免疫吸附新技术的介绍
荧光酶联免疫吸附法

荧光酶联免疫吸附法1. 简介荧光酶联免疫吸附法(Fluorescence enzyme-linked immunosorbent assay,简称ELISA)是一种常用的生物分析技术,用于检测和定量分析样品中存在的特定蛋白质或其他生物分子。
该方法基于免疫反应的原理,结合荧光检测技术和酶反应技术,具有灵敏度高、特异性强、操作简便和结果可定量等特点,广泛应用于医学、生物学和生物化学领域。
2. 原理荧光酶联免疫吸附法的原理基于抗原与特异性抗体的结合,通过荧光标记使得抗原-抗体结合物形成荧光信号,经荧光光谱仪检测荧光强度,从而实现对抗原或抗体的检测和定量。
具体步骤如下:1.表面涂覆:将待检样品或纯化的抗原分子均匀涂覆在微孔板(通常是96孔板)的孔底上,使其与固相结合。
2.免疫反应:将用于检测的荧光标记的抗体加入到孔中,与样品中的抗原发生特异性反应,并形成抗原-抗体复合物。
3.洗涤:通过洗涤步骤去除非特异性结合的物质,以降低背景信号。
4.信号放大:加入特定的酶标记抗体,并通过与抗原-抗体复合物的结合,进一步放大信号。
5.底物反应:加入酶的底物,使其与酶反应产生可观察的荧光信号或颜色。
6.信号检测:使用荧光光谱仪或酶标仪检测荧光强度或吸光度,从而实现对抗原或抗体的定量和检测。
3. 优势和应用荧光酶联免疫吸附法具有以下优势:•高灵敏度:荧光信号可以被高灵敏度的检测设备捕获和定量,其信号强度与目标物浓度呈正相关关系。
•特异性强:通过适当选择特异性抗体,可以实现对目标物的高度特异性识别,避免与其他成分的干扰。
•相对较简便:相对于其他生物分析方法,荧光酶联免疫吸附法的操作相对简便,不需要复杂的仪器设备和高端实验条件。
•可定量:通过荧光信号的定量测量,可以对目标物进行定量分析,获得充分的数据。
荧光酶联免疫吸附法在以下领域有广泛的应用:•医学诊断:荧光ELISA常被用于检测病原体感染、抗体水平、肿瘤标志物、药物浓度等医学领域的诊断与监测。
免疫吸附

体外清除低密度脂蛋白(LDL)
家族性高胆固醇血症: 纯合子型 、 杂合子型 冠心病 : 预防、 治疗 脑动脉硬化 颈动脉硬化 周围动脉粥样硬化性闭塞疾病 心脏移植后预防冠心病复发 视网膜血管动脉硬化性闭塞 肾动脉粥样硬化
分子吸附再循环系统(mole cular adsorbent recycling system. MARS)
体外清除自身抗体(3)
神经系统 疾病 重症肌无力 Guillain-Barre 系统性疾病 SLE 类风湿性关节炎 皮肌炎 结节性多动脉炎 内分泌、代谢疾病 耐胰岛素性糖尿病 其它 伴有抗精子抗体的不孕症
体外清除自身抗体(4)
肾(或其它器官)移植 移植前 清除抗 HLA抗体,降低PRA 减少急性排斥反应,提高肾存活率 方法 A. 一次性强化IA在48h内移植 B. IA 创造一个交叉配型阴性,低PRA的 “窗口” 时间。 移植后 急性血管性排斥,强化IA联合抗排斥药 物 ,可使排斥反应逆转。
历史回顾 80年代,由Seidel教授创立 B.Braun先生合作 已治疗100000例(截止1999.9)
H.E.L.P原理
LDL,LP(a)和FIB被低PH值的肝素有选 择地结合后沉淀,随后沉淀物经过滤后 被分离出来 多余的肝素由阴离子置换柱在指定的PH 下与肝素结合吸收 血浆缓冲液混合物,通过透析去除水份 ,恢复生理PH。与血细胞混合反回病人 身体。
IA治疗的优点
自身的血浆被回输,无需替代液 防止传染性疾病(病毒性肝炎,AIDS等) 吸附具有选择性或特异性,血浆成分包括 凝血因子等仅轻微下降 不影响药物治疗 价格合理?
提要 前言 IA剂的条件及分类 IA技术 临床应用 结语
免疫吸附名词解释

免疫吸附名词解释
免疫吸附(Immunoadsorption,IA)是一种血液净化技术,是近15年发展而来的一种新的血液净化方法。
它利用抗原抗体特异性结合的原理,通过特定的吸附柱将血液中的致病因子或有害物质清除,从而达到净化血液、缓解病情的目的。
免疫吸附疗法可用于治疗多种自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮、ANCA 相关性血管炎等,也可以用于治疗原发性血小板减少性紫癜、冷球蛋白血症等疾病。
免疫吸附疗法的主要优点包括对血浆中致病因子清除的选择性高,血浆中有用成分的丢失范围与数量较小,同时避免了血浆输入所带来的各种不良影响。
此外,免疫吸附疗法操作简便,患者痛苦小,不良反应少,且费用相对较低。
需要注意的是,免疫吸附疗法并非万能的,其效果因个体差异而异。
在选择该治疗方法时,患者应在医生的指导下进行,以了解其适应症、禁忌症及可能的风险和不良反应。
此外,患者在日常生活中应注意休息,避免过度劳累和剧烈运动,以免影响治疗效果。
《免疫吸附法与护理》

七、操作流程
由于免疫吸附疗法存在不同的吸附剂类型和不同的治疗模 式,其操作程序也有不同,应参照不同治疗方法、不同吸附 柱及不同的机器设备的相关说明书进行。下面介绍DNA免疫吸 附柱的操作流程:
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1.治疗前评估 医院资质 建议在三级甲等医院的血液净化中心进行。 术前常规检查血常规、出凝血指标、血清白蛋白、血清球蛋
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5、达到治疗量后,进入回收程序,观察并记录患者生命体征、 病情变化、治疗参数及治疗经过。
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5、吸附后处理
吸附结束时,宜 采用空气回血法 或生理盐水回血 法回血。
必要时可使用鱼 精蛋白中和肝素 .
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6、免疫吸附示意图:
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八、并发症及处理
低血压 多由体外循环引起,对本身存在低血容量的患者,在 上机前酌情补充必要的胶体和晶体溶液。
神经系统疾病 重症肌无力、Guillain-Barre综合征等。
血液系统疾病 特发性血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少 性紫癜、血友病等。
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血脂代谢紊乱 严重的家族性高胆固醇血症、高三酰甘油血症等。 肝衰竭 重症肝炎、严重肝衰竭尤其是合并高胆红素血症患者等。 器官移植排斥 肾移植和肝移植排斥反应、群体反应抗体(PRA)
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4、吸附
1、血液流量从50-80mL/min逐步增加到100-150mL/min。
2、吸附时间一般为120-150分钟。若有必要继续治疗,需更换 第二个吸附柱。
3、密切观察各种滤器情况,血液颜色,注意有无溶血的发生, 如有凝血情况应及时更换吸附柱。
4、密切观察患者生命体征,包括每30分钟测血压、心率等。
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而免疫吸附从根本上克服了血浆置换的问题, 由于它是 抗原抗体特异性结合,故选择性较高;同事它是通过血浆处 理后重新输回患者体内,无血浆成分丢失,且不影响同事进 行的药物治疗,价格相对便宜。其治疗强度可以根据病情的 需要进行调整。免疫吸附也不需要置换液,故消除了通过血 液制品传染疾病的问题。
简述酶联免疫吸附测定的原理

简述酶联免疫吸附测定的原理酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一种高度敏感、高通量的免疫技术,常用于检测微量生物分子或抗体的存在与浓度。
ELISA的原理基于抗体与抗原之间高度特异性的结合,以及酶底物反应的可见色素反应。
ELISA的基本原理如下:1. 酶联:先将抗原或抗体固定在固相载体(如微孔板)上。
最常用的固相载体是聚丙烯酸酯(polystyrene),可以牢固地吸附抗原或抗体。
2.结合:在固相载体上固定的抗原与样品中的分子结合,以形成特异性的抗原-抗体复合物。
3.洗涤:为了去除非特异性结合的物质,需要进行反复的洗涤步骤。
4.检测:加入与目标分子相关的抗体,这些抗体经过标记,通常是酶标记。
这些标记的抗体与复合物中的目标分子结合。
5.洗涤:再次进行洗涤步骤,以去除非特异性结合的物质。
6.底物-酶反应:加入合适的底物,底物与酶标记的抗体发生反应,并产生可见的色素物质。
7.读数:用光度计测量反应物的吸光度,吸光度的强度与样品中目标物的浓度成正比。
ELISA的优点是具有高度的特异性和敏感性,可以检测极低浓度的物质。
此外,ELISA还可以同时检测多个样品,并且操作相对简单,不需要昂贵的设备。
ELISA的应用广泛,特别是在医学诊断领域。
例如,ELISA可以用来检测一些疾病的标志物,如乳腺癌、艾滋病、流感等。
此外,ELISA还用于酶抗体检测、药物监测、细菌和病毒的检测等领域。
虽然ELISA是一种非常有用的技术,但也存在一些局限性。
ELISA对样品中的杂质比较敏感,可能会导致假阳性结果。
此外,ELISA只能检测已知的抗原或抗体,无法发现新的目标分子。
此外,ELISA需要时间较长(通常需要2-4小时)。
综上所述,酶联免疫吸附测定(ELISA)是一种重要的免疫技术,通过抗原与抗体的特异结合和酶底物反应,可以准确、敏感地检测微量生物分子或抗体的存在与浓度。
免疫检测技术前沿与进展

免疫检测技术前沿与进展免疫检测技术在医学和生命科学领域中扮演着极为重要的角色,它能够快速准确地检测人体内的抗体或抗原,帮助我们了解疾病的发展及人体免疫系统的功能情况。
随着科技的不断进步,免疫检测技术也在不断发展,不断地推动着医学及生命科学领域的进步。
本文将介绍免疫检测技术的前沿与进展。
一、免疫检测技术概述免疫检测技术是指利用人体免疫系统的特异性识别机制,针对特定的抗原或抗体进行检测的技术手段。
常见的免疫检测技术包括酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、放射免疫测定法(radioimmunoassay, RIA)、免疫荧光技术、免疫电泳技术等。
这些技术的发展,为准确检测疾病和研究免疫系统的功能提供了有力的手段。
二、免疫检测技术的前沿发展随着科技的进步和新技术的不断涌现,免疫检测技术也在不断地刷新着我们的认知。
以下将介绍几个免疫检测技术的前沿发展。
1. 荧光免疫检测技术荧光免疫检测技术是近年来兴起的一种高灵敏度的免疫检测方法。
它利用荧光标记的抗体或抗原,通过荧光显微镜等设备对样本进行检测。
相较于传统的免疫检测技术,荧光免疫检测技术具有更高的灵敏度和准确性,可以检测到更低浓度的抗原或抗体。
2. 微流控免疫检测技术微流控免疫检测技术是一种基于微流体芯片的免疫检测方法。
它通过控制微流体的流动,使样本与抗原或抗体在芯片内发生特异性反应,并通过显微镜等设备进行检测。
微流控免疫检测技术具有高通量、快速、灵敏度高的特点,可以同时检测多个目标物质,且样本消耗量较小。
因此,它在生物医学研究和临床诊断中具有广阔的应用前景。
3. 共振贡献检测技术共振贡献检测技术是一种新兴的免疫检测方法。
它利用共振贡献现象对样本进行检测。
共振贡献是指当体系与外界发生共振时,其贡献出的能量达到最大值。
通过对共振贡献的测量,可以实现对样本中抗原或抗体的高灵敏度检测。
共振贡献检测技术具有快速、灵敏度高、无需标记物等优点,将成为未来免疫检测领域的重要发展方向之一。
酶联免疫吸附试验的原理、操作方法及注意事项

影响实验结果 。 因此 , E IA试验实际操作 中除了 在 LS 选 择优 良仪器设 备和试 剂外 ,正确 的操 作是保 证
EI LS A检测结果准确可靠的必要条件。 必须熟知试验
每 次 加样 必 须 更 换 吸头 ,做 到 1 样 品 1个 吸 个
振动 3 秒 , O 使底物与终止液充分混合再读数 。
47酶标仪读数 环节 .
使 用 前 应 先 预热 仪 器 1~ 0分 钟 ,并 调 整 到 试 53
验要求 的波长 , 使测定结果更稳定。 最 好 先 擦拭 微 孔 板底 部并 压 平 板条 ,避 免 反 应 板底划痕 、 不平 、 印或 液面高度差异造成 干扰 , 指 致 使读数结果不准确 。因此要保持酶标板干净, 不能用 手触 摸板 底 留下指 印 。
45 洗 涤 反 应 板 环 节 .
EI LS A试验是靠洗 涤来达到分离游离 和结合 的 酶标记物。 酶联免疫 吸附板每次洗涤要充分。 通过洗 涤 以消除残 留在板孔 中没能与固体抗原或抗体结合 的物质 ,以及在反应过程 中非特异吸附于固相载体 上的干扰物质 。如果洗涤不充分 , 应该除去的杂质没 有洗 掉 , 这样 就会 影 响试验 结果 。 洗板时需保证微孔板平放 , 将洗涤液注满各孔 , 尽量避免漏液 、 溢液现象。
E IA反应终 止 后需 要在 1 LS O分钟 内读 数 ,否则
头 ,以免发生交叉 污染。每次加样应加在板孔的底
部 , 免加在孔壁上部 , 注意不可溅 出 , 可产生 避 并 不 气泡 , 以免加 样 不 准确 , 响 试验结 果 。 影
酶联免疫吸附试验

技术创新:新型的酶联免疫吸附试验技术不断涌现如荧光标记技术、量子点标记技术等提高了检测的灵敏度和特异性。
市场需求:随着生物技术的不断发展酶联免疫吸附试验在临床诊断、食品安全、生物医药等领域的需求不断增长。
发展趋势:随着检测技术的不断进步酶联免疫吸附试验将朝着更快速、更准确、更自动化的方向发展。
应用领域拓展:酶联免疫吸附试验的应用领域不断拓展如肿瘤标志物检测、病毒检测、食品安全检测等为各领域的发展提供了有力支持。
荧光标记技术:提高灵敏度降低背景干扰
磁珠分离技术:快速分离抗原抗体提高试验速度
酶联免疫吸附试验在交叉学科领域的应用前景
酶联免疫吸附试验在生物医学领域的应用
酶联免疫吸附试验在环境监测领域的应用
酶联免疫吸附试验在农业科技领域的应用
酶联免疫吸附试验在食品安全检测领域的应用
酶联免疫吸附试验的市场需求与发展趋势
联合检测:将酶联免疫吸附试验与其他检测方法相结合提高检测的灵敏度和特异性。
标准化和规范化:建立酶联免疫吸附试验的标准化和规范化操作流程确保试验结果的准确性和可靠性。
酶联免疫吸附试验的发展趋势
PRT SIX
酶联免疫吸附试验的技术创新与突破
自动化技术:提高试验效率降低人为误差
微孔板技术:简化操作减少样本用量
PRT TWO
酶联免疫吸附试验的定义
酶联免疫吸附试验是一种常用的免疫分析技术
通过酶与抗体或抗原的结合实现对目标分子的定量或定性检测
酶可以放大信号提高检测的灵敏度和特异性
酶联免疫吸附试验广泛应用于生物学、医学等领域
酶联免疫吸附试验的原理
洗涤去除未结合的成分后加入底物显色通过颜色反应判断待测物的浓度。
阻断酶联免疫吸附试验:将抗体先固定在固相载体上再用酶标记的抗原进行检测最后加入底物显色。
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I.A在免疫治疗相关的疾病治疗中优势
应用范围广,临床收效快 避免了免疫抑制剂的不良反应与严重副作用 无血浆的丢失,无需补充血浆,避免输注血 制品的副作用,对血液固有成分损伤小 除了循环血液中免疫复合物的清除外,也有 部分组织相结合的免疫复合物和补体的清除。 还有调节免疫,产生免疫耐受和恢复免疫功 能的作用。
免疫吸附临床应用状况(4)
心血管科: 重症高脂血症 (家族性) 脂代谢紊乱导 致心脑血管病 闭塞性动脉硬 化 扩张性心肌病
风湿科: 重症风湿病, 类风湿性关 节炎 皮肌炎 结节性多动 脉炎 其他: 天苞 牛皮藓 药物中毒 耐胰岛素性 糖尿病 肿瘤等等
抗人体IgG吸附柱。 治疗:器官移植前后,家族性高脂血症,肾脏与神 经系统疾病
I.A在免疫治疗相关的疾病治疗中优势与不足
免疫性疾病疾病累及全身多个系统 免疫抑制剂是治疗免疫性疾病基本和重要的手段,但 是免疫抑制剂疗效有较大局限性,较大的副作用,并 发症,甚至严重的后果是治疗的最大障碍 血浆臵换部分清除循环中的致病物质,提供了一个新 的治疗方法,但是标记的自身抗体,单克隆抗体进行 放免研究发现:它仅能将少量与组织结合的自身抗体 清除,而且较多血浆与蛋白的丢失,需要输血浆或蛋 白,也对机体不利。
免疫吸附临床应用状况(2)
血液科
血友病A 特发性血小板减少性紫癫(ITP) 血栓性血小板减少性紫癫(TTP) 免疫性溶血性贫血 多发性骨髓瘤 原发性巨球蛋白血症 RH血型不合 净球蛋白血症 单克隆高丙球蛋白血症等
免疫吸附临床应用状况(3)
消化科: 暴发性肝炎 术后肝功能衰竭 重症黄胆 出血坏死性胰腺炎 肝移植前高敏或排 异 神经科: 重症肌无力 格林-巴利综合症 慢性多发性脱髓鞘 神经根炎 进行性系统性硬化
常用的血液净化技术
透析:Dialysis:血透(HD):序贯透析,单纯超滤 高效透析,高流量透析 腹透(PD): CAPD,IPD,CCPD,NPD,APD 血液滤过:Hemofiltration(HF),CAVH,CVVH 血液透析滤过:Hemodiafiltration(H.D.F) CAVHDF,CVVHDF 血浆灌流:Hemoperfusion(HP) 血浆臵换:Plasma exchange(P.E) Plasmapheresis(P.P) 免疫吸附:Immunoadsorption(I.A)
生物亲和性:吸附特异性强,但原料供应,制备,纯
化,消毒,储存等均困难。
理化亲和性:吸附特异性相对教差,但活性稳定,生产
制备方便,易于推广。
对吸附柱的要求
吸附应具选择性或特异性。 在体液(如血浆)中无毒,无害。
不激活补体和凝血系统,不致敏。
极少配基离解,脱落,也不溶解。
稳定性好,便于保存和消毒。
免疫吸附的禁忌
禁忌 严重失代偿的心衰 休克 不稳定心绞痛 儿童,尤其5岁以下 极度销售 对蛋白质有过敏反应 相对禁忌 血液动力学不稳定 低血压倾向 冠心病 高龄,尤其70岁以上 体重 严重超重 有出血倾向 难以建立血管通路
小结
IA是免疫性疾病治疗中的一个新方法,有较广阔的前景 和较广泛的适应症,与传统方法相比有一定的优势 但IA也有一定的不足,很多问题有待进一步研究;长期 疗效还有待进一步观察,有效的,特异的,更安全,可 靠的IA技术有待完善,成本更有待于降低 应该深入研究,稳妥发展,但不应盲目普及,失控泛滥。 适应范围虽广,掌握指针从严,观察指标要细。 应该在原有传统的药物治疗与常用血液净化方法无效时, 或副作用过大,患者不能耐受时,或病员经济能力足以 承受时,方适宜使用
免疫吸附新技术的介绍
Edison.Xu
介绍
免疫吸附疗法是血液净化治疗中的一项新技术 免疫吸附临床应用的近况
免疫吸附治疗中的优势和不足
一.免疫吸附是血液净化治疗的新技术
血液净化(Blood purification): 是指机械、电子的装臵,理化、生物原 理,来清除体内或血液内过多积聚的有 毒,有害物质,从而达到净化血液,纠 正机体内环境异常的一种治疗方法。
IA的不足
IA不能完全替代原发病的治疗 近期疗效显著,令人鼓舞,长期疗效有待观察
治Байду номын сангаас的间隙等有待研究)
(会不会复发,有没有反跳,能不能根除,交换的量,疗程,
侵入性的治疗,要维持一个体外循环,不可避免 的存在一定的风险和副作用 价格昂贵,需要治疗的对象多,能够承受费用的 病员少 不少问题有待进一步研究:
组织内已结合的致病物质是否能被充分清除 免疫球蛋白补体会不会过多的被清除 氨基酸,白蛋白,抗体会不会丢失……..
I.A的副作用
畏寒,寒颤,发热 过敏:麻疹,过敏反应,喉头水肿 胃肠道:恶心,呕吐,腹泻 骨骼肌肉:肌肉酸痛,关节痛,骨骼痛 呼吸:气促,胸闷,呼吸困难,哮喘 心血管:高血压,低血压,心悸,心律不齐,心绞痛 神经:头痛,震颤,抽搐,昏迷,焦虑不安 其他:神经痉挛,疲劳感,潮红,出汉,排尿困难
能再生,成本不应太高
常用吸附柱的功能与应用(1)
常用配体 可吸附的物质 可治疗的疾病
RPGN,抗GBM抗体 肾炎,SLE,Wegener 肉芽肿,血友病高 敏的肾移植患者, 特发性NS,重症肌 无力,格林-巴利 综合症 蛋白A IgG1,2,4(100%),IgG3(30~80%) (Protein-A) IgM(56%),IgA(69%),抗乙酰胆 碱受体,抗-HLA,抗-GBM,抗ANCA抗 体等
免疫吸附临床应用
欧洲:开展最早也教广泛,主要使用可重复使用的
ProteinA等生物亲和型, 治疗:神经系统疾病,血液科,肾脏科病及器官移植 前后
日本:发展迅速,主要使用色氨酸,苯丙氨酸,硫
酸多聚糖等理化结合型。 治疗:多发性硬化,格林-巴利综合症,SLE,高脂 血症,血液及肾脏科疾病
北美:主要使用proteinA吸附柱和可重复使用的羊
免疫吸附(Immunoadsorption I.A)
血浆吸附(Plasma adsorption PA)
原理:是将患者的血液,通过血泵引出,先经过膜式血
浆分离器使血浆和血液有形成分(血球,血小板)分 离,再经过第二个血泵,使血浆通过含有特殊配体的 免疫吸附柱,经过异性吸附作用,清除血浆内的致病 物质(补体和致病的免疫复合物),达到净化体内环 境,恢复正常的免疫状态。 I.A的实质:膜式血浆分离+血浆灌流 原理:血浆分离+特异性的吸附
I.A中关键性装臵是“吸附柱”(吸附 器,吸附器),它有举足轻重的作用
吸附柱包括载体:
1.载体(Carrier material):有吸附功能的材料(如:琼脂 糖凝胶、聚乙烯醇珠等) 2.配基(Ligand ):是指高选择性,特异性抗体, 抗原 (生物亲和性)或特定亲和力的物质,(物理化学亲和型)
慢性脱髓鞘性N根炎, 多发性硬化,SLE, 重症类风关
硫酸葡聚糖
主要LDL抗体,其 次:C3a及其他补 体抗磷脂抗体,抗 RNP,抗AT-Ⅲ抗体 胆红素,胆汁酸
家族性高脂血症, 闭塞性A硬化,SLE, 多发性肌炎,系统 性硬化症 黄胆,术后肝损, 重症肝炎
苯乙烯聚合物
免疫吸附临床应用状况(1)
免疫吸附治疗适应范围广,多种科室均有应用的前途
多克隆绵羊 抗人抗体 色氨酸
所有免疫球蛋白及亚型有相近的结合 同上 力 抗乙酰胆碱抗体,抗DNA抗体,类风 湿因子,免疫复合物,ANCA抗体 重症肌无力,SLE, 类风关,ANCA相关 血管炎
常用吸附柱的功能与应用(2)
常用配体
苯丙氨酸
可吸附的物质
抗脱髓鞘因子,抗 DNA抗体,免疫复 合物
可治疗的疾病
肾脏科: 重症SLE,LN 抗GBM抗体肾炎(Good pasture syndrome) 新月体肾炎 原发性血管炎(ANCA阳性 如:Wegener氏肉芽肿,显微镜多 动脉炎) 溶血性尿毒症(HUS) 骨髓瘤性肾病 特发型肾病综合症 局灶节段性肾小球硬化 透析相关性淀粉样变 肾移植高敏状态,移植后排异等