枯草芽孢杆菌分离及筛选鉴定实验方案
产蛋白酶菌株枯草芽孢杆菌的分离
实验一产蛋白酶菌株枯草芽孢杆菌的分离一、教学目标及基本要求1. 学习从各种样品中分离微生物的操作技术2. 掌握分离微生物时定性测定产物的筛选方法3. 学习和掌握枯草芽孢杆菌的分离技术4. 掌握高产蛋白酶菌株的初筛方法二、实验原理枯草杆菌是属于芽孢杆菌属的一类细菌。
枯草芽孢杆菌的分布十分广泛，主要存在于土壤或腐烂的稻草之中。
由于能够形成芽孢，因此能够抵抗高温，低温等不良环境，所以是实验室及工业生产中主要污染菌之一，危害极大。
但是许多枯草芽孢杆菌能分泌蛋白酶、淀粉酶、抗菌素等物质，是工业酶制剂生产的重要菌种。
例如，我国使用的BF7658枯草芽孢杆菌生产а-淀粉酶，用于淀粉水解，纺织品退浆等。
又如AS1398枯草杆菌是生产蛋白酶的重要菌株。
1. 枯草芽孢杆菌的芽孢耐热的特点。
由于芽孢具有较强的抗高温能力，分离纯化时可采用热处理的方法，即通过高温加热杀死其中不生芽孢的菌种，使耐热的芽孢菌得到富集。
2. 枯草芽孢杆菌的产酶特征。
利用枯草芽孢杆菌产生水解酶的特性，可以选择酪蛋白或淀粉为主要营养成分的分离培养基，因菌体分泌的酶可以将大分子的蛋白或淀粉水解而在菌落周围形成透明圈。
根据透明圈直径(H)和菌落直径(C)之比值(H/C)可以初步确定酶活力，其比值越大，酶活力越高，进而可筛选出高产酶活的菌株。
3. 枯草芽胞杆菌的形态特征枯草芽孢杆菌的细胞大小0.7×2～3 μm，营养细胞为杆状，杆端钝圆、单生或者短链，着色均匀，无荚膜，周边运动，革兰氏染色阳性。
有芽孢0.6×1～1.5 μm，芽孢中生或近中生，壁薄，不膨大，孢子呈椭圆或长筒形，常为两端染色。
菌落变化很大，枯草芽孢杆菌在麦芽汁琼脂培养基斜面上，菌落呈细皱状，干燥或颗粒状。
在土豆培养基上菌落呈细皱状，干燥，有时呈现天鹅绒状的菌苔，在液体培养基表面形成银白色的菌膜。
菌落粗糙，扁平、扩展，不透明，不闪光，表面干燥，污白色或微带黄色。
4. 枯草芽胞杆菌的生理生化特性枯草芽孢杆菌能够液化明胶，冻化牛乳，还原硝酸盐，不产生吲哚，H2S，V-P反应阳性，水解淀粉。
枯草芽孢杆菌实验报告
2实验材料………………………………………………………………………1
2.1实验仪器……………………………………………………………………………1
2.2实验试剂……………………………………………………………………………1
2.3培养基………………………………………………………………………………2
2.2 实验试剂
碘液储备液：称取22.0g碘化钾溶于约300mL水中，加入11.0g碘，搅拌溶液，移入500mL容量瓶，用水定容，贮于棕色瓶中备用（每月配制一次）。
碘液使用液：称取20.0g碘化钾，溶于约300mL水中，移入500mL容量瓶中，准确加入2.00mL碘液储备液，用水定容，贮于棕色瓶中备用（每天配制一次）。
②培养皿若干个并洗净晾干，每5个一包，高压灭菌。
③移液管洗净塞上脱脂棉，用报纸条包好、捆扎高压灭菌。
④准备一个三角瓶装入自来水300-400毫升，上棉塞并用纸包好高压灭菌。
3.2培养基的配置
按各培养基配方配置培养基，并将生长培养基分装6支试管，上棉塞，放入大烧杯中待灭菌。其余的培养基分装入三角瓶内，上棉塞，包扎灭菌。
4.2平板划线分离
挑选10-5梯度的菌落进行平板划线分离，经48h培养后，每平板最大菌落结果见表4-2
表4-2平板划线菌落状况
1号
2号
3号
4号
大小／cm
形态
0.5
表面光滑，
0.7
有褶皱呈
0.8
乳白色或
0.4
淡黄色圆形
经分析，由于菌体为野生菌而各自的生长能力不同，从而导致菌落大小不同。
4.3初筛
培养24h后，结果见表4-3
枯草芽孢杆菌分离及筛选鉴定实验方案
附表：培养基的配方
肉汤琼脂培养基
牛肉膏 ５克
蛋白胨 １０克
ｐＨ ６．５ 121℃灭菌 20min
四、淀粉水解 1、原理：
许多芽孢杆菌产生淀粉酶， 能将培养基中的淀粉水解成无色糊精等小分子物质或进 一步水解为麦芽糖或葡萄糖，淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。 2、 培养基及试剂： 培 养 基 ： 在 肉 汤 琼 脂 中 添 加 0.2% 的 可 溶 性 淀 粉 ， 分 装 于 三 角 瓶 。
0.1MPa(15lbf/in2)20min 灭菌备用。
2、培养基：半固体培养基 3、操作步骤：用一小环的肉汤菌液穿刺接种到上述培养基中（必须穿刺到管底），一般于
30 培养 3—7 天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿着穿刺 线上生长者为厌氧菌或兼性厌氧菌
三、乙酰甲基甲醇实验 1、 原理：
本实验是测定芽孢杆菌 （或其他细菌） 发酵葡萄糖的变化。 有些芽孢杆菌发酵葡萄糖 产酸，并将产生的酸进一步转化为中性化合物，如乙酰甲基甲醇或 2,3-丁二醇。乙酰 甲基甲醇在碱性环境中可被空气中的氧气氧化成二乙酰， 后者与蛋白胨中精氨酸所含 的胍基起作用，生成红色化合物，即表示 V.P.试验阳性。若在培养基中加入少量肌酸
可溶性淀粉 ２克
琼脂 １５－克２０
蒸馏水 １００毫０升
ＨＨＪＳ－ＺＬ
枯草芽孢杆菌的鉴定实验
1. 形态的观察（形状、颜色、质地、透明度等） ⑴单个菌体的形态 ⑵群体形态的观察
2. 革兰氏染色 3. 芽孢染色 4. 菌体大小测量 5．枯草芽孢杆菌的生理生化鉴定：
一 过氧化氢酶测定 1、原理：过氧化氢酶能催化过氧化氢分解成水和氧 2、试剂： 3—10%过氧化氢 培养基：肉汤琼脂培养基 3、操作步骤：将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上， 30 培养 1—2 天。取一干净载玻片，在
臭豆腐中的枯草芽孢杆菌的分离、筛选、鉴定与验证
微生物实验方案设计——臭豆腐中的枯草芽孢杆菌的分离、筛选、鉴定与验证姓名：吴安琦专业：化学生物学学号：20131583摘要：本实验目的在于通过对市场上卖的臭豆腐发酵卤水中的菌种进行多样性分析,分离纯化其中的各种菌株,后对其进行生化鉴定和食用安全性验证试验，从中筛选出高效的制作食用臭豆腐发酵的枯草芽孢杆菌菌株。
关键词：臭豆腐；枯草芽孢杆菌；分离纯化；菌种鉴定。
引言臭豆腐，其名虽俗气、却外陋内秀、平中见奇、源远流长，是一种极具特色的汉族传统小吃。
臭豆腐臭豆腐以优质黄豆为原料。
制作工艺较为复杂，黄豆经过筛选、脱壳、浸泡、磨浆、过滤、煮浆、点浆、成型、划块、发酵等十道工序。
呈贡臭豆腐质地软滑，散发异香。
先人赞誉云：“味之有余美，玉食勿与传”。
它不仅有很高的营养价值，而且有较好的药用价值。
古医书记载，臭豆腐可以寒中益气，和脾胃，消胀痛，清热散血，下大肠浊气。
常食者，能增强体质，健美肌肤。
“闻着臭”是因为豆腐在发酵腌制和后发酵的过程中，其中所含蛋白质在蛋白酶的作用下分解，所含的硫氨基酸也充分水解，产生一种叫硫化氢（H2S）的化合物，这种化合物具有刺鼻的臭味。
在蛋白质分解后，即产生氨基酸，而氨基酸又具有鲜美的滋味，故“吃着香”。
枯草芽胞杆菌，是芽胞杆菌属的一种。
单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。
无荚膜，周生鞭毛，能运动。
革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
需氧菌。
可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。
在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。
广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。
并且耐氧化；耐挤压；耐高温，能长期耐60°C高温，在120°C温度下能存活20分钟；耐酸碱，但是不耐低温,在-4和-80度冰箱中会很快死亡。
枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定
枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定一、目的：掌握芽孢杆菌属常见种的分离，鉴定方法和技术。
将土壤样品中分离的芽孢杆菌属未知种鉴定到属。
二、原理：芽孢杆菌能产生芽孢，在沸水中加热不会失去生理活性，但是不能产生芽孢的细菌会失去活性。
，因而得到芽孢菌属，经过进一步分离及生理生化鉴定得到枯草芽孢杆菌。
三、材料和器皿：显微镜、培养皿（12个）、试管（12个）、三角瓶（5个）、烧杯、移液管（）、涂布棒（6个）、载玻片、接种环、接种针、试管架、灭菌锅、培养箱培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、淀粉培养基、v.p.实验培养基、肉汤琼脂培养基孔雀绿溶液、番红复染液、NaOH溶液、草酸铵溶液、碘液、乙醇四、操作步骤菌种的分离和纯化（1）土壤的采集：取土壤表层5~10厘米下的肥土100g左右，把采得的土壤放入纸袋中带回实验室分离。
（2）平板的制备：融化三角瓶中的牛肉膏蛋白胨培养基，以每皿20ml左右倒入6个平板上。
（3）稀释分离法：秤取土壤5g放入含有45ml水的三角瓶中，摇动片刻，然后将此瓶用小火加热至悬浊液沸腾，维持15分钟，而后静止5分钟。
吸取上层液0.5ml加入到含有4.5ml的无菌水的试管中，制成1:100浓度的悬液，然后分别吸取10-2和10-3土壤悬浊液个0.1ml滴加到上述牛肉膏蛋白胨培养基平板上，每种稀释2皿，用涂布棒均匀涂布，并将培养基倒置于37℃恒温培养1~2天。
（4）挑菌及纯化：从上述分离的平板上分别挑取2个单菌落中部分菌落，然后在牛肉膏蛋白胨培养基上划线纯化，经菌落特征的观察和镜检，确定是否是芽孢杆菌纯种后，从中选择一株转接于牛肉膏蛋白胨培养基斜面上，置37℃培养1~2天备用。
菌种的鉴定1、形态的观察（形状、颜色、质地、透明度等）（1）单个菌种的形态（2）菌种形态的观察2.革兰氏染色3.芽孢染色4.菌体大小测验5.枯草芽孢杆菌的生理生化鉴定一、淀粉水解一、原理许多芽孢杆菌产生淀粉酶，能将淀粉培养基中的淀粉水解成无色糊精等小分子物质或进一步水解为麦芽糖或葡萄糖，淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。
芽孢杆菌分离筛选与培养
芽孢杆菌分离筛选与培养枯草芽饱杆菌是芽饱杆菌属的模式种，很少成链，通常为0.7~0.8μm×2.0~3.0μm，营养细胞杆状，杆端钝圆，单生或成短链，能运动，革兰氏染色一致呈阳性，芽孢中生或偏生，芽孢呈椭圆或长简形。
无荚膜，周生或侧生鞭毛，游离孢子表面着色弱，菌落形态变化较大，粗糙，表面干燥，不透明，灰白色或微带黄色，扩散（蔓延）生长。
斜面丰厚粗糙，不透明，蜡质蔓延，奶油色至微褐色。
在液体培养基表面形成银白色较厚的具皱纹的菌膜。
可利用蛋白质、多种糖及淀粉，广泛分布在土壤、水体及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖。
琼脂培养基上的菌落圆或不规则形，表面色暗，变厚和不透明，可起皱，可呈奶油色或褐色，菌落的形状随培养基成分不同而有很大变化。
当琼脂培养基表面潮湿时，菌落易于扩散。
在琼脂培养基上生长的菌苔在液体中不易扩散。
在培养液中生成色暗、皱褶、完整的膜，培养液轻度混浊或不混浊。
有氧时生长旺盛，在含有葡萄糖的复杂培养基中可进行厌氧代谢，但其生长和发育都较弱，生长温度最高为45~55℃，最适为37℃。
枯草芽孢杆菌生理生化特性：液化明胶冻化牛乳还原硝酸盐不产生吲哚，硫化氢 V-P反应阳性，水解淀粉。
葡萄糖发酵产酸不产气，需氧。
地衣芽孢杆菌孢囊不膨大，无伴孢晶体，中生卵圆型芽孢，周围鞭毛，无荚膜。
革兰氏液染色呈紫色阳性菌。
细胞大小一般在0.9~1.2×2.2~3.8微米。
菌落呈灰白色、边缘不整齐的扁平菌落。
1.样品：外购菌种商品微生物制剂（固体或液体）土壤水体或枯枝烂叶，腐烂稻草（记录取样位置 PH 植被情况等）。
2.菌种分离与纯化2.1．培养基2.1.1可溶性淀粉3g/L 蛋白胨10g/L 酵母膏3g/L KH2PO41.5g/L K2HPO42g/LMgSO40.1g/L PH 7.4—7.6 （富集用）2.1.2肉汤（NA）培养基（营养琼脂）：蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl5g/L PH7.2—7.4（保存计数或分离纯化用）营养琼脂：麦芽汁培养基=1：1混合使用，菌落不易扩散，形态特征典型2.1.3蛋白胨 10g/L 酵母膏 5g/L 葡萄糖3.5g/L NaCl5g/L K2HPO40.5g/LMgSO43g/L MnSO4 25mg/L PH 7.2—7.4（分离纯化用）2.1.4产淀粉酶菌株筛选培养基：可溶性淀粉3-5g/L 蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl 5g/L PH7.2—7.4（用于淀粉酶产生菌分离筛选）2.1.5产蛋白酶菌株筛选培养基2.1.5.1酪素培养基：★★2.1.5.1.1葡萄糖1g/L，酵母膏1g/L，酪素4-5g/L，K2HPO4 1g/L，KH2PO4 0.5g/L，MgSO4 0.1g/L蒸馏水1000ml，pH7.0-7.2。
枯草芽孢杆菌的分离及筛选教学文案
枯草芽孢杆菌的分离及筛选微生物设计性实验枯草芽孢杆菌的分离及筛选1 实验目的掌握枯草芽孢杆菌的分离筛选的基本原理，熟练掌握无菌接种技术、微生物分离筛选技术和微生物形态观察技术。
了解枯草芽孢杆菌的分布、营养、生长等特点，以及它所具有的产淀粉酶的功能。
根据这些特点进行分离和筛选，从而得到纯菌株。
2 实验原理枯草芽孢杆菌属革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
需氧菌。
有的菌株是α -淀粉酶和中性蛋白酶的重要生产菌；有的菌株具有强烈降解核苷酸的酶系。
广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。
选择含淀粉丰富的土壤为最佳，80度的水浴处理样品1小时，目的是杀死微生物营养体，残留芽胞。
利用稀释涂步法，在淀粉的培养基培养，培养1-3天后，观察。
然后，进行初筛与纯化，鉴定参照《伯杰氏细菌手册》鉴定或者利用显微镜进行革兰氏染色，确认是否为枯草芽孢杆菌。
再复筛，测定其淀粉酶活，最后确定菌株。
3 实验材料3.1 选择培养基本次实验进行产淀粉酶的枯草芽孢杆菌的筛选，所以应选淀粉培养基。
配方：牛肉膏 5.0g蛋白胨 10.0g氯化钠 5.0g可溶性淀粉 10.0g琼脂 20g蒸馏水 1000ml调整 pH 至 7.2配置时应先把淀粉用少量蒸馏水调成糊状，再加入到融化好的培养基中。
3.2 溶液或试剂牛肉膏 1.25g蛋白胨 2.5g氯化钠 1.25g可溶性淀粉 2.5g琼脂 5g碘11克，碘原液2毫升，碘化钾42克，可溶性淀粉2克，磷酸氢二钠45.23克，柠檬酸8.068克，氯化钴25克，重铬酸钾3.34克，100毫升0.01NHCL。
3.4 仪器或其他用品平板培养皿10个、试管15支、三角瓶2个、烧杯3个、称量纸、高压蒸汽灭菌锅、干燥箱、恒温培养箱、超净工作台、无菌涂布器、电热恒温水浴、500ml量筒、显微镜、无菌吸管、无菌培养皿、无菌刻度吸管、酒精灯、记号笔、火柴、试管架、接种钩、滴管等。
枯草芽孢杆菌的分离筛选
４ ． Ｗｕ ｑ ｉ Ｃ ｏ ｕ ｎ ｔ ｙ Ａｎ ｉ ｍａ ｌ Ｈｕ ｓ ｂ ａ ｎ ｄ ｒ ｙ Ｂ ｕ ｒ ｅ ａ ｕ； ５ ． Ｚ ｈ ａ ｏ ｃ ｈ ｕ ａ ｎ Ｖ ｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｓ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ａｎ ｉ ｍａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ Ｃｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｎ ａ ｎ Ｃ ｏ ｕ ｎ ｔ ｙ
析， 最终 鉴定 ｂ 一１菌株 为枯 草 芽孢杆 菌 （ Ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｓ ｕ ｂ ｔ ｉ ｌ ｉ ｓ ） ， 其 同源性≥ ９ ９ 。
关 键词 ： 枯草 芽孢杆 菌 ； 筛选 ； 鉴定；
［ 中图分 类号 ］ ￥ ８ １ ６ ． ６ ［ 文献 标识 码］ Ａ ［ 文章编 号］ １ ０ ０ ４ — ６ ７ ０ ４ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ — ０ ０ ２ ４ — ０ ４ Ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎｄ Ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｎｇ ｏ ｆ Ｂａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ Ｓ ｕ ｂ ｔ ｉ ｌ ｉ ｓ
ＢＡＩ Ｙａ ｎ — ｑ ｉ ｎ ， ＸＩ Ｎ Ｘｉ ａ ｏ — ｌ ｉ ｎ ｇ 。， ＬＡＩ ＹＯ Ｕ — ｚ ｈｉ 。， ＺＨ ＡＮＧ Ｘｉ ａ ｏ — ｃ ｈ ｕａ ｎ ，
Ｚ ＨＡＮＧ Ｇａ ｎ ｇ － ｊ ｕ ａ ｎ 。 Ｌ Ｉ Ｕ Ｊ ｉ ａ ｎ — ｆ ｅ ｎ ｇ 。 ， ＸＩ Ｎ Ｙａ — ｐ ｉ ｎ ｇ
（ １ ． Ｓ ｈ ｉ ｊ ｉ ａ ｐ ａ ｎ Ｓ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｚ ｉ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ Ｈｕ ｓ ｂ ａ ｎ ｄ ｒ ｙ ａ ｎ ｄ Ｖ ｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｂ ｕ ｒ ｅ ａ ｕ， Ｚｉ ｃ ｈ ａ ｎ ｇＳ ｈ ａ ａ ｎ ｘ ｉ ７ １ ７ ３ ０ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ；
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氯化钠 ５克
蒸馏水 １００毫０升
氯化钠 ５克
琼脂 １８克
4—5ml，0.06MPa（8lbf/in2）30min 灭菌
试剂： 40%NAOH(或 KOH)，肌酸。 3、 步骤：
1. 接种与培养 将芽孢杆菌测试菌接种于上述培养液中，一般于 30 摄氏度培养 4 天。
2. 结果观察 在培养 4 天后，取培养液（约 2ml）和等量的 40%NAOH 相混合，如少量肌酸 （约 0.5—1mg），充分振荡， 2—5min 后如培养液呈红色，即为 V.P试. 验阳性， 有时须放置更长时间才出现红色反应。
ｐＨ ６．５ 121℃灭菌 20min
2、培养基：半固体培养基 3、操作步骤：用一小环的肉汤菌液穿刺接种到上述培养基中（必须穿刺到管底），一般于
30 培养 3—7 天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿着穿刺 线上生长者为厌氧菌或兼性厌氧菌
三、乙酰甲基甲醇实验 1、 原理：
本实验是测定芽孢杆菌 （或其他细菌） 发酵葡萄糖的变化。 有些芽孢杆菌发酵葡萄糖 产酸，并将产生的酸进一步转化为中性化合物，如乙酰甲基甲醇或 2,3-丁二醇。乙酰 甲基甲醇在碱性环境中可被空气中的氧气氧化成二乙酰， 后者与蛋白胨中精氨酸所含 的胍基起作用，生成红色化合物，即表示 V.P.试验阳性。若在培养基中加入少量肌酸
蒸馏0 克
pH
7.0-7.2
121℃灭菌 20min
淀粉培养基
牛肉膏 ５克
以补充胍基，可加速反应。反应式如下： 2 丙酮酸—— >乙酰甲基甲醇 + 2 二氧化碳；
-2H 乙酰甲基甲醇———— >二乙酰；
+KOH
缩合 二乙酰 + NH=C(NH 2)2———— >红色化合物 2、 培养基和试剂 培养基：蛋白胨 5g，葡萄糖 5g，NaCl 5g，蒸馏水 1000ml。调节 PH 6.5，每管分装
上面加一滴 3—10%的过氧化氢，挑取一环培养 1—2 天的菌苔，在过氧化氢 溶液中涂抹， 若有气泡（氧气）出现，记作过氧化氢酶阳性， 无气泡者为阴性。 也可将液直接加入斜面上，观察气泡的产生。
二 需氧性试验
1、原理：不同种类的芽孢杆菌对氧气的需求性常有差异，因此本实验可作为鉴定芽孢杆菌 的一个较重要指标。
蛋白胨 １０克
氯化钠 ５克
121℃灭菌 20min
Ｖ—Ｐ实．验培养基 （半固体培养基）
葡萄糖 ５克
蛋白胨 ５克
试剂： 卢哥尔氏碘液 3、步骤：
将培养基融化后，冷却至 50 摄氏度左右，倒成平板，凝固后取菌种点钟于平板上 （每皿点钟 2 点），一般于 30 摄氏度培养 2—4 天，形成菌落后， 在平板上滴加卢哥 尔氏碘液，以铺满菌落为度，平板呈蓝色，而菌落周围如有五色透明圈出现，说明 淀粉被水解，透明圈的大小，可表明水解能力的大小。
ＨＨＪＳ－ＺＬ
枯草芽孢杆菌的鉴定实验
1. 形态的观察（形状、颜色、质地、透明度等） ⑴单个菌体的形态 ⑵群体形态的观察
2. 革兰氏染色 3. 芽孢染色 4. 菌体大小测量 5．枯草芽孢杆菌的生理生化鉴定：
一 过氧化氢酶测定 1、原理：过氧化氢酶能催化过氧化氢分解成水和氧 2、试剂： 3—10%过氧化氢 培养基：肉汤琼脂培养基 3、操作步骤：将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上， 30 培养 1—2 天。取一干净载玻片，在
附表：培养基的配方
肉汤琼脂培养基
牛肉膏 ５克
蛋白胨 １０克
四、淀粉水解 1、原理：
许多芽孢杆菌产生淀粉酶， 能将培养基中的淀粉水解成无色糊精等小分子物质或进 一步水解为麦芽糖或葡萄糖，淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。 2、 培养基及试剂： 培 养 基 ： 在 肉 汤 琼 脂 中 添 加 0.2% 的 可 溶 性 淀 粉 ， 分 装 于 三 角 瓶 。
0.1MPa(15lbf/in2)20min 灭菌备用。
可溶性淀粉 ２克
琼脂 １５－克２０
蒸馏水 １００毫０升