食品中农药残留检测实验方法步骤(精)教学内容
水果农药残留实验报告
水果农药残留实验报告实验目的：本实验旨在检测不同水果样本中的农药残留情况，以评估其安全性，为消费者提供合理的选购和食用建议。
实验材料：1. 不同种类水果样本（例如苹果、香蕉、橙子等）；2. 农药残留检测盒或仪器；3. 丙酮、乙醇等有机溶剂；4. 称量器具；5. 实验操作台和安全设施。
实验步骤：1. 样本准备：从市场购买不同种类的水果样本，并将其分成合适的大小，以便于后续操作。
确保样本表皮无明显损伤。
2. 农药溶出：将每个水果样本分别放入不同瓶中，加入足够的丙酮或乙醇，覆盖样本表面。
待一定时间（如30分钟）使农药充分溶出到溶剂中。
3. 过滤处理：使用过滤纸或滤芯将溶液中的固体颗粒和杂质滤除。
得到的滤液即为待测样品。
4. 农药残留检测：根据农药残留检测盒或仪器的操作指南，将待测样品加入检测试剂中，按照要求进行震荡或加热等处理。
根据检测结果，可以判断出样品中是否存在农药残留，以及残留量的高低。
5. 结果记录：将各个水果样本的检测结果进行记录，并进行比较和分析。
实验注意事项：1. 操作前需佩戴实验手套与口罩，确保人身安全；2. 操作台需要保持清洁，避免交叉污染；3. 在操作过程中避免将有机溶剂溅入眼睛或接触皮肤；4. 操作完毕后妥善处理废液和废弃物。
实验结果与讨论：根据实验结果，我们可以得知每个水果样本中的农药残留情况。
通过对不同农药残留量进行比较，可以评估每种水果的安全性。
针对高农药残留的样本，消费者应谨慎选择或采取适当的处理方法，以减少对健康的潜在风险。
结论：本实验通过检测不同水果样本中的农药残留情况，为消费者提供了有关水果安全性的参考信息。
通过合理选择、处理和种植，可以减少水果中农药残留的可能性，保障食品安全。
农药残留检测流程步骤
农药残留检测流程步骤农药残留检测是保障农产品质量和食品安全的重要环节，其流程步骤的严谨性和准确性直接关系到人民群众的身体健康。
下面将介绍农药残留检测的流程步骤，希望对相关从业人员有所帮助。
1. 样品采集。
农药残留检测的第一步是样品采集。
在采集样品时，需要选择代表性好的样品，保证样品的新鲜度和完整性。
在采集过程中，要注意避免样品受到外界污染，避免使用污染的容器和工具。
采集好的样品需要及时送至实验室进行处理。
2. 样品处理。
样品送至实验室后，需要进行样品处理。
首先是样品的分析和分解，将样品中的农药成分分离出来。
然后进行提取和净化，将目标物质从样品基质中提取出来，并去除干扰物质。
最后是对提取的样品进行浓缩，提高目标物质的浓度，为后续的检测做好准备。
3. 仪器分析。
经过样品处理后，需要进行仪器分析。
采用高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS/MS）进行检测，这是目前农药残留检测的常用方法之一。
通过仪器分析，可以对样品中的农药残留物进行快速、准确的检测和定量分析。
4. 数据处理。
在仪器分析后，得到的数据需要进行处理。
首先是对数据进行质量控制，保证数据的准确性和可靠性。
然后进行数据的解释和分析，得出样品中农药残留物的含量和种类。
最后是对数据进行报告，将检测结果进行整理和汇总，形成检测报告。
5. 结果判定。
最后一步是对检测结果进行判定。
根据国家标准和相关法规，对检测结果进行评价，判断样品中农药残留物是否符合安全标准。
如果检测结果超出标准限量，需要及时通知相关部门和生产经营者，采取相应的措施进行处理。
总结。
农药残留检测流程步骤的严谨性和准确性对保障农产品质量和食品安全至关重要。
通过样品采集、样品处理、仪器分析、数据处理和结果判定等步骤，可以全面、准确地对农产品中的农药残留物进行检测和评价。
希望相关从业人员能够严格按照流程步骤进行操作，确保检测结果的准确性和可靠性，为人民群众的身体健康保驾护航。
农残检测步骤范文
农残检测步骤范文农残检测是对农产品中农药残留的含量以及其他有害物质的检测分析，以保障食品安全，保护消费者的健康。
农残检测步骤主要分为样品准备、提取分析和定性定量三个环节。
一、样品准备样品准备是农残检测的第一步，主要目的是将样品处理成适合后续提取分析的形式。
样品准备的步骤包括：1.采样：根据农残检测的具体要求，选择代表性的样品进行采样，例如蔬菜水果的外皮、肉类的肌肉、饲料的颗粒等。
在采样过程中要注意避免交叉污染，避免非目标物质的污染。
2.样品粉碎：对于较硬的样品，如果实、种子等，需要进行粉碎，以增加样品与溶剂接触的面积，便于后续提取操作。
3.样品分割：对于大样品，如大块肌肉、大颗粒饲料等，需要进行适当的分割，以便于提取操作时的均匀性和可操作性。
4.样品分析前处理：根据检测方法的要求，对样品进行必要的前处理步骤，如去除杂质、除去色素等，以避免后续提取分析时的干扰和误差。
二、提取分析提取分析是农残检测的核心环节，主要目的是将样品中的目标残留物质从样品基质中分离出来，并浓缩到适宜的浓度进行后续的分析与检测。
提取分析的步骤包括：1.样品液-液萃取：将样品与适宜的有机溶剂或水溶液进行混合，以使溶剂和目标物质充分接触和混合。
然后通过离心或振荡等方法分离两相，收集有机层或水层，即为提取物。
有机层或水层可以继续浓缩、净化和进一步分析。
2.固相萃取：将样品溶液通过含有固定相材料的柱子或卡片进行处理，根据目标物质与固相之间的亲合性或吸附性选择性地将目标物质吸附到固相上，然后用适宜的溶剂洗脱目标物质。
洗脱液可以进一步浓缩、净化和进一步分析。
3.超临界流体萃取：利用超临界流体（如二氧化碳）的特殊性质，通过调节温度和压力，将有机溶剂或水溶液与样品进行萃取。
超临界流体萃取具有高效、环保等优点，适用于多种样品的提取。
三、定性定量定性定量是农残检测的最后一步，主要目的是确定农产品中农药残留物的种类和含量。
定性定量的步骤包括：1.色谱分析：使用气相色谱（GC）或液相色谱（LC）等方法对提取物进行分析。
枸杞中二氧化硫、农残的快速检测方法.doc
枸杞中二氧化硫、农残的快速检测方法6月23日，天津何先生怀疑自己的购买的枸杞和二氧化硫和农药残留超标，遂致电消费者体验中心咨询，后快递送检。
检测样品：枸杞检测项目：二氧化硫、农药残留检测仪器：多功能食品安全快速检测仪、农残仪以下为检验过程：一、检测项目：二氧化硫实验仪器：多功能食品安全快速检测仪1、样品处理：称取样品1.25g至25mL比色管中，加入C溶液0.5mL，加蒸馏水约20mL，超声浸提15min。
2、加入A溶液和B溶液各0.5mL，然后加蒸馏水至25mL刻度线，摇匀，静置5min，过滤，滤液（即样品液）备用。
3、取一支10mL比色管，加入1mL样品液，加入C溶液80μL，加蒸馏水至10mL 刻度线，加入D溶液0.5mL，摇匀，开盖静置10min4、加入F溶液0.5mL，迅速盖塞颠倒两次，迅速加入E溶液1mL，盖塞混匀，静置7min。
空白管：空白管内加入蒸馏水替代样品液，其余步骤与样品管相同。
5、将装有空白液的比色皿放入检测仪器，点击“校正”。
点击校正后，弹出“正在获取数据请稍后”对话框，此时不能进行任何操作。
当该对话框消失后，将装有样品液的比色皿放入检测仪器点击“检测”，当检测结果在下方显示时，检测完成。
检测结果：枸杞二氧化硫含量为6.5mg/kg，远小于国家规定的限量350mg/kg.二、检测项目：农药残留实验仪器：农药残留检测仪1、称取2g枸杞样品于样品提取瓶中。
2、加8ml农残缓冲液，轻微震荡摇匀3、因样品液颜色太深，为防止干扰检测结果，将提取液过滤4、取两根试管，分别作为样品管和对照管。
在样品管加入3ml样品液，在对照管中加入3ml缓冲液，随后分别加入20ul显色剂和50ul酶试剂。
盖塞混匀静置10min。
5、10min加入20ul底物，混匀后迅速倒入比色皿，将对照组放入第一通道，样品液放入第二通道，盖上样品仓。
检测结果：农药残留抑制率为7%，小于50%（农残抑制率大于等于50%，农残超标），表明农残未超标。
食物中的农药测定实验
食物中的农药测定实验一、实验目的通过本实验，了解农药残留在食物中的检测方法，掌握测定食物中农药残留的技术步骤和实验操作。
二、实验器材和试剂1. 器材：酒精灯、分液漏斗、研钵、千分之一称量皿、聚乙烯瓶、移液管、滤纸、离心机等。
2. 试剂：乙酸乙酯、苯酚、醋酸乙酯、氯仿、硫酸、氢氧化钠、无水硫酸钠、氯化钙等。
三、实验步骤1. 样品准备：选择食物样本，尽量选择新鲜、无昆虫伤害的样品。
如水果、蔬菜等。
将样品洗净并晾干。
2. 样品研磨：将样品磨碎成粉末状，注意避免与空气和灰尘接触。
3. 样品称量：取适量磨碎后的样品，使用千分之一称量皿称取。
4. 提取农药：将样品放入聚乙烯瓶中，加入适量的提取剂，如乙酸乙酯等。
密封瓶口并用酒精灯进行摇匀提取。
5. 过滤提取液：将提取液倒入分液漏斗中，加入适量的醋酸乙酯和苯酚混合溶液，再加入硫酸。
轻轻振荡几下后，使两层液分离。
6. 收集有机层：打开分液漏斗滴取出有机层，注意不要滴到水层中。
7. 农药检测：将有机层溶液置于离心机中进行离心，离心后留下的液体即为含农药样品。
8. 蒸发溶剂：将离心后的有机层溶液放在通风处进行挥发，使其溶剂蒸发。
9. 添加溶剂：将蒸发后的残渣溶于氯仿溶剂中，并加入无水硫酸钠和氯化钙。
10. 过滤溶液：将溶液过滤，用滤纸过滤出杂质。
11. 高温蒸发：将过滤后的溶液放入加热器上进行高温蒸发，直到残渣完全干燥。
12. 农药残留测定：用溶液溶于适量的溶剂中，用移液管移取一定量的溶液，并采用分光光度计等仪器进行测定。
四、实验注意事项1. 实验过程中要注意安全，避免对身体造成伤害。
2. 实验操作时要严格按照实验步骤进行，注意提取液的使用量和摇匀的时间。
3. 在分液漏斗操作中，要注意两层溶液的分离。
4. 使用化学试剂时要遵守实验室安全操作规范，避免直接接触皮肤和吸入。
5. 实验器材要保持清洁，避免交叉污染。
五、结果分析根据实验步骤所得的数据，可以计算出食物样本中农药的浓度。
农药残留检测仪实训报告
一、实训目的1. 掌握农药残留检测仪的基本原理和操作方法。
2. 了解农药残留检测在食品安全领域的应用。
3. 培养学生严谨的科学态度和良好的实验操作技能。
二、实训内容1. 农药残留检测仪的原理及结构2. 农药残留检测方法3. 实验操作及数据分析三、实训过程1. 农药残留检测仪的原理及结构农药残留检测仪是一种用于检测农产品中农药残留量的仪器。
其原理是利用农药在特定条件下与检测物质发生化学反应，通过检测反应产物的含量来判断农药残留量。
农药残留检测仪主要由以下几部分组成：（1）样品前处理系统：用于将农产品样品进行预处理，如提取、净化等。
（2）检测系统：包括传感器、放大器、数据采集和处理系统等，用于检测农药残留量。
（3）控制系统：用于控制整个检测过程，确保实验结果的准确性。
2. 农药残留检测方法农药残留检测方法主要有以下几种：（1）酶抑制法：通过检测农药对特定酶活性的抑制程度来判断农药残留量。
（2）色谱法：利用色谱技术分离样品中的农药残留物，并对其进行定量分析。
（3）免疫分析法：利用抗体与抗原之间的特异性结合来检测农药残留量。
3. 实验操作及数据分析（1）实验操作①样品前处理：取一定量的农产品样品，加入提取剂进行提取，然后通过离心、过滤等步骤进行净化。
②检测：将净化后的样品加入检测系统中，根据所选方法进行检测。
③数据分析：根据检测结果，结合标准曲线，计算样品中的农药残留量。
（2）数据分析①绘制标准曲线：将已知浓度的标准品进行检测，得到一系列浓度值和对应的响应值，绘制标准曲线。
②计算样品中的农药残留量：根据样品的响应值，从标准曲线上查找对应的浓度值，再乘以样品的稀释倍数，得到样品中的农药残留量。
四、实训结果与讨论1. 实训结果通过本次实训，我们成功掌握了农药残留检测仪的操作方法，并检测了不同农产品中的农药残留量。
2. 讨论与总结（1）农药残留检测在食品安全领域具有重要意义，可以有效保障人民群众的身体健康。
（2）农药残留检测仪具有灵敏度高、准确度好、操作简便等优点，适用于各类农产品中农药残留量的检测。
农药分析与残留分析课程设计
农药分析与残留分析课程设计一、课程背景近年来，农业生产中使用的农药种类越来越多，其化学成分复杂，治理和监管难度较大。
残留物问题是当前农业面临的重要问题之一，严重影响了人们对食品安全的信心。
因此，对于农药的分析与残留分析已经成为了农业科学研究的重点之一。
本课程将提供学生所需的基本知识和实验技能，帮助学生了解农药分析和残留分析的基础理论及常用的分析方法，从而在未来的工作中能够对农药残留和安全问题有更深入的了解。
二、课程目标1.了解农药的基本概念、分类和特点；2.掌握常见的农药分析方法和残留分析方法以及实验操作技巧；3.学会使用化学仪器对农药进行分析和检测；4.加强对食品安全和环境保护的认识和理解。
三、课程内容1. 农药概述农药的定义和分类，常用的农药品种及其特点。
2. 农药残留分析的基本原理了解农药残留分析的意义，分析手段和方法，以及配套仪器的基本原理和应用。
3. 农药残留分析方法1.色谱分析法：气相色谱法和液相色谱法；2.质谱分析法：质谱的概念和质谱技术在农药残留分析中的应用；3.其他常用的分析方法，如电化学法、免疫学法等。
4. 农药残留分析实验1.气相色谱法测定有机磷农药残留；2.液相色谱法测定苯甲酰肼残留；3.质谱法测定氯噻嗪残留。
5. 综合分析实验利用所学习的分析方法对不同的食品样品进行分析和检测，掌握综合分析实验的基本技能。
四、课程评估本课程通过以下形式对学生进行评估：1.平时表现（20%）：包括出勤率、课堂表现、作业完成情况等；2.实验操作（30%）：包括实验记录、实验操作规范等；3.实验报告（25%）：包括实验设计、实验步骤、结果分析等；4.期末考试（25%）：考察学生对所学内容的掌握程度。
五、课程总结本课程通过讲解农药分析和残留分析的相关理论和实验技能，使学生能够全面了解农药残留问题，并具备基本的分析和检测能力。
同时，本课程也加强了学生对食品安全和环境保护的认识和理解，具有很强的实用性和现实意义，是一门非常具有价值的课程。
农产品农药残留的实验报告【精品】
化学农药以其高效、快速的防治作用，在农业病虫害的防治中得到广泛的施用，但由于化学农药的有毒成分难以降解，致使这些有毒物质在农产品和环境中累积，又对环境和农产品造成了污染。
俗话说，国以民为本，民以食为天，食以安为先。
目前，农产品农药残留问题是影响食品安全的最突出的问题，由于食用农药残留超标的食品而发生农药中毒的事件时有报道。
如何快速、简单的检测出农产品中的农药残留呢?为此，我们课题研究小组进行了这次课题实验。
初中生年龄小，知识面不广，生活经验不多，因而，进行农药残留检测实验，相关的知识储备是必要的。
在实验之前，我们课题研究小组成员在学校电脑室上查询食品农药残留的相关知识，收集了大量有用信息，在指导老师和学校的实验员、仪管员的协助和指导下，对这些信息进行了梳理，购买了必要的实验药品，精心设计实验步骤。
人们每天进食量的三分之一是蔬菜，在市场经济的大潮中，少数菜农为盲目追求经济效益，在蔬菜上使用高毒农药，使食用蔬菜而引起食物中毒的现象呈上升趋势。
我国蔬菜主要有3类农药残留：一是有机磷农药。
作为神经毒物，会引起神经功能紊乱、震颤、精神错乱、语言失常等症状。
二是拟除虫菊酯类农药。
毒性一般较大，还有蓄积性，中毒表现症状为神经系统症状和皮肤刺激症状。
三是六六六、滴滴涕等有机氯农药。
有机氯农药随食物等途径进入人体后，主要蓄积于脂肪组织中，引起人体机能病变。
因而，在进入实验室之前，我们课题研究小组在铜鼎农贸市场上随机购买了白菜、冬瓜、空心菜等日常蔬菜，带回实验室进行检测。
我国有关农产品农药残留试验和检测方法的研究始于60年代初，现在，普遍采用气液色谱、高效液相色谱等先进仪器分析，特异性好，灵敏度高，但分析周期长，设备昂贵，基层不易推广。
如何快速测定农药残留，有四种生物快速检验方法可供选择：1、利用能产生荧光的细菌，当细菌受到样品中残留农药作用后其荧光减弱，且减弱程度与毒物浓度呈一定的线性关系。
该方法已能用来测定甲胺磷等常见有机磷农药。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
食品中农药残留检测实验方法步骤(精)实验一粮食、水果和蔬菜中有机磷农药测定的气相色谱法 Experiment 1 Determination of Organophosphorus Pesticide Residues in Foodstuff, Fruits and Vegetables by Gas Chromatographic Method1. 方法原理样品中有机磷农药残留在加入无水硫酸钠后，用有乙酸乙酯提取、过滤、浓缩、定容，用气相色谱氮磷检测器(NPD或火焰光度检测器(FPD检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。
2. 方法适用范围本法规定了粮食(大米、小麦、玉米、水果(苹果、梨、桃等、蔬莱(黄瓜、大白菜、西红柿等中速灭磷(mevinphos、甲拌磷(phorate、二嗪磷(diazinon、异稻瘟净(iprobenfos、甲基对硫磷(parathionmethyl、杀螟硫磷(fenitrothion、溴硫磷(bromophos 、水胺硫磷(isocarbophos、稻丰散(phenthoate、杀扑磷(methidathion等多组分残留量的测定。
3. 仪器与试剂3.1 试剂无水硫酸钠：分析纯，650℃灼烧4h ，冷却后贮于密闭容器中备有。
丙酮：分析纯，重蒸馏。
乙酸乙酯：分析纯，重蒸馏。
所需有机磷农药标准溶液：纯度≥98.0%。
3.2 仪器与设备气相色谱仪：配FPD 或NPD高速组织捣碎机微量注射器：5μL ，10μL 。
梨形瓶：200mL具塞刻度试管：10mL 。
鸡心瓶：100mL 。
4. 样品处理步骤4.1 提取和净化称取试样25.0g 置于组织捣碎机中，加入25.0g 无水硫酸钠和50.0mL 乙酸乙酯，高速匀浆3min ，提取液经铺有无水硫酸钠的漏斗过滤，残渣用10mL 乙酸乙酯洗涤2次，合并滤液于梨形瓶中，用旋转蒸发器在45℃水浴减压浓缩后定容至5.0mL ，采用GC 测定。
在分流/不分流进样口的玻璃衬管中填入0.5cm 高的石英棉，进样70次后，更换石英棉。
4.2 测定4.2.1 色谱条件(1 色谱柱：BP-10石英毛细管柱(25m×0.22mm×0.35μm(2 色谱柱温度：60(2min→10/min→200(0.2min →2/min→250℃℃℃℃℃(3 进样口温度：270℃(4 检测器温度：270℃(5 载气和尾吹气：N2≥99.99%，0.5mL/min，尾吹气：35mL/min(6 氢气(FPD：40mL/min；空气(FPD：120mL/min(7 进样方式：不分流进样4.2.2 色谱测定根据样品液中有机磷含量情况，选择峰高相近的标准工作液。
标准工作液和样液中有机磷农药的响应值均应在仪器的检测线范围内。
对标准工作液和样液等体积穿插进样测定。
在上述条件下对硫磷保留时间约为28.54min 。
4.2.3 空白试验除不加试样外，按上述测定步骤进行。
4.2.4 结果计算mh A V c h A X s s s ×××=( ( 式中：X ：试样中农药残留量，mg/kgA(h ：被测农药的峰面积(峰高 As(h s ：标准工作液中被测农药峰面积(峰高c s ：标准工作液中被测农药浓度，μg/mLV ：样液最终定容体积，mLm ：样品量，g4.2.5 检测限和回收率对硫磷检测限：0.01mg/kg；对硫磷回收率：浓度在0.01～1.00mg/kg范围内，回收率为89.0%～94.3%。
实验二畜产品中氯霉素残留的ELISA 检测Experiment 2 Determination of Chloramphenicol Residue in AnimalBy-Products by ELISA1. 方法原理采用直接竞争ELISA 方法，在酶标板微孔条上预先包被氯霉素抗体，样品中残留的氯霉素和酶标氯霉素抗原竞争微孔条上预包被的抗体，经3,3',5,5'-四甲基联苯胺(3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine,TMB底物显色，样品吸光值与其残留物氯霉素的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可计算样品中氯霉素的含量。
2. 方法适用范围可定性、定量检测动物组织(含水产品、牛奶、蜂蜜、饲料、鸡蛋等样品中氯霉素的残留量。
3. 仪器与试剂3.1 试剂乙酸乙酯、正己烷、氯化钠、去离子水，以上试剂均为分析纯。
氯霉素检测试剂盒(商品3.2 仪器与设备酶标仪、离心机、水浴锅、天平、旋转蒸发仪、微量移液器等3.3 试剂配制按试剂盒说明配制4. 样品处理步骤4.1 牛奶样品处理(1 室温4000rpm/min，离心15min ，去上层脂肪(脱脂奶可省此步;(2 取4.0mL 除去脂肪的牛奶于50.0mL 离心管中，加入8.0mL 乙酸乙酯，振荡混匀1min ；4000rpm/min，离心15min(3 移取上层乙酸乙酯4.0mL 至另一玻璃试管中，于60℃氮气流下吹干；(4 向玻璃试管中加入2.0mL 正己烷，振荡混匀；(5 加入2.0mL 稀释后的样品稀释液强烈振荡1min ；室温4000rpm/min，离心5min ；(6 取下层液70μL 检测。
4.2 组织样品处理(1 称取2.0±0.05g去脂肪并匀浆样品于50.0mL 离心管中，加入4%NaCl溶液4.0mL ，振荡均匀后，加入4.0mL 乙酸乙酯振荡5min ；(2 室温4000rpm/min，离心15min(3 移取上层乙酸乙酯1.0mL 至另一玻璃试管中，于60℃氮气流下吹干；(4 向玻璃试管中加入1.0mL 正己烷，振荡混匀；(5 加入1.0mL 稀释后的样品稀释液强烈振荡1min ；室温4000rpm/min，离心5min ；(6 离心后，如下层液出现乳化现象，试管放入80℃水浴5min ，再执行(2操作；(7 去上层正己烷，取下层液70μL 检测。
4.3 蜂蜜(1 称取2.0±0.05g至离心管中，加入4.0mL 去离子水振荡溶解；加入4.0mL 乙酸乙酯振荡5min ；(2 室温4000rpm/min，离心15min(3 移取上层乙酸乙酯1.0mL 至另一玻璃试管中，于60℃氮气流下吹干；(4 加入0.5mL 稀释后的样品稀释液强烈振荡混匀；(5 取下70μL 检测。
5. 检测5.1 试剂盒使用前准备(1 所有试剂及酶标板条温度回升至室温(20～25℃(2 使用后试剂立即放回2～8℃(3 正确洗板操作是ELISA 测定程序中的要点；(4 所有恒温孵育过程，避免光照，用盖板膜封住微孔板。
5.2 操作步骤(1 所需试剂冷藏取出，室温平衡30min 以上；所有试剂用前混匀。
(2 洗涤工作液使用前也需回温。
(3 将样品/标准品对应微孔按序编号，并记录标准孔和样品孔所在位置。
(4 加标准品/样品：加标准品/样品70.0μL 至对应孔，再加入氯霉素酶标物30μL/孔，轻轻振荡混匀，盖板膜盖板后置于25℃避光反应30min 。
(5 洗板：小心揭去盖板膜，将孔内溶液甩干，用洗涤工作液300μL/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s ，用吸水纸拍干。
(6 显色：加入底物A 液50μL/孔，再加底物液B 液50μL/孔，轻轻振荡混匀，盖板膜盖板后置于25℃避光反应15～20min 。
(7 测定：加入终止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm 处测定其吸光值(建议5min 内完成。
5.3 结果判定5.3.1 估算法用样品的平均吸光值与标准值比较即可得出其浓度范围。
例如：样品1吸光值为0.569，样品2吸光值为1.725，标准液吸光值依次为：2.523(0μg/L、2.217(0.05μg/L、1.566(0.15μg/L、0.842(0.45μg/L、0.387(1.35μg/L、0.145(4.05μg/L，则样品1浓度范围为0.45～1.35μg/L，样品2浓度范围为0.05～0.15μg/L。
5.3.2 定量分析(1 百分吸光率计算：标准品或样品的百分吸光率等于标准品或样品的百分吸光度值的平均值(双孔除以第一个标准液(0标准的吸光度值，再乘以100%。
%100(%0×=B B 百分吸光度值 B :标准品或样品的平均吸光度值B 0: 0号标准品的平均吸光度值(2 标准曲线绘制和计算以标准品百分吸光率值为纵坐标，以氯霉素标准品浓度(μg/L的半对数为横坐标，绘制标准曲线。
以样品的平均吸光度值查曲线，计算相应浓度，乘以稀释倍数、体积后除以样品质量即为样品中氯霉素的残留量。
6. 注意事项6.1 室温低于20℃或试剂及样品没有回温到室温(20～25℃会导致所有标准的吸光值偏低。
6.2 每种试剂加入前应混匀。
6.3 反应终止液为2mol/L硫酸，避免接触皮肤。
6.4 试剂盒保存在2～8℃，不要冷冻，不用的酶标板应放入自封袋中密封。
标准物质和无色发色剂对光敏感，避免直接暴露于光线下。
6.5 0标准的吸光度(450nm值＜0.5，试剂可能变质。
6.6 加入底物15～20min 后，若色浅，可适当延长时间至30min 或更长，但不能超过40min 。