2.5，不高于7.0。
2.6 尽量用流动相溶解样品，一是避免出现拖尾峰、怪峰，二是避免试样在系统中由于溶解度降低而析出。
2.7 对于阻塞或受伤严重的柱子，必要时，可卸下不锈钢滤板，超声洗去滤板阻塞物，对塌陷污染的柱床进行清除、填充、修补工作，此举可使柱效恢复到一定程度（80%），有继续使用的价值。
2.8 色谱仪检测器输出和积分仪（处理机）要匹配，要合理设置参数如斜率、半峰宽、阈值、AUFS值、衰减等。
将适宜的进样量和合适的参数结合起来，使主峰峰高达到记录仪满量程的80%左右。
2.9 如仪器突发故障，应立即停机并报告，由专业人员排除故障后经校准方可重新使用。
3 使用后
3.1 做完实验，及时用适当溶剂冲洗柱子和进样阀，尤其是对过夜的柱子和进样阀，一定要
用足量的水彻底洗净其中的盐类、缓冲液，再用甲醇或乙腈冲洗，并保存在乙腈中。
正相柱保存在非极性有机溶剂（如己烷）中。
3.2 仪器关闭后应切断电源。
3.3 经常检查仪器的通风过滤装置，如有必要应清洗或更换。
3.4 对易耗品（如氘灯、过滤器、保持柱、柱塞杆密封圈等）要按规定时间更换。
3.5 保持仪器清洁。