实验4 植物细胞骨架的观察
实验4 细胞骨架的显示及观察学习资料
实验4 细胞骨架的显示及观察姓名：李思露学号：131140040一、实验目的1.掌握用考马斯亮蓝R250染色观察动物和植物细胞骨架的原理和方法。
2.了解免疫荧光法检测细胞成分的原理和方法。
二、实验原理1.细胞骨架：指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。
广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。
狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括微管（microtubule，MT）、微丝（microfilament，MF）、中间纤维（intermediated filament，IF）。
2.微管微管是细胞内由微管蛋白形成的直径约20~26nm的长度不一的小管。
分布在核周围，呈放射状向胞质四周扩散，主要确定膜性细胞器的位置和作为膜泡运输的导管。
微管蛋白有α和β两种。
αβ异二聚体沿纵向聚合成丝，原丝成环状排列形成微管的壁。
微管不稳定，对低温（冷冻）、高压等物理因素及秋水仙素（微管断裂剂）等化学因素敏感。
紫杉醇可以和微管蛋白多聚体结合，抑制微管解聚。
3.微丝：真核细胞内是主要由肌动蛋白（actin）组成的直径为5～7nm的骨架纤丝。
主要分布在细胞质膜的内侧，作用是确定细胞表面特征、并与细胞运动、收缩、内吞等功能有关。
脊椎动物肌动蛋白分为α、β和γ三种类型，不同种类细胞中肌动蛋白组成不同。
肌动蛋白单体为球形，依次连接成链，两串肌动蛋白链互相缠绕扭曲成一股微丝。
细胞松弛素B为微丝断裂剂。
4.中间纤维：直径介于微丝和微管之间（7~11nm）、由多种不同蛋白组成的细胞骨架成分。
在细胞中围绕着细胞核分布，成束成网，并扩展到细胞质膜，与质膜骨架相连结。
主要起机械支撑和加固作用。
组成中间纤维的蛋白：角蛋白，波形蛋白，结蛋白、神经纤维，神经胶质纤维和核纤层蛋白。
不同组织来源的细胞，组成其中间纤维的蛋白质种类可能不同。
5.研究细胞骨架的意义。
（1）了解细胞骨架与细胞各种功能行使之间的关系。
（2）了解理化因素是否通过影响细胞骨架对细胞功能产生影响，以便趋利避害。
植物细胞骨架的光学显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察
首先，我们需要准备植物细胞标本。
可以选择一片老化或短时处理的叶片或根尖作为实验材料。
将其取下并迅速固定在伊红溶液中，避免细胞变形。
接下来，需要进行细胞固定和染色。
将固定好的细胞标本移至PBS （磷酸缓冲盐溶液）中进行洗涤，以去除残余的伊红溶液。
然后，在细胞中加入透明质酸，将其中和离子对骨架的结合，使骨架暴露出来。
接着，利用荧光染色剂如荧光素-鲍曼氏染液或Phalloidin染液来染色微丝以及微管。
准备好细胞标本后，我们可以将其放置在显微镜下进行观察。
在显微镜镜头下，可以看到细胞内微丝和微管形成的骨架结构。
微丝主要分布在细胞质内，形成一种网状结构，其中包括原生质流动的微丝束。
而微管主要分布在细胞中心，形成一个网络，并且辐放到细胞外围。
进一步观察时，可以调节显微镜的焦距和光源强度，以获得更清晰的图像。
可以使用高倍目镜观察细胞骨架的细节，并使用显微镜移动台来调整视野。
此外，还可以利用荧光显微镜技术，通过筛选不同波长的荧光滤光片，进一步突出特定荧光标记的细胞结构。
通过光学显微镜观察植物细胞骨架，可以更深入地了解细胞结构和功能。
通过观察微丝和微管的分布和连通性，可以了解细胞形态的维持和改变，细胞分裂以及细胞运动等生理过程。
此外，还可以观察植物细胞骨架在应对外界环境刺激，如生物逆境和激素信号的响应中的作用。
这些研究可以为揭示细胞生物学的本质和发展新的疾病治疗方法提供重要的参考。
植物细胞骨架的显示与观察
植物细胞骨架的显示与观察
实验目的 １．加深了解细胞骨架成份的化学性质、形态
分布与功能。 ２．掌握用考马斯亮兰显示细胞骨架系统的原
理与方法。
植物细胞骨架的显示与观察
１．仪器、用具 显微镜、载玻片、盖玻片、剪刀、镊子
２．材料 新鲜的洋葱鳞茎内表皮
３．试剂 （１）3%戊二醛固定液 （２）1%TritonX-100抽提剂 （３）0.2%考马斯亮兰R250染色液
植物细胞骨架的显示与观察
1 取材：新鲜内表皮。 2 固定：3%戊二醛固定液，15min。水洗干净，
吸干水分。 3 抽提：1%TritonX-100抽提剂，20min。水洗
干净，吸干水分。 4 染色：0.2%考马斯亮兰R250染色液，20-
60min。可以做多个制片，染色不同的时间 观察比较。 5 无需或者稍微水洗，盖片，镜检。 操作过程中注意材料需与试剂充分接触。
植物细胞骨架的显示与观察
观察时，先用低倍镜观察，可以看见细胞的核 区及细胞质中的细胞骨架成份被染成兰色，成束 的细胞骨架成份从核周围呈现放射状地向细胞质 中延伸，找到典型的图像后，转用油镜细心观察 ，注意调节显微镜的工作状态，尽可能达到最佳 分辨效果和清晰度，并仔细地调节细调旋钮，在 立体细胞的不同水平面进行观察。这时候，可以 看到细胞骨架结构的立体情况，并在细胞膜下见 到由很细的纤维构成的网格结构，此外，还可以 明显观察到横穿细胞壁的胞间连丝存在的部位。
的三维的纤维状网架体系。不仅维持细胞形态，在细胞分裂、 细胞生长、细胞物质运输、细胞壁合成等许多生命活动中都 具有非常重要的作用。发现较晚，主要是因为一般电镜制样 采用低温固定，而细胞骨架会在低温下常解聚。直到20世纪 60年代后，采用戊二醛常温固定，才逐渐认识到细胞骨架的 客观存在。细胞骨架一般包括微丝、微管和中间纤维，广义 的细胞骨架还包括核骨架、核纤层和细胞外基质，形成贯穿 于细胞核、细胞质、细胞外的网络结构。
实验四 植物细胞骨架的观察
三、实验用品
（一）材料 ： 洋葱 （二）器材： 显微镜、载玻片、滴管、擦镜纸、 PH 计 （三）试剂： 1、 0.01mol/L 磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)
0.2mol/L Na2HPO4- NaH2PO4缓冲液（PB，PH7.3） 50ml、0.15mol/L NaCl、加双蒸馏水加至1000ml
实验四 植物细胞骨架的观察
一、实验目的
1. 掌握考马斯亮蓝R250 对植物细胞骨架染色的方 法。 2. 通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨 架的制备方法与显微形态观察。
பைடு நூலகம்
二、实验原理
细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主 要成分的网络结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和 组装结构的不同可分为微丝、微管和中等纤维。细胞骨架 对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转 换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。本试验采用去 垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的 膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却 被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250 染色，在光学显微 镜下可见一种网状结构。
2、 PB
0.2mol/L Na2HPO4 0.2mol/L NaH2PO4 77ml 23ml
3、 M-缓冲液
咪唑(PH 6.7) KCl MgC12 EGTA EDTA 巯基乙醇 甘油 用1mol/L HCl 调pH 至7.2。 50mmol/L 50mmol/L 0.5mmol/L 1mmol/L 0.1mmol/L 1mmol/L 4mmol/L
五、实验建议
1、 用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理材料时，应 控制在30min 左右。 2、 每一次加液或染色后，应用PBS 洗2 次，并用 滤纸吸干。
细胞骨架的观察实验报告
细胞骨架的观察实验报告细胞骨架的观察实验报告细胞是生命的基本单位，它们构成了人体和其他生物体的组织和器官。
细胞内存在着许多重要的结构，其中之一就是细胞骨架。
细胞骨架是由微观的蛋白质纤维组成的网络结构，它在细胞内起着支撑和维持细胞形态、运动和分裂等重要功能。
为了更好地理解细胞骨架的结构和功能，我们进行了一系列的观察实验。
实验一：荧光染色观察细胞骨架我们首先使用了一种叫做荧光染色的技术来观察细胞骨架。
在实验中，我们选取了一种叫做荧光素的染料，它能够与细胞骨架中的蛋白质结合，并发出荧光信号。
我们将这种染料加入到培养皿中的细胞培养液中，让其与细胞骨架结合。
然后，我们使用荧光显微镜观察细胞，并通过摄像机将观察到的图像记录下来。
在观察的过程中，我们发现细胞骨架呈现出一种网状结构。
这个结构覆盖了整个细胞，并且与细胞膜相连。
通过进一步的观察，我们发现细胞骨架在不同类型的细胞中有所差异。
在肌肉细胞中，细胞骨架形成了一种有序的纤维排列，这种排列有助于肌肉的收缩和运动。
而在神经细胞中，细胞骨架则呈现出一种分支状结构，这种结构有助于神经细胞的延伸和传导。
实验二：细胞骨架的动态观察为了更深入地了解细胞骨架的功能，我们进行了细胞骨架的动态观察实验。
在这个实验中，我们使用了一种叫做活细胞荧光显微镜的仪器，它能够实时观察细胞骨架的运动和变化。
通过实验，我们发现细胞骨架是一个动态的结构，它可以根据细胞的需要进行重组和重塑。
当细胞需要移动或分裂时，细胞骨架会重新组织，形成一个新的结构，以支撑和维持细胞的活动。
而当细胞需要改变形态或进行细胞内物质的运输时，细胞骨架会发生变化，以适应细胞的需求。
此外，我们还观察到细胞骨架在细胞运动中的重要作用。
通过实验，我们发现细胞骨架能够通过与细胞膜的相互作用，推动细胞的移动。
当细胞需要移动时，细胞骨架会向前伸展，并与细胞膜相连，通过收缩和伸展的运动，推动细胞的移动。
细胞骨架在细胞分裂中也起着重要的作用。
细胞骨架观察实验报告
细胞骨架观察实验报告细胞骨架观察实验报告细胞骨架是细胞内的一种重要结构，由微丝、中间丝和微管组成。
它们在维持细胞形态、细胞运动以及细胞内物质的运输等方面起着重要的作用。
为了更好地了解细胞骨架的结构和功能，我们进行了一系列的观察实验。
实验一：细胞骨架的染色观察我们首先使用荧光染色技术对细胞骨架进行观察。
通过使用荧光标记的抗体，我们能够将细胞骨架上的蛋白质特异性地染色，从而使其在显微镜下呈现出荧光信号。
在实验中，我们选择了小鼠肺细胞作为观察对象。
将细胞固定在载玻片上后，使用抗体与荧光标记结合，然后进行显微镜观察。
结果显示，细胞骨架呈现出网状结构，覆盖在整个细胞内。
微丝呈现为细而长的纤维，中间丝则呈现为较粗的纤维，微管则呈现为管状结构。
通过荧光染色技术，我们能够清晰地观察到细胞骨架的分布和形态。
实验二：细胞骨架的动态观察为了观察细胞骨架的动态变化，我们进行了实时显微镜观察。
在实验中，我们使用了活体细胞显微镜，能够对细胞进行连续观察并记录下来。
通过观察，我们发现细胞骨架在细胞运动过程中发挥着重要作用。
例如，在细胞的伸展和收缩过程中，微丝会发生变化，从而影响细胞的形态。
此外，细胞骨架还参与了细胞内物质的运输。
微管作为细胞内物质运输的通道，能够将物质从细胞核运输到细胞的其他部位。
实验三：细胞骨架与细胞功能的关系细胞骨架不仅仅是维持细胞形态的重要结构，还与细胞的功能密切相关。
为了探究细胞骨架与细胞功能之间的关系，我们进行了一系列的功能实验。
在实验中，我们选择了细胞的迁移能力作为研究对象。
通过抑制细胞骨架的形成，我们发现细胞的迁移能力明显受到抑制。
这表明细胞骨架对细胞的迁移过程起到了重要的调控作用。
此外，我们还观察到细胞骨架与细胞分裂之间的关系。
在细胞分裂过程中，细胞骨架会发生动态重组，从而参与细胞的分裂。
通过抑制细胞骨架的形成，我们发现细胞的分裂过程受到了明显的干扰。
综上所述，细胞骨架是细胞内的一种重要结构，对细胞的形态、运动以及功能都起着重要的作用。
植物细胞骨架的光学显微镜观察
几种不同类型显微镜的使用及其对胞质环流的观察一、实验目的学会使用相差显微镜，掌握暗视野技术，以及荧光显微镜等技术二、实验原理在活细胞中，原生质流动是细胞活力强弱的重要标志，它的产生与细胞中微丝的作用是密不可分的。
微丝的纤维较细，直径为5－6nm，主要成分是肌动蛋白、肌球蛋白和原肌球蛋白，并像肌肉一样有收缩功能。
微管是由一种叫做微管蛋白的蛋白质组成的，位于原生质（静止的）外质，紧靠在质膜之下，离运动的内质至少有1µm的距离，与胞质川流运动无关，主要起保持细胞形状、承担细胞运动和细胞内物质运输的作用。
另外，用秋水仙素与细胞松弛素B处理也可产生不同的结果。
经秋水仙素处理后，细胞的纤维被扰乱，但不影响川流运动，这是与秋水仙素影响边缘微管作用有关。
相反，用细胞松弛素B处理，就可抑制细胞的川流运动，很明显，微丝担负着川流运动的功能。
胞质环流需要消耗能量，也受温度、渗透压以及离子浓度的影响。
三、实验材料新鲜洋葱鳞茎，刚毛藻等。
四、实验器材相差显微镜，普通光学显微镜，黑卡纸，载玻璃片，盖玻片，镊子，吸水纸，剪刀，滴管，擦镜纸。
五、实验药品100µg/ml秋水仙素溶液，20µg/ml细胞松弛素B(cytochalasin B)，蒸馏水，香玻油，二甲苯。
六、实验步骤1.取新鲜洋葱鳞茎内表皮约1cm2 或更小，放在干净的载玻片上，加一小滴水，将盖玻片倾斜盖上，并注意不出现气泡，即制成水封片。
2.取一块黑纸，把它剪成暗视野显微镜用的遮光板，并放入普通光学显微镜的聚光器下的光阑上，制成暗视野显微镜。
（须反复调整遮光板的尺寸以得到最佳效果）。
3.把制成的水封片放在暗视野显微镜下用10倍物镜观察，可以看到在明亮的细胞壁与半透明的细胞核之间有很多极小而明亮的“质点”或颗粒，仔细观察，可以看出这些正作有向的运动（速度很慢），水封片中多加些水会促进这种运动。
4.学习相差显微镜，荧光显微镜和倒置显微镜的使用方法和有关操作技术。
植物细胞骨架的光学显微观察
三、实验用品
(一)器材：显微镜、50ml烧杯、滴管、容量瓶、载玻片、 盖玻片、镊子。 (二)试剂： 1、M一缓冲液：50mmol／L眯唑，50mmol／L kCl，0.5 mmol／LMgCl2，lmmol／L EGTA(乙二醇双(a一氨基乙酸) 醚四乙酸)0．1mmoL／L EDTA，lmmol／L巯基乙醇或 DTT(二硫苏糖醇)。 2、6m mol／L PH6．8磷酸缓冲液。 3、1％Triton X一100，用M一缓冲液配。 4、0.2％考马斯亮蓝R250，其溶剂是甲醇46.5ml，冰乙酸 7ml，蒸馏水46.5ml。 5、3％戊二醛，用6m mol／L磷酸缓冲液(PH6．8)配制。 6、5％、7％、95％乙醇。 7、叔丁醇、正丁醇、二甲苯、树胶。 (三)材料：洋葱鳞茎。
四、实验步骤
(1)取洋葱鳞茎内表皮细胞(约lcm2大小)若干片温于装有 PH6．8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉。 (2)吸去磷酸缓冲液，用1％Triton X一100处理20—30分钟。 (3)吸去Triton X—l00，用M一缓冲液洗3次，每次10分钟。 (4)3％戊二醛固定0.5—1小时，(对照组开始处理)。 (5)PH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次10分钟。 (6)用0．2％考马斯亮蓝R250染色20—30分钟。 (7)用蒸馏水洗1—2次，材料置于载玻片上，加盖玻片，即可 镜检。 (8)如作永久制片，可使样品，顺序通过如下试剂：50％乙醇， 70％乙醇。95％乙醇，95％乙醇和叔丁醇混合液(1：1)， 每次5一10分钟，或正丁醇→正丁醇二→甲苯二→甲苯，每 次5—10分钟。然后捞取样品，平展于载玻片上，中性树 胶封固。
实验四、植物细胞骨架的光学 显微观察
讲解员：赵鹏飞
一、实验目的
• 观察光学显微镜下细胞骨架的结构，了解 显示植物细胞骨架的方法及其原理。
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中国海洋大学实验报告姓名：常天易系年级：海洋生命学院2012级专业：生物科学
科目：分子细胞生物学实验学号：12050011006
植物细胞骨架的观察
一、实验目的：
1. 掌握植物细胞骨架处理及染色方法。
2. 对细胞骨架的形态和分布有一个初步认识。
二、实验原理：
真核细胞胞质中存在的纤维网状结构称为细胞骨架，包括：微管（直径20-25nm）、微丝（直径6-7nm）、中间丝（直径10nm）、和粗丝等。
考马斯亮蓝R250是一种普通的蛋白质染料，它可以使各种细胞骨架蛋白着色，显示微丝组成的张力纤维。
张力纤维（直径40nm）在体外培养细胞中普遍存在，与细胞对基质的附着，维持细胞扁平铺展的性状有关。
三、实验材料
洋葱表皮细胞
试剂：
1、0.01mol/L的磷酸盐缓冲液
2、M-缓冲液
3、1%Triton X-100/M-缓冲液
4、30%戊二醛-PBS溶液
四、实验方法
五、实验结果
核骨架
六、思考题：
1．洋葱表皮细胞中，质膜下，核围，胞质中的细胞骨架分布有无不同？
答：
质膜下细胞骨架比较稀疏，细胞膜骨架膜骨架(membrane skeleton)是质膜下与膜蛋白相连的由纤维蛋白构成的网架结构，普遍存在于各种细胞中，参与维持质膜的形状, 并协助质膜完成多种生理功能。
胞质中的细胞骨架比较均匀，主要有微管和纤丝组成，参与物质的运输，维持细胞的形态，参与细胞的运动，参与纺锤体的形成等作用。
细胞核中染色最深，是因为细胞核骨架的存在，细胞核骨架包括染色体骨架，细胞质基质和核纤层。
在图2中可以观察到细胞核中有好几处染色特别深（箭头所指处），为核仁的致密纤维成分。
2．为什么实验中所看到的洋葱表皮细胞中的细胞骨架有的呈纤维状，有的呈串珠状？
答：
实验中所看到的洋葱表皮细胞中的细胞骨架有的呈纤维状，呈纤维状的细胞骨架主要成分是张力纤维的成分，用于维系整个细胞。
呈念珠状的成分有：1.由于在处理条件下，细胞骨架不可避免的存在解聚，由于细胞骨架的解聚，呈现念珠状的细胞骨架。
2.在微管
上有运输的囊泡，也可以被染成蓝色。
3.有的细胞器也可以沿着细胞而运动，所以也有可能被染成蓝色。
七、总结与讨论
观察到的细胞骨架为张力纤维，由微丝组成，直径40nm，参与细胞对基质的吸附
1、实验中各个试剂的作用为：
①、PBS溶液：保持细胞的形态
②、TritonX-100通透细胞膜，溶解细胞膜，利于细胞内物质的释放，有利于染液的进入
③、M-缓冲液，含有咪唑基，起到缓冲作用，其中含有的EDTA，螯合溶液中的Ca2+，在低钙条件下，骨架纤维保持聚合状态并且较为舒张
④、戊二醛，固定细胞。
之所以不用甲醛溶液，是因为戊二醛的固定效果更好，不会破坏细胞骨架
2、由于细胞核中含有丰富的细胞核骨架包括核纤层、细胞核基质与染色体骨架构成，在考马斯亮蓝的染色下可以呈现蓝色。