实验八、转基因生物的GUS检测
实验八GUS组织化学定位
报告基因GUS的表达的检测
材料：拟南芥AK12-pro 试剂： GUS工作液：在450mlddH2O中加入82mg铁氰化钾，105.6mg亚 铁氰化钾，50ml 1mol/L磷酸钾缓冲液（pH7.0），加水至500ml， 4℃储存备用。1mol/LGUS染色液：用DMSO溶解100mg X-Gluc， 再加入GUS工作液，定容至100ml，分装成小管，置于-20℃储存备 用。 组织化学染色检测 -- GUS染色 1. 取2支1.5ml离心管，各加入0.5ml 1mol/L GUS染色液； 2. 用镊子夹取 转基因和野生型拟南芥幼苗各1根，分别放入上述离心 管中； 3. 37℃浸泡2-5h（或过夜）；（晚上继续下面的脱色和照相步骤） 4. 倒掉染色液，加入75%乙醇脱色；30min后换一次75%乙醇脱色； 肉眼下观察染色情况；拍照。如果有GUS基因表达产物，则出现 蓝色。
实验报告
转基因作物的检测
新霉素磷酸转移酶II(nptⅡ )基因（卡那霉素抗性）
AK12- pro RB 35S-pro NPT П NOS-ter GUS NOS-ter LB
p动子 nopaline synthase(NOS)gene 终止子 胭脂碱合成酶
考核
成绩计算方法（百分制）：
期末考试: 50分（考试内容包括平时操作和涉及实
验的理论基础）
平时成绩: 50分 (共5份实验报告,每份10分)
基 因 工 程 的 基 本 路 线
质粒DNA提 取和酶切
PCR
连接
转化
• 基因的组织特异性表达
原 理
GUS基因就是转β-葡萄糖醛酸酶基因 ，它存在于 E.coli等一些细菌基因组内，编码β-葡萄糖苷酸酶。 β-葡萄糖苷酸酶是一个水解酶，以β-葡萄糖苷酸酯 类物质为底物，其分解产物呈蓝色。 由于绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背 景活性，因此这个基因被广泛应用于基因调控的 研究中（作为报告基因）。根据gus基因检测所用 的底物不同，可以选择三种检测方法：组织化学 法、分光光度法和荧光法（灵感度为分光光度检 测法最高），其中最为常用的是组织化学法。
GUS报告基因范文
GUS报告基因范文GUS报告基因是一种用于筛选转基因植物的报告基因。
它在植物细胞内表达的酵素β-葡萄糖苷酶（β-Glucuronidase，GUS），能够将葡萄糖醛酸（X-Gluc）转化为蓝色产物。
通过观察和分析植物组织的GUS活性，可以判断是否发生了基因转化。
下面将详细介绍GUS报告基因的特点、应用以及实验方法。
1.GUS报告基因的特点（1）GUS基因来自于大肠杆菌，它很少在真核生物中表达，因此不会对植物正常生长发育产生影响。
（2）GUS基因编码的酵素活性能够方便、快速地用染色剂标记出来，实验结果直观可见。
（3）转GUS基因的步骤相对简单，转化率较高，且不需要使用昂贵的设备。
2.GUS报告基因的应用（1）植物转基因筛选：通过观察和分析转基因植物的GUS活性，可以确定哪些植株成功地转化了外源基因。
（2）基因调控研究：GUS报告基因可以用来研究目的基因的表达调控机制，例如在转基因植物中瞬时表达GUS基因，观察其在各种组织和发育阶段的表达情况，可以推测目的基因的启动子活性。
（3）信号传导途径研究：通过构建GUS基因的操纵，可以研究植物信号传导途径中特定基因的表达情况，进而了解信号传导途径的效率和调节机制。
3.实验方法以下是GUS报告基因实验的一般步骤：（1）构建GUS载体：将GUS基因与适合的植物表达载体进行连接，形成GUS转化载体。
（2）遗传转化：将GUS转化载体导入要进行转基因植物研究的植物细胞中，使用适当的生物技术方法（如冲击法、农杆菌介导法）实现遗传转化。
（3）植物筛选：选择经过转化的植株进行分析，通常可以通过PCR、Southern blot、Western blot等技术检测GUS基因的存在。
（4）组织切片染色：收集不同部位的植物组织，例如叶片、根、花等，制作切片。
使用X-Gluc作为底物加入切片中，观察蓝色染色产物的形成。
（5）定量分析：通过测定GUS活性，使用亲合素、含有底物的液体培养基等方法，可以 quantitatively 地测定GUS酶活性。
gus基因检测
gus 基因PCR 反应程序： 94℃预变性5 min 94℃变性1 min58℃退火1 min 30个循环 72℃延伸2min 72℃延伸7 mingus 基因引物序列为：5’GCTATACGCCTTTGAAGCC 3’和5’TTGACTGCCTCTTCGCTGTA 3’GUS 染色母液:X-Gluc 由DMSO 溶解，贮存浓度为l0mg/mL,于-20°C 保存。
GUS 染液:500mg/L X-Gluc, 0.1mol/L K3Fe(CN)6，0.lmol/L K4Fe(CN)6，0.0lmol/L ，的配制方法：将7.800g NaH2PO4溶于水，定容至100ml●这是1ml的配方体系：终浓度药品分子量体积0.5M Na2EDTA 20ulTritonX-100 1ul1M 磷酸钠缓冲液（PH7.0） 100ul0.1M K3Fe(CN)6 5ul0.1M K4Fe(CN)6 5ul10mg/ml X-Gulc 200ul去离子水或无菌水669ul染液配方0.05M磷酸缓冲液 4.48ml 5mM铁氰化钾0.05ml, 5mM亚铁氰化钾0.05ml，Triton-100 0.01ml，水4.64ml，X-Gluc先溶于0.05ml DMF中，终浓度为0.5mg/ml37度染色过夜1.2染色步骤1)染色：加入适量配制好的GUS染液于24孔板的孔中，将待测样品浸到GUS染液中，将24孔板置于37℃保温箱中放置6h。
2)漂洗：先后用50%，70%，100%的乙醇漂洗样品，每次浸泡5分钟。
3)脱色：加入100%乙醇浸泡直至完全脱色。
4)记录：在体视显微镜下拍照记录。
2．GUS报导基因的定量检测GUS能与底物MUG（分子量352.3，4-甲基伞型酮-β-葡萄糖醛酸苷，4-methylumbelliferylβ-D-glucuronide）反应产生荧光物质MU（分子量198.2，4-甲基伞型酮，4-methylumbelliferone）。
转基因植株的GUS染色
转基因植株的GUS染色1、X-Gluc 母液：100 mg X-Gluc溶于5 ml DMF中；2、基液：50 mM PBS pH7.0(NaH2PO450 mM 0.78 g/100 ml, Na2HPO450 mM 1.791 g/100 ml)溶解EDTA·2Na(10 mM, 372 mg), Triton-100(0.1％,100 μl), 铁氢化钾(0.5 mM, 16.5 mg)，亚铁氢化钾(0.5 mM, 21.1 mg)定容至100 ml；3、X-Gluc使用液：50 μl母液＋950 μl基液，混匀备用，可存放于－20℃。
取合适大小的转基因苗浸入GUS染液中，37℃染色1-24小时直到染出理想效果；吸去反应液，乙醇梯度脱色。
体视镜观察并拍照。
这是转基因植株的染色，我想也可以用来做愈伤的染色。
GUS染色protocols2007-06-11 05:25Tissue for GUS staining was gently fixed by incubation in 90% acetone, on ice, for 15 to 20 min and then rinsed in 50 mM NaPO4, pH7.2, 0.5 mM K3Fe(CN)6, and 0.5 mM K4Fe(CN)6. The tissue was then placed in staining solution (50 mM NaPO4, pH 7.2, 2 mM X-gluc[Gold Biotechnology, St. Louis, MO], 0.5 mM K3Fe[CN]6, and 0.5 mMK4Fe[CN]6), vacuum infiltrated, and incubated at 37°C overnight. After staining, the tissue was processed through an ethanol series (30, 50, 70, 85, 95, 100, and 100%), with the 50% step of the series replaced by a 1 -hr formaldehyde-acetic acid fixation (50% ethanol, 5% acetic acid, and 3.7% formaldehyde). To prepare tissue for histological analysis, we passed tissue through a xylene series and embedded it in Paraplast (Sigma). Sections (10 μm) were cut from the embedded tissue, wax was removed by a brief incubation in xylene, and sections were mounted in Paraplast. Sections were visualized using dark-field illumination. (Leslie E. Sieburth et al Plant Cell, 1997, 9, 355-365)1. 染色材料在90％的丙酮中固定15－20min2. 漂洗后，加入GUS染液，抽气，37度过夜3. 乙醇脱色（30，50，70, 95, 100％的依次梯度）后，加入FAA固定液4. 包埋，按石蜡切片步骤进行二、GUS histochemical stainingStock50mM K3Fe(CN)6 0.82315 g/50 ml50mM K4Fe(CN)6 1.056 g/50 ml1M Na2HPO4 7.1 g/50 ml1M KH2PO4 6.8 g/50 ml0.5M Na2EDTA 18.612 g/ 100ml(直接加入 NaOH crystal，調pH = 8.0 )10﹪Triton X-100 1ml/10mlStaining solution（有毒，請戴手套操作）Stock final conc. 1M Na2HPO4 100mM phosphate buffer 0.64ml1M KH2PO4 0.36ml0.5M Na2EDTA 10mM 0.2ml50mM K3Fe(CN)6 0.5mM 0.1ml50mM K4Fe(CN)6 0.5mM 0.1ml10﹪Triton X-100 0.1﹪ 0.1mlMeOH（有毒） 10﹪ 1mlx-gluc 0.3﹪ 30mg以250μl DMSO（有機溶劑）溶解，加水至1mlTotal volume 10ml1. 剪取sample，將 staining solution 加入至可淹沒sample 為止2. 抽氣5min，37℃ incubate O/N3. 以70﹪ EtOH 洗掉葉綠素。
【实验】β-葡萄糖醛酸糖苷酶(GUS) 组织化学染色检测转基因植物
材料呈白色。 4．肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为
GUS表达位点。 5．组织可在70%乙醇中保存数日。
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用GUS进行这些实验有如下优点：1）大多数植物组织中GUS活 性的本底低；2）反应产物不扩散，在表达基因的植物细胞内积累； 3）通过简单的扩散或真空渗入，底物易被植物细胞吸收。当然， 也存在一些缺点：1）虽然非致死检测的研究取得了一些进展，但 这一检测对于活体组织仍然不太合适；2）由于酶和产物非常稳定， 因而不能真实地反映出GUS替代的那个蛋白在稳定状态下的丰度；3） 在GUS表达水平很高的组织中会发生无色反应中间产物渗漏的现象， 但是这可以通过在底物溶液中加入氧化剂高铁氰化钾或亚铁氰化钾 或者二者都加来使这种渗减至最少；4）同所有的组织化学方法
3．X-gluc母液：称取10mg X-gluc，溶于100μl的N，N-二甲基甲酰胺 （DMF，C3H7NO），得到80㎎/ ml 的 X-gluc母液，-20℃保存。
4．X-gluc反应液：取6.5μl X-gluc母液于500μl buffer中 5．70% 乙醇
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实验步骤
1．将阴性对照材料和转GUS基因或带有可表达的GUS基 因的烟草叶片切成小块，浸入盛有100μl染色液的 0.5ml的离心管中。
1．50mmol/l 磷酸钠缓冲液 A液：称NaH2PO4.2H2O 3.12g，定容100 ml 水中。 B液：称 Na2HPO4.12 H2O 7.17g，定容100 ml 水中。 取39 ml A液、61ml B液混匀
2．缓冲液：50mmol/l 磷酸钠缓冲液中含有0.1 mmol/l K3[Fe(CN)6]、 0.1 mmol/l K4[Fe(CN)6].3H2O、1mmol/L EDTA
GUS组织化学染色
GUS组织化学染色1. 实验原理适宜的反应条件下，β-葡聚糖苷酶（GUS）可将X-Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。
2．实验材料1）转基因烟草叶片或试管苗2）非转基因烟草的叶片或试管苗（阴性对照）3．药品试剂1) X-Gluc，用N-N-二甲基酰胺配成20mM的贮存液，分装成每管100µL，保存于-20℃。
2) 底物溶液（染色液）：3) 1mM X-Gluc加入100mM磷酸钠缓冲液（pH=7.0）,缓冲液中含10mM ED TA-Na2，1-5mM K3[Fe(CN)6](铁氰化钾)，1-5mM K4[Fe(CN)6](亚铁氰化钾)，0.001%（V/V）Triton X-1004．实验器材小药瓶，培养皿，培养箱（37℃），微量移液器5．实验步骤1) 将准备好的叶片放入小药瓶，加入染色液浸没试材，封好盖子；2) 37℃培养箱中温育1小时至过夜；3) 将浸染过的试材转入70%或95%乙醇中脱色2-3次（除去叶绿素），至阴性对照材料呈白色为止。
6．结果叶片上GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点。
先用DMSO溶解X-GLUC 好像是100mg/2ml PBF 94ML+X-GLUC 0.1ML+TRIT ION X-100 2ML +FE2+ 2ML+ FE3+ 2ML/plsc/labs/sherrierlab/Methods_pdf/microscopy/Protocol%2 0for%20Fluorescent%20GUS%20Staining%20of%20Root%20Nodules.pdf /stockingerlab/Protocols/GUS-HistochemicalS taining.pdf/langdalelab/protocols/misc/Dex_induc_GUS_stain.p dfGus staining1. Excise root and leaf segments, wash with 100mM potassium phosphate buffer (pH7.0) for 3 times.2. Immerse in the Gus substrate solution, 37C, dark, 12-24h3. Rinse in phosphate buffer4. Fix for 4h or longer5. Rinse in the same buffer6. Observe as whole specimens or as sections.1M potassium phosphate buffer (pH7.0)K2HPO4: 34.8g --->200mlKH2PO4: 27.2g---->200ml184.5ml K2HPO4+115.5ml KH2PO4----> 300ml 1M potassium phosphate b uffer(pH7.0)Gus substrate solutionVolume(500ml)Final concentrationPotassium ferricyanide82mg0.5mMPotassium ferrocyanide105.6mg0.5mMPotassium phosphate buffer (pH7.0, 1M)50ml100mMStore at -20C. Add 1mM x-gulc (MW521.8~~0.5mg/ml) freshly when use. Fix solution2.5% glutaraldehyde200mM sodium cacodylate, pH7.2共培养后愈伤的瞬时表达、抗性愈伤的鉴定以及转基因植株的鉴定用GUS组织化学法测定.将待测定的材料,如愈伤或叶片,浸入适量X-Gluc溶液,于37 ℃保温过夜后,在体视显微镜下观察,拍照记录.若将加有X-Gluc溶液的材料抽真空,染色效果将更好.如材料存在色素干扰问题,染色后用酒精脱色,使色素的颜色褪掉而使染成的蓝色保存.X-Gluc染色液：（20*）0.2mol/L Na3PO4缓冲液(62mL0.2mol/L Na2HPO4;38mL0.2 mol/L NaH2PO4)，pH7.0；0.1 mol/L K3［Fe(CN)6］;0.1 mol/L K4［Fe(CN)6］.3H2O;1.0 mol/L Na2EPTA;0.1% X-Gluc.1000mlx-gluc 1000mg （20ml dmso）Na2HPO4: 620*0.2*M=0.620*0.2*358（12H2O）=44NaH2PO4: 380*0.2*M=0.358*0.2*156（2H2O）=11K3［Fe(CN)6:1000*0.01*M=329．26*0.01=3.3K4［Fe(CN)6]:1000*0.01*M=422．39（3H2O）*0.01=4.2Triton 1MLNa2EPTA:1000*0.1*M=372.24(2H2O)=371. 取5 mg X-Gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl glucuronide)溶於100 l DMSO於中.2. 加入10 ml reaction buffer (10 mM Na2EDTA, 100 mM NaH2PO4·H2O, 0.1% Triton, 0.5 mM potassium ferricyanide, 0.5 mM potassium ferrocyanide, pH7.0).3. 混合均匀后分装於eppendorf tube中,保存於-20℃冰箱内.100ml x-gluc染液配制x-gluc 50mg加入溶入1ml dmso1ml triton 100Na2EDTA (20mM) 10mM 5ml ; K3Fe(CN)6 (0.1M) 5mM 0.5mlK4Fe(CN)6 (0.1M) 5mM 0.5ml ; Na2HPO4 (0.2M) 100mM 3.1mlNaH2PO4 (0.2M) 100mM 1.9mlX-Gluc 0.1% 10ul。
实验八、转基因生物的GUS检测
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2
原理
•
适宜的反应条件下，β- 葡萄糖苷酸酶
（GUS）可将X－Gluc水解成蓝色物质，因
此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或
蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。
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3
相关知识链接——标记基因
•
标记基因是帮助对转基因生物体进行
筛选和鉴定的一类外源基因，包括选择标
记基因和报告基因。
Na2HPO4 1.79g/100ml共同溶解； Na2EDTA （10mM， 372mg），Triton-100（0.1％，100μl）, K3 [Fe(CN) 6] （铁氰化钾）（0.5mM，16.5mg）K4 [Fe(CN) 6] （亚铁氰化钾）（0.5mM，21.1mg） • 染色液：50μl X-Gluc母液＋450μl基液
敏度高而且重现性好，表达产物能进行定量测定。 • (4) 细胞内其它的基因产物不会干扰报告基因产物的
检测。
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6
常见的报告基因：
• 在植物基因工程研究领域，已使用的报告基因有 以下几种：
常用的报告基因包括β—葡萄糖苷酸酶报告基因
(gus), 胭脂碱合成酶基因(nos)、章鱼碱合成酶基 因(ocs)、新霉素磷酸转移酶(NPTll)、氯霉素乙酰 转移酶基因(cat)、β-半乳糖苷酶(β-gal，βgalactosidase)、萤光素酶(luc，luciferase)、和 绿色荧光蛋白基因(gfp，green fluorescence
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8
gus基因简介
• gus基因是目前常用的一种报告基因，是β－D－ 葡 萄糖苷酸酶(gus)基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶
(GUS)能催化裂解一系列的β－葡萄糖苷酸 ，它可以 将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc） 分解为蓝色的物质,也可以将4-甲基-伞形花酮-β-D葡萄糖苷酯(4-MUG)分解为蓝色物质。 其检测方法简 单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。
实验八GUS组织化学定位
实验七、转基因植物中报告基因 GUS组织化学定位检测
如何检测基因的组织特异性表达？
• 基因的组织特异性表达主要是由该基因特异 性启动子决定的。即，某些启动子有组织特 异性，它会启动该基因的特异性表达。
• 启动子没有基因特异性，它会启动任何下 游基因的表达。
• 只要知道启动子在什么部位表达，就可以推 测出该启动子所启动的基因的表达部位。 • 启动子的表达如何才能肉眼可见呢？——连 接报告基因（GUS,分解底物呈蓝色）。
报告基因GUS的表达的检测
材料：拟南芥AK12-pro 试剂： GUS工作液：在450mlddH2O中加入82mg铁氰化钾，105.6mg亚 铁氰化钾，50ml 1mol/L磷酸钾缓冲液（pH7.0），加水至500ml， 4℃储存备用。1mol/LGUS染色液：用DMSO溶解100mg X-Gluc， 再加入GUS工作液，定容至100ml，分装成小管，置于-20℃储存备 用。 组织化学染色检测 -- GUS染色 1. 取2支1.5ml离心管，各加入0.5ml 1mol/L GUS染色液； 2. 用镊子夹取 转基因和野生型拟南芥幼苗各1根，分别放入上述离心 管中； 3. 37℃浸泡2-5h（或过夜）；（晚上继续下面的脱色和照相步骤） 4. 倒掉染色液，加入75%乙醇脱色；30min后换一次75%乙醇脱色； 肉眼下观察染色情况；拍照。如果有GUS基因表达产物，则出现 蓝色。
实验报告
ห้องสมุดไป่ตู้ 转基因作物的检测
新霉素磷酸转移酶II(nptⅡ )基因（卡那霉素抗性）
AK12- pro RB 35S-pro NPT П NOS-ter GUS NOS-ter LB
pBI101
花椰菜花叶病毒( CaM V)启动子 nopaline synthase(NOS)gene 终止子 胭脂碱合成酶
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染色方法
– 将准备好的试材浸泡在染液，于25—37℃ 保温1小时至过夜。
– 叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2—3 次，至阴性对照材料呈白色。 – 肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色 小点即为Gus表达位点。
实验步骤 • 将准备好的拟南芥植株放入小EP管中，加 入染色液浸没试材，封好盖子； • 37℃培养箱中温育1小时至过夜； • 将浸染过的试材转入70%或95%乙醇中脱 色2-3次（除去叶绿素），至阴性对照材料 呈白色为止。 • 观察结果。
敏度高而且重现性好，表达产物能进行定量测定。 • (4) 细胞内其它的基因产物不会干扰报告基因产物的 检测。
常见的报告基因：
• 在植物基因工程研究领域，已使用的报告基因有 以下几种： 常用的报告基因包括β—葡萄糖苷酸酶报告基因 (gus), 胭脂碱合成酶基因(nos)、章鱼碱合成酶基 因(ocs)、新霉素磷酸转移酶(NPTll)、氯霉素乙酰 转移酶基因(cat)、β-半乳糖苷酶(β-gal，βgalactosidase)、萤光素酶(luc，luciferase)、和 绿色荧光蛋白基因(gfp，green fluorescence protein)等.
• 常用的选择标记基因包括有抗生素抗性基 因和除草剂抗性基因（Bar 基因）。标记 基因通常与目的基因构建在同一表达载体 上，一起转入生物，但有时，标记基因本 身就是目的基因，如除草剂抗性基因。
• 报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的 基因，也就是一个其表达物非常容易被鉴定 的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列 相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融 合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它 的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选 得到转化体。
实验八、转基因生物的GUS检测
实验目的：通过GUS(β- 葡萄糖苷酸酶)活性测定， 了解报告基因在基因工程中的应用。 要求：了解通过显色反应检验外源基因的表达情况 的方法，了解报告基因的概念。 技术应用：1. Gus基因与目的基因连接构建融合基 因进行组织定位； 2. gus基因与启动子连接来研究启动子的表达的组织 特异性。
材料： 转化的植物组织、器官、原生质体、
种子的胚及萌发的幼苗等。
非转化的相同材料（阴性对照）。
试剂： 5-溴-4-氯-3-吲哚-β -葡萄糖苷酸酯 （X－Gluc） ；N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ； NaH2PO4； Na2HPO4 ； Na2EDTA ；Triton-
100； K3 [Fe(CN) 6] （铁氰化钾）；K4
利用报告基因表达载体的研究技术的优点：
• 其一，避开内源和外源基因表达水平的影响：对于报告基 因编码产物的检测水平可以精确地反映基因启动子的转录
活性，不会受到内源性基因表达产物水平的影响.
• 第二，易于检测：如果研究不同基因启动子的转录活性， 采取本身基因表达产物的检测方法，必须建立各种基因表
达产物的检测方法，有些基因的表达产物的检测技术还不
药品配方
• 1）X－Gluc母液：X-Gluc，用N-N-二甲基酰胺 (DMF)配成20mM的贮存液，分装成每管100µL，保 存于-20℃。 • 2）X－Gluc基液（50mM PBS， pH7.0）。 • 配制方法：50mM NaH2PO4· 0.78g/100ml；50mM Na2HPO4 1.79g/100ml共同溶解； Na2EDTA （10mM， 372mg），Triton-100（0.1％，100μ l）, K3 [Fe(CN) 6] （铁氰化钾）（0.5mM，16.5mg）K4 [Fe(CN) 6] （亚铁氰化钾）（0.5mM，21.1mg） • 染色液：50μ l X-Gluc母液＋450μ l基液
具备，或者很难建立，而采用报告基因的研究策略就很容 易解决这一问题，只要建立稳定的报告基因表达的检测技
术就可以用于不同基因启动子转录活性的检测和研究。
gus基因简介
• gus基因是目前常用的一种报告基因，是β －D－ 葡 萄糖苷酸酶(gus)基因，其表达产物β -葡萄糖苷酸酶 (GUS)能催化裂解一系列的β －葡萄糖苷酸 ，它可以 将5-溴-4-氯-3-吲哚-β -葡萄糖苷酸酯（X－Gluc） 分解为蓝色的物质,也可以将4-甲基-伞形花酮-β -D葡萄糖苷酯(4-MUG)分解为蓝色物质。 其检测方法简 单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。 • gus基因的最大优点是它能测定外源基因表达的具体 细胞和组织部位，这是其它报告基因所不能及的。
• 报告基因是研究基因调控的有力工具，常用于 判断试验基因的转化效率以及基因的调控与功 能的研究实验中。
报告基因必须具备的条件
• (1)已被克隆和全序列已测定;
• (2)表达产物在受体细胞中不存在，即无背景，在被
转染的细胞中无相似的内源性表达产物;
• (3) 报告基因编码的产物的检测应该快速、简便、灵
[Fe(CN) 6] （亚铁氰化钾）
原理
• 适宜的反应条件下，β- 葡萄糖苷酸酶 （GUS）可将X－Gluc水解成蓝色物质，因 此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或 蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。
相关知识链接——标记基因 • 标记基因是帮助对转基因生物体进行 筛选和鉴定的一类外源基因，包括选择标 记基因和报告基因。