枯草芽孢杆菌的分离及筛选
枯草芽孢杆菌分离及筛选鉴定实验方案
氯化钠 ５克
蒸馏水 １００毫０升
氯化钠 ５克
琼脂 １８克
4—5ml，0.06MPa（8lbf/in2）30min 灭菌
试剂： 40%NAOH(或 KOH)，肌酸。 3、 步骤：
1. 接种与培养 将芽孢杆菌测试菌接种于上述培养液中，一般于 30 摄氏度培养 4 天。
2. 结果观察 在培养 4 天后，取培养液（约 2ml）和等量的 40%NAOH 相混合，如少量肌酸 （约 0.5—1mg），充分振荡， 2—5min 后如培养液呈红色，即为 V.P试. 验阳性， 有时须放置更长时间才出现红色反应。
ｐＨ ６．５ 121℃灭菌 20min
2、培养基：半固体培养基 3、操作步骤：用一小环的肉汤菌液穿刺接种到上述培养基中（必须穿刺到管底），一般于
30 培养 3—7 天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿着穿刺 线上生长者为厌氧菌或兼性厌氧菌
三、乙酰甲基甲醇实验 1、 原理：
本实验是测定芽孢杆菌 （或其他细菌） 发酵葡萄糖的变化。 有些芽孢杆菌发酵葡萄糖 产酸，并将产生的酸进一步转化为中性化合物，如乙酰甲基甲醇或 2,3-丁二醇。乙酰 甲基甲醇在碱性环境中可被空气中的氧气氧化成二乙酰， 后者与蛋白胨中精氨酸所含 的胍基起作用，生成红色化合物，即表示 V.P.试验阳性。若在培养基中加入少量肌酸
蒸馏0 克
pH
7.0-7.2
121℃灭菌 20min
淀粉培养基
牛肉膏 ５克
以补充胍基，可加速反应。反应式如下： 2 丙酮酸—— >乙酰甲基甲醇 + 2 二氧化碳；
-2H 乙酰甲基甲醇———— >二乙酰；
+KOH
缩合 二乙酰 + NH=C(NH 2)2———— >红色化合物 2、 培养基和试剂 培养基：蛋白胨 5g，葡萄糖 5g，NaCl 5g，蒸馏水 1000ml。调节 PH 6.5，每管分装
分离枯草芽孢杆菌的流程
分离枯草芽孢杆菌的流程下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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枯草芽孢杆菌的培养、筛选分离和鉴别
03
枯草芽孢杆菌的筛选分离
枯草芽孢杆菌的分离纯化
制样品稀释液
取得土壤样g，放入盛 1 有99ml的无菌水锥形
瓶中，充分振荡。
培养
用移液枪将各个浓度梯度的一 3 定量稀释液接种到开始时制作 好的培养基上，用无菌刮铲涂 匀。37℃下倒置培养24小时。
加热筛选能形成芽孢的 细菌
在超净工作台中，将装有锥形瓶 2 的菌悬液加塞、包扎、摇匀后放
3
高压灭菌：将分装包扎的培养基放入 高压蒸汽灭菌锅中进行高压蒸汽霉菌， 用0.075MPa灭菌30分钟。（使用高 压蒸汽灭菌锅要注意放完冷气。灭菌 结束后等到气压降到“0”时才能打 开放气阀。）
培养基 制备
2
精确称取蔗糖30g、磷酸二氢钾4.5g、 硫酸铵2.5g、蛋白胨10g、碳酸钙 2g、酵母膏5g和琼脂20g，然后在 1000ml水中充分溶解。
道中的游离氧，造成肠道
2
低氧，促进有益厌氧菌生
长，间接抑制其它致病菌
生长。
4.
枯草芽孢杆菌菌体自身合成α -
4
淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤
维素酶等酶类，在消化道中与
动物体(人体)内的消化酶类一
同发挥作用。
3.
3
刺激动物(人体)免疫器官
的生长发育，激活T、B
淋巴细胞，提高免疫球
蛋白和抗体水平，增强
细胞免疫和体液免疫功
能，提高群体免疫力。
生物科学 进入人体，能100%到达大小肠，抑
制致病菌，促进有益厌氧菌生长，并产生 乳酸等有机酸类，降低肠道PH值，间接抑 制其它致病菌生长。提高免疫球蛋白和抗 体水平，增强细胞免疫和体液免疫功能， 提高群体免疫力。合成α -淀粉酶、蛋白酶、 脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与 动物体(人体)内的消化酶类一同发挥作用。
枯草芽孢杆菌实验报告
微生物技术综合实验年级：13级生物工程（专升本）班级：学号：姓名：徐红贞指导老师：刘凤霞教授日期：二零一三十月五号目录1实验目的及原理 (1)1.1实验目的 (1)1.2实验原理 (1)2实验材料 (1)2.1实验仪器 (1)2.2实验试剂 (1)2.3培养基 (2)2.3.1 生长培养基 (2)2.3.2鉴定培养基 (2)2.3.3摇瓶培养基 (2)3试验方法 (2)3.1仪器的准备 (2)3.2培养基的配置 (2)3.3初步筛选及鉴定 (2)3.3.1采集土样 (3)3.3.2富集培养 (3)3.3.3稀释分离、纯化 (3)3.3.4初筛 (3)3.4复筛及鉴定 (4)3.4.1革兰染色 (4)3.5酶活力的测定 (4)3.5.1摇瓶培养 (4)3.5.2酶液稀释 (4)3.5.3酶液测定 (4)4结果分析 (5)4.1平板涂布分离 (5)4.2平板划线分离 (5)4.3初筛 (5)4.4复筛 (5)4.5摇瓶培养 (6)4.6酶活力测定 (6)5参考资料 (7)6附录 (8)微生物上游技术综合实验枯草芽孢杆菌的分离、纯化、筛选及鉴定1.实验目的及原理1.1实验目的（1）学习从土壤中分离、纯化枯草芽孢杆菌的原理和方法。
（2）学习掌握枯草芽孢杆菌的鉴定方法。
（3）掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力的测定的原理和方法。
（4）培养学生综合应用微生物实验方法的能力。
（5）培养学生自行设计实验流程、综合分析问题解决问题和判断实验结果的能力。
1.2实验原理选择合适与待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
将土壤稀释液倒在不同类型的培养基平板上，在适宜的环境中培养几天，细菌或是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。
将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养基中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。
枯草芽孢杆菌分离及筛选鉴定实验方案
附表：培养基的配方
肉汤琼脂培养基
牛肉膏 ５克
蛋白胨 １０克
ｐＨ ６．５ 121℃灭菌 20min
四、淀粉水解 1、原理：
许多芽孢杆菌产生淀粉酶， 能将培养基中的淀粉水解成无色糊精等小分子物质或进 一步水解为麦芽糖或葡萄糖，淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。 2、 培养基及试剂： 培 养 基 ： 在 肉 汤 琼 脂 中 添 加 0.2% 的 可 溶 性 淀 粉 ， 分 装 于 三 角 瓶 。
0.1MPa(15lbf/in2)20min 灭菌备用。
2、培养基：半固体培养基 3、操作步骤：用一小环的肉汤菌液穿刺接种到上述培养基中（必须穿刺到管底），一般于
30 培养 3—7 天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿着穿刺 线上生长者为厌氧菌或兼性厌氧菌
三、乙酰甲基甲醇实验 1、 原理：
本实验是测定芽孢杆菌 （或其他细菌） 发酵葡萄糖的变化。 有些芽孢杆菌发酵葡萄糖 产酸，并将产生的酸进一步转化为中性化合物，如乙酰甲基甲醇或 2,3-丁二醇。乙酰 甲基甲醇在碱性环境中可被空气中的氧气氧化成二乙酰， 后者与蛋白胨中精氨酸所含 的胍基起作用，生成红色化合物，即表示 V.P.试验阳性。若在培养基中加入少量肌酸
可溶性淀粉 ２克
琼脂 １５－克２０
蒸馏水 １００毫０升
ＨＨＪＳ－ＺＬ
枯草芽孢杆菌的鉴定实验
1. 形态的观察（形状、颜色、质地、透明度等） ⑴单个菌体的形态 ⑵群体形态的观察
2. 革兰氏染色 3. 芽孢染色 4. 菌体大小测量 5．枯草芽孢杆菌的生理生化鉴定：
一 过氧化氢酶测定 1、原理：过氧化氢酶能催化过氧化氢分解成水和氧 2、试剂： 3—10%过氧化氢 培养基：肉汤琼脂培养基 3、操作步骤：将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上， 30 培养 1—2 天。取一干净载玻片，在
臭豆腐中的枯草芽孢杆菌的分离、筛选、鉴定与验证
微生物实验方案设计——臭豆腐中的枯草芽孢杆菌的分离、筛选、鉴定与验证姓名：吴安琦专业：化学生物学学号：20131583摘要：本实验目的在于通过对市场上卖的臭豆腐发酵卤水中的菌种进行多样性分析,分离纯化其中的各种菌株,后对其进行生化鉴定和食用安全性验证试验，从中筛选出高效的制作食用臭豆腐发酵的枯草芽孢杆菌菌株。
关键词：臭豆腐；枯草芽孢杆菌；分离纯化；菌种鉴定。
引言臭豆腐，其名虽俗气、却外陋内秀、平中见奇、源远流长，是一种极具特色的汉族传统小吃。
臭豆腐臭豆腐以优质黄豆为原料。
制作工艺较为复杂，黄豆经过筛选、脱壳、浸泡、磨浆、过滤、煮浆、点浆、成型、划块、发酵等十道工序。
呈贡臭豆腐质地软滑，散发异香。
先人赞誉云：“味之有余美，玉食勿与传”。
它不仅有很高的营养价值，而且有较好的药用价值。
古医书记载，臭豆腐可以寒中益气，和脾胃，消胀痛，清热散血，下大肠浊气。
常食者，能增强体质，健美肌肤。
“闻着臭”是因为豆腐在发酵腌制和后发酵的过程中，其中所含蛋白质在蛋白酶的作用下分解，所含的硫氨基酸也充分水解，产生一种叫硫化氢（H2S）的化合物，这种化合物具有刺鼻的臭味。
在蛋白质分解后，即产生氨基酸，而氨基酸又具有鲜美的滋味，故“吃着香”。
枯草芽胞杆菌，是芽胞杆菌属的一种。
单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。
无荚膜，周生鞭毛，能运动。
革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
需氧菌。
可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。
在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。
广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。
并且耐氧化；耐挤压；耐高温，能长期耐60°C高温，在120°C温度下能存活20分钟；耐酸碱，但是不耐低温,在-4和-80度冰箱中会很快死亡。
土壤中枯草芽孢杆菌的分离与鉴定之细菌芽孢染色法
土壤中枯草芽孢杆菌的分离与鉴定之细菌芽孢染色法一、实验目的1.学习掌握芽孢染色法并了解芽孢的形态特征2.学习并掌握荚膜染色法并了解荚膜的形态特征3.学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征4.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术二、实验原理1.细菌的芽孢具有厚而致密的壁不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。
2.芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上色又难以脱色这一特点而设计的。
3.所有的芽孢染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色，然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而更能明显地衬托出芽孢，便于观察。
4.染色方法：改良后的Schaeffer-Fulton氏染色法三、实验仪器及材料1.菌种：枯草芽孢杆菌2.染色剂：5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液3.仪器或其他用具：Eppendorf管架、载玻片、显微镜、电磁炉、搪瓷杯等。
四、实验步骤1.制备菌悬液：在EP管中滴两滴生理盐水，挑取2-3环菌苔加入到含生理盐水的EP管中，混合均匀。
2.染色：在EP管中滴加2-3滴孔雀绿染液，盖紧EP管，将EP管插入浮筏中，放进沸水中加热15-20分钟，加热过程需要有人看护，随时控温，防止沸水进入EP管。
3.涂片固定：取半滴经孔雀绿染色的菌悬液在载玻片的中央，用接种环将菌液涂抹均匀，将载玻片用法电风机冷风吹干，经过酒精灯火焰固定三次。
4.脱色：待玻片冷却后，水洗脱色。
5.复染：滴加数滴0.5%番红水溶液在菌膜上，染色2min，再水洗。
6.镜检：将晾干后放在显微镜下观察。
五、实验结果结果描述：大部分菌体被染成红色，少部分被染成绿色，说明有芽孢产生，但是芽孢的数量没有菌体多，芽孢被染成绿色，菌体被染成红色，由绿色芽孢的外面还包裹着一层淡红色带可知，该芽孢是内生芽孢，芽孢呈椭圆形，位于菌体的中央，是中央生的芽孢，同时可以观察到枯草芽孢杆菌的大小比平常的小得多。
枯草芽孢杆菌的筛选及其与光合细菌复配对养殖水体的净化
枯草芽孢杆菌的筛选及其与光合细菌复配对养殖水体的净化枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种广泛存在于自然界中的益生菌，它具有很强的抗菌能力，在农业、食品、环保等领域中有着重要的应用价值。
近年来，随着生态环境的恶化和水质污染的加剧，水产业生态环境问题日益突出，针对水体的净化和养殖水环境的改善成为亟需解决的问题。
本文将探讨枯草芽孢杆菌的筛选及其与光合细菌复配对养殖水体的净化的相关内容，为水产业的可持续发展提供一定的参考。
一、枯草芽孢杆菌的筛选枯草芽孢杆菌是一种广泛存在于土壤和水体中的益生菌，它具有很强的适应性和抗逆性，能够在各种环境中生存和繁殖。
在水体净化中，枯草芽孢杆菌可以分解有机污染物，降解废弃物中的氮、磷等养分物质，减轻水质负荷，提高水体的透明度和透氧性，有效改善养殖水环境。
筛选出优良的枯草芽孢杆菌菌株对养殖水体的净化具有重要的意义。
1. 筛选标准的确定在筛选枯草芽孢杆菌菌株时，需要确定一定的筛选标准，可以从菌株的抗逆能力、生长速度、对废弃物的降解能力等方面进行评价。
抗逆能力是菌株在恶劣环境中生存的保障，生长速度则影响菌株的应用效果，对废弃物的降解能力是衡量菌株是否适合用于水体净化的重要指标。
2. 筛选方法常用的筛选方法包括菌落计数法、抗生素敏感性试验、生长速率检测等。
通过对大量菌株的筛选和鉴定，可以得到具有优良特性的枯草芽孢杆菌菌株，为养殖水体的净化提供优质的微生物资源。
二、枯草芽孢杆菌与光合细菌的复配光合细菌是一类能够进行光合作用的细菌，它们能够利用光能和无机物质合成有机物，具有很强的生物合成能力。
在养殖水体净化中，光合细菌可以参与氮、磷等营养物质的循环，促进水体中废弃物的降解，提高水质的透明度和透氧性，改善水体的生态环境。
1. 复配原理2. 复配效果。
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微生物设计性实验枯草芽孢杆菌的分离及筛选1 实验目的掌握枯草芽孢杆菌的分离筛选的基本原理，熟练掌握无菌接种技术、微生物分离筛选技术和微生物形态观察技术。
了解枯草芽孢杆菌的分布、营养、生长等特点，以及它所具有的产淀粉酶的功能。
根据这些特点进行分离和筛选，从而得到纯菌株。
2 实验原理枯草芽孢杆菌属革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
需氧菌。
有的菌株是α -淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌；有的菌株具有强烈降解核苷酸的酶系。
广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。
选择含淀粉丰富的土壤为最佳，80度的水浴处理样品1小时，目的是杀死微生物营养体，残留芽胞。
利用稀释涂步法，在淀粉的培养基培养，培养1-3天后，观察。
然后，进行初筛与纯化，鉴定参照《伯杰氏细菌手册》鉴定或者利用显微镜进行革兰氏染色，确认是否为枯草芽孢杆菌。
再复筛，测定其淀粉酶活，最后确定菌株。
3 实验材料3.1 选择培养基本次实验进行产淀粉酶的枯草芽孢杆菌的筛选，所以应选淀粉培养基。
配方：牛肉膏5.0g蛋白胨10.0g氯化钠5.0g可溶性淀粉10.0g琼脂20g蒸馏水1000ml调整pH 至7.2配置时应先把淀粉用少量蒸馏水调成糊状，再加入到融化好的培养基中。
3.2 溶液或试剂牛肉膏1.25g蛋白胨2.5g氯化钠1.25g可溶性淀粉2.5g琼脂5g碘11克，碘原液2毫升，碘化钾42克，可溶性淀粉2克，磷酸氢二钠45.23克，柠檬酸8.068克，氯化钴25克，重铬酸钾3.34克，100毫升0.01NHCL。
3.4 仪器或其他用品平板培养皿10个、试管15支、三角瓶2个、烧杯3个、称量纸、高压蒸汽灭菌锅、干燥箱、恒温培养箱、超净工作台、无菌涂布器、电热恒温水浴、500ml量筒、显微镜、无菌吸管、无菌培养皿、无菌刻度吸管、酒精灯、记号笔、火柴、试管架、接种钩、滴管等。
4 实验流程倒平板→制备梯度稀释液→涂布→培养→初筛→复筛→纯化→保存5 实验步骤实验前准备制备淀粉培养基，无菌水，在121摄氏度下灭菌20min。
倒平板。
把接种工具，培养基，和其他用品全部在超净工作台上摆好，进行紫外线灭菌30min。
5.1 制备土壤稀释液取土样时最好选取如花坛等地方的土样，选好采样地点，铲产去表层5cm，取5～15cm 处。
用无菌器具规范采样几十克，装入无菌的塑料袋或纸袋中扎好，记录采样时间、地点、采样环境等以备考证。
采样后应尽快分离。
振摇约二十分钟，使土样与水充分混合，将细胞分散。
放入盛有99ml无菌水三角瓶中，常压80度的水浴处理样品1小时后，取出。
用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推，制成10-2、10-3、10-4、10-5不同稀释度的土壤溶液。
5.2 涂布将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上10-3、10-4、10-5三种稀释度，然后用无菌吸管分别由10-3、10-4、10-5三管土壤稀释液中各吸取0.2ml，小心地滴在对应平板培养基表面中央位置。
用无菌涂布器涂布。
右手拿无菌涂布器平放在平板培养基表面上，将菌悬液先沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀。
室温下静置5～10min，使菌液浸入培养基。
5.3 培养将淀粉培养基平板倒置于30°C培养箱中培养1～3d。
5.4 初筛观察菌落表面粗糙不透明，呈污白色或微黄色，将这样的菌种单个菌落分别挑取少许细胞接种到培养基上，置于30°C的培养箱中培养，若发现有杂菌，需要再一次进行分离纯化。
（如不能用肉眼更好的观察，可对其进行革兰氏染色，在显微镜下观察，与标准菌种比较。
）5.8 复筛测定其淀粉酶活。
5.8.1 试剂和器材1、试剂：（1）碘原液：称取碘11克，碘化钾22克，加水溶解，稀释至500毫升。
（2）稀碘液：取碘原液2毫升，加碘化钾20克，稀释至500毫升，此试剂随配随用。
（3）2%淀粉液：称取干燥过的可溶性淀粉2克，加5毫升蒸馏水，搅拌混和，再徐徐倾入70毫升煮沸的蒸馏水中。
继续煮沸2分钟，冷却至室温，加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液（pH为6）（4）柠檬酸缓冲液：称取磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）45.23克，柠檬酸（C6H8O7·H2O）8.068克，加水溶解，稀释至1000毫升。
（5）标准比色液：称取氯化钴（CoCL2·6H2O）25克和重铬酸钾3.34克溶于100毫升0.01N HCL，其五倍稀释作标准。
（6）样品：细菌-α淀粉酶2、器材（1）电热恒温水浴（2）试管（3）量筒（4）吸量管（1ml）5.8.2 操作方法：1、取试管1支，加20毫升2%淀粉，混匀，在30℃水浴中，使管内温度达到30℃。
2、将淀粉酶0.5ml加到30℃的淀粉液中，混匀，在30℃水浴中保温，自加入记时，经5分钟后取反应液1毫升，加入盛有5毫升稀碘液的试管中。
混匀，目测比色，每隔一定时间重复测定，直至呈色与标准比色颜色相同为止，记录反应进行的时间。
3、计算。
在上述条件下，每一小时催化1毫升2%可溶性淀粉水解的酶量，定为一个酶活力单位。
5.9 纯化并保存菌种保存时一般都需要不受杂菌污染，菌种变异很少，并能尽量保持细菌的形态和生理性状不发生变化。
同时，做好以下工作：（1）做好菌种保存记录，注明菌种名称，分离年月日、分离者姓名、分离地点等。
（2）防止杂菌污染及意外事故，把菌种保存在2—3只试管中备用。
（3）原始菌种妥善保存。
6 结果与分析6.1 分离到枯草芽孢杆菌菌的株数6.2 枯草芽孢杆菌产酶活性大小及形态观察鉴定结果【注明参考文献，格式参考学术论文样式】枯草芽孢杆菌的鉴定实验1、形态的观察（形状、颜色、质地、透明度等）（1）单个菌体的形态（2）群体形态的观察2、革兰氏染色3、芽孢染色4、菌体大小测量5、枯草芽孢杆菌的生理生化鉴定：一、过氧化氢酶测定1、原理：过氧化氢酶能催化过氧化氢分解成水和氧2、试剂：3～10%过氧化氢培养基：肉汤琼脂培养基3、操作步骤：将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上，30 培养1～2 天。
取一干净载玻片，在上面加一滴3～10%的过氧化氢，挑取一环培养1～2 天的菌苔，在过氧化氢溶液中涂抹，若有气泡（氧气）出现，记作过氧化氢酶阳性，无气泡者为阴性。
也可将液直接加入斜面上，观察气泡的产生。
二、需氧性试验1、原理：不同种类的芽孢杆菌对氧气的需求性常有差异，因此本实验可作为鉴定芽孢杆菌的一个较重要指标。
2、培养基：半固体培养基3、操作步骤：用一小环的肉汤菌液穿刺接种到上述培养基中（必须穿刺到管底），一般于30 培养3— 7 天观察结果。
若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿着穿刺线上生长者为厌氧菌或兼性厌氧菌三、乙酰甲基甲醇实验1、原理：本实验是测定芽孢杆菌（或其他细菌）发酵葡萄糖的变化。
有些芽孢杆菌发酵葡萄糖产酸，并将产生的酸进一步转化为中性化合物，如乙酰甲基甲醇或的胍基起作用，生成红色化合物，即表示2,3-丁二醇。
乙酰甲基甲醇在碱性环境中可被空气中的氧气氧化成二乙酰，后者与蛋白胨中精氨酸所含V.P. 试验阳性。
若在培养基中加入少量肌酸以补充胍基，可加速反应。
反应式如下： 2 丙酮酸—— >乙酰甲基甲醇+ 2 二氧化碳；-2H 乙酰甲基甲醇———— >二乙酰；+KOH 缩合二乙酰+ NH=C(NH 2)2———— >红色化合物2、培养基和试剂培养基：蛋白胨5g，葡萄糖5g，NaCl 5g ，蒸馏水1000ml。
调节PH 6.5，每管分装4— 5ml ，0.06MPa（8lbf/in2 ）30min 灭菌试剂：3、步骤：1.接种与培养将芽孢杆菌测试菌接种于上述培养液中，一般于30 摄氏度培养4 天。
2.结果观察在培养4 天后，取培养液（约2ml）和等量的40%NAOH 相混合，如少量肌酸（约0.5— 1mg），充分振荡，2— 5min 后如培养液呈红色，即为V.P. 试验阳性，有时须放置更长时间才出现红色反应。
四、淀粉水解1、原理：许多芽孢杆菌产生淀粉酶，能将培养基中的淀粉水解成无色糊精等小分子物质或进一步水解为麦芽糖或葡萄糖，淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
2、培养基及试剂：培养基：在肉汤琼脂中添加0.2% 的可溶性淀粉，分装于三角瓶。
0.1MPa(15lbf/in2)20min 灭菌备用。
试剂：3、步骤：将培养基融化后，冷却至50 摄氏度左右，倒成平板，凝固后取菌种点钟于平板上（每皿点钟2 点），一般于30 摄氏度培养2— 4 天，形成菌落后，在平板上滴加卢哥尔氏碘液，以铺满菌落为度，平板呈蓝色，而菌落周围如有五色透明圈出现，说明淀粉被水解，透明圈的大小，可表明水解能力的大小。
卢哥尔氏碘液40%NAOH( 或KOH) ，肌酸。
附表：培养基的配方肉汤琼脂培养基牛肉膏5克蛋白胨10克氯化钠５克琼脂１８克蒸馏水１０００毫升葡萄糖10 克pH 121℃灭菌20min 7.0-7.2 淀粉培养基牛肉膏５克蛋白胨１０克氯化钠５克可溶性淀粉２克琼脂１５－２０克蒸馏水１０００毫升121℃灭菌20min Ｖ—Ｐ．实验培养基（半固体培养基）葡萄糖５克蛋白胨５克氯化钠５克蒸馏水１０００毫升ｐＨ６．５121℃灭菌20min。