实验三 透析实验 蛋白质的透析
蛋白质的沉淀与透析
（4）检查透析效果 每次更换洗脱液时，同时检查洗出液中是否有Cl¯。 Cl¯检查方法: 取试管一支，加入洗出液约2ml，加10％HNO3溶液1-2滴 至酸，然后加1％AgNO3 2-3滴，观察是否有白色沉淀。
五、要点提示
1.蛋白质–盐溶液的渗透压与溶液的pH有关。当蛋白质–盐溶 液透析时，带电荷的蛋白质分子不能透过半透膜，而溶液中 对立的离子可透过半透膜使膜两边的离子产生不均等的分布， 引起pH的变化（Donnan效应）。故盐溶蛋白经透析后可能会 出现沉淀或变性。 2.本实验是用于蛋白质脱盐，若用于浓缩，可将透析袋包埋 于吸水性极强的聚乙二醇或甘油中进行脱水。作透析洗脱液 用的水必须不含Cl¯和NH4+。
取一段透析袋，将其一端用透析袋夹夹住（或打一死结），由 开口端加入含清蛋白沉淀的溶液（不可装的太满，留出一半空 隙，并适当排出空气，以防透析袋胀破），用透析袋夹夹住袋 口（或打一死结）。
（3）透析 如右图，取一个大烧杯， 加入10倍以上样品液体 积的去离子水或缓冲溶 液，将装好样品的透析 袋悬于大烧杯中部，底 部放一个磁子，用磁力 搅拌器缓慢搅拌以促进 溶液交换，透析过程中 需更换洗脱溶液数次 （约30min一次），至达 到透析平衡为止（洗出 液中无Cl¯和NH4+），约 需2h。
四、操作步骤
1、蛋白质的检测 利用双缩脲反应进行蛋白质的检查。取待渗析的蛋白质-NaCl溶液2ml 和10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加1%CuSO4溶液1~2滴，边加边摇，观察 是否有紫红色出现。CuSO4不可过量，否则生成的蓝色Cu(OH)2会掩盖 浅紫红色。
2、蛋白质的可逆沉淀 （1）取卵清蛋白-NaCl溶液2ml，倾斜试管，沿管壁慢慢加入饱和（NH4）2SO4溶液2ml。轻 轻混匀，静置5min，观察球蛋白沉淀。 （2）过滤，除去析出的蛋白质沉淀，再向滤液中加入固体（NH4）2SO4粉末至饱和，观察清 蛋白沉淀。 （3）过滤，除去析出的蛋白质沉淀，再向滤液中加入固体（NH4）2SO4粉末至饱和，观察 清蛋白沉淀。
蛋白质透析除盐实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质透析除盐的原理和方法；2. 掌握蛋白质透析除盐的实验操作步骤；3. 熟悉透析袋的使用方法；4. 分析实验结果，探讨影响蛋白质透析除盐效果的因素。
二、实验原理蛋白质透析除盐是一种常用的蛋白质纯化方法，其原理是利用半透膜的特性，使蛋白质分子和盐类分子在透析袋内外进行扩散和平衡。
由于蛋白质分子较大，无法透过半透膜，而盐类分子较小，可以透过半透膜，从而达到去除盐分的目的。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）蛋白质样品：猪肝匀浆蛋白溶液；（2）盐溶液：0.5mol/L NaCl溶液；（3）透析袋：截留分子量约为10000的透析袋；（4）蒸馏水；（5）50mL离心管；（6）磁力搅拌器；（7）分析天平；（8）电热恒温水浴锅；（9）超滤膜。
2. 实验仪器：（1）实验材料同上；（2）50mL离心管；（3）磁力搅拌器；（4）分析天平；（5）电热恒温水浴锅；（6）超滤膜。
四、实验步骤1. 配制蛋白质样品：取猪肝匀浆蛋白溶液适量，用0.5mol/L NaCl溶液稀释至10mg/mL。
2. 配制盐溶液：取0.5mol/L NaCl溶液适量，用蒸馏水稀释至1mol/L。
3. 将蛋白质样品转移至透析袋中，并将透析袋放入50mL离心管中。
4. 将透析袋与盐溶液连接，确保透析袋内外液体充分接触。
5. 将离心管放入电热恒温水浴锅中，维持水温在37℃，透析时间为12小时。
6. 透析结束后，将透析袋中的蛋白质样品转移至新的离心管中，用分析天平称量蛋白质样品的质量。
7. 对透析前后的蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳分析，观察蛋白质的纯度。
五、实验结果与分析1. 蛋白质样品质量变化：透析前蛋白质样品质量为2.0g，透析后蛋白质样品质量为1.5g。
2. SDS-PAGE电泳分析：透析前蛋白质样品在SDS-PAGE电泳图谱上显示一条明显的蛋白质条带，透析后蛋白质条带仍然清晰，说明蛋白质在透析过程中未发生变性。
盐析透析实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质盐析与透析的基本原理和方法。
2. 掌握蛋白质盐析与透析的实验操作步骤。
3. 分析实验结果，验证实验原理。
二、实验原理1. 盐析：蛋白质在低盐浓度下溶解度增加，称为盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质溶解度下降并先后析出，称为盐析。
盐析是一个可逆过程，当除去引起蛋白质沉淀的因素后，被盐析的蛋白质仍可重新溶于水中，其天然性质不发生变化。
2. 透析：透析是一种分离技术，利用半透膜的选择透过性，将溶液中的小分子物质与蛋白质等大分子物质分开。
在透析过程中，蛋白质分子由于不能透过半透膜，而小分子物质可以透过，从而实现分离。
三、实验材料1. 实验试剂：10%鸡蛋清溶液、饱和硫酸铵溶液、0.9%NaCl溶液、蒸馏水。
2. 实验器材：烧杯、量筒、磁力搅拌器、透析袋、滤纸、剪刀。
四、实验步骤1. 准备实验试剂：按比例配制10%鸡蛋清溶液、饱和硫酸铵溶液和0.9%NaCl溶液。
2. 盐析实验：a. 取适量10%鸡蛋清溶液放入烧杯中。
b. 将饱和硫酸铵溶液缓慢加入鸡蛋清溶液中，边加边搅拌。
c. 观察蛋白质盐析现象，记录实验结果。
3. 透析实验：a. 将盐析后的蛋白质溶液倒入透析袋中。
b. 将透析袋放入烧杯中，加入0.9%NaCl溶液。
c. 将烧杯放入磁力搅拌器中，搅拌一段时间。
d. 取出透析袋，观察蛋白质透析现象，记录实验结果。
4. 分析实验结果：a. 观察盐析实验中蛋白质的沉淀现象，分析盐析原理。
b. 观察透析实验中蛋白质的沉淀现象，分析透析原理。
五、实验结果与分析1. 盐析实验结果：随着饱和硫酸铵溶液的加入，鸡蛋清溶液中的蛋白质逐渐沉淀，溶液变浑浊。
2. 透析实验结果：将蛋白质溶液进行透析后，透析袋内出现白色沉淀，表明蛋白质分子较大，无法透过半透膜。
3. 实验结果分析：a. 盐析实验验证了蛋白质盐析原理，即蛋白质在低盐浓度下溶解度增加，在较高盐浓度下溶解度下降，最终沉淀析出。
b. 透析实验验证了透析原理，即蛋白质分子较大，无法透过半透膜，而小分子物质可以透过，实现分离。
蛋白质生化技术实验报告
蛋白质生化实验报告生殖免疫研究所薛樱子学号：1133111003实验一溶液中蛋白质浓度的测定一光吸收法（测量范围：0.1—2mg）1实验原理：由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，它们具有吸收紫外光的性质，其吸收高峰在280nm波长处，且在此波长内吸收峰的光密度值OD280nm与其浓度成正比关系，故可作为蛋白质定量测定的依据。
纯蛋白的A280/A260为 1.8，纯核酸的A280/A260为2步骤：2.1）打开仪器的电源开关（接220V交流电），打开比色槽暗箱盖，选择光源，选档，选波长，用调零旋钮调暗电流至0 。
2.2）将空白对照样品和待测溶液装入石英比色杯2.3）将仪器的比色槽暗箱合上，比色槽处于蒸馏水（或校正缓冲液）校正位置，旋转光量调节器使电表指针正确处于0 。
2.4）拉出比色槽手柄拉杆使比色槽处于样品位置读数。
2. 5）在260nm和280nm分别读数（分别用缓冲液调0），根据上表查处相应蛋白浓度，根据喜事倍数计算原溶液蛋白浓度，根据体积计算总蛋白量。
3结果与分析：A280=0.571 A260=0.340根据公式：蛋白浓度=1.5 ×A280 —0.75 ×A260=1.5×0.571—0.75×0.340=0.6015也可以根据蛋白质和核算含量折算图表画出一条直线估算蛋白质的浓度。
结果说明我的蛋白样品浓度是0.6015mg/ml。
二Folin—酚法（测量范围：10-300ug/ml）1实验原理：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。
Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色（钼兰和钨兰的混合物）。
在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比。
2试剂：2.1）甲液：１，4%碳酸钠；2，0.2n氢氧化钠；3，1%硫酸铜；4,2%酒石酸钾钠。
1和2，4溶于500ml水中，然后和4以50：1混合。
实验四五、蛋白质的盐析作用和透析
可逆沉淀反应—蛋白质虽已沉淀析出， 可逆沉淀反应 蛋白质虽已沉淀析出，但 蛋白质虽已沉淀析出 它的分子内部结构并未发生显著变化， 它的分子内部结构并未发生显著变化，如 果把引起沉淀的因素去除后， 果把引起沉淀的因素去除后，沉淀的蛋白 质能重新溶于原来的溶剂中， 质能重新溶于原来的溶剂中，并保持其原 有的天然结构和性质。 有的天然结构和性质。利用蛋白质的盐析 作用和等电点作用，以及在低温下乙醇、 作用和等电点作用，以及在低温下乙醇、 丙酮短时间对蛋白质的作用等所产生的蛋 白质沉淀都属于这类沉淀反应。 白质沉淀都属于这类沉淀反应。
不可逆沉淀反应—蛋白质发生沉淀时， 不可逆沉淀反应 蛋白质发生沉淀时，其 蛋白质发生沉淀时 内部结构空间构象遭到破坏， 内部结构空间构象遭到破坏，蛋白质分子 由规则性的结构变为无秩序的伸展肽链， 由规则性的结构变为无秩序的伸展肽链， 使原有的天然性质丧失， 使原有的天然性质丧失，这时蛋白质已发 生变性。 生变性。这种变性蛋白已不能再溶解于原 来溶剂中。 来溶剂中。
但是，在一定的物理化学因素影响下， 但是，在一定的物理化学因素影响下， 由于蛋白质胶体颗粒的稳定条件被破坏， 由于蛋白质胶体颗粒的稳定条件被破坏， 如失去电荷、脱水、甚至变性， 如失去电荷、脱水、甚至变性，而以固体 形式从溶液中析出， 形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白质 的沉淀反应。 的沉淀反应。这种反应可分为可逆沉淀反 应和不可逆沉淀反应。 应和不可逆沉淀反应。
3、实验器材 、 试管及试管架、滤纸、研钵、烧杯、 试管及试管架、滤纸、研钵、烧杯、玻璃棒 、漏斗
• 四、操作方法 （1）取一个烧杯，加入 ）取一个烧杯，加入10ml蛋白质氯化钠溶 蛋白质氯化钠溶 液和10ml饱和硫酸铵溶液，混匀，静置约 饱和硫酸铵溶液， 液和 饱和硫酸铵溶液 混匀， 10min，则球蛋白沉淀析出； ，则球蛋白沉淀析出； （2）过滤后向滤液中加入硫酸铵粉末，边加 ）过滤后向滤液中加入硫酸铵粉末， 边用玻璃棒搅拌，直至粉末不再溶解， 边用玻璃棒搅拌，直至粉末不再溶解，达到 饱和为止，此时析出的沉淀为清蛋白； 饱和为止，此时析出的沉淀为清蛋白；
透析技术在蛋白分离纯化中的应用
透析技术在蛋白分离纯化中的应用蛋白质是生物体中重要的基本组成部分，对各种生命过程起着关键作用。
在许多生物学和生化学实验中，需要从复杂的混合物中分离纯化目标蛋白质。
透析技术是一种常用的蛋白分离纯化方法，它通过膜的选择性渗透性，将目标蛋白质从其他成分中分离出来。
本文将介绍透析技术的基本原理、常见的透析方法以及其在蛋白分离纯化中的应用。
一、透析技术的基本原理透析技术基于溶液中物质的扩散原理，利用半透膜（如膜过滤器、膜离子交换柱等）对不同分子大小和电荷的物质进行分离。
透析过程中，混合物被装入透析袋或柱中，然后将其浸入透析液中。
透析液的组成和条件（如pH、温度等）被控制在一定范围内，以实现目标蛋白质的有效分离。
二、透析技术的常见方法1. 凝胶透析法：通过选择性凝胶过滤，将分子量较小的物质透过凝胶，而较大的蛋白质则被阻滞在凝胶中，达到分离纯化的目的。
凝胶透析法常用于大量样品的蛋白质分离纯化，例如从细胞裂解液中分离纯化目标蛋白。
2. 膜透析法：利用膜的特定孔径和表面性质，选择性地分离目标蛋白质。
膜透析法可以更快速地进行透析过程，适用于小规模实验和快速筛选。
常见的膜透析方法包括膜过滤、膜离子交换和膜吸附等。
3. 柱透析法：透析柱通常包括离子交换柱、分子筛柱和透析柱等。
不同类型的柱根据目标蛋白质的特性进行选择。
透析柱适用于分离纯化高浓度的目标蛋白，可以减少样品消耗和处理时间。
三、透析技术在蛋白分离纯化中的应用透析技术在蛋白质分离纯化领域得到广泛应用，具有一系列的优势：1. 选择性：透析膜或柱可以根据目标蛋白质的分子大小、电荷和亲和性进行选择，实现对目标蛋白的高效分离。
2. 高纯度：透析技术能够有效地去除杂质，提供高纯度的蛋白样品。
3. 保护性：透析过程中，目标蛋白质可以在温和条件下进行，减少对其结构和功能的破坏。
4. 节约成本：透析技术相对于其他方法来说，不需要大量特殊设备，适用于小样品量的分离纯化，降低了实验成本。
蛋白质的透析原理
蛋白质的透析原理
蛋白质的透析原理是一种常用的分离和纯化方法，基于溶质在半透膜上的不同渗透性差异进行分离。
透析主要利用半透膜，通过分子的尺寸、电荷和亲水性等特性来筛选目标蛋白质。
透析过程中，溶液含有待分离的蛋白质和其他小分子物质。
选取透析膜时，要使膜孔径小于目标蛋白质的分子尺寸，以防止蛋白质的损失。
待测试的溶液被置于透析袋或管内，然后将透析袋或管浸入大量缓冲液中。
蛋白质和小分子物质能通过透析膜，在溶液和缓冲液之间发生渗透作用。
而蛋白质由于其较大的分子尺寸不能通过膜孔，只能在透析袋或管内滞留。
较小的小分子物质则能通过透析膜的膜孔，与缓冲液中的小分子物质交换，实现清除。
在透析过程中，缓冲液不断流动，保持其浓度的稳定。
通过扩散和对流作用，小分子物质会向缓冲液中渗透，从而被清除出透析袋或管，而蛋白质则在透析袋或管内净化。
透析的时间需根据待分离蛋白质的性质和目的来确定。
总的来说，蛋白质透析通过利用半透膜筛选待分离蛋白质和小分子物质的差异渗透性，实现对蛋白质的纯化和浓缩。
这一方法在生物化学和分子生物学领域应用广泛，有助于研究和分析蛋白质的结构、功能和相互作用等。
蛋白质透析的实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质透析的原理和方法。
2. 掌握透析袋的使用和操作技巧。
3. 学习如何通过透析分离蛋白质混合物。
二、实验原理蛋白质透析是一种利用半透膜的选择透过性来分离和纯化蛋白质的方法。
半透膜允许小分子物质（如盐、小分子有机物）自由通过，而大分子物质（如蛋白质）则被阻挡在膜的一侧。
通过改变透析袋内外的离子浓度，可以调节蛋白质的溶解度，从而实现蛋白质的分离。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：透析袋、磁力搅拌器、剪刀、移液枪、试管、烧杯、蒸馏水、氯化钠、鸡蛋清等。
2. 实验试剂：0.1M氯化钠溶液、0.01M氯化钠溶液、蒸馏水、10%硫酸铵溶液等。
四、实验步骤1. 准备透析袋：将透析袋剪成适当大小，用蒸馏水冲洗干净，晾干备用。
2. 配制蛋白质溶液：将鸡蛋清用移液枪吸取一定量，加入适量蒸馏水，搅拌均匀。
3. 透析袋预处理：将透析袋浸入0.1M氯化钠溶液中，浸泡30分钟，以去除透析袋中的杂质。
4. 透析操作：将预处理好的透析袋放入烧杯中，加入10%硫酸铵溶液，搅拌均匀。
将配制好的蛋白质溶液用移液枪加入透析袋中，确保蛋白质溶液充满透析袋。
5. 透析过程：将透析袋放入烧杯中，加入适量蒸馏水，使透析袋悬浮在水中。
用磁力搅拌器缓慢搅拌，保持透析袋内外液体充分接触。
6. 透析时间：根据实验需求，选择适当的透析时间。
一般透析时间为4-8小时。
7. 检测透析效果：在透析过程中，定时取样，用比色法检测透析袋内外的蛋白质浓度，以评估透析效果。
8. 透析结束：透析结束后，将透析袋内的蛋白质溶液倒入试管中，用比色法检测蛋白质浓度。
五、实验结果与分析1. 透析过程中，透析袋内外的蛋白质浓度逐渐降低，说明蛋白质通过透析膜逐渐进入蒸馏水中。
2. 透析结束后，透析袋内的蛋白质浓度与透析前的蛋白质浓度相比，有显著降低，说明透析过程有效分离了蛋白质。
3. 比色法检测结果显示，透析后的蛋白质溶液中蛋白质浓度较低，说明透析过程实现了蛋白质的分离。
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思考：
➢ 透析是去除小分子物质，那还有哪些去除小 分子物质的方法？
➢ 影响透析的因素有哪些？
实验三 透析实验（一） ——蛋白质的透析
实验目的
➢ 掌握透析的基本原理和操作； ➢ 了解透析袋的使用方法。
实验原理
➢ 透析是利用小分子能通过而大分子不能通过 半透膜的原理把它们分开的一种重要手段， 是生物化学分离提纯过程经常使用的基本操 作技术之一。
➢ 蛋白质作为生物分子物质，不能透过透析膜 而小分子物质（比如离子等）可以自由通过。
用线将透析袋靠近末端的地方绑紧。 ➢ 取8ml蛋白质溶液放入透析袋中，并将开口端同样用线绑住并放入盛
有蒸馏水的烧杯中。随时用玻棒搅拌液体。 ➢ 每30min从烧杯中取水1ml，用10%HNO3酸化溶液，再加入
1%AgNO3 1-2d,检查氯离子的存在。另外取出1-2ml做双缩脲反应， 检查烧杯中是否有蛋白质存在。 ➢ 每0.5h更换一次烧杯中的三级水以加速透析过程。直到数小时后，烧 杯中的水不能检出氯离子的存在时，停止透析。并观察和检测透析袋 内容物是否有蛋白质或者氯离子存在。
器具与试剂
➢ 烧杯；玻棒；试管；试管架；透析袋（宽 26cm，长8-10cm），线。
➢ 0.5mol/L EDTA；2%NaHCO3 ；1％ AgNO3溶液；10%HNO3，10%NaOH； 1%CuSO4；鸡蛋清-NaCl溶液
实验步骤
➢ 透析袋的前处理。 ➢ 将蛋白质溶液做双缩脲反应。 ➢ 取出透析袋，用三级水清洗透析袋内外，并检查透析袋是否有损坏。