肝糖原的提取、鉴定与定量实验实验报告
079-肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告
生物化学实验报告姓名：符含敏学号： 3140090079专业年级： 2014级预防医学组别：第三实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期2015-1-8 实验地点第三实验室合作者杨锐指导老师朱利娜评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的：提取鸡肝中的肝糖原进行肝糖原的定性以及定量实验二、实验原理：1.低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，使糖原能很好地保存在上清液中，95%的乙醇能将滤液中的糖原沉淀。
2.糖原溶液遇碘呈红棕色，糖原水解成的葡萄糖与班氏试剂水浴加热可变黑色。
3.糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸可使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物，它再与蒽酮试剂脱水缩合生成蓝色的化合物。
4.糖含量在10-100μg，溶液颜色深浅与可溶性糖含量成正比。
三．实验材料：1.鸡肝乙醇 5%三氯醋酸 50%NaOH 12mol/LHCl 碘试剂班氏试剂普通离心机室温至100℃恒温箱可见光分光光度计天平剪刀镊子研钵试管架10ml离心管刻度吸量管白瓷反应板2. 30%KOH 标准葡萄糖溶液 90%浓硫酸蒽酮显色剂四．实验步骤：1.肝糖原的提取与鉴定：鸡肝约1.5 g，剪碎＋5%CClCOOH 1 ml3研磨至乳状＋5%CClCOOH 3 ml3研磨成肝匀浆3分钟（4000 r / min）3 ml）＋3ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟5分钟（4000 r / min）＋蒸镏水1 ml沸水浴2分钟，溶解沉淀糖原溶液1ml＋浓HCl 5滴加碘试剂沸水浴糖原溶液2滴滴呈色对比＋班氏试剂4滴沸水浴2分钟，观察变化2.肝糖原的定量测定：鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml （用吸量管)沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液取3支试管，按下表操作:试剂（ml）空白管标准管样品管标准葡萄糖溶液— 1.0 —糖原提取液—— 1.00.2%蒽酮溶液2.5 2.5 2.5（用吸量管）混匀，沸水浴10分钟，冷却c。
肝糖原的提取、鉴定与定量-实验报告-第四实验室【参考借鉴】
生物化学实验报告
姓名：
学号：
专业年级： 2015级护理本科
组别：第四实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量
实验日期2016-12-20 实验地点第四实验室
合作者指导老师
评分教师签名批改日期
一、实验目的
1、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
2、了解离心管和分光光度计使用的原理并掌握操作步骤。
3、熟悉吸量管、可调式微量移液器的操作步骤。
4、熟悉溶液的转移操作；熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
5、了解呈色反应。
二、实验原理
(一) 肝糖原的提取与鉴定
1.糖原的分离
采用研磨匀浆使细胞破碎，用低浓度的三氯醋酸使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶从而使其沉淀，而糖原仍稳定保持在上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开。
肝糖原的提取鉴定与定量肝糖原的提取与鉴定
肝糖原的提取鉴定与定量肝糖原的提取与鉴定生物化学实验报告姓名：学号： 3130010071专业年级： xx级临床医学组别：第2实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定、分离实验日期 xx-12-25 合作者评分陈海玲签名实验地点第2实验室指导老师朱利娜批改日期一、实验目的1、掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4、熟练运用溶液混匀的各种方法。
5、正确掌握溶液转移的操作。
6、正确操作使用分光光度计。
二、实验原理●肝糖原的提取糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。
●糖原的鉴定糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。
CuSO 4 + 2NaOH = Na2SO 4 + Cu(OH)2Cu(OH)2 + C6H 12O 6 = 2CuOH + 氧化型葡萄糖 + H2O2CuOH = H20 + Cu2红色) Cu(OH)2 ==== H2黑色) ●肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在10—100mg 范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量的标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
肝糖原的提取,定性以及定量实验
生物化学实验报告姓名：张子荣学号： 3150901080专业年级： 2015级临床医学组别：第五实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖元的提取，鉴定和定量检测实验日期2016.12.29 实验地点第五实验室合作者张林燕指导老师何肖娟评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的1.掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2.了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3.正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4.熟练运用溶液混匀的各种方法。
5.正确掌握溶液转移的操作。
6.正确操作使用分光光度计。
二、实验原理1.肝糖原的提取糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。
2.糖原的鉴定糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。
CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4+ Cu(OH)22Cu(OH)2 + C6H12O6= 2CuOH + 氧化型葡萄糖 + H2O2CuOH = H20 + Cu2O (红色)Cu(OH)2 ==== H2O + CuO (黑色)3.肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告9页
肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告9页实验目的：1.了解肝糖原的结构与性质；3.熟悉超声波提取技术的应用。
实验原理：肝糖原是一种糖原，在肝脏中以甲基α-D-葡萄糖嘌呤核苷（SAM）为原料，经过糖原合成酶的催化作用合成而成。
它是一种高分子多糖，由葡萄糖基通过1-4键连接而成，具有极强的极性，难溶于非极性溶剂。
肝糖原的提取：取新鲜肝组织80g，冰冻于低温冰箱-20℃冰冻保存，取出后立即加入10倍体积的冷盐酸（0.1mol/L），用手柄式破碎器将组织均匀破碎，加入适量的冷盐酸，使其均匀分布，浸泡在冰箱中30min，取出用移液器吸取上清液。
用纱布过滤残渣，滤好的液体置于4℃冰箱中，制备组织液。
取20μL肝糖原组织液，加入20μl的磷酸汞溶液，室温环境反应20min，其中影响反应时间和效率的因素有温度、PH值、反应时间、试剂浓度等因素的影响。
反应结束后，加入一定量的氢氧化钠，与水分解反应，生成红褐色的水银，其数量与肝糖原含量成正比例关系。
经过计算，得到肝糖原的含量。
实验步骤：1. 超声波法提取肝糖原：在超声波处理器中，取15g搅拌均匀的肝组织，加入草酸（0.1mol/L）溶液100mL中，混合均匀；2. 将二氧化硫加入混合液中，浸泡3分钟；3. 将混合液通过过滤纸过滤，收集上清液，其即肝糖原溶液；4. 测定肝糖原浓度：取30μL的肝糖原溶液，加入1.5mL的琼脂糖溶液，室温下反应2小时，以紫外分光光度法（UV-6500）在260nm处测定吸光度，计算肝糖原浓度。
实验结果：1.超声波提取的肝糖原溶液中肝糖原的浓度为6.67mg/L；2.实验中所测定的肝糖原含量为3.76mg/g。
结论：1.超声波提取技术适用于肝糖原的提取，可显著提高提取效率；2.磷酸汞法可用于肝糖原的含量测定，该方法操作简单，结果准确。
实验中还发现，肝糖原含量随年龄增长趋势下降，这与肝脏代谢功能的下降有关。
参考文献：1.老师名字，丁丁等。
生物化学实验教程[M]。
实验五、肝糖原的提取与鉴定
通过动物实验等方法检测肝糖原的生物活性。例如，给实验动物注射一定量的肝糖原后，观察其血糖水 平的变化情况，以判断肝糖原的生物活性。
04
实验结果与数据分析
实验结果展示
肝糖பைடு நூலகம்提取量
通过实验，成功从肝脏组织中提取出一定 量的肝糖原，提取量符合预期。
肝糖原纯度
经过纯化步骤，所得肝糖原的纯度较高， 杂质含量较低。
生物学活性验证
将提取的肝糖原与标准品进行生物学活性比较，如血糖调节活 性等。结果显示，提取的肝糖原具有良好的生物学活性，与标 准品相似。
05
实验讨论与结论
实验结果讨论
01
肝糖原提取效率
本次实验中，我们采用了XX方法提取肝糖原，通过对比不同提取条件
下的得率，发现XX条件下提取效率最高，为后续实验提供了可靠的基
实验原理
肝糖原是一种多糖类物质 ，主要存在于动物肝脏和 肌肉中，是动物体内的重 要能量来源之一。
肝糖原在肝脏中合成并储 存，当机体需要能量时， 肝糖原可分解为葡萄糖并 释放到血液中，以维持血 糖水平的稳定。
本实验通过提取肝脏中的 肝糖原，并利用其理化性 质进行鉴定，以深入了解 其在动物体内的功能和作 用。
肝糖原的鉴定
物理性质鉴定
通过观察肝糖原的颜色、气味、溶解性等物理性质进行初步鉴定。肝糖原应为白色或类白色粉末，无臭、无味，易溶 于水。
化学性质鉴定
利用肝糖原的还原性进行化学鉴定。可采用斐林试剂等还原糖试剂与肝糖原反应，观察颜色变化判断其还原性。同时 ，可利用肝糖原与碘的反应呈现蓝紫色等特性进行鉴定。
鉴定试剂
用于鉴定提取的肝糖原，如碘液等。
仪器与设备
匀浆器
用于将肝脏样本匀浆化，以便于提取肝糖 原。
肝糖原的提取实验报告
肝糖原的提取实验报告肝糖原的提取实验报告引言：肝糖原是一种重要的能量储存物质，它在肝脏中储存，并在需要时释放出葡萄糖供给身体其他组织使用。
本实验旨在探究肝糖原的提取方法，并进一步了解其在人体生理中的重要性。
材料与方法：我们选取了新鲜的猪肝作为实验材料。
首先，将猪肝切成小块，并用冷盐水彻底清洗，以去除表面的杂质。
然后，将清洗后的猪肝块放入研钵中，加入适量的冷盐水，用搅拌器搅拌均匀，使猪肝细胞破碎释放出肝糖原。
接下来，将搅拌后的混合液过滤，去除固体残渣，得到含有肝糖原的溶液。
结果与讨论：通过实验，我们成功地提取到了含有肝糖原的溶液。
肝糖原是一种多聚体的葡萄糖分子，其分子量较大，可溶于水。
在搅拌的过程中，猪肝细胞被破碎，使肝糖原释放到溶液中。
通过过滤，我们去除了猪肝的固体残渣，获得了纯净的肝糖原溶液。
肝糖原在人体中具有重要的生理功能。
它是肝脏中的主要能量储存物质，可在需要时迅速释放出葡萄糖，维持血糖水平的稳定。
肝糖原的提取与研究对于了解人体能量代谢、调节血糖平衡等方面具有重要意义。
此外，肝糖原还参与了人体其他重要生理过程。
研究发现，肝糖原在肝脏细胞中的含量与一些代谢性疾病的发生有关。
例如，糖尿病患者的肝糖原合成和降解过程受到了异常的调节，导致血糖的异常升高。
因此，通过研究肝糖原的提取和代谢机制，有助于深入理解糖尿病等疾病的发生机制，并为治疗提供新的思路。
此外，肝糖原的提取方法也具有一定的局限性。
在实验过程中，我们选择了猪肝作为材料，但猪肝与人体肝脏在结构和功能上存在差异。
因此，我们需要进一步研究不同动物肝脏中肝糖原的提取方法，以更好地模拟人体情况。
结论：通过本次实验，我们成功地提取到了含有肝糖原的溶液，并初步了解了肝糖原的重要性及其在人体生理中的作用。
肝糖原作为一种重要的能量储存物质，在维持血糖平衡、调节代谢等方面起着关键作用。
进一步深入研究肝糖原的提取方法和代谢机制，有助于我们更好地理解人体生理过程，并为相关疾病的治疗提供新的思路。
肝糖原的实验报告
一、实验目的1. 学习肝糖原的提取方法。
2. 掌握肝糖原的鉴定技术。
3. 了解肝糖原在生物体内的重要作用。
二、实验原理肝糖原是动物体内的一种重要储能物质，主要储存于肝脏中。
当血糖水平下降时，肝糖原可以被分解为葡萄糖，以维持血糖的稳定。
本实验通过提取肝糖原，并对其进行鉴定，来了解肝糖原在生物体内的代谢过程。
三、实验材料与仪器材料：1. 小鼠肝脏2. 三氯醋酸3. 乙醇4. 碘液5. 水浴锅6. 移液器7. 离心机8. 显微镜仪器：1. 电子天平2. 研钵3. 研钵杵4. 烧杯5. 烧瓶6. 漏斗7. 滤纸四、实验步骤1. 肝糖原提取- 称取新鲜小鼠肝脏约0.5g，用剪刀剪碎，置于研钵中。
- 加入少量三氯醋酸，研磨至肝组织完全破碎。
- 将研磨物转移至烧杯中，加入适量的水，用玻璃棒搅拌。
- 将混合物过滤，收集滤液。
- 将滤液置于水浴锅中加热，使蛋白质变性沉淀。
- 取上清液，加入适量的乙醇，静置过夜。
- 次日，用滤纸过滤，收集滤液，即为肝糖原粗制品。
2. 肝糖原鉴定- 将肝糖原粗制品溶解于适量的水中，配制成一定浓度的溶液。
- 取少量溶液，加入碘液，观察颜色变化。
- 将肝糖原溶液滴在载玻片上，用显微镜观察其形态。
五、实验结果与分析1. 肝糖原提取- 通过研磨、过滤、加热和沉淀等步骤，成功提取了肝糖原。
2. 肝糖原鉴定- 碘液与肝糖原反应，溶液呈现蓝色，证明肝糖原存在。
- 显微镜下观察，肝糖原呈颗粒状，大小不一。
六、实验讨论1. 本实验成功提取了肝糖原，并对其进行了鉴定，证明了肝糖原在生物体内的重要作用。
2. 在肝糖原提取过程中，三氯醋酸起到了破坏肝组织中的酶和蛋白质的作用，使肝糖原得以保留。
3. 碘液与肝糖原反应，是肝糖原鉴定的常用方法，操作简单，结果明显。
七、实验总结本实验通过肝糖原的提取与鉴定，使我们了解了肝糖原在生物体内的代谢过程和重要作用。
在实验过程中，我们学会了肝糖原的提取方法，掌握了肝糖原的鉴定技术。
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生物化学实验报告
姓名：
学号：
专业年级：
组别：
实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验
实验日期实验地点
合作者指导老师
评分教师签名批改日期
一、实验目的
1．掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2．了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3．正确操作使用刻度吸管和可调微量移液器。
4．熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
5．正确掌握溶液转移的操作。
6．正确操作使用分光光度计。
二、实验原理
1、肝糖原的提取与鉴定
糖原储存于细胞内,采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎,低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,而糖原仍稳定地保存于上清液中,从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀,再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中, 依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可判定肝组织中糖原的存在。
2、肝糖原定量测定
糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛,此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)g范围内,溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色,通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前,肝组织先臵于浓碱中加热,以破坏其它成分,而保留肝糖原。
三、材料与方法：以流程图示意
1、材料
(1)样品:鸡肝(2)试剂:95%乙醇、5%(W/V)三氯乙酸、浓盐酸、12.5mol/L(50%)NaOH溶液、碘试剂、班氏试剂、5.35mol/L(30%)KOH溶液、标准葡萄糖液(50mg/L)、蒽酮显色剂(3)仪器和器材:普通离心机、室温-100℃恒温水浴箱、可见光分光光度计、托盘天平、剪刀、镊子、研钵、试管架、离心管、试管、100mm*15mm试管、刻度吸量管(2ml、5ml)、1000μl微量可调取液器、100ml容量瓶、白瓷反应板
2、操作方法
（1）肝糖原提取与鉴定
鸡肝约1.5 g，剪碎
COOH 1 ml
＋5%CCl
3
研磨至乳状
COOH 3 ml
＋5%CCl
3
研磨成肝匀浆
全部转入离心管中，离心3分钟（4000 r / min）
沉淀（弃去）上清（取约3 ml）
＋3ml （等量）95%乙醇，混匀，静置10分钟
离心5分钟（4000 r / min）
上清（弃去）沉淀
＋蒸镏水1 ml
沸水浴2分钟，溶解沉淀
白瓷板孔穴中糖原溶液1ml
＋浓HCl 250μl
加碘试剂2滴加碘试剂2滴沸水浴15分钟，冷却
糖原溶液2滴
呈色对比糖原水解液2滴糖原水解液
＋班氏试剂4滴
混匀
沸水浴2分钟，观察变化
（2）肝糖原定量实验
鸡肝0.15 g
＋30%KOH 1.5ml
沸水浴15分钟
冷却，全部转入100 ml容量瓶中
加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液
糖原的测定
取3支试管，按下表操作。
试剂（ml）空白管标准管样品管
蒸馏水 1.0 ——
标准葡萄糖溶液— 1.0 —
糖原提取液—— 1.0
0.2%蒽酮溶液
2.5 2.5 2.5
混匀，沸水浴10分钟，冷却至室温。
在分光光度计620 nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A）。
四、结果与讨论：①结果：实验数据、现象、图谱；②讨论：以结果为基础的逻辑推论，并得出结论。
结果：
1）肝糖原的提取与鉴定
①第一次离心后,肝匀浆分为2层,上层为上清液,不完全澄清,下层为淡褐色沉淀。
图一：肝匀浆第一次离心后
②加入乙醇混匀并静置后,溶液分层,上层为上清液,下层有白色絮状沉淀。
③第二次离心后,溶液分为2层,上层为上清液,试管底部有少量白色沉淀。
图二：第二次离心后上清液与沉淀
④加入蒸馏水并沸水浴后,白色沉淀溶解。
⑤白瓷板上,糖原溶液加碘后变为红棕色,与碘自身的黄色有明显区别，证明有糖原。
图三：呈色对比结果（左为糖原+碘液，右为碘液）
图四：砖红色沉淀
⑥往糖原水解液中加入班氏试剂后,溶液呈蓝色(班氏试剂本身为蓝色)。
沸水浴后,溶液变为砖红色(生成砖红色沉淀)，证明有糖原。
2）肝糖原的定量测定
①往鸡肝中加入KOH并沸水浴后,溶液变为红棕色。
图五：第一次沸水浴后
图六：沸水浴前（从左到右依次为：空白管、标准管、样品管）
图七：沸水浴后（从左到右依次为：空白管、标准管、样品管）
②第二次沸水浴前空白管呈黄色，标准管呈绿色，样品管呈黄色；水浴后，空白管无变化,标准管颜色略变深,样品管由黄色变为深绿色
③测得吸光度如下表
次数/吸光度/管号空白管标准管样品管
100.7200.119
200.7180.122
300.7180.128
平均00.7190.123
肝糖原（g/100g肝组织）=A样品/A标准× 0.05 ×（100/肝组织重）×0.1 × 1.11 代入平均值计算得肝糖原含量为0.633g/100g肝组织
讨论
本次实验结果理想，成功提取并鉴定了鸡肝样品中的肝糖原，并计算出了肝糖原的含量。
饱食鸡肝的肝糖原含量为2~3g/100g肝组织，实验测得的肝糖原含量为0.633g/100g肝组织，对比可知实验所用鸡肝为非饱食肝。
在做用班氏试剂鉴定糖原水解液时，第一次所做试管内并无明显沉淀，后进行了两次重复实验，其中一管比实验操作中所述的加入
4滴班氏试剂要多加了一滴，终于得出了可见的明显的砖红色沉淀。