产淀粉酶芽孢杆菌的筛选和分离 - 副本
产淀粉酶的活性芽胞杆菌的分离、鉴定与育种
题目产淀粉酶的活性芽胞杆菌的分离、鉴定与育种摘要首先通过淀粉培养基从土壤中筛选出产淀粉酶的活性菌株，对菌株初步鉴定后进行微波诱变，筛选出产量高、性状优良的正突变菌株，并用正交实验的方法，从发酵培养基三个主要成分（玉米粉、黄豆饼粉、酵母粉）对产酶条件进行优化，实验最后利用多相分类的方法对筛选出的正突变菌株做了菌种鉴定，初步确定为短芽孢杆菌。
引言淀粉酶是最早用于工业生产并且迄今仍是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一。
淀粉酶种类繁多,特点各异,在造纸、印染、酿造、果汁和食品加工、医药、洗涤剂、工业副产品及废料的处理、青贮饲料及微生态制剂等多种领域具有广阔的用途[1]。
现在淀粉酶主要来源于植物和微生物[2]并通过发酵完成生产，因此筛选出高产、稳定的淀粉酶产生菌是淀粉酶生产的头等大事[3]。
本文试图从土壤中分离出产淀粉酶的芽孢杆菌，通过诱变育种及发酵条件优化来得到高产、稳定的淀粉酶产生菌株。
一、研究方法1、实验材料：河北大学生命科学学院院前的土壤2、仪器设备：高压蒸汽灭菌锅、培养皿、培养基分装器、PH试纸、移液管、吸耳球、玻璃棒、量筒、三角刮、试管、试管架、酒精灯、电子天平、显微镜、三角烧瓶、洗瓶、接种针、接种环、双层瓶、擦镜纸、德汉氏小管、直尺、记号笔等。
诱变箱：微波炉（E30E-3）离心机、721分光光度计：3、培养基和试剂（1）培养基：淀粉培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、种子培养基[4、7]、出发培养基[4、7]、糖发酵培养基、明胶培养基、柠檬酸盐培养基、醋酸铅培养基、蛋白胨液体培养基（吲哚实验）、葡萄糖蛋白胨培养基（V.P.、M．R实验）、硝酸盐液体培养基、酪素培养基（2）试剂：碘液、孔雀绿染液、番红染液、乙醚、吲哚试剂、KOH、α-耐酚、甲基红、格里斯氏试剂、锌粉、3%H2O2 、柠檬酸缓冲液、1%淀粉溶液、3,5-二硝基水杨酸（注：所用药品均为分析纯）。
4、实验方法（1）细菌的分离与初步鉴定：将土壤系列稀释，把10-4、10-5、10-6分别涂布到淀粉培养基上，37℃倒置、过夜培养，影印，将碘液加到淀粉平板上，记录出现水解圈的单菌落的H/C值[5]。
产淀粉酶菌株的分离和筛选
产淀粉酶菌株的分离及筛选摘要：【实验目的】1学习从土壤等环境中分离微生物的技术。
2了解产淀粉酶菌株的分离方法。
3观察产淀粉酶菌的形态特点，并分析不同条件下酶的特性。
【实验原理】淀粉酶广泛在于动植物和微生物中，是最早用于工业生产并且迄今仍是用途最广、产量最大的酶制剂.。
【实验目的】1学习从土壤等环境中分离微生物的技术。
2了解产淀粉酶菌株的分离方法。
3观察产淀粉酶菌的形态特点，并分析不同条件下酶的特性。
【实验原理】淀粉酶广泛在于动植物和微生物中，是最早用于工业生产并且迄今仍是用途最广、产量最大的酶制剂产品之一。
淀粉酶种类繁多，特点各异，可应用于造纸、印染、酿造、果汁和食品加工、医药、洗涤剂、工业副产品及废料的处理、青贮饲料及微生态制剂等多种领域。
在酿造发酵工业如酒精生产、啤酒制造、发酵原料液化及糖化工艺过程均有重要价值，如添加高温淀粉酶可提高啤酒质量，中温蒸煮条件下添加适当耐高温a-淀粉酶可提高糖化率及酒精出酒率，降低甲醇含量，提高酒精质量，同时可提高设备利用率等。
淀粉酶在面包焙烤过程中分解淀粉产生的可溶性糖被酵母转化成酒精和CO2气体，不仅能增加面包体积，同时还有改善面包表皮色泽、提高面包软度、延长保质期的作用，对面包冷却和冷冻也有重要作用。
由于微生物数量多，繁殖快，工业生产主要采用向生物发酵法大量生产该制剂。
本实验从土壤中分离的淀粉酶产生菌从温度、pH值两方面探讨其产酶的最适条件。
通过平板培养法，从样品中初步分离出淀粉产生菌株，再通过单菌落培养从而获得比较纯的菌种。
然后对其进行二级扩大培养，最终测定液体培养基菌液中被酶分解得到的葡萄糖含量来讨论菌株的最适条件（温度、pH值等），为工业街道淀粉酶及饲料添加剂提供候选菌株。
【仪器、材料和试剂】（一）仪器1、恒温培养箱2、高压蒸气灭菌锅3、摇床4、恒温水浴锅5、生物显微镜6、电子天平（二）材料样品一：存放过久发霉的麦芽和周围粉尘样品二：米饭生产线附近草坪上的土壤（三）试剂与器材1、锥形瓶（50ml、100ml、500ml等）2、培养皿（25个左右）3、大小试管（30个左右）4、移液枪（1000μl、100μl）及大小枪头若干5、酒精灯、接种针等6、牛肉膏或酵母膏7、蛋白胨8、NaCl9、可溶性淀粉10、琼脂11、卢戈氏碘液11、草酸铵结晶紫12、碘液13、95%酒精14、蕃红染色液15、蒽胴试剂（现配）16、葡萄糖标准液(0.1 g/L)实验环节1 产淀粉酶菌株的初筛【实验步骤】1、称取一个样品5g，倒入盛有45mL无菌水带塞的三角锥形瓶中，摇床振荡30min制成样品悬液记为10-1土壤稀释液；2、用无菌移液管吸取10-1的土壤悬液0.5mL，放入4.5mL无菌水中吹吸数次混匀即为10-2稀释液，照此方法分别制成10-2~10-9稀释液；3、分别取10-5、10-6、10-7、10-8、10-9土壤稀释液各0.5mL，涂布于平板培养基表面，一个稀释度涂布接种2块平板，37℃下恒温培养16h ；4、待长出菌落后滴加卢戈氏碘液，挑取有明显淀粉水解圈的单菌落，作为初筛菌株。
产淀粉酶芽孢杆菌的分离和鉴定
产淀粉酶芽孢杆菌的分离和鉴定王磊;陈宇飞;杨柳【摘要】从土壤中分离筛选出产淀粉酶的菌株,经淀粉培养基初筛后,采用DNS法对发酵提取的粗酶液进行总酶活和α-淀粉酶活力的测定,通过形态观察和生理生化反应对筛出的菌株进行鉴定.结果表明:分离到4株产淀粉酶芽孢杆菌,测得其透明圈直径与菌落直径比值在1.7~3.5之间,其中有2株菌株产淀粉酶能力较高,总酶活达到19.760 U/mL和15.432 U/mL;4株芽孢杆菌所产α-淀粉酶酶活在6.4U/mL~10.4 U/mL之间.经鉴定,1株为枯草芽孢杆菌,3株为蜡样芽孢杆菌,枯草芽孢杆菌的产淀粉酶能力优于蜡样芽孢杆菌.%The amylase-producing strains were isolated from soil. After initially screening by starch culture medium, the DNS method was used to determine the total enzyme activity andα-amylase activity of the crude enzyme solution by fermentation extraction. The screened strains were identified through morphological observa-tion and physiological and biochemical reactions. Results showed that:four strains of amylase-producing Bacil-lus were isolated. The ratio of hydrolysis zone diameter to colony diameter was 1.7-3.5. Two strains of them had high amylase-producing activity, which the total enzyme activity reached 19.760 U/mL and 15.432 U/mL. Theα-amylase activity of four strains of Bacillus was 6.4 U/mL~10.4 U/mL. The four strains of Bacillus were authen-ticated that one was Bacillus subtilis, the other three were Bacillus cereus. The ability to produce amylase of Bacillus subtilis was superior to Bacillus cereus.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2017(038)006【总页数】4页(P175-178)【关键词】芽孢杆菌;淀粉酶;分离;鉴定【作者】王磊;陈宇飞;杨柳【作者单位】吉林工商学院食品工程学院,吉林长春130507;吉林工商学院食品工程学院,吉林长春130507;吉林工商学院食品工程学院,吉林长春130507【正文语种】中文淀粉酶是催化淀粉水解的一类酶的总称，是最早实现工业化生产并且迄今为止用途最广、产量最大的酶制剂品种。
土壤中分离筛选出产淀粉酶的芽孢杆菌方法
可溶性淀粉100g 蒸馏水50L pH7.2
实消:a.投料结束后，启动电机，慢速搅拌。
b.微开夹套排污阀，打开夹套蒸汽阀，保持夹套压力为0.1Mpa左右，待培 养基预热达到95度以上时停止搅拌，关闭夹套蒸汽阀，开大夹套排污阀。
c.培养基温度达到95度后，缓慢打开进气阀及底阀处的蒸汽阀，同时向罐 内 进气，待罐压升至0.11Mpa后，打开罐面排气阀进行排气。
平皿、超净台、水浴锅、玻璃棒、玻璃球 等 • c.培养基 :牛肉膏2.5g 蛋白胨5g 氯化钠2.5g 可溶性淀粉1g 蒸馏水500ml 琼脂2% pH7.2
2.初筛方案
5g土壤
45ml 无菌 水
玻璃珠
摇床震荡 10分钟
10-1土壤菌悬液
85℃水浴 15分钟
10-2 10-3 10-4 10-5
0.1ml
去上述处理液1mL+DNS试剂2mL沸水浴，取出后迅速冷却+9mL 蒸馏水，摇匀
540nm波长处测其吸光值
上清液+1%淀粉溶液直接加热煮沸+DNS试剂（空白）
表五 DNS法测定发酵液酶活结果
从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌实验方案
从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌实验方案实验方案：从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌实验目的：分离产淀粉酶的芽孢杆菌，用于后续淀粉酶相关研究。
实验步骤：1.样品采集：选择含有潜在产淀粉酶的土壤样品，如农田土壤或果园土壤。
2.稀释培养：将采集的土壤样品用无菌PBS缓冲溶液稀释，并进行均匀悬浮。
3.接种装置：将土壤悬浮液均匀涂布在含有淀粉的固体培养基上，使用毛细管或平面接种棒操作，确保样品均匀地接种在培养基上。
4.培养条件：将接种好的培养基培养皿在适宜的培养条件下培养。
适宜的培养条件包括温度、湿度和氧气供应等。
一般来说，菌株生长的适宜温度为30-37摄氏度，湿度为60-70%。
5.纯化分离：通过制备出来的细菌菌落将产酶菌株分离出来。
可以使用毛细管、骨牌、环针等工具，分别挑取单个菌落并将其转移到含有淀粉的培养基上。
6.传代培养：将分离出来的产酶菌株进行传代培养，以确保其菌落的特性稳定。
7.筛选鉴定：通过淀粉酶活性分析等方法，对分离出来的菌株进行筛选鉴定。
一般来说，可采用滴定法或I2-KI法测定淀粉酶活性。
根据颜色变化或者酶活性指标的变化，筛选出淀粉酶产量较高的菌株。
8.鉴定菌株：对产淀粉酶的菌株进行鉴定，确定其属于芽孢杆菌的种属。
可以采用传统的形态学和生理生化特性鉴定方法，如菌落形态观察、革兰染色、氧需气性、形状和运动情况等。
9.鉴定纯化：最后，对鉴定出来的菌株进行纯化培养，以获得纯种淀粉酶产生菌。
实验注意事项：1.采集样品时要避免采集过于含油的土壤，以免对实验造成干扰。
2.在操作过程中要做好防护，戴手套，避免污染样品。
3.在培养过程中注意严格无菌操作，以避免外源菌的污染。
4.在菌株的鉴定过程中，要仔细观察菌株的形态特征，并结合多种鉴定方法综合分析。
5.实验过程中要注意做好记录，包括实验步骤、结果、观察和记录等。
总结：通过上述实验方案，我们可以从土壤中分离出产淀粉酶的芽孢杆菌。
这有助于开展后续淀粉酶相关的研究，包括酶的生物化学性质、作用机制等。
产淀粉酶的芽孢杆菌的分离和筛选
从土壤中分离和筛选产淀粉酶活性的芽孢杆菌及部分鉴定试验一、实验目的1、通过本实验的学习，学习掌握从环境中分离产淀粉酶菌株以及菌株初步鉴定的方法；2、巩固微生物分离纯化、细菌生理生化鉴定，对所学习过的微生物学实验方法进行综合技能训练；3、培养综合利用微生物学、生物化学等相关知识，自行设计、实施并判断实验结果的能力。
4、根据所学知识自主设计实验方案，在实验方案通过审核后组织实施，最终要求获得产淀粉酶的菌株。
二、实验原理1、土壤中含有各种微生物，其中产淀粉酶的芽抱杆菌含量在不同土壤中含量也不同，因此实验前进行预埋工作，能使土壤中产淀粉酶的细菌含量增加。
待实验前取样即可。
2、在只用淀粉充当碳源的选择培养基中，只有能产生淀粉酶利用淀粉的菌体能成为优势菌种。
在淀粉选择培养基中，产淀粉酶的菌种可以得到富集及分离。
3、芽抱是菌体生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，芽抱最主要的特点就是抗性强，对高温、紫外线、干燥、电离辐射和很多有毒的化学物质都有很强的抗性。
它帮助菌体度过不良环境，在适宜的条件下可以重新转变成为营养态细胞。
细菌富集一段时间后，生长环境不利，会产生芽抱，再在80-90 C温度下杀死菌体，可使芽抱得到富集。
4、芽抱杆菌属的共同特征是：革兰氏阳性；接触酶阳性；水解淀粉；VP试验阳性；不产生吲哚；苯甲氨酸不脱氨；分解酪素；不分解酪氨酸；不产生二羟丙酮；营养体的最高生长温度大约从25C到75C以上；最低生长温度大约5C到45C；生长最低pH值，从一8到2左右；耐盐范围从低于2%勺NaCI到25%NaC；营养明胶(22°C) 7天内液化1厘米或1厘米以上。
枯草芽抱杆菌和地衣芽抱杆菌在糖发酵试验用阿拉伯糖，木糖和甘露糖代替葡萄糖可产酸；作为营养生长的最低限培养基是无维生素的，但含有葡萄糖、柠檬酸盐和一个氨态盐作为唯一的碳源和氮源。
5、在含有淀粉的鉴别培养基的平板上，具有产淀粉酶能力的芽抱杆菌，水解淀粉生成小分子糊精和葡萄糖，在淀粉平板上菌落周围出现水解圈，但肉眼不易分辨，滴加碘液，未水解的淀粉呈蓝色，水解圈无色。
产淀粉酶芽孢杆菌的筛选和分离
碘 原 液 ： １ ｇ 碘 化 钾 ２ ｇ 加 水 定 容 至 碘 ｌ， ２，
５ ＯｒＬ。 ０ ａ
（ ａｉｕ） Ｂ ｃｌｓ 中能 产 生淀粉 酶 的菌 种较 多 ； 次 ， 孢 ｌ 其 芽
杆菌 属产 的 淀 粉 酶 有 较 好 的应 用 价 值 ， 凝 结 芽 如
孢杆 菌 、 草 芽 孢 杆 菌 、 热 芽 孢 杆 菌 、 衣 芽 孢 枯 嗜 地
成 菌悬液 ， 菌悬 液 置 于 ８ ％ 水浴 ２ ｉ ， 度 稀 将 ０ ０ｍｎ 梯
作 者简 介 ： 琛 （ ９４ ） 男 ， 苏 启 东 人 ， 教 徐 １８一 ， 江 助
总第 １７ ４ 期
释 至 １ ～。 ０
齐鲁师范学 院学报
终点 ， 录时 间 即为液 化 时间 。 记
取 ２０． １ 菌 悬 液 涂 布 于 筛 选 培 养 基 上 ， ０１ ０ ￣ Ｌ ３ ℃培 养 ２ ｈ ７ ４ 。在 菌落 周 围滴加 卢 戈 氏 碘液 ， 察 观 菌 落 周 围是 否 出现 透 明水 解 圈 ， 测 定 菌 落 及 水 并
第２ ６卷
第 ５期
齐 鲁 师 范 学 院 学 报
Ｊｕｎ ｌ ｆ ｉ Ｎ ｒ ｌ ｎｖｒｔ ｏ ｒａ ｏ Ｑｌ ｕ ｏ Ｕ ｉｅｓｙ ｍａ ｉ
Ｖｏ ． ６ １ ２ Ｎｏ． ５
０ｃ ． ｔ２０１ １
２１ ０ １年 １ ０月
产 淀 粉 酶 芽 孢 杆 菌 的筛 选 和分 离
徐 琛
关键词 ： 芽孢 杆 菌 ； 粉 酶 ； 选 淀 筛
落 形 态观 察 、 兰 氏染 色和 芽孢 染 色初 步 鉴 定 这 ２株 菌株 为 芽孢 杆 菌属 。 革
中图分 类号 ：９ ９ ９ Ｑ ３ ．
土壤中产淀粉酶的芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活力的测定教案
土壤中产淀粉酶的芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活力的测定13级生技426摘要本实验从土壤中分离出能产淀粉酶的芽孢杆菌并对其进行鉴定、保存，实验中涉及菌株的分离纯化、菌株的形态学鉴定和生理生化鉴定，根据伯杰氏细菌学手册鉴定其种属。
实验中通过80℃水浴20min预处理，杀死无芽孢菌体，筛选出芽孢杆菌；再用稀释涂布平板法对芽孢杆菌进行初步筛选；又通过分区划线法对初筛菌株进一步分离纯化；最后用选择性淀粉培养基进行筛选，得到纯培养的产淀粉的芽孢杆菌。
最后并通过耐盐试验、明胶试验、糖发酵试验、VP试验、吲哚试验等多项生理生化实验对筛选出来的菌种进行鉴定。
关键词：淀粉酶芽孢杆菌生化鉴定一、引言芽孢杆菌属(Bacillus)是一类好氧或兼性厌氧，产生抗逆性内生孢子的杆状细菌。
多为腐生菌，主要分布于土壤、动植物体表及水体中。
由于芽孢杆菌属的细菌可以产生多种有用代谢产物，芽孢又是菌体度过不良环境的休眠体。
因此，在工、农业生产上有较高的应用价值。
菌体杆状，直或接近直，0.3 – 2.2X1.2 – 7.0微米。
多数运动，鞭毛典型侧生，形成抗热内生孢子。
在一个孢子囊细胞中，孢子不多于1个。
暴露与空气中时，不妨碍孢子的形成。
革兰氏反应为阳性，仅在生长早期为阳性、阴性。
有机体化能营养，利用多种底物进行严格呼吸代谢，严格发酵代谢或呼吸和发酵二者兼有的代谢。
在呼吸代谢中，最终的电子受体是分子氧，在一些种中可以用硝酸盐代替氧，大多数种产接触酶，严格好养或兼性厌氧。
淀粉酶是一种用途极为广泛的生物催化剂，可应用于面包制造业淀、粉的糖化和液化、纺织品脱浆、造纸、清洁剂工业、化学、临床医学的分析和制药业等。
淀粉酶家族包括α-淀粉酶，β-淀粉酶和葡萄糖淀粉酶。
二、实验目的1．了解微生物分离纯化的原理及微生物分离纯化常用方法和技术；2．掌握从土壤中筛选产淀粉酶菌株的原理及方法；3．掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力测定的原理及方法；4．培养学生自行设计实验流程、综合分析解决问题及判断实验结果的能力；5．对所学习过的微生物实验方法进行综合技能训练；6．从不同环境土壤样品中筛选出能产淀粉酶的芽孢杆菌，并分析比较各产淀粉酶菌株的产淀粉酶活力及总结各芽孢杆菌在土壤中的分布情况。
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H/C 2． 08 2． 49 1． 84 1． 45 1． 78 1． 68 1． 71 1． 56
2． 2 菌株的复筛 H /C 值在一定程度上反映了产淀粉酶酶活的 高低，检测迅速，可用作初筛的判断标准。但 H / C 值受多种因素影响与淀粉酶酶活有一定的不一致 性［5］，如菌种特性、培养时间、培养基成分、酶的稳 定性、酶 的 扩 散 速 度、底 物 浓 度、平 板 厚 度 等。 因
（ 责任编辑：许海丽）
收稿日期：2011 － 03 － 22 作者简介：徐 琛（ 1984—） ，男，江苏启东人，助教。
总第 147 期
齐鲁师范学院学报
·145·
释至 10 － 4 。 取 200μL10 － 4 菌 悬 液 涂 布 于 筛 选 培 养 基 上，
37℃ 培养 24h。在菌落周围滴加卢戈氏碘液，观察 菌落周围 是 否 出 现 透 明 水 解 圈，并 测 定 菌 落 及 水 解圈直径，计算其比值（ HC 比值） 。挑取 HC 比值 较大的菌种分离纯化，保存。
终点，记录时间即为液化时间。
淀粉酶活力 D（ U）
=6
× 10 × 1% t ×2
=3/t
t———液化时间（ min） ；
1． 2． 4 菌种的初步鉴定
对所筛选的菌种进行革兰氏染色、芽孢染色，
通过显微观察及菌落形态进行初步鉴定。
2 结果与分析
2． 1 菌株的初筛
利用筛选培养基从土样中筛选产淀粉酶的菌
1 材料与方法 1． 1 实验材料 筛选培养基［5］： 淀粉 20． 0g，酵母膏 5． 0g，蛋白 胨 10g，Na2 HPO4 5． 0g，MgSO4 ·7H2O 0． 1g，NaCl 0． 1g，琼脂 20． 0g，水 1000mL，pH7． 0 － 7． 4。0． 1 MPa 灭菌 20 min。 发酵 培 养 基［5］： 淀 粉 20． 0g，蛋 白 胨 20g， Na2 HPO4 5． 0g，MgSO4 ·7H2 O 0． 1g，NaCl 0． 1g，水 1000mL，pH7． 0 － 7． 4。0． 1 MPa 灭菌 20 min。 卢戈氏 碘 液： 碘 1g，碘 化 钾 2g，加 水 定 容 至 300mL。 碘原 液： 碘 11g，碘 化 钾 22g，加 水 定 容 至 500mL。 比色稀碘液： 取碘原液 2mL，加碘化钾 20g，用 水定容到 500mL。 土样来源： 林地土壤、草地土壤、湖底淤泥。 1． 2 实验方法 1． 2． 1 产淀粉酶菌株的初筛 称取土样 1 g，放于 300mL 无菌水中打散，制 成菌悬液，将菌悬液置于 80℃ 水浴 20 min，梯度稀
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
株。经过多次筛选并分离纯化后，获得 8 个菌株，
其菌落在滴加碘液后出现水解圈。即淀粉被水解
成了不被碘液着色的物质，如糊精、麦芽糖和葡萄
糖。水解圈与菌落直径的比值（ H /C） 在一定程度
上反映了菌株产生淀粉酶的能力，H / C 值越大产
淀粉酶越多。8 个菌株的水解圈与菌落直径、H / C
值见表 1。
杆菌的分离筛选及其紫外诱变育种［J］． 华北农学 报，2009，（ 3） ． ［5］ 王丽丽，仪宏，田庄，等． α － 淀粉酶产生菌的平板筛 选法 的 研 究 与 改 进［J］． 河 北 轻 化 工 学 院 学 报， 1998，（ 2） ． ［6］ 刘雅琴，陈海魁，孔令全． α － 淀粉酶产生菌的分离 筛选与诱变选育［J］． 畜牧与饲料科学，2010，（ 9） ．
1． 2． 2 产淀粉酶菌株的复筛 在 500 mL 三角瓶装入 100 mL 发酵培养基，将 初筛菌株接入其中，37℃ ，200 r / min 摇瓶培养 70 h，取发酵液测定酶活。 1． 2． 3 淀粉酶酶活测定方法 淀粉酶活测定采用碘消色法［6］： 在 pH 值 6． 0， 温度 60℃ 的条件下，每小时催化水解 1 g 可溶性淀 粉成为糊精的酶量作为一个酶活力单位。 在 25mL 的比色试管中加入 1% 可溶性淀粉溶 液 10mL，60℃ 水浴 5min。加入 2mL 发酵液，混匀。 开始计时，定时取出一滴反应液于比色板，滴加比
目前生产应用的淀粉酶主要来源于微生物， 并集中在 几 种 细 菌 和 真 菌 中，尤 其 以 芽 孢 杆 菌 所 产的 淀 粉 酶 较 多［2 － 4］。其 原 因 首 先 芽 孢 杆 菌 属 （ Bacillus） 中能产生淀粉酶的菌种较多； 其次，芽孢 杆菌属产 的 淀 粉 酶 有 较 好 的 应 用 价 值，如 凝 结 芽 孢杆菌、枯草 芽 孢 杆 菌、嗜 热 芽 孢 杆 菌、地 衣 芽 孢 杆菌产的淀粉酶具有耐热性； 再次，芽孢杆菌应用 历史悠久，广 泛 用 于 饲 料 添 加 剂，其 安 全 性 有 保 证。本文 主 要 从 土 壤 中 筛 选 产 淀 粉 酶 的 芽 孢 杆 菌，并分离纯化，为工业上生产淀粉酶制剂及饲料 添加剂提供菌株。
第 26 卷 第 5 期 2011 年 10 月
齐鲁师范学院学报 Journal of Qilu Normal University
Vol． 26 No． 5 Oct． 2011
产淀粉酶芽孢杆菌的筛选和分离
徐琛
（ 齐鲁师范学院 生物系，山东 济南 250013）
摘要：利用筛选培养基从土壤中分离出 8 株产淀粉酶的菌株，测得其水解圈直径与菌落直径的比值，在 1． 4
徐 琛： 产淀粉酶芽孢杆菌的筛选和分离
表 2 菌株淀粉酶酶活力测定结果
A42
C31
C32
C41
C42
2'50"
7'35"
2'20"
3'9"
4'8"
1． 06
0． 40
1． 29
0． 95
0． 73
D21 4'31" 0． 66
2011 年第 5 期
D31 4'40" 0． 64
2． 3 菌株的初步鉴定 A42、C32 两 菌 株 在 筛 选 培 养 基 上 培 养 24 h 后，菌 落 呈 乳 白 色，边 缘 不 光 滑，直，形 态 不 规 则， 质地干燥，表 面 粗 糙 呈 脉 状。 两 菌 株 在 显 微 镜 下 观察时，菌体形态呈短杆状，经革兰氏染色后结果 呈阳性。菌体经芽孢染色后观察，中央着生芽孢， 芽孢呈卵圆型。可判断 A42、C32 两菌株为芽孢杆 菌属（ Bacillus） 。 3 结论及展望 利用筛选培养基从土壤中筛选出两株具有较 高淀粉酶酶活的菌株，经初步鉴定为芽孢杆菌属。 为 进 一 步 提 高 菌 株 的 生 产 应 用 价 值，下 一 步 工作主要为： 通过发酵条件优化提高菌株产淀粉 酶酶活； 利用诱变的方法改良菌株特性，主要包括 产淀粉酶酶活、对高温的耐受性、最适 pH 值范围。
淀粉 酶 是 催 化 淀 粉 水 解 的 一 类 酶 的 总 称，广 泛存在于 动 物、植 物 和 微 生 物 中。 目 前 淀 粉 酶 广 泛应用多 种 领 域［1］，在 发 酵 工 业 中 淀 粉 酶 可 用 于 淀粉原料的液化及糖化工艺； 在食品工业中淀粉 酶可用于面 包 焙 烤，使 其 体 积 更 大，颜 色 更 好，颗 粒更柔软； 在农业中淀粉酶可作为饲料添加剂，降 解饲料中淀粉营养成分以利于动物吸收利用； 此 外，淀粉酶在 医 疗 卫 生、废 料 处 理、纺 织 印 染 等 领 域都有广泛应用。
色稀碘液，当 紫 色 逐 渐 转 变 为 棕 橙 色 时 即 为 反 应
表 1 产淀粉酶菌株 H /C 值
菌株编号 A41 A42 C31 C32 C41 C42 D21 D31
菌落直径（ C） / mm 3． 9 4． 5 3． 7 5． 5 6． 0 4． 7 4． 5 5． 0
水解圈直径（ H） / mm 8． 1 11． 2 6． 8 8． 0 10． 7 7． 9 7． 7 7． 8
The Screening and Isolation of Bacillus Strains Producing Amylase
Xu Chen
（ Department of Biology，Qilu Normal University，Jinan 250013，China）
Abstract： 8 bacteria strains with activity of amylase were isolated from soil． The ratio of hydrolysis zone diameter to colony diameter was 1． 4 － 2． 4． By fermentating the liquid culture medium，2 of the strains had high activity of amylase，which were 1． 06，1． 29． By Gram＇s staining and spore staining，the 2 strains were identified as Bacillus strains． Key words： Bacillus； Amylase； Isolation
参考文献： ［1］ 冯健飞． α － 淀粉酶的应用及研究进展［J］． 现代农
业科技，2010，（ 17） ． ［2］ 唐丽江，王振华，王迪． 高产淀粉酶芽孢杆菌菌株的
筛选［J］． 安徽农业科学，2009，（ 12） ． ［3］ 张双民，． 土壤中淀粉酶高产菌株的分离及产酶条
件的优化［J］． 土壤肥料，2006，（ 2） ． ［4］ 谢凤行，赵玉洁，周可，等． 产胞外淀粉酶枯草芽孢
此若准确 判 断 菌 株 产 淀 粉 酶 酶 活，需 液 体 发 酵 培 养，测其淀粉酶酶活。
将所筛选的 8 株菌接入发酵培养基进行培养， 取发酵液测定淀粉酶酶活力，结果如表 2。其中菌 株 A42、C32 酶活较高，有一定的应用价值。