高纯度质粒小提中量试剂盒说明书-天根
高纯度质粒小提试剂盒使用说明书
高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit(目录号：HS0103)产品包装试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml)150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml)50个（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。
若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。
加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。
产品简介本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。
菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜（Spin Columns PA ）吸附。
通过去蛋白液（Buffer PD ）和漂洗液（Buffer PW ）的清洗可去除蛋白及其他杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到高纯度的质粒DNA 。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA，可在30 min之内完成提取任务。
所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。
产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。
2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇，即开即用。
高纯度质粒小提中量试剂盒说明书-天根
高纯度质粒小提中量试剂盒说明书-天根1.柱平衡步骤：向吸附柱CP4 中（吸附柱放入收集管中）加入500 μL的平衡液BL, 12000rpm（~13400g）离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
（请使用当天处理过的柱子）2.取5-15ml 过夜培养的菌液加入离心管中，12000 rpm (~13400g ）离心1 min，尽量吸除上清。
注意：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中，菌体量以能够充分裂解为佳，过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。
3.向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μL溶液Pl （请先检查是否已加入RNaseA ) ，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：请务必彻底悬浮细菌沉淀，如果有未彻底混匀的菌块会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
质粒4.向离心管中加入500μL溶液P2 ，温和地上下翻转6-8 次使菌体充分裂解。
注意：温和地混合不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA 。
此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min，以免质粒受到破坏。
如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
5.向离心管中加入700 μL溶液P3 ，立即温和地上下翻转6-8 次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。
12000rpm ( ~13400g ）离心10 min，此时在离心管底部形成沉淀。
注意：P3 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。
如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6.将上一步收集的上清液分次加入过滤柱Cs （过滤柱放入收集管中）, 12000rpm（~13400g ）离心2 min，小心地将离心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP4 中（吸附柱放入收集管中）, （如果过滤柱中有残余的液体说明步骤5 吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间；如果离心后收集管底部有少量的沉淀．尽量地吸取上清）。
7.12000rpm (~13400g）离心l min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4 放入收集管中。
天根 快速定点突变试剂盒说明书
KM101 （20 rxn）
30 μl 200 μl 20 μl 40 μl 80 μl 20×50 μl
储存条件
收到本产品后， 请立即将FDM competent cells置于-70℃条件下保存，试剂盒其他组分 置于-20℃条件下保存。感受态细胞可在-70℃条件下保存3个月，试剂盒其他组分可在-20℃ 条件下保存1年。
50 μl 体系 2 μl 4 μl 10 μl 1.5 μl
至50 μl
终浓度 0.2 ng/μl 400 nM
1× 0.075 U/μl
－
4、将实验组及对照组按照如下PCR反应程序进行PCR反应。
PCR反应程序： 注：下表中PCR程序按照对照组实验条件设置，客户可根据自身实验进行相应调整。
阶段 预变性
■ PCR、RT-PCR系列 ■ 核酸DNA、RNA分离纯化系列 ■ DNA分子量标准 ■ 克隆载体、感受态细胞 ■ 细胞生物学产品 ■ 蛋白分子量标准 ■ 蛋白质染色、检测及定量相关产品
版本号: KM131204
Order: 010-59822688 Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057 TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD
PCR反应
补充延伸
循环 1×
18×
1×
温度 95℃ 94℃ 55℃ 68℃ 68℃
时间 2 min 20 sec 10 sec 2.5 min 5 min
二、质粒模板的消化
1、按照下表所述配制酶切体系： 组成成分
PCR产物 Dpn I restriction enzyme （20 U/μl） Total Volume 2、充分混匀后，将上述酶切体系于37℃条件下消化1 h。
质粒小量提取试剂盒说明书
质粒小量提取试剂盒说明书货号：D1100规格：50T/100T保存：常温保存，复检期一年。
（注：RNase A以附件形式发货，收到未使用前请-20℃保存）试剂盒内容：试剂盒组成D1100-50T D1100-100TRNase A300ul500ul溶液Ⅰ15ml30ml溶液Ⅱ15ml30ml溶液Ⅲ20ml40ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液15ml30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品说明：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA （将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤:1、取1-5ml细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250ul溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入250ul溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5min，以免质粒受到破坏。
4、向离心管中加入350ul溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。
12000rpm离心10min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。
高纯度质粒小量提取试剂盒 说明书
大班数学活动教案：拼图教案1. 教学背景学生年龄：4-5岁学生已具备的知识和技能：会数数、认识一到十的数字、知道形状与颜色的区别2. 教学目标2.1 知识目标1.学生能把简单的拼图拼好，并准确地说出拼图所属的几何形状。
2.学生能通过拼图，巩固对一到十个数字的认识。
2.2 技能目标1.提升学生的动手能力，能够按照图示，拼好拼图。
2.培养学生的观察能力，能够观察拼图的几何形状和数字，准确地做出判断。
2.3 情感目标1.养成学生对数学活动的兴趣，让学生体验到学习数学的快乐。
2.培养学生的合作意识，学生能够在小组内合作完成拼图。
3. 教学过程3.1 导入环节教师问学生：“你们在家里会玩拼图吗？”学生回答时，教师让学生展示一下自己的拼图，然后教师说：“好的，今天我们就来学习大一点的拼图，准备好了吗？”3.2 活动环节一：拼图过程1.分组：教师将学生分成小组，每组三到四名学生。
2.活动准备：教师为每个小组提供一份数字拼图图纸，和相应的拼图，每张图纸上有一到十个数字和图形，学生需要根据图纸上的数字和图形拼出对应的图片。
3.活动过程：教师告诉学生，现在开始拼图，让学生自由组合句子，优美表达以及敢于发言。
学生在拼图过程中，要注意拼图的位置和相互之间的关系，有效进行小组合作，完成自己的任务。
3.3 活动环节二：讲解数字与形状教师在学生完成拼图后，根据每个组完成拼图的情况，问学生完成拼图的过程，并带学生回顾每个数字都对应的几何形状，如数字一对应的图形是直线，数字五对应的图形是五边形等。
3.4 活动环节三：游戏比赛教师让每个小组选一名代表出来，分别进行拼图比赛，以时间最短和完成度最高的小组为胜者，并为获胜小组颁发奖励。
4. 教学反思这次的数学活动，让学生在拼图的过程中，不仅锻炼了学生的动手能力和观察力，还让学生对数字和几何形状有了更深刻的认识。
同时，我们也培养了学生的合作意识，让他们感受到集体的力量。
在今后的数学活动中，我们将进一步发扬数学活动的魅力，让学生在活动中感受到更多的乐趣。
质粒小提试剂盒使用说明书
质粒小提试剂盒I简明步骤（PD1211）（详细内容请参考英文说明书）I.实验前准备II.注意事项RNase A: 使用前将提供的所有RNase A瞬时离心后加入Buffer A1, 使用后将Buffer A1/RNase A置于4o C保存。
质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer 和Elution Buffer.转化菌:若为-70o C甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
切勿直接取冻存的菌种进行培养。
DNA Wash Buffer*: 使用前请将8 mL (PD1211-00)或48 mL(PD1211-01)或216 mL (PD1211-02) or 90 mL (PD1211-03) 96-100%乙醇加入DNA Wash Buffer。
Buffer B1: 在低于室温时会沉淀，请于50o C左右水浴加热至沉淀完全溶解，溶液澄清，使用后保证Buffer B1瓶盖旋紧。
在室温下（22-25o C）进行所有离心操作。
III.操作步骤1.接种新鲜的单个菌落到1-5 mL的LB培养基（含适量抗生素），37o C震荡培养14-16小时。
室温下10,000 xg离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
注：残留的液体培养基容易导致菌液裂解不充分，第5步离心后沉淀较松，不能有效吸取上清。
注：本说明书中的操作程序适用于标准LB （Luria Bertani）培养基培养12-16 小时后，OD600（细菌密度）在2.0-3.0之间的菌液。
若采用的是富集培养基，例如TB 或2×YT，请注意保证OD600不超过3.0。
2.加入250 µL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液枪或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。
注：细菌细胞如果没有充分悬浮均匀，将导致菌体裂解不完全，从而降低产量。
高纯质粒小量制备试剂盒(升级版离心柱型)
试剂盒组成Components GK2002-100GK2002-200Plasmid Recovery Column100个200个2-mL Collection Tube100个200个Buffer CBS25mL50mlSolution I30mL60mlSolution II30mL60mlSolution III42mL90mlW1solution60mL125mlWash Solution*24mL24ml+60mlElution Buffer20mL25mlRNase A(10mg/mL)240µl500µl注：1、Buffer CBS用于质粒提取前柱子的平衡处理，可以活化硅胶膜，有利于提高质粒的产量。
2、*Wash Solution在使用前应按要求加入乙醇：使用后及时盖紧瓶盖，防止乙醇挥发。
3、Wash solution分两瓶，大瓶用于配制工作液（已预装24ml母液），小瓶为母液，当大瓶工作液用完时，可从小瓶中取24ml用于配制工作液。
4、独立包装的RNase A收货后请于-20℃保存；初次使用本试剂盒时，请将RNase A全部加入Solution I中，均匀混合后，4℃保存，表明日期，如长时间不用，请于-20度冻存。
5、Solution II：SolutionⅢ：室温保存。
6、试剂盒其余组分于室温（15℃~25℃）可以稳定存放1.5年而使用活性无明显衰减。
室温过高或需要更长期保存，请放置于2~8℃。
◆产品特点：●本试剂盒所提取的质粒DNA可用于多种常规实验，包括酶切、测序、转化等。
●本试剂盒采用常规碱裂解法分离质粒DNA，并结合膜吸附技术特异性吸附质粒DNA，具有高效、快速、方便的特点。
◆实验前准备：●第一次使用产品前，请仔细阅读该说明书。
●确认Solution I中已经加入RNase A，并做好标记。
●检查Washing Solution是否按照要求加入乙醇。
酵母双杂交步骤
1.酵母质粒提取参考天根公司酵母小题试剂盒说明书步骤:1)柱平衡步骤:向吸附柱CPZ中(吸附柱放入收集管中)加入500ul的平衡液BL，12000rpm离心1min，弃掉收集管中废液，将吸附柱重新放回收集管中（使用当天处理的柱子）。
2)取1-5ml酵母培养物，12000rpm离心lmin，尽量吸除上清。
3)破除酵母细胞壁:向菌液中加入300ul山梨醇buffer，加入大约50U Lyticase，充分混匀，并在摇床上220 rpm，30℃处理lh。
4000rpm离心10min，弃上清，收集沉淀。
加入250ul 溶液YP1(已加RNaseA)，重悬沉淀。
4)向管中加入250ul YP2溶液，温和地上下翻转6-8次，使菌体充分混匀，室温静置5-10min。
5)向管中加入350ul YP3 溶液，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，出现白色絮状沉淀。
12000rpm离心20min。
6)小心地将上清液加入吸附柱CP2中，12000rpm离心1min，弃废液。
7)向吸附柱CP2中加入500ul缓冲液PD，12000rpm离心1min，弃废液。
8)向吸附柱CP2中加入600ul漂洗液PW(己加无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液。
9)重复步骤8。
10)将吸附柱CP2放入收集管中，12000rpm离心2min，去除吸附柱中残余的漂洗液。
11)将吸附柱CP2置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50-100ul洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12000rpm离心2min，收集质粒，-20℃保存。
提取的酵母质粒浓度低很难凝胶电泳监测，可将其转入感受态DH5a，若转化成功即可认为质粒抽提合格，送交测序。
2. 酵母质粒DNA的提取1. 挑取经过酵母选择/诱导培养基初步鉴定的酵母单菌落，接种于5.0-10.0ml SD/-Trp液体培养基，30℃恒温，250rpm振荡培养20hr。
2. 室温离心5000xg×1min，弃上清，收菌。
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1.柱平衡步骤：向吸附柱CP4 中（吸附柱放入收集管中）加入500 μL的平衡液BL, 12000
rpm（~13400g）离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
（请使用当天处理过的柱子）
2.取5-15ml 过夜培养的菌液加入离心管中，12000 rpm (~13400g ）离心1 min，尽量吸
除上清。
注意：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中，菌体量以能够充分裂解为佳，过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。
3.向留有菌体沉淀的离心管中加入500 μL溶液Pl （请先检查是否已加入RNaseA ) ，使
用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：请务必彻底悬浮细菌沉淀，如果有未彻底混匀的菌块会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
质粒
4.向离心管中加入500μL溶液P2 ，温和地上下翻转6-8 次使菌体充分裂解。
注意：温和
地混合不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA 。
此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min，以免质粒受到破坏。
如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
5.向离心管中加入700 μL溶液P3 ，立即温和地上下翻转6-8 次，充分混匀，此时会出
现白色絮状沉淀。
12000rpm ( ~13400g ）离心10 min，此时在离心管底部形成沉淀。
注意：P3 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。
如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6.将上一步收集的上清液分次加入过滤柱Cs （过滤柱放入收集管中）, 12000rpm
（~13400g ）离心2 min，小心地将离心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP4 中（吸附柱放入收集管中）, （如果过滤柱中有残余的液体说明步骤5 吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间；如果离心后收集管底部有少量的沉淀．尽量地吸取上清）。
7.12000rpm (~13400g）离心l min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4 放入收集管中。
8.向吸附柱CP4 中加入500μL去蛋白液PD，12000rpm（~13400g）离心l min，倒掉收
集管中的废液，将吸附柱CP4 放入收集管中。
9.向吸附柱CP4 中加入600μL漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm
（~13400g）离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4 放入收集管中。
注意：加入漂洗液PW后，如果室温静置2-5 min，有助于更好地去除杂质。
10.向吸附柱CP4 中加入600μL漂洗液PW , 12000rpm（13400g）离心l min，倒掉收集管
中的废液。
11.将吸附柱CP4 重新放回收集管中置于12000rpm（~13400g ）离心2 min，目的是将吸
附柱中残余的漂洗液去除。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。
为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP4 开盖，置于室温放置数min，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
12.将吸附柱自科置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300μL洗脱
缓冲液TB ，室温放置2 min，12000rpm（~13400g ）离心l min将质粒溶液收集到离心管中。
注意：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中．重复步骤
12 。
洗脱液的pH 值对于洗脱效率有很大影响。
若用水做洗脱液，应保证其pH 值在
7.0-8.5 范围内（可以用NaOH 将水的pH 值调到此范围）, pH 值低于7.0 会降低洗脱
效率。
洗脱缓冲液体积不应少于100μL，体积过小影响回收效率。
且DNA产物应保存
在-20 ℃，以防DNA 降解。
质粒DNA 浓度及纯度检测:
得到的质粒DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
电泳可能为单一条带，也可能为2到3条DNA 条带，这主要与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。
OD260值为l 相当于大约50μg/ml 双链DNA 。
OD260 / 0D28 。
比值应为 1.7 -1.9 ，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，但并不表示纯度低，因为pH 值和离子存在会影响光吸收值。