载体选择
5-复合维生素载体选择关注要点及效果评价-刘向阳
（七）、评价主要指标：混合均匀度 标准差S与变异系数CV按下式计算 变异系数CV（%）=S/ X×100 其中X为平均值。 CV
T
（八）、实验结果小结:
1、实验表明混合载体（米糠+膨润土）作为载体在现有生产工艺 条件下变异系数较国家标准大，不符合要求。 2、玉米芯粉的容重比米糠的容重还要小，也不适合本工艺作载 体用。 3、细砻糠：输送过程中产生了比较严重的静电现象，造成结团 和管道及仓壁吸附物料现象的产生，在不消除静电的情况下，不 宜混合均匀。 4、粗砻糠：通过实验表明我厂现有工艺输送过程较长，物料（ 尤其是纤维性含量高的物料）容易产生静电，需要采取一些措施 消除输送过程中的静电影响。
三、载体满足工艺需要：
目前生产复合多维的工艺从物 料流程方式不同，可简单划分 为3种工艺： 1、简短立式 2、立式纵向 3、立式横向
（一）、简单 立式
物料流程短，静 电摩擦少，出料 流程短。不易干 扰混合均匀度， 载体易于选择。
（二）、立式纵向
传统饲料生产方式，物 料以上下方向运动为主， 流程较长，可产生摩擦 静电；出料距离长。要 求载体物料消除和降低 静电负荷。
500
120
1
2、玉米载体实验结果： 试验数据见下表。 玉米粉载体生产试验结论：生产正常，试验料容重、水分符 合企标要求。混合时间为90秒时较好（CV<5%），但在120 秒时，混合均匀度变异系数变差（CV>5%）。
项目
试验料中载体 玉米粉 混合时间
90秒 120秒
试验料（华罗1171成品）检测数据 容重 水分 变异系数（％） （％） （g/L) 4.82 3.78 646.0 6.11 3.68
（三）、维生素容重：平均在450—650克/升
第4章 载体的选择与构建
大多数自主转移质粒都有tra基因和oriT位点，它们在质粒 自主转移过程中起着重要作用。
tra 基因：大多数 tra 基因的产物与性菌毛的形成 (F 、 RP4 和 pKMl01 都 编码一根性菌毛 )、杂交对的形成有关；有些 tra基因编码作用于 oriT位 点的内切酶，使质粒中的一条 DNA链产生切口，从而开始转移；有些 tra基因则与质粒转移调控等有关。
pMB1, colE1 replicon 修饰的pMB1 replicon pSC101 pUB110 pE194 replicon
拷贝数15～20
宿主范围小：肠细菌
拷贝数500～700 宿主范围小：肠细菌（pUC系列) 拷贝数5 50 5 宿主范围广 多种革兰氏阴性菌 广 多种革兰氏阳性菌 广 多种革兰氏阳性菌
pSC101 replicon
1.4 质粒的不稳定性 ★
分离不稳定性：在细胞分裂过程中，有一个子细胞没有获得质粒 DNΑ
拷贝，并最终增殖成为无质粒的优势群体；
结构不稳定性：由转位作用和重组作用所引起的质粒 DNA的重排与缺失
质粒的分配方式： 主动分配 平均分配:每个子细胞刚好获得一半数目的质粒拷贝 配对位点分配:只有一对质粒呈主动分配，其余的是随机分配。 主动分配存在着有效的质粒拷贝数控制系统，从而保证了质粒的高度稳 定性 随机分配 分配不稳定，部分子细胞没有质粒，并在生长过程中具有优势而逐渐使 含质粒细胞比例越来越少
RBS，融合tag） 基因敲除质粒（筛选系统，目的基因的 同源片段） 辅助性质粒（例如提供位点特异性重组酶）
1.3 质粒的复制 ★
1.3.1 复制子(replicon) 包括复制起点(ori)、复制控制元件、复制蛋白编码基因的遗 传单元
选择生物膜载体的基本原则
选择生物膜载体的基本原则
选择生物膜载体的基本原则包括以下几点：
1. 生物相容性：选择与目标应用环境相容的载体材料，以确保生物膜能够在该环境中稳定存在并发挥作用。
2. 材料特性：选择具有合适特性的载体材料，如表面化学性质、机械性能、孔隙结构等，以适应目标应用的要求。
3. 可控性和可调性：选择具有可控性和可调性的载体材料，以便调控生物膜的生长、活性和功能。
4. 稳定性：选择具有良好稳定性的载体材料，以确保生物膜能够长期稳定存在，并保持其功能和活性。
5. 易操作性：选择易于操作和制备的载体材料，以便实现规模化生产和应用。
6. 成本效益：考虑载体材料的成本和可行性，以确保在实际应用中具有经济效益。
以上是选择生物膜载体的基本原则，具体的选择还需根据应用需求和载体材料的特性进行评估和权衡。
亲和色谱的分离原理及载体的选择
亲和色谱的原理载体选择一、基本理论原理在生物体内，许多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有与某些相对应的专一分子可逆结合的特性。
例如抗原和抗体、酶和底物及辅酶、激素和受体、RNA和其互补的DNA等，都具有这种特性。
生物分子之间这种特异的结合能力称为亲和力，根据生物分子间亲和吸附和解离的原理，建立起来的色谱法称亲色谱法。
亲和色谱中两个进行专一结合的分子互称对方为配基。
如抗原和抗体，抗原可认为是抗体的配基，反之抗体也可认为是抗原的配基。
将一个水溶性配基在不伤害其生物学功能的情况下与水不溶性载体结合称为配基的固相化。
二、亲和色谱法的基本过程是：1.配基固相化。
将与纯化对象有专一结合作用的物质，连接在水不溶性载体上，制成亲和吸附剂后装柱（称亲和性）。
2.亲和吸附。
将含有纯化对象的混合物通过亲和柱，纯化对象吸附在柱上，其他物质流出色谱柱。
3.解吸附。
用某种缓冲液或溶液通过亲和柱，把吸附在亲和柱上的欲纯化物质洗脱出来。
三、应用范围亲和色谱可用于下列生物体系：酶：底物、抑制剂、辅酶抗体：抗原、病毒、细胞外源凝集素：多糖、糖蛋白、细胞表面受体、细胞核酸：互补碱基序列、组蛋白、核酸聚合酶、结合蛋白激素及维生素：受体、载体蛋白细胞：细胞表面特异蛋白、外源凝集素亲和色谱的优点是操作简便、效率高、条件温和，缺点是使用局限性大。
四、载体的选择原则用于亲和色谱的理想载体应具有下列特性：⑴不溶性：不溶于水；⑵渗透性：疏松网状结构，容许大分子自由通过；⑶有一定硬度，最好为均一的珠状；⑷具有大量可供反应的化学基团，能与大量配基共价连接；⑸非特异性吸附能力极低；⑹能抗微生物和酶的侵蚀；⑺有较好的化学稳定性；⑻亲水性。
选择配基根据对纯化大分子的特异性的全面认识。
选择也的配基有两条标准：第一是蛋白质和配基之间必须有强的亲和力，解离常数在5mM以上不是好配基；相反亲和力太高也是有害的，因为在解离蛋白质──配基复合物时所需的条件就要强烈，这样可能使蛋白质变性。
催化剂制备与载体选择的技巧与原则
催化剂制备与载体选择的技巧与原则催化剂是化学反应中不可或缺的重要组成部分，它可以加速反应速率，提高反应效率。
而催化剂的制备和载体的选择则决定了催化剂的活性、选择性和稳定性。
在催化剂制备与载体选择的过程中，存在着一定的技巧和原则，下文将进行探讨。
首先，制备催化剂时，选择合适的前驱体是至关重要的。
前驱体直接关系到催化剂的化学组成和结构，从而影响催化剂的性能。
在选择前驱体时，需要考虑到其合成的可行性、纯度、稳定性等因素。
此外，前驱体的选择还应结合所需催化反应的特点，例如选择氧化物作为前驱体，可以制备出具有氧化还原特性的催化剂，而选择金属络合物作为前驱体，则可以制备出具有特定配位结构的催化剂。
其次，正确地选择载体是影响催化剂性能的重要因素之一。
载体具有很多种类，例如氧化铝、硅胶、硅酸盐等。
不同的载体对催化剂的稳定性、活性和选择性具有不同程度的影响。
选择合适的载体需考虑催化剂的活性中心与载体的相互作用，以及载体的物理化学性质。
例如，某些催化剂需要高比表面积的载体来提高催化活性，而某些催化剂则需要有良好导电性的载体来利用电子转移进行催化反应。
在实际制备过程中，还需要考虑到催化剂的纯度与分散度。
高纯度的催化剂可以减少杂质对催化性能的影响，从而获得更高的催化活性。
而良好的分散度可以增加活性中心的暴露度，提高催化剂的反应活性。
制备高纯度的催化剂可以采用化学合成、物理方法和生物方法等多种途径，而提高分散度可以通过控制前驱体的配比、反应条件和添加助剂等手段来实现。
此外，催化剂的后续处理也是制备过程中需要考虑的重要环节。
后续处理可以改变催化剂的表面性质和结构，从而进一步调控催化剂的性能。
例如，催化剂的表面酸碱性可以通过浸渍法、浸泡法等进行调控，从而影响催化剂对酸碱性反应的催化活性。
另外，在后续处理中，还可以通过离子交换、氧化还原等方法改变催化剂的形貌和晶相，从而对其催化活性和选择性进行调控。
总结起来，催化剂制备与载体选择是一个综合性的工程，需要综合考虑前驱体的选择、载体的选择、催化剂纯度和分散度的控制等因素。
分子克隆中载体的选择标准特性
分子克隆中载体的选择标准特性
在分子克隆中，选择合适的载体是非常重要的。
以下是一些选择载体的标准特性：
1.大小：载体应具有足够的大小来容纳所需的DNA序列，包括目标基因和其他重要元素，如启动子、终止子和选择标记等。
2.多克隆位点：载体通常含有多个克隆位点，使得可以同时插入多个目标序列。
这些位点通常是限制性内切酶切割位点。
3.选择标记：载体上通常携带有选择标记，例如抗生素抗性基因，以便在转化后对成功克隆的细菌进行筛选。
4.复制数：载体的复制数是指在细胞中存在的拷贝数目。
高复制数的载体能够更有效地产生目标基因的拷贝，但也可能导致不稳定性。
选择合适的复制数取决于实验的需要。
5.可调控性：某些载体具有可调控的表达系统，可以根据需要调整目标基因的表达水平，例如使用诱导子来控制基因的启动。
6.安全性：选择的载体应该是安全的，不会引起不良反应或对宿主细胞产生不利影响。
7.序列可用性：确定载体序列是否已被广泛验证和文献报道，确保其可靠性和有效性。
8.兼容性：载体应与所选择的宿主细胞类型兼容，以确保高效地转化和复制。
色母粒配方设计必须遵守的五大载体选择原则
在使用色母料的过程中，最大的困难是如何把它适当添加到材料里，两个主要因素分别是用于生产色母的载体树脂及其分子量，而它们往往是不能由购买色母料的公司所能决定的。
故色母粒企业在进行配方设计时，就需考虑到载体树脂的选用对后期销售、应用端的影响。
色母料在最终树脂中的添加量一般为2%-5%，如果正确地混合添加色母，在最终的混合物中载体树脂的含量占1%-3%或以上。
这样一来就使它成为了添加剂系列中含量最大的一种添加剂，因此在选择载体树脂时应该注意一些细节。
例如，用户对颜色的要求、对色泽稳定性的要求、对环境的要求以及色母粒在最终制品中所起的作用等，使得色母粒的配方日趋复杂。
色母粒一般选择与制品树脂相同的树脂作为载体，两者的相容性最好，但在复杂情况下，同时也要考虑载体的流动性以及选用此载体后的颜料分散性和混合分配性，这些复杂的特性只有进行统一平衡，才能得出最合适的色母粒配方。
具体而言，色母粒配方中载体选择的五大原则就是相容性、流动性、加工性、高黏性、适用性。
相容性所谓相容性是指两种物质彼此相互容纳的能力，按照相似相容原则，色母粒载体树脂与被着色树脂结构相同或相似。
其相容性好。
常规情况下色母粒载体树脂与制品的基体树脂应选择相同类型的聚合物，目的是保证载体树脂与基体树脂具有良好的化学相容性。
例如ABS色母载体可选用AS树脂，PBT可用作PET色母粒的载体。
但如果相同类型树脂之间亦不相容,就会影响着色产品质量，如聚乙烯和聚丙烯虽同属烯烃类，选用聚乙烯为载体的色母用在注塑、吹膜等产品没有问题，但将聚乙烯载体色母用于聚丙烯纺丝会影响可纺性、用于高亮度注塑产品，会在产品上有流痕，也说明了聚乙烯与聚丙烯虽同为烯烃树脂、但两树脂的相容性不是很好。
哪怕是使用聚乙烯蜡为载体的万能色母粒，在面对工程塑料时也不免有所缺陷，表面容易出现“起皮”的现象。
故万能母粒现有的市场规模远远达不到预期的目标。
流动性所谓流动性就是色母载体树脂自身的流动性要好，载体熔体流动速率要高于被着色树脂，如使用与需要着色的塑料相同的聚合物作载体，其分子量应低于着色的塑料（即载体的熔体流动速率大于需着色的塑料的熔体流动速率）。
如何选择合适的基因载体
如何选择合适的基因载体在进行基因工程研究或生物学实验时，选择合适的基因载体是至关重要的。
基因载体是指将外源DNA片段插入到其中的DNA分子，常用于基因克隆、表达和转染等实验操作中。
在选择合适的基因载体时，需要考虑多个因素，包括：适合的宿主细胞、载体大小、DNA复制能力、表达能力和基因编辑能力。
本文将详细介绍如何选择合适的基因载体。
首先，选择适合的宿主细胞是非常重要的。
宿主细胞的选择应根据研究目的和所需结果而定。
常用的宿主细胞包括大肠杆菌（E.coli）、酵母菌和哺乳动物细胞等。
大肠杆菌是最常用的宿主微生物，具有丰富的遗传工具和高效的表达系统；酵母菌常用于蛋白质大量表达和克隆研究；而哺乳动物细胞常应用于真核生物表达以及重组蛋白质的产生。
因此，在选择基因载体时，应综合考虑所需研究对象的特点和所需结果，选择适合的宿主细胞。
其次，基因载体的大小是选择的另一个重要考虑因素。
基因载体的大小直接关系到可克隆的DNA片段的大小限制。
一般而言，细菌宿主对于较小的载体更为适应，并且很多商业上常用的载体都是较小的质粒，例如pUC系列质粒。
大肠杆菌细胞在摇瓶或发酵罐中处理小型质粒时更为高效，因此选择适当大小的基因载体有助于增加转化效率和表达效果。
另外，载体过大容易导致构建和分离的困难，而过小的载体则可能限制了载体的功能。
此外，选择合适的基因载体还需考虑其复制能力。
一般情况下，选择能够在目标宿主细胞中高效复制的基因载体是非常重要的。
选择拥有高拷贝数的基因载体（如pUC18和pUC19）可以提高目标基因的拷贝数，从而增加目标基因的表达量。
此外，一些特定的载体可能具有选择性复制性，如2μm质粒在酵母中复制，选择这样的特定载体可以在遗传上稳定地保持插入DNA。
除了复制能力，基因载体的表达能力也是选择的重要因素之一。
一些载体在宿主细胞中具有强大的表达能力，可以帮助目标基因高效表达。
常见的表达载体常包含启动子、转录/翻译起始子、选择性标记和可视化标签等。
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1、pCMVp-NEO-BAN载体
特点: 该真核细胞表达载体分子量为6600碱基对，主要由CMVp启动子、兔β-球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因以及pBR322骨架构成，在大多数真核细胞内都能高水平稳定地表达外源目的基因。
更重要的是，由于该真核细胞表达载体中抗neo基因存在，转染细胞后，用G418筛选，可建立稳定的、高表达目的基因的细胞株。
插入外源基因的克隆位点包括Sal1、BamH1和EcoR1位点。
注意在此载体中有二个EcoR1位点存在。
2、pEGFP, 增强型绦色荧光蛋白表达载体(Enhanced Fluorecent Protein Vector)
特点: pEGFP表达载体中含有绿色荧光蛋白，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。
载体骨架中的SV40 origin使该载体在任何表达SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制。
Neo抗性盒由SV40早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成，能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株。
此外，载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制，而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。
用途: 该表达载体EGFP上游有Nde1、Eco47111和Age1克隆位点，将外源基因扦入这些位点，将合成外源基因和EGFP的融合基因。
借此可确定外源基因在细胞内的表达和/或组织中的定位。
亦可用于检测克隆的启动子活性(取代CMV启动子,Acet1-Nhe1)。
3、pEGFT-Actin, 增强型绿色荧光蛋白/人肌动蛋白表达载体
特点: pEGFP-Actin表达载体中含有绿色荧光蛋白和人胞浆β-肌动蛋白基因，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。
载体骨架中的SV40 origin使该载体在任何表达SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制。
Neo抗性盒由SV40早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK基因的聚腺嘌呤信号组成，能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株。
此外，载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制，而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。
用途: pEGFP-Actin载体在真核细胞表达EGFP-Actin融合蛋白，该蛋白能整合到胞内正在生的肌动蛋白，因而在活细胞和固定细胞中观察到细胞内含肌动蛋白的亚细胞结构。
4、pSV2表达载体
特点：该表达质粒是以病责SV40启动子驱动在真核细胞目的基因进行表达的，克隆位点为Hind111。
SV40启动子具有组织/细胞的选择特异性。
此载体不含neo基因，故不能用来筛选、建立稳定的表达细胞株。
5、CMV4 表达载体
特点:该真核细胞表达载体由CMV启动子驱动，多克隆区域酶切位点选择性较多。
含有氨苄青霉素抗性基因和生长基因片段以及SV40复制原点和fl单链复制原点。
但值得注意的是，该表达载体不含有neo基因，转染細胞后不能用G418筛选稳定的表达细胞株。
其他常用克隆Vector：
pBluscript II KS DNA 15 ug
pUC18 DNA 25 ug
pUC19 DNA 25 ug
说明:
pBluescript II kS、pUC18 & Puc19载体适合于DNA片段的克隆、DNA测序和对外源基因进行表达等。
这些载体由于在lacZ基因中含有多克隆位点，当外源DNA片段扦入，转化lacZ基因缺乏细胞，并在含有IPTG和X-gal的培养基上培养时，含有外源DNA载体的细胞将为白色菌落，而无外源DNA片段载体的细胞则为兰色菌落，由此易于筛选有无外源DNA片段的载体。
此外，这些载体中有便于测序的M13、T7和T3的通用引物进行DNA测序。
保存液: TE Buffer
TE Buffer组成:
10mM Tris.HCL(Ph 8.0)
1mM EDTA
用途:
克隆外源DNA片断.
进行基因表达.
使用M13、T7和T3引物进行测序.
存在的问题
细胞的生命活动是一个复杂的调控过程，有些生命活动的机理还不完全清晰，由于插人的目的基因不同，载体构建栗用的顺式组件不同，组装的空间位置不同，采用的表达系统不同，目的基因表达水平和阳性克隆筛选率都会有很大差异。
另外，由于所有的顺式元件存在种属和组织特异性，所构建的高效表达载体不一定在所有细胞株中均高效表达。
再者，细胞生长状态的差异，转染方法的不同培养时阉的长短，筛选药物浓度的高低，对表达量都有很大影响。
所以，需要综合评价一个表达载体和表达系统，排除一些不定因素，筛选出最佳组合
真核表达载体趋向于既有利于扩增目的基因又有利于筛选阳性克隆的载体的构建。
许多有效的应用范围广的强启动子和增强子被人发现并应用于载体中，大大提高了目的基因的表达量，另外一些强的组成型启动子，如SV40早期启动子+PHTLv，已应用于大规模生产的细胞系中。
应用以GS为筛选标志的表达载体可兼有筛选和扩增目的基因两种功能，是目前研究的重点。
以IRES连接的双顺反子表达载体已成为核表达载体的主体。
在同一启动子操纵下，筛选基因或报告基因与目的基因转录在同一mRNA上通过IRES的作用，表达出两种蛋白，因而在理论上可认为，通过了筛选或表达了报告基因的克隆必为阳性克隆，即表达目的基因的克隆，有报道说这种双顺反子的共表达率为90％。
这就大大提高了筛选率，简化了实验过程。
将强启动子、增强子和可扩增的筛选标志组装在同一载体上，构建高效表达和筛选的表达载体并将其运用于最合适的表达系统中，是当今真核表达载体构建研究发展方向。