钙激活氯通道蛋白TMEM16A在小鼠心肌组织的表达
钙激活氯离子通道TMEM16G的研究进展
(２０１８３２) ꎻ吉林省抗体工程科技协同创新中心大学生开放
科研项目.
作者简介: 张 磊(１９８１—) ꎬ女( 汉族) ꎬ副教授ꎬ硕士.
通信作者: 孙美艳(１９８１—) ꎬ女( 汉族) ꎬ副教授ꎬ博士.
这种氯离子通道的存在和功能ꎬ但对其分子结构知之
的研究进展进行综述ꎮ
关 键 词: ＴＭＥＭ１６ＧꎻＡＮＯ７ꎻ前列腺癌
中图分类号: Ｒ３１９ 文献标志码: Ａ
ＴＭＥＭ１６Ｇ 是一种特异性存在于前列腺中的蛋
导及细胞增殖等 [２] ꎮ 然而ꎬ人类最初仅是认识到了
ＴＭＥＭ１６) 家族ꎬ具有钙离子激活的氯离子通道( Ｃａｌ￣
甚少ꎮ 直到 ２００８ 年ꎬ 三 个 独 立 研 究 团 队 分 别 证 实
— ２８７ —
综 述
张 磊ꎬ李 明ꎬ王呈程ꎬ韩 江ꎬ孙美艳 ∗ ( 吉林医药学院检验学院ꎬ吉林 吉林 １３２０１３)
摘 要: ＴＭＥＭ１６Ｇ 是一种特异性存在于前列腺上皮细胞及前列腺癌细胞的跨膜蛋白ꎬ具有钙离子激活的氯
离子通道功能ꎬ且与前列腺癌的发生、发展密切相关ꎬ有望成为前列腺癌抗体治疗有效靶点ꎮ 现对 ＴＭＥＭ１６Ｇ
其编码的蛋白产物即为 ＴＭＥＭ１６Ｇ 蛋白ꎬ ＴＭＥＭ１６Ｇ
蛋白分子量为 ９５ ｋＤａꎬ是一种具有 ８ 次跨膜结构的糖
蛋白ꎬ在 Ｎ８０９ 及 Ｎ８２４ 位点存在糖基化结构 [１１] ꎮ
２ ＴＭＥＭ１６Ｇ 的功能
ＴＭＥＭ１６ 家族蛋白均定位于细胞的生物膜系统
中ꎬ常由 ８００ ~ １０００ 个氨基酸残基组成ꎬ涉及离子运
形式:较小的转录本( ＮＧＥＰ￣Ｓ) 编码 １７９ 个氨基酸残
TMEM16A氯通道对心肌缺血再灌注损伤的保护作用
TMEM16A氯通道对心肌缺血再灌注损伤的保护作用苏振宇;李小兵;李军鹏;李红方;黄建成;张会军【期刊名称】《中国心血管病研究》【年(卷),期】2018(016)004【摘要】目的探讨TMEM16A氯通道对心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法采用SD小鼠分离心肌细胞,分为4组,空白组正常培养细胞,模型组建立心肌缺血再灌注损伤模型,对照组在模型建立后采用Cl-free培养,实验组在模型建立后加入终浓度为0.1 mmol/L TMEM16A氯通道抑制剂,记录和观察细胞存活率,GSH-Px、SOD、MDA、LDH酶活性变化及细胞内的Ca2+含量,TMEM16A、NF-ΚB表达变化情况.结果模型组与空白组比较细胞存活率降低、LDH升高(P<0.05),对照组、实验组与模型组相比细胞存活率均升高,LDH均降低(P<0.05).模型组与空白组相比,细胞悬液中MDA含量升高,SOD、GSH-Px降低(P<0.05),对照组、实验组与模型组比较细胞悬液中MDA含量降低,SOD、GSH-Px活性升高(P<0.05).空白组心肌细胞Ca2+含量为13.44±11.43,模型组为207.13±19.33,对照组和实验组为43.55±5.39和24.59±3.19,模型组最高(P<0.05).模型组的TMEM16A、NF-ΚB 蛋白相对表达水平最高,其次为对照组,实验组和空白组最低,两两对比差异都有统计学意义(P<0.05).结论 TMEM16A氯通道在心肌缺血再灌注损伤中起了重要作用,与增加细胞内氧化应激作用、NF-ΚB活性、细胞内Ca2+含量有一定的相关性.%Objective To investigate the protective effect of TMEM16A chloride channel on myocardial ischemia reperfusion injury. Methods The cardiomyocytes were isolated from SD mice and were divided four groups. The blank group was given normal cultured,the model group was used toestablish the model of myocardial ischemia reperfusion injury,the control group was established by Cl-free cultured after the model was established, the experimental group was given the 0.1 mmol/L TMEM16A chloride channel inhibitor for cultured after the model was established,the cell survival rate,LDH,MDA,SOD,GSH-Px enzyme activity and intracellular the levels of Ca2+and the expression of NF-ΚB TMEM16A in the four groups were recorded. Results Compared with the blank group,the survival rate in the model group was significantly lower than that of the blank group,and the LDH was increased(P<0.05). Compared with the model group,the survival rate of the cells in the control group and the ex-perimental group was increased respectively,and the LDH were decreased(P<0.05). Compared with the blank group,the MDA levels in cell suspension was increased,SOD and GSH-Px decreased in the model group(P<0.05),while levels of MDA in the cell suspension in the control group the experimental group were decreased, and the activity of SOD and GSH-Px wereinc reased(P<0.05). The levels of Ca2+in the blank group was 13.44±11.43,and that in the model group was 207.13±19.33. The control group and the experimental group were 43.55± 5.39 and 24.59 ±3.19,respectively which were lower than that of the model group(P<0.05). The NF-ΚB, TMEM16A protein relative expression level in the model group was the highest,followed by the control group,the experimental group and control group were the lowest,there was statistically significant compared with two groups(P<0.05). Conclusion TMEM16A chloride channel in myocardial ischemia reperfusion injury played an important protective role,it hasrelationship with the increase of Ca2+levels,cell oxidative stress,NF-ΚB activity.【总页数】5页(P376-380)【作者】苏振宇;李小兵;李军鹏;李红方;黄建成;张会军【作者单位】050031 河北省石家庄市,河北医科大学第一医院心外科;050031 河北省石家庄市,河北医科大学第一医院心外科;050031 河北省石家庄市,河北医科大学第一医院心外科;050031 河北省石家庄市,河北医科大学第一医院心外科;050031 河北省石家庄市,河北医科大学第一医院心外科;050031 河北省石家庄市,河北医科大学第一医院心外科【正文语种】中文【中图分类】Q95-33;R542.2【相关文献】1.心肌缺血预处理联合后处理在大鼠心肌缺血-再灌注损伤过程中的保护作用 [J], 罗晨光;张顺业2.氯通道阻滞剂对大鼠心肌缺血再灌注损伤致心肌细胞凋亡的作用 [J], 陈涛;雷兰萍;周和平;金振晓3.TMEM16A氯通道对心肌缺血再灌注后损伤大鼠乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶的影响 [J], 苏振宇;黄建成;董彦博;李小兵;张会军4.双下肢与心肌缺血后处理对兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 李利文;李李;裴万敏5.体积调节氯通道与心肌缺血/再灌注损伤 [J], 李苹;孙晓莉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
TMEM16A：钙激活氯通道研究进展
础 的候选基 因 ， 以上蛋 白分子产生的氯离子电流都 与典 型 但
的天 然 Ｃ Ｃ ｓ 道 有 明显 区别 。最 近 几 个 研 究 小 组 几 乎 同 ａＣ 通
时报道 了 Ｃ Ｃ ｓ的分子基础是跨膜蛋 白 １ Ａ（ｒｎｍｅ ｂａ ｅ ａＣ ６ ｔ ｓ ｍ ｒｎ ａ ｐｏｅ ６ Ｔ Ｅ ６ ）２４ ， ｒｔｉ １Ａ，Ｍ Ｍ１ Ａ Ｌ １这将为在特定细胞和组织 中研 ｎ －
・
１９ ４ ０‘
中国药理学通报
Ｃ ｉｅ ｈ ｒ ａｏ ｇｃｌ ｕ ｅｎ ０ １Ｎ ｖ２ （ １ ：４０～ ｈｎｓ Ｐ ａｍ ｃｌ ｉ ｌｔ ２ １ ｏ ；７ １ ） １９ ３ ｅ ｏ ａ Ｂ ｌｉ
网络 出版 时 间 ： １ —１ ２ １０ ０ 网络 出版 地 址 ：ｔ ：／ ｗ ． ｎ ｉｎ ｔｋ ｍ ／ ｅ ｉ ３ ．０ ６ Ｒ ２ １ １２ ． ３ ０ ０ ２ ｈｍ ２ １ ０— ５０ ： ０ ０ ０： ｈ ｐ ／ ｗ ｗ ｃ ｋ． ｅ ｃ ｓ ｄ ｔ ｌ ４ １ ８ ． ．０ １０ ５ １０ ． ３ ． ｔ ｌ ｔ ／ ａ／
Ｔ Ｍ１Ａ： ＭＥ ６ 钙激活氯通道研究进 展
刘雅 妮 ， 张海林
（ 河北 医科 大学药理 学教研 室 ， 河北 石 家庄 ００１ ） ５０ ７
ｄｉ１ ．９ ９ ｊｉ ｎ １０ ｏ：０ ３ ６／．ｓ ．０ １—１７ ．０ １１ ．０ ｓ ９ ８ ２ １ ． １０４
由于技术上 的原 因 ，ａ Ｃ 分子基础 的问题一直未 能解 ＣＣ ｓ 决， 曾有报道认为 Ｃ Ｃ ＣＣ３ Ｂ ｓ ｏｈｎ 是 Ｃ Ｃ ｓ Ｌ Ａ、 １一、 ｅｔ ｐｉｓ ｒ ａ Ｃ 分子 基
２ ０ Ｃ ５２ ０ ） ０ ７ Ｂ １ １２
剂 的敏感性也 不同。最近 的研 究表 明 ，ｅｔ ｐ ｉｓ ｂ ｓｏｈｎ 为钙 离子 ｒ 通过 内质 网膜 提供 电动力 Ｊ 。 ２０ ０ ８年 ， ３个研究小组几乎 同时用不 同方 法独立 指出 了 Ｔ Ｅ ６ Ｍ Ｍ１Ａ是 Ｃ Ｃ ｓ ａ Ｃ 的分 子基 础。体内或体外 Ｔ Ｍ１ Ａ沉 ＭＥ ６
钙激活氯通道蛋白ANO1在小鼠主动脉平滑肌细胞的表达及其功能鉴定
３ 。 内参 Ｂ — ａ ｃ ｔ ｉ ｎ引物序列 ： 上游 ５ ． Ｃ Ａ Ｔ Ｃ Ｃ Ｔ Ｇ Ｃ Ｇ Ｔ Ｃ Ｔ — Ｇ Ｇ Ａ Ｃ Ｃ Ｔ Ｇ 一 ３ ， 下 游 ５ 一 Ａ Ｔ Ｃ Ｔ Ｃ Ｃ Ｔ Ｔ Ｃ Ｔ Ｇ Ｃ Ａ Ｔ Ｃ Ｃ Ｔ Ｇ Ｔ Ｃ 一 ３ 。Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ产 物进行 ２ ％琼脂糖凝胶 电泳 。
凝胶 电泳后转 至 Ｐ Ｖ Ｄ Ｆ膜 ， 封闭２ ｈ ， 加 Ａ Ｎ Ｏ １单 克
作 为研 究 对 象 ， 应 用分子生 物学 、 免 疫 荧 光 化 学 方
法 以及 荧 光 淬 灭 动 力 学 实验 ， 明确 Ａ Ｎ Ｏ １ 在 主 动 脉
观 察细 胞形 态 ， 流式 细胞术 检测 平滑 肌细胞 纯 度 。
１ ． ２ ． ２ 逆 转 录一 多 聚酶 联 反应 （Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ） 检测 Ａ Ｎ ０１ 表达 应用 Ｔ Ｒ Ｉ Ｚ ｏ ｌ 提取 Ｒ Ｎ Ａ。 以 总 Ｒ Ｎ Ａ为 模
平 滑 肌细胞 的 表 达 ， 为深入研 究该通 道功能 、 明 确 该 通道 与 高 血 压 的 发 病 机 制 及 靶 向 治 疗 提 供 实 验
依 据
１ 材 料 与方 法
板， 逆转 录 为 ｃ Ｄ Ｎ Ａ， Ｐ Ｃ Ｒ扩 增 。参 照 文 献 ［ ４ ］ 合 成
Ａ Ｎ Ｏ １引 物 序 列 ： 上游 ５ 一Ｇ Ｇ ＡＣ Ｃ Ｔ Ｇ Ｇ Ｇ Ｃ Ｔ Ａ Ｔ Ｇ Ａ Ｇ ．
关键 词 ： Ａ Ｎ Ｏ １蛋白 ； 钙激 活氯离子通道 ； 小 鼠； 主动脉平 滑肌 细胞
中 图分 类 号 ： Ｒ ３ ３ ７ ． ５ 文 献标 志码 ： Ｂ
钙激活的氯离子通道
钙激活的氯离子通道
钙激活的氯离子通道（Calcium-activated Chloride Channels，CaCCs）是一种在细胞膜上表达的离子通道，它对氯离子（Cl-）具有高度选择性，并且可以被细胞内的钙离子（Ca2+）激活。
CaCCs 在许多生理过程中发挥着重要作用，例如细胞体积调节、神经元兴奋性、平滑肌收缩和腺体分泌等。
在神经元中，CaCCs 参与了突触传递和神经递质释放的调节；在平滑肌细胞中，CaCCs 参与了平滑肌收缩的调节；在腺体细胞中，CaCCs 参与了腺体分泌的调节。
CaCCs 由多个亚基组成，其中最主要的亚基是TMEM16A。
TMEM16A 是一种跨膜蛋白，它包含了6 个跨膜螺旋和1 个N 端和1 个C 端。
TMEM16A 可以与其他亚基结合形成功能性的离子通道。
CaCCs 的活性受到多种因素的调节，包括细胞内的Ca2+浓度、膜电位、pH 值和磷脂等。
其中，细胞内的Ca2+浓度是最主要的调节因素。
当细胞内的Ca2+浓度升高时，CaCCs 被激活，Cl-通过通道进入细胞内，导致细胞膜电位去极化和细胞体积增大。
CaCCs 的异常表达或功能失调与多种疾病有关，例如囊性纤维化、哮喘、慢性阻塞性肺病和膀胱癌等。
因此，CaCCs 已成为药物研发的重
要靶点之一。
tmem蛋白家族分类
tmem蛋白家族分类Tmem蛋白家族分类Tmem蛋白家族是一类跨膜蛋白家族，其成员在细胞膜上具有跨膜结构，参与多种细胞功能的调节和信号传导。
本文将对Tmem蛋白家族进行分类和介绍。
一、按功能分类1. 转运蛋白：Tmem蛋白家族中的一部分成员具有转运物质的功能。
例如，Tmem16家族成员在细胞膜上形成离子通道，参与离子的转运和电信号的传导。
Tmem16A通常被称为CaCCs，具有钙激活的氯离子通道功能。
另外，Tmem16F也被称为ANOs，参与磷脂外翻和氯离子通道功能。
2. 受体蛋白：Tmem蛋白家族中的一些成员具有受体功能，可以与外界信号分子结合，触发细胞内的信号传导。
例如，Tmem16K是一种受体蛋白，能够与神经肽Y受体相互作用，参与胰岛素和葡萄糖的调节。
3. 信号传导蛋白：Tmem蛋白家族中的一部分成员参与细胞内信号传导的调节。
例如，Tmem55B是一种负调节因子，能够与细胞内信号传导通路中的蛋白相互作用，抑制信号的传导。
二、按结构分类1. 单跨膜蛋白：Tmem蛋白家族中的一部分成员只具有一个跨膜结构。
例如，Tmem16A和Tmem16F都是单跨膜蛋白，其跨膜区域与离子通道结构密切相关。
2. 多跨膜蛋白：Tmem蛋白家族中的另一部分成员具有多个跨膜结构。
例如，Tmem55B是一种具有6个跨膜结构的蛋白，其跨膜区域与信号传导通路相关。
三、按组织特异性分类1. 神经系统特异性：Tmem蛋白家族中的一些成员在神经系统中表达较高。
例如，Tmem16A在中枢神经系统中广泛表达，参与神经传递过程。
而Tmem16F在脑部神经元中表达较高，参与神经调节。
2. 免疫系统特异性：Tmem蛋白家族中的另一部分成员在免疫系统中表达较高。
例如，Tmem55B在免疫细胞中表达较高，参与免疫应答和炎症调节。
四、按疾病关联分类1. 神经系统疾病：Tmem蛋白家族中的一些成员与神经系统疾病相关。
例如，Tmem16K的突变与肌阵挛性侧索硬化症有关，该疾病是一种影响中枢神经系统的退行性疾病。
TMEM16A:钙激活氯通道研究进展
TMEM16A：钙激活氯通道研究进展刘雅妮;张海林【摘要】钙激活氯通道(calcium-activated chloride channels,CaCCs)组织分布广泛,参与了众多生理过程,如感觉传导、神经和心肌兴奋性调节、腺体和上皮分泌等,甚至可能参与细胞分裂周期与细胞增殖.钙激活氯通道生理病理意义如此重要,但直到2008年才报道了跨膜蛋白16A(transmembrane protein 16A,TMEM16A)为钙激活氯通道的分子基础,同时研究揭示TMEM16A在一些肿瘤组织中表达明显上调.该文即对钙激活氯通道的生理、病理学意义进行综述.%The Ca + activated Cl channels ( CaCCs ) play a variety of physiological roles in many organs and tissues, including transduction of sensory stimuli, regulation of neuronal and cardiac excitability, and transepithelial Cl secretion. In addition, CaCCs may be involved in the cell division cycle and cell proliferation. The molecular identity of CaCCs remained controversial until 2008 when TMEM16A, a member of the transmembraneprotein 16 family, was identified as an important subunit of CaCCs. In this review, the physiological and pathophysiological roles of CaCCs are discussed.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2011(027)011【总页数】4页(P1490-1493)【关键词】钙激活氯通道(CaCCs);跨膜蛋白16A;分子基础;构效关系;特异性;肿瘤【作者】刘雅妮;张海林【作者单位】河北医科大学药理学教研室,河北,石家庄,050017;河北医科大学药理学教研室,河北,石家庄,050017【正文语种】中文【中图分类】R-05;R341;R329.25;R977.6钙激活的氯通道(calcium-activated chloride channels，CaCCs)广泛分布在内皮细胞、上皮细胞、甚至血细胞等非兴奋细胞，及心肌细胞、神经细胞、血管平滑肌细胞等可兴奋细胞。
Anoctamin家族中钙激活氯离子通道调节剂筛选及应用研究进展
Anoctamin家族中钙激活氯离子通道调节剂筛选及应用研究进展吴明达;洪啟元;兰月娇;姚岚;习诗婷;刘雪莹;高俊涛;郑锴;郝峰【期刊名称】《中国药理学与毒理学杂志》【年(卷),期】2024(38)6【摘要】钙激活氯离子通道(CaCC)是一类能通过胞内钙离子激活转运氯离子的通道蛋白,其主要在神经元和肌细胞中参与调节膜电位、细胞内钙平衡和细胞兴奋性等重要的生理作用。
Anoctamin(Ano)家族中Ano1是最经典的CaCC,Ano1的靶向调节剂对癌症、囊性纤维化、高血压、腹泻和哮喘等疾病具有潜在治疗作用。
自2008年Ano1首次被发现后,先后出现了多种CaCC特异性调节剂的筛选方法,主要包括基于荧光蛋白的高通量初级筛选、电生理膜片钳技术和虚拟筛选,进而发现了多种药理学作用不同的小分子调节剂。
本文综述了目前较为主流的筛选方法的原理和优缺点,并对迄今发现的Ano1特异性调节剂的化学结构和潜在的应用进展进行综述。
【总页数】10页(P445-454)【作者】吴明达;洪啟元;兰月娇;姚岚;习诗婷;刘雪莹;高俊涛;郑锴;郝峰【作者单位】吉林医药学院检验学院;吉林医药学院公共卫生学院;吉林省人民医院;北华大学医学技术学院;吉林医药学院基础医学院【正文语种】中文【中图分类】R965;R915【相关文献】1.钙离子激活的氯离子通道蛋白TMEM16A在女性生殖系统中的研究进展2.基于钙激活氯离子通道的Piezo1通道调节剂高通量筛选模型的构建3.小鼠背根神经节中三个不同的钙激活氯离子通道基因家族的表达(英文)4.钙激活的氯离子通道蛋白A在肿瘤形成中作用的研究进展5.钙激活的氯离子通道Anoctamin 5在骨骼肌发育过程中的表达变化因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
跨膜蛋白16A_钙激活氯通道的最新进展
不断涌现．TMEM16A 是目前在细胞膜上发现的较 为明确的 CaCC 通道，所以它的作用机制和作为 CaCC 通道的阴离子电流产生机制也引发了众多研 究者的兴趣．
Tmem16a 属于 Tmem16 基因家族(Tmem16a 到 k)，人类有 10 种 Tmem16a 的同源基因．Yang 等 在鼠眼中利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的 方法克隆到了它的全长 cDNA，其开放阅读框长度 为 2 880 个核苷酸，编码含 960 个氨基酸残基的蛋 白质．疏水性分析表明，TMEM16A 蛋白具有 8 个 跨膜结构域，小鼠的 Tmem16a 与人的同源基因之 间有 91%的序列相似性．有趣的是，Tmem16 基因 家族与其他的离子通道基因家族序列同源性非常 低[7]．其中的 Tmem16b 与 Tmem16a 在基因序列上 有 60%的相似度，其他成员的序列相似度较低． Tmem16 基因家族成员的蛋白质拓扑结构类似，都 具有 8 个跨膜(transmembrane，TM)结构和胞内的 N 端与 C 端，基于它们的拓扑结构和在阴离子转 运中的作用，它们也被称为 anoctamin1～10．值得 注意的是，它们的跨膜结构部分的一级结构保守性 最大．TM5 和 TM6 跨膜区可能是形成通道的关键 组分，因为此区域带正电荷的氨基酸突变成带负电 荷的谷氨酸(R621E，K645E 和 K668E)可显著降低 通道对阴离子的通透性，而可以同时升高对阳离子 的通透性，即改变通道的离子选择性[7, 12]．TM3 上 的精氨酸和 TM6 的谷氨酸突变也可改变该通道的 离子选择性和电压依赖性[11]．构象一致性分析预测 到 TMEM16A 蛋白的胞内部分可能具有多个蛋白 激酶 A/C/G 和酪氨酸蛋白激酶磷酸化位点，而在 其胞外部分则具有多个糖基化位点．尽管 TMEM16A 为细胞内钙所激活，但一致性分析却 未能找到钙离子结合常见的 EF 手结构或者钙离 子 - 钙调蛋白(CaMK)结合常见的 IQ 模体[7]． 2．2 TMEM16A 的膜表面表达特性和组织分布
钙离子激活的氯离子通道蛋白TMEM16A在女性生殖系统中的研究进展
钙离子激活的氯离子通道蛋白TMEM16A在女性生殖系统中的研究进展吴开林【摘要】Transmembrane protein 16A (TMEM16A), the molecular basis of calcium-activated chloride chan-nels (CaCCs), is distributed in various tissues and organs of human body and has important significance in many physio-logical and pathological processes. In recent years, study on distribution and function of TMEM16A in female reproduc-tive system has gradually increased, such as the contraction of uterine smooth muscle, the synthesis of estrogen in ovari-an granulosa cells and the regulation of oocyte morphology, all of which suggest the physiological importance of TMEM16A in female reproductive system. This article will review the latest research progress of TMEM16A in the fe-male reproductive system.%作为钙离子激活的氯离子通道(CaCCs)分子基础的跨膜蛋白16A(TMEM16A)分布于人体多种组织器官中,对许多生理和病理过程具有重要意义.近年来,对TMEM16A在女性生殖系统中分布和作用的研究逐渐增多,比如参与子宫平滑肌的收缩、影响卵巢颗粒细胞雌激素的合成以及调节卵母细胞的形态等,这些都提示了TMEM16A在女性生殖系统中的生理重要性.现本文将就TMEM16A在女性生殖系统各方面的最新研究进展进行综述.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2017(028)020【总页数】5页(P3360-3364)【关键词】钙离子激活的氯离子通道;跨膜蛋白16A;女性生殖系统【作者】吴开林【作者单位】武汉大学人民医院生殖医学中心,湖北武汉 430060【正文语种】中文【中图分类】R711钙激活氯通道(calcium-activated chloride channels，CaCCs)是一类受细胞内钙离子调节的氯离子通道，早于20世纪80年代便由Miledi在非洲爪蟾卵母细胞中发现[1]，因其参与许多生理和病理过程而备受关注。
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第４ ８卷 第３期 ２ ０ １ ２年６月
青 岛 大 学 医 学 院 学 报
Ａ Ｃ ＴＡ Ａ Ｃ Ａ Ｄ ＥＭ Ｉ Ａ Ｅ ＭＥ Ｄ Ｉ Ｃ Ｉ ＮＡ Ｅ Ｑ Ｉ ＮＧ Ｄ ＡＯ ＵＮ Ｉ Ｖ Ｅ Ｒ Ｓ Ｉ ＴＡＴ ． ３ ０ １ ２ Ｊ ｕ ｎ ｅ ２
钙激活氯通道蛋白 ＴＭ ＥＭ １ ６ Ａ 在小鼠心肌组织的表达
贾辉辉１ ， 韩晓华２ ， 曲志强２ ， 傅增泮１
（ 青岛大学医学院 ， 山东 青岛 ２ ６ ６ ０ ０ ３ １ 附属医院心血管内科 ； ２ 生理学教研室 ）
［ 摘要 ］ １ ６ Ａ 在小鼠心肌组织 的 表 达 。 方 法 采 用 Ｒ Ｔ－Ｐ Ｃ Ｒ 和免疫荧 目的 探讨钙激活氯通道蛋白 ＴＭＥＭ 光染色方法 ， 检测小鼠心肌组织中 ＴＭＥＭ １ ６ Ａ 的表达 。 结果 小鼠心肌组 织 中 检 测 到 ＴＭＥＭ １ ６ Ａ ｍＲ ＮＡ 和 蛋 白 的表达 。 结论 小鼠心肌存在 ＴＭＥＭ １ ６ Ａ 通道蛋白 。 ［ 关键词 ］ 氯通道 ； 心肌 ； 小鼠 １ ６ Ａ 蛋白 ； ＴＭＥＭ ［ （ ） 中图分类号 ］ 文献标志码 ］ 文章编号 ］ ４ ６ ３； Ｒ ３ ３ １． ３ ［ ６ ７ ２ ４ ４ ８ ８ ２ ０ １ ２ ０ ３ ０ ２ ０ ４ ０ ３ Ｑ Ａ ［ １ － － －
是心肌主要的氯离 Ｃ ａ Ｃ Ｃ 通道） 钙激活氯通道 （ 子通道 之 一 ， 该通道与心肌细胞的电活动关系密
１］ 。Ｃ 切［ ａ Ｃ Ｃ 通道不仅参 与 心 肌 静 息 电 位 的 形 成 及
逆转 录 试 剂 盒 （ 为Ｆ Ｋ １ ６ ２ ２） ｅ ｒ ｍ ｅ ｎ ｔ ａ ｓ 公 司 产 品， 、 Ｄ Ｌ １ ０ ０ ０Ｄ ＮＡ Ｍ ａ ｒ ｋ ｅ ｒ Ｐ Ｃ Ｒ 引物 、 Ｐ ｒ ｅ ｍ ｉ ｘ Ｔ ａ ｑ 均由 ＴＡＫＡＲ Ａ 公 司 提 供 。 兔 抗 ＴＭＥＭ １ ６ Ａ 多克隆抗 体（ 一抗 ， 及Ｆ 二 ａ ｂ ５ ３ ２ １ ２） Ｉ Ｔ Ｃ 标记的 羊 抗 兔Ｉ Ｇ（ ｇ ） 抗， 均为 Ａ ａ ｂ ６ ７ １ ７ ｂ ｃ ａ ｍ 公 司 产 品。 实 验 仪 器 主 要 、 紫外分光光度计 （ 德国 Ｅ 包括 ： ｅ ｎ ｄ ｏ ｒ ｆ 公司 ） Ｐ Ｃ Ｒ ｐ ｐ 、 仪（ 美国 Ｔ 激光共聚焦扫描显微镜 ｈ ｅ ｒ ｍ ｏ 公 司） （ 日本 Ｏ 等。 Ｆ Ｖ ５ ０ ０， ｌ ｍ ｕ ｓ公司 ） ｙ ｐ １． ２ Ｒ Ｔ－ Ｐ Ｃ Ｒ 检 测 心 肌 组 织 ＴＭＥＭ １ ６ Ａ ｍＲ ＮＡ 的表达 成年 及 新 生 小 鼠 各 ６ 只 ， 拉颈处死后迅速取出 心脏 ， 取５ ０～１ ０ ０ｍ ｒ ｉ ｚ ｏ ｌ试 剂 提 取 ｇ心肌组织以 Ｔ 总Ｒ ＮＡ。ｃ Ｄ ＮＡ 按 照 Ｆ ｅ ｒ ｍ ｅ ｎ ｔ ａ ｓ反 转 录 试 剂 盒 说 ， 明 合成 ： 反应体系 ２ ０μ Ｌ，包括 Ｒ ＮＡ 模板 ５μ Ｏ ｌ ｉ － ｇ （ ｄ Ｔ）引物 １ μ Ｌ， ５ × 反 应 缓 冲 液 ４μ Ｌ，Ｒ Ｎ ａ ｓ ｅ ｏ ｇ ／ ， 抑制剂 １μ 混合物 Ｌ， １ ０ｍｍ ｏ ｌ Ｌ ｄ ＮＴ Ｐ ２ Ｌ ＭＬ Ｖ μ 反转录酶 １ μ 加Ｄ Ｌ， Ｅ Ｐ Ｃ 水至２ ０μ Ｌ。４ ２ ℃反应 １ｈ， ７ ０ ℃ 加热 ５ｍ ｉ ｎ 以 终 止 反 应 。 取 １μ Ｌ 反转录 ／ 由 ｃ Ｄ ＮＡ 或 ０． １μ Ｌ ＴＭＥＭ １ ６ Ａｃ Ｄ ＮＡ （ ０． １ｍ Ｌ， ｇ ， 美国 Ｅ 根据 ｍ ｏ ｒ Ｔ Ｚ Ｅ Ｌ Ｌ 教 授 惠 赠） ｙ 大 学 ＨＡＲ Ｐ ｒ ｅ ｍ ｉ ｅ ｒ ３． ０ 设 计 ＴＭＥＭ １ ６ Ａ 和 ＧＡ Ｐ ＤＨ 引 物 。 上游引物 ５ ＴＭＥＭ １ ６ Ａ： ′ Ｔ Ｃ Ｇ Ｔ Ｃ ＡＡＴ Ｃ Ａ Ｃ Ａ Ｃ Ｇ －Ｔ － ， 下游引物５ Ｃ Ｔ Ｃ Ｔ Ｃ ３ ′ ′ Ｃ Ｔ Ｇ Ｃ Ｔ Ｃ Ｃ Ｔ Ｃ Ａ Ｃ Ｇ Ｃ ＡＴＡ － － － ， 扩增产 物 大 小 ３ 上游引 ＡＡ Ｃ Ａ ３ ′ ３ ０ｂ ＧＡ Ｐ ＤＨ： － ｐ； ， 物５ ′ Ｃ Ｃ Ｃ Ｃ Ｃ ＡＡＴ Ｇ ＴＡＴ Ｃ Ｃ Ｇ Ｔ Ｔ Ｇ Ｔ Ｇ ３ ′ 下游引 － －