实验2 蛋白质的沉淀与透析
蛋白质的沉淀实验报告
蛋白质的沉淀实验报告蛋白质的沉淀实验报告一、引言蛋白质是生物体内一类重要的生物大分子，具有多种功能，如结构支持、催化反应、传递信息等。
为了研究蛋白质的性质和功能，科学家们经常需要对蛋白质进行分离和纯化。
其中，蛋白质的沉淀是一种常用的分离方法。
本实验旨在通过沉淀实验，探究蛋白质的沉淀条件和纯化效果。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 鸡蛋清- 乙醇- 硫酸铵- 氯化钠- 氯化钾- 磷酸盐缓冲液2. 实验步骤：1）制备蛋白质溶液：取适量鸡蛋清，加入磷酸盐缓冲液，搅拌均匀。
2）蛋白质的沉淀：将蛋白质溶液分别加入不同浓度的乙醇溶液中，并观察沉淀情况。
3）蛋白质的纯化：将沉淀后的蛋白质溶液加入硫酸铵溶液中，并离心沉淀，收集上清液。
三、实验结果与分析1. 蛋白质的沉淀在实验中，我们分别将蛋白质溶液加入了不同浓度的乙醇溶液中，并观察到了不同程度的沉淀。
结果显示，随着乙醇浓度的增加，蛋白质的沉淀量逐渐增加。
这是因为乙醇的加入改变了溶液中的离子强度和极性，导致蛋白质与水分子结合力的变化，从而使蛋白质发生沉淀。
2. 蛋白质的纯化在蛋白质沉淀后，我们将沉淀物加入硫酸铵溶液中，并进行离心沉淀。
通过这一步骤，我们成功地将蛋白质从杂质中分离出来，得到了相对纯净的蛋白质溶液。
这是因为硫酸铵能够改变蛋白质的溶解度，使其发生沉淀，而杂质则大多不会发生沉淀，从而实现了蛋白质的纯化。
四、实验总结与展望通过本次实验，我们成功地进行了蛋白质的沉淀实验，并探究了蛋白质的沉淀条件和纯化效果。
实验结果表明，乙醇浓度的增加可以促进蛋白质的沉淀，而硫酸铵则可以实现蛋白质的纯化。
这些结果对于蛋白质的分离和纯化具有重要的指导意义。
然而，本实验还存在一些不足之处。
首先，实验过程中的操作技巧对结果的影响较大，需要进一步提高实验者的技术水平。
其次，本实验仅针对鸡蛋清中的蛋白质进行了沉淀和纯化，对于其他来源的蛋白质可能存在差异。
因此，未来可以进一步扩大样本范围，进行更多的实验验证。
蛋白质的沉淀与透析
（4）检查透析效果 每次更换洗脱液时，同时检查洗出液中是否有Cl¯。 Cl¯检查方法: 取试管一支，加入洗出液约2ml，加10％HNO3溶液1-2滴 至酸，然后加1％AgNO3 2-3滴，观察是否有白色沉淀。
五、要点提示
1.蛋白质–盐溶液的渗透压与溶液的pH有关。当蛋白质–盐溶 液透析时，带电荷的蛋白质分子不能透过半透膜，而溶液中 对立的离子可透过半透膜使膜两边的离子产生不均等的分布， 引起pH的变化（Donnan效应）。故盐溶蛋白经透析后可能会 出现沉淀或变性。 2.本实验是用于蛋白质脱盐，若用于浓缩，可将透析袋包埋 于吸水性极强的聚乙二醇或甘油中进行脱水。作透析洗脱液 用的水必须不含Cl¯和NH4+。
取一段透析袋，将其一端用透析袋夹夹住（或打一死结），由 开口端加入含清蛋白沉淀的溶液（不可装的太满，留出一半空 隙，并适当排出空气，以防透析袋胀破），用透析袋夹夹住袋 口（或打一死结）。
（3）透析 如右图，取一个大烧杯， 加入10倍以上样品液体 积的去离子水或缓冲溶 液，将装好样品的透析 袋悬于大烧杯中部，底 部放一个磁子，用磁力 搅拌器缓慢搅拌以促进 溶液交换，透析过程中 需更换洗脱溶液数次 （约30min一次），至达 到透析平衡为止（洗出 液中无Cl¯和NH4+），约 需2h。
四、操作步骤
1、蛋白质的检测 利用双缩脲反应进行蛋白质的检查。取待渗析的蛋白质-NaCl溶液2ml 和10%NaOH溶液1ml，摇匀，再加1%CuSO4溶液1~2滴，边加边摇，观察 是否有紫红色出现。CuSO4不可过量，否则生成的蓝色Cu(OH)2会掩盖 浅紫红色。
2、蛋白质的可逆沉淀 （1）取卵清蛋白-NaCl溶液2ml，倾斜试管，沿管壁慢慢加入饱和（NH4）2SO4溶液2ml。轻 轻混匀，静置5min，观察球蛋白沉淀。 （2）过滤，除去析出的蛋白质沉淀，再向滤液中加入固体（NH4）2SO4粉末至饱和，观察清 蛋白沉淀。 （3）过滤，除去析出的蛋白质沉淀，再向滤液中加入固体（NH4）2SO4粉末至饱和，观察 清蛋白沉淀。
蛋白质的性质实验二-蛋白质的等电点测定和沉淀反应
蛋白质沉淀反应结果分析
要点一
蛋白质沉淀反应原理
当溶液的pH值低于或高于蛋白质的 等电点时，蛋白质带负电荷或正电荷 ，容易与其他带相反电荷的物质发生 静电吸引而产生沉淀。沉淀反应可用 于分离纯化和测定蛋白质含量。
要点二
实验结果
实验观察到在pH值低于或高于等电 点时，蛋白质出现沉淀现象。通过离 心分离和称重，测定了沉淀物中蛋白 质的质量和含量。实验结果表明，该 蛋白质在不同pH值下的沉淀效果显 著，可用于蛋白质的分离纯化和含量 测定。
实验试剂
盐酸、氢氧化钠、醋酸、醋酸钠、磷酸盐缓冲液等。
配置不同pH值的缓冲液
选择适当的缓冲液，如醋酸-醋酸钠缓 冲液、磷酸盐缓冲液等。
根据需要配置不同pH值的缓冲液，确 保缓冲液的准确性和稳定性。
蛋白质溶液的等电点测定
将蛋白质溶液与不同pH值的缓冲液混合，观察蛋白质的溶解度变化。
当蛋白质溶解度最低时，记录对应的pH值，即为该蛋白质的等电点。
了解蛋白质的沉淀反应及原理
沉淀反应
蛋白质在某些条件下，失去溶解性从 溶液中析出的现象。
原理
蛋白质的沉淀反应通常与溶液的pH值 、离子强度、温度等因素有关，当这 些因素发生变化时，蛋白质的溶解度 可能会降低，导致沉淀的产生。
02
实验原理
蛋白质等电点的概念及影响因素
蛋白质等电点
蛋白质分子在溶液中处于净电中性状态时的pH值，此时蛋白质的溶解度最低。
通过测定不同pH值下的蛋白质电导率，确定了蛋 白质的等电点。
在实验过程中，观察到了蛋白质的溶解度变化和 电荷性质的变化。
分析实验结果与理论预期的差异
实验结果与理论预期基本一致，没有出现明显的偏差。
实验结果支持了蛋白质等电点沉淀的理论，即当溶液pH值等于蛋白质等电点时，蛋白质溶解度最低， 容易发生沉淀。
实验二蛋白质的沉淀反应
实验二蛋白质的沉淀反应一、蛋白质等电点的测定：1.目的：(1)了解蛋白质的两性解离性质。
(2)学习测定蛋白质等电点的一种方法2.原理：蛋白质是两性电解质。
在蛋白质溶液中存在下列平衡：蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。
当溶液的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数日相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。
不同蛋白质各有其特异的等电点。
在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。
最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。
本实验借观察在不同pH溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。
用醋酸与酷酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白溶液中)配制成各种不同pH值的缓冲液。
向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。
3.器材：(1)水浴锅。
(2)温度计。
(3)200毫升锥形瓶。
(4)100毫升容量瓶。
(5)吸管。
(6)试管。
(7)试管架。
(8)乳钵。
4.试剂：(1)0.4％酪蛋白醋酸钠溶液200毫升取0.4克酪蛋白，加少量水在乳钵中仔细地研6，将所得的蛋白质悬波移入200毫升锥形瓶内，用少量40～50℃的温水洗涤乳钵，将洗涤液也移入锥形瓶内。
加入10毫升1当量/升醋酸钠溶液。
把锥形瓶放到50℃水浴中，并小心地旋转锥形瓶，直到酪蛋白完全溶解为止。
将锥形瓶内的溶液全部移至100毫升容量瓶内，加水至刻度，塞紧玻塞，混匀。
(2)1.00当量／升醋酸溶液100毫升(3)0.10当量／升醋酸溶液100毫升(4)0.01当量／升醋酸溶液50毫升5.操作方法：(1)取同样规格的试营4支，按下表颠序分别精确地加入各试剂，然后混匀。
(2)向以上试管中各加酪蛋白的醋酸钠溶液1毫升，加一管，摇句一管。
此时1、2、3、4管的pH值依次为5.9、5.3、4.7、3.5。
观察其混浊度。
静置10分钟后，再观察其混浊度。
实验二 蛋白质的纯化-透析实验
实验二蛋白质的纯化-透析实验【实验目的】1. 学习透析的基本原理和操作；2. 掌握盐析沉淀蛋白质后，蛋白质的脱盐处理技术；3. 了解透析袋的使用方法。
【实验原理】透析是利用小分子能通过而大分子不能通过半透膜的原理而把它们分开的一种重要手段，是食品分离提纯过程中经常使用的基本操作技术之一。
蛋白质是大分子物质，不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过。
在分离提纯蛋白质的过程中，常利用透析的方法使蛋白质与其中夹杂的小分子物质分开。
【实验仪器与试剂】烧杯；玻璃棒；离心机；离心管；冰箱；电炉。
1％氯化钡溶液；硫酸铵粉末；1mol/L EDTA；2%NaHCO3。
透析管（宽约2.5cm，长12－15cm）或玻璃纸; 皮筋；鸡蛋清溶液：将新鲜鸡蛋的蛋清与水按1：20混匀，然后用六层纱布过滤。
【实验步骤】1. 透析管（前）处理：先将一适当大小和长度的透析管放在1mol/L EDTA溶液中，煮沸10分钟，再在2％NaHCO3溶液中煮沸10分钟，然后再在蒸馏水中煮沸10分钟即可。
2. 取5ml蛋白质溶液于离心管中，加4g硫酸铵粉末，搅拌使之溶解。
然后在4℃下静置20分钟，出现絮状沉淀。
3. 离心：将上述絮状沉淀液以1000转/分的速度离心20分钟。
4. 装透析管：离心后倒掉上清夜，加5ml蒸馏水溶解沉淀物，然后小心倒入透析管中，扎紧上口。
5. 将装好的透析管放入盛有蒸馏水的烧杯中，进行透析，并不断搅拌。
6. 每隔适当时间（5－10分钟），用氯化钡滴入烧杯的蒸馏水中，观察是否有沉淀现象。
【结果与讨论】记录并解释实验现象。
【思考题】在透析袋处理过程中，EDTA和NaHCO3起何作用？。
蛋白质沉淀反应实验报告
一、实验目的1. 理解蛋白质沉淀反应的基本原理。
2. 掌握常用的蛋白质沉淀方法。
3. 分析蛋白质沉淀反应的影响因素。
4. 学习蛋白质沉淀反应在生物科学中的应用。
二、实验原理蛋白质沉淀反应是指在一定条件下，蛋白质从溶液中析出的现象。
蛋白质沉淀反应的原因主要有两种：一是破坏蛋白质的水化膜，二是中和蛋白质所带的电荷。
当蛋白质的水化膜被破坏或电荷被中和时，蛋白质颗粒之间的相互排斥力减弱，导致蛋白质颗粒聚集形成沉淀。
蛋白质沉淀反应在生物科学中具有广泛的应用，如蛋白质的分离、纯化、定量分析等。
三、实验材料1. 蛋白质溶液：鸡蛋清溶液、牛奶蛋白质溶液等。
2. 沉淀剂：硫酸铵、硫酸钠、氯化钠、乙醇、甲醇、氯仿等。
3. 实验仪器：试管、移液管、滴管、pH计、离心机等。
四、实验方法1. 盐析法：向蛋白质溶液中加入适量的硫酸铵，观察蛋白质沉淀现象。
2. 低温沉淀法：将蛋白质溶液置于低温条件下，观察蛋白质沉淀现象。
3. 有机溶剂沉淀法：向蛋白质溶液中加入适量的乙醇或甲醇，观察蛋白质沉淀现象。
4. 重金属盐沉淀法：向蛋白质溶液中加入适量的重金属盐（如氯化汞），观察蛋白质沉淀现象。
五、实验步骤1. 准备蛋白质溶液：取鸡蛋清溶液或牛奶蛋白质溶液，用蒸馏水稀释至一定浓度。
2. 盐析法：向蛋白质溶液中加入适量的硫酸铵，观察蛋白质沉淀现象。
3. 低温沉淀法：将蛋白质溶液置于4℃低温条件下，观察蛋白质沉淀现象。
4. 有机溶剂沉淀法：向蛋白质溶液中加入适量的乙醇或甲醇，观察蛋白质沉淀现象。
5. 重金属盐沉淀法：向蛋白质溶液中加入适量的重金属盐（如氯化汞），观察蛋白质沉淀现象。
6. 记录实验结果，分析沉淀现象。
六、实验结果与分析1. 盐析法：向蛋白质溶液中加入硫酸铵后，观察到蛋白质沉淀现象。
这是因为硫酸铵破坏了蛋白质的水化膜，同时中和了蛋白质所带的电荷，导致蛋白质颗粒聚集形成沉淀。
2. 低温沉淀法：将蛋白质溶液置于4℃低温条件下，观察到蛋白质沉淀现象。
蛋白质的沉淀反应实验报告
蛋白质的沉淀反应实验报告一、实验目的1、掌握几种常用的使蛋白质沉淀的方法。
2、理解蛋白质沉淀的原理和应用。
二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的大分子化合物。
在一定条件下，蛋白质分子会发生沉淀现象。
蛋白质沉淀的原因主要有以下几种：1、盐析：在蛋白质溶液中加入中性盐，如硫酸铵、氯化钠等，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度逐渐降低而沉淀析出。
这是因为中性盐会破坏蛋白质分子表面的水化膜，并中和蛋白质分子所带的电荷，从而使其沉淀。
盐析沉淀的蛋白质一般不变性，经透析或超滤等方法除去盐后，蛋白质仍能恢复其原有的溶解性和生物活性。
2、有机溶剂沉淀：向蛋白质溶液中加入一定量的有机溶剂，如乙醇、丙酮等，可使蛋白质沉淀。
这是因为有机溶剂能降低溶液的介电常数，增加蛋白质分子之间的静电引力，同时还能破坏蛋白质分子的水化膜，导致蛋白质沉淀。
有机溶剂沉淀的蛋白质往往会发生变性，失去其原有的生物活性。
3、重金属盐沉淀：蛋白质在碱性溶液中可与重金属离子，如汞离子、铅离子等结合形成不溶性的盐而沉淀。
这种沉淀反应是由于重金属离子与蛋白质分子中的巯基、羧基等基团结合，从而破坏了蛋白质的结构，导致其沉淀。
重金属盐沉淀的蛋白质通常会发生变性。
4、生物碱试剂沉淀：生物碱试剂，如苦味酸、鞣酸等，能与蛋白质分子中的碱性基团结合而沉淀。
这种沉淀反应常用于定性和定量分析蛋白质。
三、实验材料与仪器1、实验材料蛋白质溶液（鸡蛋清稀释液）饱和硫酸铵溶液乙醇氯化汞溶液苦味酸溶液氢氧化钠溶液醋酸溶液2、实验仪器试管试管架滴管离心机四、实验步骤1、盐析沉淀取 2 支试管，分别加入 2mL 蛋白质溶液。
向其中一支试管中逐滴加入饱和硫酸铵溶液，边加边振荡，直至出现沉淀为止。
将另一支试管作为对照，观察现象。
2、有机溶剂沉淀取 2 支试管，分别加入 2mL 蛋白质溶液。
向其中一支试管中逐滴加入乙醇，边加边振荡，直至出现沉淀为止。
将另一支试管作为对照，观察现象。
蛋白的沉淀实验报告
一、实验目的1. 了解蛋白质的沉淀原理及其应用；2. 掌握常用蛋白质沉淀方法，如盐析、酸沉、有机溶剂沉淀等；3. 学习蛋白质沉淀实验的操作步骤及注意事项。
二、实验原理蛋白质在溶液中处于溶解状态，当受到某些物理或化学因素的影响时，其溶解度会降低，从而导致蛋白质从溶液中析出。
这种现象称为蛋白质的沉淀。
蛋白质沉淀的方法有很多种，常见的有盐析、酸沉、有机溶剂沉淀等。
盐析：在一定浓度的盐溶液中，蛋白质的溶解度降低，从而使蛋白质从溶液中析出。
盐析过程中，盐的浓度越高，蛋白质的沉淀效果越好。
酸沉：在酸性条件下，蛋白质的溶解度降低，从而使蛋白质从溶液中析出。
酸沉过程中，pH值越低，蛋白质的沉淀效果越好。
有机溶剂沉淀：有机溶剂能破坏蛋白质的氢键、疏水作用等，使蛋白质的溶解度降低，从而使其从溶液中析出。
有机溶剂沉淀过程中，溶剂的浓度越高，蛋白质的沉淀效果越好。
三、实验材料1. 蛋白质溶液：牛血清白蛋白（BSA）溶液；2. 盐析试剂：饱和硫酸铵溶液；3. 酸沉试剂：0.1mol/L HCl溶液；4. 有机溶剂沉淀试剂：无水乙醇；5. 实验器材：试管、移液管、量筒、磁力搅拌器、离心机等。
四、实验步骤1. 取5支试管，分别编号为1-5；2. 在1-5号试管中分别加入2ml牛血清白蛋白溶液；3. 在1号试管中加入1ml饱和硫酸铵溶液，充分振荡后静置观察；4. 在2号试管中加入2滴0.1mol/L HCl溶液，充分振荡后静置观察；5. 在3号试管中加入1ml无水乙醇，充分振荡后静置观察；6. 在4号试管中加入1ml饱和硫酸铵溶液，再加入2滴0.1mol/L HCl溶液，充分振荡后静置观察；7. 在5号试管中加入1ml饱和硫酸铵溶液，再加入1ml无水乙醇，充分振荡后静置观察；8. 将所有试管在室温下静置30分钟；9. 观察各试管中蛋白质的沉淀情况，记录实验结果；10. 将沉淀后的溶液进行离心，取上清液进行分析。
五、实验结果与分析1. 盐析：在1号试管中加入饱和硫酸铵溶液后，蛋白质从溶液中析出，形成白色沉淀；2. 酸沉：在2号试管中加入HCl溶液后，蛋白质从溶液中析出，形成白色沉淀；3. 有机溶剂沉淀：在3号试管中加入无水乙醇后，蛋白质从溶液中析出，形成白色沉淀；4. 盐析+酸沉：在4号试管中加入饱和硫酸铵溶液和HCl溶液后，蛋白质的沉淀效果更好；5. 盐析+有机溶剂沉淀：在5号试管中加入饱和硫酸铵溶液和无水乙醇后，蛋白质的沉淀效果更好。
蛋白质的沉淀反应实验报告
蛋白质的沉淀反应实验报告
实验目的，通过对蛋白质的沉淀反应进行实验，掌握蛋白质的沉淀方法和技巧，了解蛋白质的性质和特点。
实验原理，蛋白质的沉淀反应是利用蛋白质与醋酸和酒精混合后在酸性条件下
沉淀出来的特性进行实验。
醋酸和酒精可以使蛋白质变性并沉淀出来，酸性条件有利于蛋白质的沉淀。
实验步骤：
1. 取少量蛋白质溶液放入试管中；
2. 加入少量醋酸，并充分混合；
3. 加入适量酒精，再次充分混合；
4. 观察蛋白质的沉淀情况。
实验结果，经过以上步骤，观察到蛋白质在酸性条件下与醋酸和酒精混合后发
生了沉淀反应，沉淀物呈现白色。
实验分析，蛋白质的沉淀反应是由于醋酸和酒精的作用下，蛋白质发生变性并
沉淀出来。
酸性条件有利于蛋白质的沉淀，而酒精可以加速蛋白质的沉淀过程。
因此，通过本实验可以初步了解蛋白质的性质和特点。
实验结论，蛋白质的沉淀反应是一种常见的实验方法，通过本实验可以掌握蛋
白质的沉淀技巧，并了解蛋白质的性质和特点。
在实际应用中，蛋白质的沉淀反应可以用于蛋白质的提取和分离，具有一定的应用价值。
实验注意事项：
1. 实验操作要注意安全，避免醋酸和酒精的接触；
2. 实验过程中要注意观察蛋白质的沉淀情况，及时记录实验结果；
3. 实验结束后要及时清理实验器材，保持实验环境整洁。
通过本实验，我对蛋白质的沉淀反应有了更深入的了解，掌握了蛋白质的沉淀
方法和技巧，对蛋白质的性质和特点有了更清晰的认识。
希望通过今后的实验实践，能够进一步提高自己的实验技能，为科学研究和实际应用做出更多的贡献。
蛋白质的沉淀实验报告
1. 了解蛋白质的沉淀现象及其原理；2. 掌握几种常见的蛋白质沉淀方法；3. 分析蛋白质沉淀过程中的影响因素。
二、实验原理蛋白质在溶液中形成胶体，具有稳定性和可逆性。
在一定条件下，蛋白质胶体发生凝聚，形成沉淀。
蛋白质沉淀的原因主要有：电解质的作用、pH值的变化、温度的影响、有机溶剂的作用等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鸡蛋清溶液- 硫酸铵溶液- 乙醇- 氯仿- 玻璃棒- 离心管- pH试纸- 移液管- 烧杯- 水浴锅2. 实验仪器：- pH计- 离心机- 恒温水浴锅1. 电解质沉淀法（1）取鸡蛋清溶液5mL，加入等体积的硫酸铵溶液，充分搅拌；（2）观察溶液颜色变化，记录沉淀形成时间；（3）将混合溶液离心，弃去上清液，观察沉淀情况。
2. pH值沉淀法（1）取鸡蛋清溶液5mL，用pH计测定pH值；（2）逐滴加入稀盐酸或氢氧化钠溶液，调节pH值至4.7；（3）观察溶液颜色变化，记录沉淀形成时间；（4）将混合溶液离心，弃去上清液，观察沉淀情况。
3. 温度沉淀法（1）取鸡蛋清溶液5mL，置于恒温水浴锅中；（2）分别在不同温度下（如30℃、50℃、70℃）观察溶液颜色变化，记录沉淀形成时间；（3）将混合溶液离心，弃去上清液，观察沉淀情况。
4. 有机溶剂沉淀法（1）取鸡蛋清溶液5mL，加入等体积的乙醇；（2）观察溶液颜色变化，记录沉淀形成时间；（3）将混合溶液离心，弃去上清液，观察沉淀情况。
五、实验结果与分析1. 电解质沉淀法：加入硫酸铵溶液后，溶液颜色变浅，沉淀形成时间约为5分钟。
离心后，沉淀较多。
2. pH值沉淀法：调节pH值至4.7后，溶液颜色变深，沉淀形成时间约为10分钟。
离心后，沉淀较多。
3. 温度沉淀法：随着温度升高，沉淀形成时间逐渐缩短，沉淀量逐渐增多。
在70℃时，沉淀最多。
4. 有机溶剂沉淀法：加入乙醇后，溶液颜色变浅，沉淀形成时间约为3分钟。
离心后，沉淀较多。
六、实验结论1. 蛋白质在溶液中具有稳定性和可逆性，在一定条件下会发生沉淀；2. 电解质、pH值、温度和有机溶剂等因素均可影响蛋白质的沉淀；3. 通过本实验，掌握了蛋白质的沉淀方法及其原理，为后续实验奠定了基础。
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实验二
蛋白质的沉淀与透析
山东师范大学生命科学学院
【实验目的】 实验目的】 1. 学习蛋白质沉淀和透析的基本原理 2. 掌握蛋白质可逆沉淀、透析的基本操作方法 掌握蛋白质可逆沉淀、 实验原理】 【实验原理】 某些试剂（如硫酸铵、氯化钠） 某些试剂（如硫酸铵、氯化钠）与蛋白质作 可使蛋白质沉淀； 用，可使蛋白质沉淀；但当除去使蛋白质沉淀的 因素后，蛋白质又可再次溶于原来的溶剂中， 因素后，蛋白质又可再次溶于原来的溶剂中，这 种沉淀作用称为可逆的沉淀作用。 种沉淀作用称为可逆的沉淀作用。
【实验步骤】 实验步骤】 1. 蛋白质的检查 取卵清蛋白 /NaCl溶液2ml和 /NaCl溶液2ml和 溶液2ml 10%NaOH溶液1ml， 10%NaOH溶液1ml， 溶液1ml 摇匀， 摇匀，加1%CuSO4 溶液1~2滴 溶液1~2滴，边 1~2 加边摇。 加边摇。
2. 蛋白质的可逆沉淀作用 1） 球蛋白沉淀 ） 取卵清蛋白/NaCl溶液 溶液 取卵清蛋白 2ml，倾斜试管，沿管壁 ，倾斜试管， 慢慢加入饱和硫酸铵溶液 2ml，轻轻混匀，静置 ，轻轻混匀， 5min。 。
2）清蛋白沉淀 ） 过滤， 过滤，除去盐 析出的蛋白质。 析出的蛋白质。 向滤液中加入 硫酸铵粉末至饱和。 硫酸铵粉末至饱和。
3. 蛋白质的透析 （1）装样：取一段透析袋，将一端夹住，由 ）装样：取一段透析袋，将一端夹住， 开口端加入含有硫酸铵的清蛋白沉淀（ 开口端加入含有硫酸铵的清蛋白沉淀（不可 装太满，并适当排出空气），夹住袋口。 ），夹住袋口 装太满，并适当排出空气），夹住袋口。 （2）透析：取10倍以上蛋白质体积的去离子 ）透析： 倍以上蛋白质体积的去离子 将装好样品的透析袋悬于大烧杯中部。 水，将装好样品的透析袋悬于大烧杯中部。 在烧杯底部放一个磁子， 在烧杯底部放一个磁子，缓慢搅拌以促进溶 液交换。更换洗脱溶液数次（ 一次）， 液交换。更换洗脱溶液数次（约30min一次）， 一次 至达到透析平衡为止。 至达到透析平衡为止。
一些物理因素（如剧烈震荡、搅拌等） 一些物理因素（如剧烈震荡、搅拌等）或 化学因素（如重金属离子、有机酸等），会破 化学因素（如重金属离子、有机酸等），会破 ）， 坏蛋白质的稳定的构象，引起蛋白质变性。 坏蛋白质的稳定的构象，引起蛋白质变性。即 使除去了使蛋白质沉淀的因素， 使除去了使蛋白质沉淀的因素，蛋白质也不能 再溶于原来的溶剂中, 即为不可逆沉淀作用。 再溶于原来的溶剂中 即为不可逆沉淀作用。
在实验室分离纯化蛋白质的过程中， 在实验室分离纯化蛋白质的过程中，常利 用透析的方法除去蛋白质溶液中的小分子物质 （无机盐、单糖等）。利用透析膜的半透膜作 无机盐、单糖等）。利用透析膜的半透膜作 ）。 用，小分子物质可以自由通过与周围的缓冲溶 液进行物质交换，大分子物质（蛋白质） 液进行物质交换，大分子物质（蛋白质）保留 在透析袋中而彼此分l-的检查： ） 的检查： 取洗出液约2ml， ， 取洗出液约 溶液1~2滴 加10%HNO3溶液 滴 至酸性， 至酸性，加1%AgNO3 2~3滴，观察有无白色 滴 沉淀。 沉淀。
2）NH4+的检查： ） 的检查： 取洗出液2滴加入白瓷板穴中， 取洗出液 滴加入白瓷板穴中， 滴加入白瓷板穴中 加纳氏试剂1滴，观察有无黄红色沉 加纳氏试剂 滴 淀。