蛋白质的透析实验
蛋白质的透析
一、实验目的
学习透析的基本原理和操作
二、实验原理
蛋白质是大分子物质，它不能透过透析膜而 小分子物质可以自由透过。在分离提纯蛋白 质的过程中，常利用透析的方法使蛋白质与 其中夹杂的小分子物质分开。
三、器材 器材
1 1、透析管或玻璃纸 2、烧杯 3、玻璃棒 4、电磁搅拌器 5、试管及试管架
五ห้องสมุดไป่ตู้实验操作
3、约1小时后，自烧杯中取水1~2mL，加 10%硝酸溶液数滴使成酸性，再加入1% 硝酸银溶液1~2滴，检查氯离子的存在。 4、从烧杯中另取1~2mL水，做双缩脲反 应，检查是否有蛋白质存在
五、实验操作
5、不断更换烧杯中的蒸馏水（并用电磁搅 拌器不断搅动蒸馏水）以加速透析过程。数 小时后从烧杯中的水中不能再检出氯离子。 此时停止透析并检查透析袋内容物是否有蛋 白质或氯离子存在（此时应观察到透析袋中 球蛋白沉淀的出现，这是因为球蛋白不溶于 纯水的缘故）。
六、思考题
蛋白质透析的操作要点及主要事项
四、试剂
1、蛋白质的氯化钠溶液 3个除去卵黄的鸡卵蛋 清与700mL水及300mL饱和氯化钠溶液混合后， 用数层干纱布过滤。 2、10%硝酸溶液 3、1%硝酸银溶液 4、10%氢氧化钠溶液 5、1%硫酸铜溶液
五、实验操作
1、用蛋白质溶液作双缩脲反应。 2、向火棉胶制成的透析管中装人 10~15mL蛋白质溶液并放在盛有蒸馏水的 烧杯中(作法见第二章，或用玻璃纸装入蛋 白质溶液后扎成袋形,系于一横放在烧杯的 玻璃棒上)。
蛋白质的沉淀与透析
（4）检查透析效果 每次更换洗脱液时，同时检查洗出液中是否有Cl¯。 Cl¯检查方法: 取试管一支，加入洗出液约2ml，加10％HNO3溶液1-2滴 至酸，然后加1％AgNO3 2-3滴，观察是否有白色沉淀。
五、要点提示
1.蛋白质–盐溶液的渗透压与溶液的pH有关。当蛋白质–盐溶 液透析时，带电荷的蛋白质分子不能透过半透膜，而溶液中 对立的离子可透过半透膜使膜两边的离子产生不均等的分布， 引起pH的变化（Donnan效应）。故盐溶蛋白经透析后可能会 出现沉淀或变性。 2.本实验是用于蛋白质脱盐，若用于浓缩，可将透析袋包埋 于吸水性极强的聚乙二醇或甘油中进行脱水。作透析洗脱液 用的水必须不含Cl¯和NH4+。
取一段透析袋，将其一端用透析袋夹夹住（或打一死结），由 开口端加入含清蛋白沉淀的溶液（不可装的太满，留出一半空 隙，并适当排出空气，以防透析袋胀破），用透析袋夹夹住袋 口（或打一死结）。
（3）透析 如右图，取一个大烧杯， 加入10倍以上样品液体 积的去离子水或缓冲溶 液，将装好样品的透析 袋悬于大烧杯中部，底 部放一个磁子，用磁力 搅拌器缓慢搅拌以促进 溶液交换，透析过程中 需更换洗脱溶液数次 （约30min一次），至达 到透析平衡为止（洗出 液中无Cl¯和NH4+），约 需2h。
四、操作步骤
1、蛋白质的检测 利用双缩脲反应进行蛋白质的检查。取待渗析的蛋白质-NaCl溶液2ml 和10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加1%CuSO4溶液1~2滴，边加边摇，观察 是否有紫红色出现。CuSO4不可过量，否则生成的蓝色Cu(OH)2会掩盖 浅紫红色。
2、蛋白质的可逆沉淀 （1）取卵清蛋白-NaCl溶液2ml，倾斜试管，沿管壁慢慢加入饱和（NH4）2SO4溶液2ml。轻 轻混匀，静置5min，观察球蛋白沉淀。 （2）过滤，除去析出的蛋白质沉淀，再向滤液中加入固体（NH4）2SO4粉末至饱和，观察清 蛋白沉淀。 （3）过滤，除去析出的蛋白质沉淀，再向滤液中加入固体（NH4）2SO4粉末至饱和，观察 清蛋白沉淀。
蛋白透析的实验报告
蛋白透析的实验报告实验目的本实验旨在通过蛋白透析的方法，将混合溶液中的目标蛋白分离出来，以便对目标蛋白进行进一步的研究和分析。
实验原理蛋白透析是利用半透膜的特性，根据蛋白的分子量和大小差异，使得目标蛋白可以通过膜孔流出，而其他较小的物质则被滞留在膜中。
通常使用的透析膜是具有亲水性的海藻酸膜或聚丙烯酰胺凝胶膜。
实验步骤1. 首先准备好透析袋，将干燥的透析袋放入溶液中浸泡一段时间，使其充分吸水膨胀；2. 吸取透析袋中的溶液，将其转移到含有混合溶液的容器中；3. 将透析袋与容器顶部的薄膜封口，以防止溶液的挥发和污染；4. 将装有透析袋的容器放置在透析槽中，加入足够的缓冲液以覆盖透析袋，并保持一定的水平；5. 在透析槽中加入电泳峰的专用研磨液，并轻轻摇动容器，使透析袋内的蛋白透析进行；6. 取出透析袋，将溶液收集到离心管中，进行离心；7. 在离心管中分离上清液和沉淀，得到目标蛋白。
实验结果本次实验通过蛋白透析的方法，成功将混合溶液中的目标蛋白分离出来。
经过离心分离之后，上清液中含有目标蛋白，沉淀中则为其他较小分子量物质。
结果分析蛋白透析是一种常用的蛋白质纯化方法，通过该方法可以将目标蛋白与其他较小的分子量物质有效分离。
透析膜的选择非常重要，应根据溶液的性质和目标蛋白的分子量来选择合适的透析膜。
在本次实验中，利用适当的缓冲液和透析时间，成功地将目标蛋白从混合溶液中分离出来。
然而，实验过程中也存在一些问题，例如透析过程中容器内的电泳峰会与目标蛋白发生竞争，进而影响分离效果。
实验总结蛋白透析是一种常用的蛋白质纯化方法，通过调整透析条件和透析膜的选择，可以将目标蛋白从混合溶液中高效地分离出来。
该方法具有操作简单、成本低廉、适用范围广等优点。
在实际应用中，需要根据实验需求选择合适的透析膜，并结合其他分离方法，如离心、电泳等，进行综合分析。
此外，透析过程中还需要注意透析时间、容器内其他物质的干扰等问题，以保证分离效果的准确性和可靠性。
蛋白质透析的实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质透析的原理和方法。
2. 掌握透析袋的使用和操作技巧。
3. 学习如何通过透析分离蛋白质混合物。
二、实验原理蛋白质透析是一种利用半透膜的选择透过性来分离和纯化蛋白质的方法。
半透膜允许小分子物质（如盐、小分子有机物）自由通过，而大分子物质（如蛋白质）则被阻挡在膜的一侧。
通过改变透析袋内外的离子浓度，可以调节蛋白质的溶解度，从而实现蛋白质的分离。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：透析袋、磁力搅拌器、剪刀、移液枪、试管、烧杯、蒸馏水、氯化钠、鸡蛋清等。
2. 实验试剂：0.1M氯化钠溶液、0.01M氯化钠溶液、蒸馏水、10%硫酸铵溶液等。
四、实验步骤1. 准备透析袋：将透析袋剪成适当大小，用蒸馏水冲洗干净，晾干备用。
2. 配制蛋白质溶液：将鸡蛋清用移液枪吸取一定量，加入适量蒸馏水，搅拌均匀。
3. 透析袋预处理：将透析袋浸入0.1M氯化钠溶液中，浸泡30分钟，以去除透析袋中的杂质。
4. 透析操作：将预处理好的透析袋放入烧杯中，加入10%硫酸铵溶液，搅拌均匀。
将配制好的蛋白质溶液用移液枪加入透析袋中，确保蛋白质溶液充满透析袋。
5. 透析过程：将透析袋放入烧杯中，加入适量蒸馏水，使透析袋悬浮在水中。
用磁力搅拌器缓慢搅拌，保持透析袋内外液体充分接触。
6. 透析时间：根据实验需求，选择适当的透析时间。
一般透析时间为4-8小时。
7. 检测透析效果：在透析过程中，定时取样，用比色法检测透析袋内外的蛋白质浓度，以评估透析效果。
8. 透析结束：透析结束后，将透析袋内的蛋白质溶液倒入试管中，用比色法检测蛋白质浓度。
五、实验结果与分析1. 透析过程中，透析袋内外的蛋白质浓度逐渐降低，说明蛋白质通过透析膜逐渐进入蒸馏水中。
2. 透析结束后，透析袋内的蛋白质浓度与透析前的蛋白质浓度相比，有显著降低，说明透析过程有效分离了蛋白质。
3. 比色法检测结果显示，透析后的蛋白质溶液中蛋白质浓度较低，说明透析过程实现了蛋白质的分离。
透析实验优实验报告
一、实验目的1. 了解透析的基本原理及其在蛋白质分离纯化中的应用。
2. 掌握透析操作的步骤和方法。
3. 分析透析过程中蛋白质的迁移和分离效果。
二、实验原理透析是一种利用半透膜的选择透过性，将小分子物质从大分子物质中分离的方法。
半透膜允许小分子物质（如离子、小分子有机物等）自由通过，而大分子物质（如蛋白质、核酸等）则不能通过。
因此，通过透析可以去除蛋白质溶液中的小分子杂质，实现蛋白质的纯化。
三、实验材料与仪器实验材料：- 鸡蛋清蛋白溶液- 氯化钠溶液（饱和）- 透析袋- 滤纸- 移液管- 电子天平- 磁力搅拌器- 恒温水浴锅实验仪器：- 透析装置- 离心机- 超净工作台四、实验步骤1. 准备透析袋：将透析袋剪成适当大小，并用滤纸将袋口密封。
2. 配制蛋白质溶液：称取一定量的鸡蛋清蛋白，加入适量的氯化钠溶液，充分溶解。
3. 将蛋白质溶液转移至透析袋中，密封袋口。
4. 将透析袋放入透析装置中，加入适量的蒸馏水，使透析袋完全浸没。
5. 将透析装置放入恒温水浴锅中，维持一定温度（如25℃）。
6. 定期更换透析水，观察蛋白质的迁移情况。
7. 透析结束后，收集透析液，检测蛋白质的纯度和浓度。
五、实验结果与分析1. 在透析过程中，蛋白质逐渐从透析袋中迁移到透析水中，导致透析袋内蛋白质浓度逐渐降低。
2. 透析结束后，收集透析液，检测蛋白质的纯度和浓度，发现蛋白质的纯度得到显著提高，而浓度有所降低。
3. 通过SDS-PAGE电泳分析，发现透析后的蛋白质条带更加清晰，表明蛋白质的纯度提高。
六、实验讨论1. 透析过程中，蛋白质的迁移速度受多种因素影响，如温度、透析时间、透析膜的性质等。
2. 透析过程中，蛋白质的浓度降低，可能是因为部分蛋白质通过透析膜迁移到透析水中。
3. 通过优化实验条件，可以提高蛋白质的透析效果。
七、结论本实验成功实现了蛋白质的透析分离，证明了透析是一种有效的蛋白质纯化方法。
通过优化实验条件，可以进一步提高蛋白质的纯度和浓度。
蛋白质的透析实验图文
透析膜的选择性取决于其孔径大小和化学性质。孔径大小需根据 目标蛋白质的分子量进行选择，以确保蛋白质被有效截留。同时 ，膜的化学性质也需考虑，以避免与蛋白质发生非特异性相互作 用。
实验目标与意义
实验目标
本实验的目标是验证透析技术在蛋白质纯化中的应用，通过透析去除蛋白质溶液中的小分子杂质，如盐、有机溶 剂等，以获得高纯度的蛋白质样品。
优化透析液配方
通过调整透析液的成分和浓度 ，提高蛋白质的稳定性和透析 效果，从而提高回收率。
控制透析时间与温度
通过实验确定最佳的透析时间 和温度，以提高蛋白质的回收 率。
拓展应用于其他类型蛋白质研究
不同类型蛋白质的特性
探讨不同类型蛋白质（如酶、抗体、结 构蛋白等）在透析过程中的特性及行为 差异。
VS
蛋白质浓度测定
使用适当的方法（如BCA法、Lowry法或Bradford 法）测定蛋白质浓度。
缓冲液交换
将蛋白质样品换入与透析液相同的缓冲体系中，以 减少透析过程中的pH变化。
透析膜选择与处理
透析膜选择
根据蛋白质分子量和需要去除的小分 子物质，选择适当截留分子量的透析 膜。
透析膜处理
将透析膜剪成适当长度，用蒸馏水清 洗干净后，浸泡在透析液中备用。确 保透析膜完全浸透，避免在透析过程 中出现膜破裂或漏液现象。
实验意义
蛋白质纯化是生物化学和分子生物学研究中的重要步骤，对于后续的结构和功能研究具有重要意义。透析作为一 种简单、有效的蛋白质纯化方法，具有广泛的应用前景。通过本实验，可以加深对透析原理和方法的理解，掌握 其在蛋白质纯化中的应用技巧。
相关研究现状及进展
透析技术的发展
随着生物技术的不断发展，透析技术也在不断改进和 完善。新型的透析膜材料不断涌现，具有更高的选择 性和通透性，使得透析效果更加显著。同时，透析设 备的自动化和智能化程度也在不断提高，使得实验操 作更加便捷和高效。
蛋白质的盐析与透析
蛋白质的盐析与透析一、实验目的1.了解蛋白质的分离纯化方法2.掌握蛋白质的盐析及透析方法二、实验原理在蛋白质溶液中加入一定浓度的中性盐，蛋白质即从溶液中沉淀析出，这种作用称为盐析。
盐析法常用的盐类有硫酸铵、硫酸钠等。
蛋白质用盐析法沉淀分离后，需脱盐才能获得纯品，脱盐最常用的方法为透析法。
蛋白质在溶液中因其胶体质点直径较大，不能透过半透膜，而无机盐及其它低分子物质可以透过，故利用透析法可以把经盐析法所得的蛋白质提纯，即把蛋白质溶液装入透析袋内，将袋口用线扎紧，然后把它放进蒸馏水或缓冲液中，蛋白质分子量大，不能透过透析袋而被保留在袋内，通过不断更换袋外蒸馏水或缓冲液，直至袋内盐分透析完为止。
透析常需较长时间，宜在低温下进行。
三、实验材料和试剂10%鸡蛋白溶液，含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液，饱和硫酸铵溶液，硫酸铵晶体，1%硝酸银溶液。
四、实验步骤（一）蛋白质盐析取10%鸡蛋白溶液5ml于试管中，加入等量饱和硫酸铵溶液，微微摇动试管，使溶液混合后静置数分钟，蛋白即析出，如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵溶液，观察蛋白质的析出；取少量沉淀混合物，加水稀释，观察沉淀是否会再溶解。
（二）蛋白质的透析注入含鸡蛋清的氯化钠蛋白溶液5ml于透析袋中，将袋的开口端用线扎紧，然后悬挂在盛有蒸馏水的烧杯中，使其开口端位于水面之上。
经过10分钟后，自烧杯中取出1ml溶液于试管中，加1%硝酸银溶液一滴，如有白色氯化银沉淀生成，即证明蒸馏水中有Cl-存在。
再自烧杯中取出1ml溶液于另一试管中，加入1ml 10%的氢氧化钠溶液，然后滴加1-2滴1%的硫酸铜溶液，观察有无蓝紫色出现。
每隔20分钟更换蒸馏水一次，经过数小时，则可观察到透析袋内出现轻微混浊，此即为蛋白质沉淀。
继续透析至蒸馏水中不再生成氯化银沉淀为止。
实验报告记录透析完毕所需的时间。
附：胶棉半透膜的制备市售5%的胶棉液，加入干燥的150mL锥形瓶中，将锥形瓶横斜不断转动，使瓶的内壁和瓶口都均匀沾有胶棉液。
实验四蛋白质的盐析作用和透析
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但是，在一定的物理化学因素影响下， 由于蛋白质胶体颗粒的稳定条件被破坏， 如失去电荷、脱水、甚至变性，而以固体 形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白质 的沉淀反应。这种反应可分为可逆沉淀反 应和不可逆沉淀反应—蛋白质虽已沉淀析出，但 它的分子内部结构并未发生显著变化，如 果把引起沉淀的因素去除后，沉淀的蛋白 质能重新溶于原来的溶剂中，并保持其原 有的天然结构和性质。利用蛋白质的盐析 作用和等电点作用，以及在低温下乙醇、 丙酮短时间对蛋白质的作用等所产生的蛋 白质沉淀都属于这类沉淀反应。
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• 五、思考题 鸡蛋清为什么可用作铅中毒或汞中毒的
解毒剂？
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• 五、思考题
高浓度的硫酸铵对蛋白质溶液溶解度有何影 响，为什么？
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实验四 蛋白质可逆沉淀和不可逆沉 淀的比较
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• 一、目的要求 了解蛋白质的沉淀反应、变性作用 。 学习透析操作技术。
• 二、实验原理 蛋白质分子在水溶液中，由于其表面形成了 水化层和双电层而成为稳定的胶体颗粒，所 以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相似。
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• 三、 材料与试剂 1、实验材料：鸡蛋 2、实验试剂 蛋白质氯化钠溶液：取20ml蛋清，加蒸馏水
200ml和饱和氯化钠溶液100ml，充分搅匀后， 以纱布滤去不溶物（加氯化钠的目的是溶解 球蛋白）。 其他试剂：①硫酸铵粉末 ②饱和硫酸铵溶液
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3、实验器材
试管及试管架、滤纸、研钵、烧杯、玻璃棒 、漏斗
实验三 蛋白质的盐析作用
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• 一、目的要求 了解蛋白质的的沉淀反应 学习盐析操作技术
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操作步骤
透析 用磁力搅拌器搅拌促进溶液交换。透析过程中
需要更换洗脱溶液数次（约15min一次），至达到透 析平衡为止（洗出液中无Cl-），约需1h.
检查透析效果
• 检查氯离子：自烧杯中取水1~2ml，加10%硝酸溶液数滴使之成酸性，再 加入1%硝酸银1~2滴，检查氯离子的存在。
• 检查蛋白质：从烧杯中取1~2ml，做双缩脲反应，检查是否有蛋白质存在。 • 双缩脲反应：加10%氢氧化钠1ml，振荡摇匀，再加1%硫酸铜溶液1滴，振
荡，观察是否出现粉红色。
注意事项
➢ 把需要透析的样品盛于透析袋内，袋内留有挤去空气的空余部分，以防 由于溶剂渗入造成样品体积增加而引起透析袋胀破
➢ 为了获得较快的透析速度，常常采取一些措施保持膜两侧浓度差具有最 大差，如经常更换透析外液，连续搅动外液。
透析实验
——蛋白质的透析
实验原理
• 透析是膜技术的一种，利用透析膜可以选择性的透过一定大小分子，从 而将待分离纯化的物质和杂质离子分离开。
• 透析膜是半透膜，蛋白质是大分子物质，它不能透过透析膜，而小分子 物质可以自由通过透析膜与周围的缓冲溶液进行溶质交换，进入到透析 液中。
• 常见的透析有：蛋白质的透析和糖类的透析。
➢ 检查透析效果的方法：用1％ BaCl2检查(N H4)2SO4，用1％AgNO3检查NaCl、KCl等
操作步骤
装样 取一段透析袋10~15cm，将其一端用棉绳扎死，
由开口端加入约5ml待透析的样品溶液（蛋白质氯化 钠溶液），开口端用棉绳扎死，放入盛有蒸馏水的 烧杯中，系于一横放在烧杯的玻璃棒上。
透析装置（原理图）
实ห้องสมุดไป่ตู้仪器
• 磁力搅拌器
器材与试剂
➢ 器材：透析袋 ，烧杯，玻璃棒，磁力搅拌器，试管及试管架。 ➢ 试剂：饱和氯化钠溶液，10%硝酸溶液，1%硝酸银溶液，10%
氢氧化钠溶液，1%硫酸铜溶液。
操作步骤
➢ 透析袋的处理：一般是将透析袋剪成10～2 0cm的小段，在2％（W/V）NaHCO3和1m mol/L的EDTA（pH8.0）中煮沸10min，用 蒸馏水彻底洗尽透析袋，然后放在1mmol/L 的EDTA（pH8.0）中煮沸10min，用蒸馏水 彻底洗尽透析袋，冷却后，存放于4℃，从 此时起取用透析袋，必须戴手套