土壤中芽孢杆菌的分离及初步鉴定
浙江师范大学微生物实验报告 产淀粉酶芽孢杆菌的分离与初步鉴定
产淀粉酶芽孢杆菌的分离与初步鉴定吴月婷摘要：从土壤中分离得到一株产淀粉酶的芽孢杆菌X-1，对其进行形态学鉴定和生理生化特性分析，包括菌落形态、菌体形态、糖利用情况、生长pH范围、耐盐范围、明胶液化和酪素的水解等，初步鉴定为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）或地衣芽孢杆菌（Bacillus lentus）。
关键词：产淀粉酶；芽孢杆菌；分离；初步鉴定淀粉酶(Amylase)是指能分解淀粉糖苷键的一类酶，主要包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶和异淀粉酶等，在生物体的糖类代谢中起重要的作用。
其中α-淀粉酶（1,4-α-D-glucan glucanohydrolase）能水解淀粉大分子的α-1,4-糖苷键，生成糊精、麦芽寡糖、麦芽糖、葡萄糖等水解产物[1]。
α-淀粉酶在植物、动物和微生物中都广泛存在，常见的产淀粉酶微生物有芽孢杆菌、放线菌、黑曲霉、米曲霉、红曲霉和根霉等[2-7]。
芽孢杆菌属(Bacillus)是一类能产生芽孢的革兰氏阳性细菌，具有较强的抵抗不良环境的能力，如耐酸碱、耐高温的能力较强。
芽孢杆菌中较多菌种具有高淀粉酶、蛋白酶活性，近年来被广泛地用于动物饲料业，特别是作为水产饲料的添加剂。
例如在银鲫饲料中添加了0.1%的芽孢杆菌后，银鲫肠道和肝胰脏的淀粉酶活性提高了3.7%和129.5%[8]，能够有效帮助动物对饲料的消化吸收，同时作为一种良好的免疫激活剂，能增强动物的免疫力和抗病力[9]。
此外，利用芽孢杆菌产生α-淀粉酶，在食品生产中也有广泛应用。
笔者从土壤中分离得到产淀粉酶的芽孢杆菌，进行种属的初步鉴定，以期为芽孢杆菌在动物饲料业和食品生产中的发开应用提供理论依据。
1 材料与方法1.1 材料土壤材料采集于浙江师范大学取杏园食堂草坪土壤表层5~10厘米下的肥土。
1.2 培养基淀粉培养基：可溶性淀粉1%、蛋白胨l%、葡萄糖0.5%、Nacl 0.5%、牛肉膏0.5%、琼脂粉0.8%。
芽孢杆菌的筛选和鉴定的一般流程
芽孢杆菌的筛选和鉴定的一般流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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生防芽孢杆菌的分离筛选与初步鉴定
２ １ 年 ２月 ０１
现 代 农 药
Ｍ ｏ ｅ Ａｇ ｏ ｈ ｍｉ ａｓ ｄ ｍ ｒ ｃ ｅ ｃ ｌ
ＶＯ ．０ ＮＯ １ １ １ ． Ｆｂ２ １ ｅ ． ０ｌ
生 防 芽孢 杆 菌 的分 离 筛 选 与初 步鉴 定
任 士伟 ，邢 小霞 ，董向 丽
（ 岛农 、 大 学 农 学 与 植 物 保 护 学 院 ， 山东 青 岛 青 ２６０ ） ６ １９
中图分类号：Ｓ４ ２ ２ ８ ． ９ ２ 文献标识码 ：Ａ ｄｉ ０３ ６ ８ｉ ｎ１７ ．２４２ １．１ １ ｏ：１．９９ ．ｓ ． １ ８ ．０ １ ． ３ ｓ ６ ５ ０ ０
Ｉ ｏ ａ ｉ ｎ，Ｓ ｒ ｅ ｎ ｄ Ｐｒ ｌｍ ｉ ｒ ｄｅ ｉ ｃ ｔｏ ｏ ｏｎｔ ｏ ｔ ａ ｎｓｏｆ ｃｌｕｓｓ ｓ ｌ ｔｏ ｃ ｅ ｎｉ ｇ ａｎ ｅｉ ｎａ ｙ Ｉ ｎｔｆ ａ ｉ ｎ ｏｆＢｉ ｃ ｉ ｒ ｌＳ ｒ ｉ Ｂａ ｉｌ ｐｐ．
Ａｂｓ ｒ ｔ ０Ｓｒｉ ｓｏ ｃｌ ｓｓｐ ｗｅｅｉｏａｅ ｏ ７ｓｉ ｓｍｐ ｅ ｓｎ ｅ ｅ ｔｄｐａｅｓｒａ ｉｇ ａ ｄ４ ｓｒｉｓｏ ｔ ａｃ ：３ ｔ ｎ ｆ ａ Ｂａ ｉｕ ｐ ． ｒ ｓｌｔｄｆ ｍ ｏｌ ａ ｌｓ ｉｇｒｐ ａｅ ｌｔ ｔ ｋｎ ， ｎ ｔａｎ ｆ ｌ ｒ ｕ ｅ
ｔ ｔ ｅ ｌｎ ａ ｈ ｇ ｎ ｃｆ ｎ ｉ ｒ ｖ ｄ ｂ ｅｍｅ ｈ ｄｏ ｐ ａｅｔ ｓ． ｅｄ ｔ ｃ ｅ ａ ｅ ｓ ｃ ｎ ａ ｙ ｍｅ ａ ｏ ｉ ｓｏ Ｂａ ｉ ｕ ｏ ｏ ｈ ｒ ａ ｔ ｔ ｏ ｅ ｉ ｇ ｏ ｅ ｙ ｔ ｔ ｏ ｆ ｌｔ ｅ ｔ Ｗ ｅ ｅ ｔｄ ｔ ｔ ｈ ｅ ｏ ｄ ｒ ｔ ｂ ｌ ｅ ｆ ｃｌ ｓ ｐ ｐ ｕ ｐ ｈ ｈ ｔ ｔ ｌ
枯草芽孢杆菌实验报告
微生物技术综合实验年级：13级生物工程（专升本）班级：学号：姓名：徐红贞指导老师：刘凤霞教授日期：二零一三十月五号目录1实验目的及原理 (1)1.1实验目的 (1)1.2实验原理 (1)2实验材料 (1)2.1实验仪器 (1)2.2实验试剂 (1)2.3培养基 (2)2.3.1 生长培养基 (2)2.3.2鉴定培养基 (2)2.3.3摇瓶培养基 (2)3试验方法 (2)3.1仪器的准备 (2)3.2培养基的配置 (2)3.3初步筛选及鉴定 (2)3.3.1采集土样 (3)3.3.2富集培养 (3)3.3.3稀释分离、纯化 (3)3.3.4初筛 (3)3.4复筛及鉴定 (4)3.4.1革兰染色 (4)3.5酶活力的测定 (4)3.5.1摇瓶培养 (4)3.5.2酶液稀释 (4)3.5.3酶液测定 (4)4结果分析 (5)4.1平板涂布分离 (5)4.2平板划线分离 (5)4.3初筛 (5)4.4复筛 (5)4.5摇瓶培养 (6)4.6酶活力测定 (6)5参考资料 (7)6附录 (8)微生物上游技术综合实验枯草芽孢杆菌的分离、纯化、筛选及鉴定1.实验目的及原理1.1实验目的（1）学习从土壤中分离、纯化枯草芽孢杆菌的原理和方法。
（2）学习掌握枯草芽孢杆菌的鉴定方法。
（3）掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力的测定的原理和方法。
（4）培养学生综合应用微生物实验方法的能力。
（5）培养学生自行设计实验流程、综合分析问题解决问题和判断实验结果的能力。
1.2实验原理选择合适与待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
将土壤稀释液倒在不同类型的培养基平板上，在适宜的环境中培养几天，细菌或是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。
将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养基中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。
西藏土壤芽孢杆菌的分离鉴定及生防促生菌筛选
櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄［２０］ＷｅｉＹＢ，ＬｕＭＡ，ＹｕＱＹ，ｅｔａｌ．Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｔｈｅｄｙｎａｍｉｃｓｏｆｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｒｉｃｅ－ｃｒａｗｆｉｓｈｆａｒｍｉｎｇｉｎＱｉａｎｊｉａｎｇｃｏｕｎｔｙ，ＣｈｉｎａｕｓｉｎｇＬａｎｄｓａｔｔｉｍｅｓｅｒｉｅｓｉｍａｇｅｓ［Ｊ］．ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｙｓｔｅｍｓ，２０２１，１９１：１０３１６７．［２１］曹凑贵，江 洋，汪金平，等．稻虾共作模式的“双刃性”及可持续发展策略［Ｊ］．中国生态农业学报，２０１７，２５（９）：１２４５－１２５３．［２２］ＡｖａｔＳ，ＥｍａｍＹ．Ｐｌａｎｔｇｒｏｗｔｈｒｅｇｕｌａｔｏｒ（ｅｔｈｅｐｈｏｎ）ａｌｔｅｒｓｍａｉｚｅ（ＺｅａｍａｙｓＬ．）ｇｒｏｗｔｈ，ｗａｔｅｒｕｓｅａｎｄｇｒａｉｎｙｉｅｌｄｕｎｄｅｒｗａｔｅｒｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｏｎｏｍｙ，２００８，７（１）：４１－４８．［２３］ＺｈａｎｇＸＢ，ＷａｎｇＹ，ＷａｎｇＸＷ，ｅｔａｌ．Ａｖｅｒｙ－ｌｏｎｇ－ｃｈａｉｎｆａｔｔｙａｃｉｄｓｙｎｔｈｅｓｉｓｇｅｎｅ，ＳＤ３８，ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓｐｌａｎｔｈｅｉｇｈｔｂｙａｃｔｉｖａｔｉｎｇｅｔｈｙｌｅｎｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎｒｉｃｅ［Ｊ］．ＴｈｅＰｌａｎｔＪｏｕｒｎａｌ，２０２２，１１２（４）：１０８４－１０９７．［２４］赵 赫，陈受宜，张劲松．乙烯信号转导与植物非生物胁迫反应调控研究进展［Ｊ］．生物技术通报，２０１６，３２（１０）：１－１０．［２５］ＫａｓｈｉｗａｇｉＴ，ＩｓｈｉｍａｒｕＫ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆａｌｏｃｕｓｆｏｒｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｌｏｄｇｉｎｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｉｎｒｉｃｅ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００４，１３４：６７６－６８３．［２６］ＺｈａｎｇＪ，ＬｉＧＨ，ＳｏｎｇＹＰ，ｅｔａｌ．Ｌｏｄｇｉｎｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｈｉｇｈ－ｙｉｅｌｄｉｎｇｒｉｃｅｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＦｉｅｌｄＣｒｏｐｓＲｅｓｅａｒｃｈ，２０１４，１６１：６４－７４．［２７］ＺｈａｏＹＴ，ＬｖＹＪ，ＺｈａｎｇＳＡ，ｅｔａｌ．Ｓｈｏｒｔｅｎｉｎｇｉｎｔｅｒｎｏｄｅｓｎｅａｒｅａｒ：ａｎａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｔｏｒａｉｓｅｍａｉｚｅｙｉｅｌｄ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｔＧｒｏｗｔｈＲｅｇｕｌａｔｉｏｎ，２０２２，４１：６２８－６３８．董晓雪，彭国袁，常卓凡，等．西藏土壤芽孢杆菌的分离鉴定及生防促生菌筛选［Ｊ］．江苏农业科学，２０２３，５１（２３）：１１４－１２３．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２３．２３．０１８西藏土壤芽孢杆菌的分离鉴定及生防促生菌筛选董晓雪１，彭国袁１，常卓凡１，于文娟２，旺 姆１（１．西藏农牧学院植物科学学院，西藏林芝８６００００；２．四川省农业科学院植物保护研究所，四川成都６１００００） 摘要：青稞是西藏人民的主要粮食作物，在种植生长过程中有多种病害对其产生危害，直接影响青稞的产量和质量。
枯草芽孢杆菌的分离与鉴定方法
枯草芽孢杆菌的分离与鉴定方法枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种广泛存在于自然环境中的细菌，具有重要的应用价值，被广泛应用于农业生产中的抗病、增产、改善土壤等方面。
因此，对枯草芽孢杆菌的分离与鉴定方法进行研究具有重要意义。
以下将介绍枯草芽孢杆菌的分离与鉴定方法。
一、枯草芽孢杆菌分离方法：1. 样品采集：根据研究需要，选择合适的样品，如土壤、植物组织、水等。
采集样品时要注意避免外源性污染，尽量避免使用过多的抗生素。
2. 样品处理：将采集到的样品进行处理，如土壤样品需要经过悬浮液稀释法进行样品制备，植物组织需要进行消毒处理等。
3. 分离培养基选择：根据枯草芽孢杆菌的生长特性，选择合适的分离培养基。
通常可以选用液体培养基（如TSA、LB培养基）或固体培养基（如TSA、PDA培养基）。
固体培养基还可以添加适当的抑菌剂来抑制其他细菌的生长。
4. 分离培养：将样品制备好后，均匀涂布在选择的培养基上，然后进行培养。
液体培养基需要在适当的温度和速度下进行摇床培养，固体培养基需要静置培养。
培养时间一般为24-48小时。
5. 子培养：在培养基上出现孤立的菌落后，用离心管吸取菌落，再划线接种到新的培养基上，进行连续传代培养。
一般选择形态特征明显、菌落形状规则的菌落进行子培养。
6. 纯化：通过连续传代培养，最终获得纯种的枯草芽孢杆菌。
纯化的细菌可以通过形态观察、生理生化特性检测等方法进行初步鉴定。
二、枯草芽孢杆菌鉴定方法：1. 形态观察：观察菌落形态、色素、菌体形态等。
枯草芽孢杆菌的菌落通常呈乳白色或灰白色，形状为圆形或不规则形。
2. 胞内酶活性检测：通过检测枯草芽孢杆菌的胞内酶活性来鉴定，如淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等。
常用方法为利用不同培养基的酶基质进行相关酶活性检测。
3. 生理生化特性检测：包括对枯草芽孢杆菌的耐温、耐酸碱性、氧化还原反应等生理生化特性的检测。
4. 分子生物学鉴定方法：利用分子生物学方法，如PCR、16S rRNA基因测序等来鉴定枯草芽孢杆菌。
芽孢杆菌的分离鉴定2
芽孢杆菌的分离与鉴定实验器材：铲子（1）,盆（1）,电子天平（1），洗耳球(1)，接种勾和环（1）,1ml吸管（7）,玻璃涂棒（1）,平皿（12）,250ml带玻璃珠三角瓶（1）,双层纱布（1）,试管（7），标签纸（1）,恒温箱，显微镜（4）。
实验试剂：无菌水，1mol/L NaOH、1mol/L HCL、草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、复红液、5%孔雀绿、沙黄、乙醚、吲哚试剂、40%NaOH、肌酸牛肉蛋白胨培养基：牛肉膏1g，蛋白胨2g，Nacl 1g，水200ml，ph7.2，琼脂3.0-4.0g；生孢培养基：0.1%蛋白胨，0.1%葡萄糖，0.07%酵母粉，0.02%硫酸镁晶体（七水），0.02%硫酸铵，0.1%磷酸氢二钾（3水），1.5%琼脂；一、土壤中芽孢杆菌的筛选A.培养基配置步骤：（1）称量：按比例称取牛肉膏、蛋白胨、氯化钠，共置于烧杯中；（2）溶解：先加入适量无菌水，加热使其溶解，再补足水至总量；（3）调pH：用1mol/L NaOH或1mol/L HCL调PH至7.6；（4）过滤：用滤纸过滤；（5）融化琼脂：加入3.5克琼脂，继续加热至完全溶解，补足因加热蒸发失去的水分；（6）分装与包扎：摆斜面（7）灭菌：121℃，灭菌20minB.实验步骤：（一）采集土样: 每个采样点选取土壤较肥沃、有代表性的地块约0．2 cm2，五点法采集。
取5～10cm深土壤，每一个土样约500 g。
将土样放入无菌的纸袋中，并记录采集的时间、地点、植被类型，4℃保存备用。
（二）土壤悬液制备：称取10g土样，放入盛有99ml无菌水并带有玻璃珠的250ml三角瓶中，振荡摇晃20min，使土样与水充分混合，将细胞分散，两层纱布过滤，然后将锥形瓶置于90℃水浴锅，加热20min，制备成土壤悬液。
（三）土壤悬液稀释：用一支1ml的无菌吸管从锥形瓶吸取过滤的土壤悬液1ml加入盛有9ml 无菌水的大试管中，震荡均匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一只盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成10-1 、 10-2 、 10-3、 10-4、10-5、 10-6 不同的稀释度。
从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌实验方案报告
从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌实验方案报告实验方案报告：从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌一、实验目的：本实验旨在从土壤中分离出产淀粉酶的芽孢杆菌，为进一步研究淀粉酶的性质和应用提供材料基础。
二、实验原理：产淀粉酶的芽孢杆菌主要存在于土壤中，它们具有高效分解淀粉的能力。
本实验通过稀释土壤样品，制备土壤悬浮液，然后采用平板和液体培养基法进行分离纯化。
三、实验步骤：1.土壤样品的采集2.土壤样品制备将土壤样品采样袋中的土壤倒入无菌的研钵中，使用无菌铁锹将土壤表面的杂质去除，然后将土壤样品与等量无菌蒸馏水混合浸泡2小时。
使用无菌玻璃棒搅拌1分钟，然后过滤土壤悬浮液，得到土壤样品的0.1倍稀释液。
3.平板培养基分离将制备好的土壤样品0.1倍稀释液分别取0.1mL均匀涂布在含有淀粉的固体培养基平板上，用无菌的铁锹均匀摊开。
将培养皿倒立放置在培养箱中，以30℃恒温培养。
4.鉴定单菌菌落在培养平板上观察菌落生长情况，挑选形态不同的菌落，并进行分离培养。
将单个菌落挑选到含有淀粉的液体培养基中，用无菌胶头移液管进行吸取和移植。
5.验证淀粉酶活性将挑选分离得到的菌株分别接种在含淀粉的液体培养基中，并进行培养。
通过观察培养基颜色的变化、液体浑浊度的变化以及淀粉浓度的定量检测，判断菌株产淀粉酶的能力。
四、实验结果：根据实验步骤所述，从土壤中成功分离得到了产淀粉酶的芽孢杆菌。
通过观察培养基的颜色变化和液体浑浊度的变化，可以初步判断杆菌产淀粉酶的能力。
五、实验讨论与结论：通过本实验的步骤操作，成功分离出产淀粉酶的芽孢杆菌。
该实验为进一步研究淀粉酶的性质和应用提供了材料基础。
此外，实验中还可以对分离得到的菌株进行基于16SrRNA基因的鉴定，对其进行淀粉酶的基本特性、产酶条件和产酶规律等方面的研究。
这对于我们深入了解淀粉酶功能机制，以及在饲料、食品、生物工程等领域的应用具有重要意义。
六、实验心得：通过本次从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌的实验，我学会了土壤样品的制备和分离培养的方法，掌握了菌株的挑选和鉴定技巧，对淀粉酶产生的条件和酶活性的检测有了初步了解。
土壤中芽孢杆菌的分离及初步鉴定
土壤中芽孢杆菌的分离及初步鉴定一、引言芽孢杆菌（Bacillus）是一类广泛存在于土壤中的细菌，具有较高的耐受性和适应能力。
研究土壤中芽孢杆菌的分离和鉴定，对于了解土壤微生物群落的多样性和功能具有重要意义。
本文旨在介绍土壤中芽孢杆菌的分离方法及初步鉴定步骤，以供参考。
二、芽孢杆菌的分离方法2.1 采样1.选择适当的采样地点，如农田、林地或草地等。
2.使用无菌铁铲或无菌采样袋等工具采集土壤样品，避免污染。
3.采集多个不同位置的土壤样品，以增加样品的代表性。
2.2 分离培养基的选择1.常用的分离芽孢杆菌的培养基有营养琼脂培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基等。
2.培养基中可以添加适当的抑菌剂，如青霉素或链霉素，以抑制其他细菌的生长。
2.3 分离培养1.取适量土壤样品加入到分离培养基中，均匀涂布于琼脂平板上。
2.使用无菌鉴别环或无菌棉签，在培养基表面划线，以分离不同的菌落。
3.将琼脂平板倒置放入恒温培养箱中，培养温度一般为30°C。
4.观察培养基上的菌落形态，并进行初步鉴定。
三、芽孢杆菌的初步鉴定步骤3.1 形态特征观察1.观察菌落的形状、颜色和质地等特征。
2.观察菌落的边缘形态，如光滑、凹凸不平或褶皱等。
3.观察菌落的直径和高度等参数。
3.2 石蜡切片染色1.从培养基上挑取一颗纯培养的菌落，用无菌的刮片将其转移到玻璃片上。
2.在玻璃片上加入一滴碘酒，静置片刻。
3.用无菌的刮片将菌落与碘酒混合均匀。
4.加入一滴无菌水，冲洗碘酒。
5.加入一滴甲苯，使细胞透明化。
6.加入一滴碱性溴甲酮，染色。
7.加入一滴甲苯，清洗溴甲酮。
8.加入一滴封片剂，加盖封片。
3.3 微观形态观察1.使用光学显微镜观察石蜡切片。
2.观察细胞形态、大小、排列方式等特征。
3.观察细胞内部结构，如芽孢、胞内颗粒等。
3.4 生理生化特性测试1.进行革兰氏染色，观察细胞壁结构。
2.进行氧需求实验，观察芽孢杆菌的氧耐受性。
3.进行酸碱度测试，观察芽孢杆菌的酸碱耐受性。
芽孢杆菌筛选实验报告
一、实验目的1. 了解芽孢杆菌的基本特性。
2. 掌握从土壤中筛选芽孢杆菌的方法。
3. 学习微生物的纯化与鉴定技术。
二、实验原理芽孢杆菌属于革兰氏阳性菌，具有较强的抗逆性和生存能力。
在土壤中，芽孢杆菌广泛分布，具有丰富的种类。
本实验通过选择含有淀粉的培养基，利用芽孢杆菌产生淀粉酶的特性，从土壤中筛选出芽孢杆菌，并对筛选出的菌株进行纯化和鉴定。
三、实验材料1. 实验仪器：培养皿、移液枪、玻璃棒、天平、酒精灯、高压灭菌锅、恒温培养箱等。
2. 实验试剂：淀粉、琼脂、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、葡萄糖、碘液等。
3. 实验土壤：采集于校园周边土壤。
四、实验步骤1. 土壤样品的处理：将采集的土壤样品进行充分混匀，称取1g土壤置于无菌烧杯中，加入10ml无菌水，用玻璃棒搅拌后静置30分钟，取上清液备用。
2. 稀释涂布：将土壤样品上清液进行10倍梯度稀释，取适量稀释液分别涂布于含淀粉的培养基平板上。
3. 培养与观察：将涂布好的平板倒置，置于37℃恒温培养箱中培养24小时，观察菌落生长情况。
4. 初步筛选：挑选生长良好的菌落进行纯化培养，采用平板划线法进行纯化。
5. 菌株鉴定：对纯化后的菌株进行形态观察、革兰氏染色、生化试验等鉴定。
6. 淀粉酶活性测定：采用淀粉酶活力测定试剂盒对筛选出的菌株进行淀粉酶活性测定。
五、实验结果与分析1. 土壤样品处理：经过充分混匀和搅拌，土壤样品上清液呈现浑浊状态，表明土壤中存在大量微生物。
2. 稀释涂布：涂布后的平板在培养箱中培养24小时后，观察到菌落生长良好，表明土壤中存在大量芽孢杆菌。
3. 初步筛选：通过平板划线法，成功纯化出多个菌落。
4. 菌株鉴定：经过形态观察、革兰氏染色、生化试验等鉴定，初步确定筛选出的菌株为芽孢杆菌。
5. 淀粉酶活性测定：对筛选出的菌株进行淀粉酶活性测定，结果显示其中一株菌株的淀粉酶活性较高。
六、实验结论1. 成功从土壤中筛选出芽孢杆菌。
2. 通过形态观察、革兰氏染色、生化试验等鉴定，初步确定筛选出的菌株为芽孢杆菌。
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四川畜牧兽医·２００８·０２ 期·总第 ２０８ 期
３号 菌 ＋ ／－
＋ ／－
－ ／－
－ ／－
－ ／－ ＋ ＋ －
４号 菌 ＋ ／－
－ ／－
－ ／－
－ ／－
－ ／－ ＋ ＋ －
２．３ 抗 药 性 试 验 培 养 １２ ｈ 后， 可见明显的抑菌环出现。根 据抑菌环直径大小可知， ４ 种芽 孢杆菌对所试 ７ 种抗生素均敏 感。其中 １ 号菌对氯霉素， 卡那 霉素， 环丙沙星， 链霉素， 四环素 为高度敏感（ 直径大于 １．５ ｃｍ） ； 对复方新诺明， 氨苄青霉素为 中 度敏感（ 直径 大 于 １ ｃｍ， 小 于 １．５ ｃｍ） 。 ３ 结论及讨论
直到长出单个菌落。再分别挑取 单个菌落划线接种于生孢培养 基， 于 ３７ ℃培养箱中培养， 直到
振荡试管， 以使空气中的氧溶 入， 置 ３７ ℃恒 温 箱 中 保 温 １５～ ３０ ｍｉｎ 后， 观察结果。若培养液
胨 ， ０．５％牛 肉 膏 ， ０．２％酵 母 粉 ， 长出单个菌落。
呈 红 色 ， 即 为 ＶＰ 试 验 阳 性 反
本 试 验 从 土 壤 中 分 离 出 ４ 分别涂布于 ２０ 个 ＬＢ 琼 脂 平 板
ＶＰ 试验 （ 乙酰甲基甲醇试
种芽孢杆菌， 并进行初步鉴定， 上， 于 ３７ ℃培养箱中培养至长 验） ： 用无菌接种环挑取单个菌
为今后进一步试验打下基础。
出单个菌落。
落分别接种于装有 ５ ｍＬ 葡萄糖
１ 材料与方法
杰 细 菌 鉴 定 手 册 》（ 第 八 版 ） ， 发
现该 ４ 种细菌均呈现出芽孢杆
菌属的菌落形态及菌体形态特 试
征。经过生孢培养后， ４ 种细菌 验
均产生芽孢， 呈现出了芽孢杆菌 研 最主要的特征， 可以证明该 ４ 种 究
细菌均为芽孢杆菌属成员。由此 ２
可以判定， 从辽宁省某地区采集
ＳＩＣＨＵＡＮ ＸＵＭＵＳＨＯＵＹＩ
试 验
土壤中芽孢杆菌的分离及初步鉴定
研
究
邹 伟 １， 赵玉军 １， 陈晓月 １， 海 洋 １， 金苗苗 １， 杨剑洁 ２， 刘 永 １
１２
（ １．沈阳农业大学畜牧兽医学院， 辽宁 沈阳 １１０１６１； ２．鞍山市动物疫病控制中心， 辽宁 鞍山 １１４０００）
ＳＩＣＨＵＡＮ ＸＵＭＵＳＨＯＵＹＩ
中图分类号： Ｓ８５２．６１６ 文献标识码： Ｂ 文章编号： １００１－ ８９６４（ ２００８） ０２－ ００２４－ ０２
胨， １％ＮａＣｌ； 生孢培养基： ０．１％ 种 环 分 别 于 ＬＢ 琼 脂 平 板 上 划 ＮａＯＨ 溶 液 １０～２０ 滴 ， 并 用 牙
蛋 白 胨 ， ０．１％ 葡 萄 糖 ， ０．０７％ 酵 线接种， 于 ３７ ℃培养箱中培养， 签 挑 入 约 ０．５～１ ｍｇ 微 量 肌 酸 ，
母 粉 ， ０．０２％ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ， ０．０２％ （ ＮＨ４） ２ＳＯ４， ０．１％ Ｋ２ＨＰＯ４·３Ｈ２Ｏ， １．５％ 琼 脂 ； Ｔ２ 培 养 基 ： １％ 蛋 白
１ 号菌菌落大小为 ５ ｍｍ 左 右， 菌落呈圆形， 边缘不整齐， 灰 白色， 不透明， 表面有皱褶。菌体 经革兰氏染色， 呈蓝紫色， 为革 兰氏阳性细菌。菌体为杆状， 多 散在， 其中一些菌体连接成链 状。经过生孢培养基培养后， 可 见芽孢呈椭圆状或柱状， 位于菌 体中部。
２ 号菌菌落大小为 ３ ｍｍ 左 右， 菌落也为圆形， 边缘整齐， 乳 白色， 不透明， 表面光滑。菌落边 缘呈现透明液滴， 似菌落可游 走。菌体经革兰氏染色， 呈蓝紫 色， 为革兰氏阳性细菌。菌体形 状同 １ 号菌， 菌体长度略小于 １ 号菌。经生孢培养后可见芽孢位 于菌体一端。
白方面则要明显优于大肠杆
菌。随着研究的不断深入， 芽孢 编 杆菌也必将成为外源基因最具 辑
潜力的表达宿主之一。 参考文献（ 略）
■曾
宪 春
２５
表１
生理生化试验结果
＋ ／－
１号 菌
葡萄糖 （ 产酸 ／ 产气）
＋ ／－
麦芽糖－ ／ － （ 产酸 ／ 产气）
－ ／－
鼠李糖 （ 产酸／产气）
－ ／－
蔗糖 （ 产酸／产气）
－ ／－
乳糖 （ 产酸／产气）
－ ／－
ＶＰ 试验
＋
淀粉水解试验 ＋
吲哚试验
＋
２号 菌 ＋ ／－
＋ ／－
－ ／－
－ ／－
－ ／－ ＋ ＋ ＋
１％葡 萄 糖 ； 革 兰 氏 染 色 液 ： 草 １．４ 形态学观察 首先通过肉 应， 否则为阴性。
酸 铵 结 晶 紫 ， 碘 液 ， ９５％酒 精 ， 眼 观 察 并 记 录 细 菌 的 菌 落 形 态
淀粉水解试验： 将细菌接种
番 红 复 染 液 ； 芽 孢 染 色 液 ： 萋 － 特征。之后， 通过光学显微镜观 于 含 ０．５％ 可 溶 性 淀 粉 的 Ｔ２ 琼
摘要： 芽孢杆菌是一种耐高温、高压及低 ｐＨ 值的有益微生物。本试验从土壤中分离出 ４ 种 细菌， 经初步鉴定， 判定该 ４ 种细菌均为芽孢杆菌属成员。通过进一步试验， 了解到其部分生理生 化特点及对几种药物的敏感程度， 为芽孢杆菌在工农业生产中的应用及在基因工程中的研究与 应用提供了一定的依据。
关键词： 芽孢杆菌； 土壤； 分离； 鉴定
机体无不良影响， 又不会造成环
境污染。
另外， 由于芽孢杆菌还具
有良好的分泌外源蛋白的特
性， 人们可从分子生物学角度
对其进行开发研究， 将其应用
于基因工程研究与生产中， 将
外源基因转入合适的该种菌株
中， 使其表达外源基因。当然，
对于外源蛋白表达的研究， 芽
孢杆菌还远远落后于大肠杆
菌， 但是在表达和分泌活性蛋
３ 号菌菌落大小为 ５ ｍｍ 左 右， 菌落呈圆形， 边缘整齐， 乳白
色， 不透明， 表面有皱褶。菌体经 革兰氏染色， 呈蓝紫色， 为革兰 氏阳性细菌。经过生孢培养后可 见芽孢位于菌体一端。
４ 号菌菌落大小为 ７ ｍｍ 左 右， 菌落呈圆形或椭圆形， 边缘 不整齐， 灰白色， 不透明， 表面有 明显隆起的皱褶。菌体经革兰氏 染色， 呈蓝紫色， 为革兰氏阳性 细菌。经过生孢培养后可见芽孢 位于菌体一端。 ２．２ 生理生化试 验 结果如表 １ 所示。
辑 收稿日期： ２００７－ ０９－ ２４
管， 于 ３７ ℃培养箱中培养 ４８ ｈ， ２４～４８ ｈ。在培养液中加入 乙醚
曾 宪
作者简介： 邹 伟（ １９８１－ ） ， 女， 在读研究
观 察 是 否 产 酸 （ 有 颜 色 变 化 ） 、 １～２ ｍＬ， 经充分振荡使吲哚萃取
春 生， 研究方向： 动物传染病防治。
司。
的形状、着生位置。
显现。若出现透明圈， 即为淀粉
１．２ 土样的采集 与处理 从不 １．５ 生理生化试验 糖发酵试 水 解 试 验 阳 性 反 应 ， 否 则 为 阴
同地点采集土壤 ２０ 份， 各称取 验 （ 主 要 有 葡 萄 糖 ， 麦 芽 糖 ， 鼠 性。
１ ｇ 放 入 含 有 ５ ｍＬ 灭 菌 水 的 试 李 糖 ， 蔗 糖 ， 乳 糖 ） ： 用 无 菌 接 种
纳 氏 石 炭 酸 复 红 液 ， ９５％乙 醇 ， 察细菌菌落的形态特征。用革兰 脂平板中， 于 ３７ ℃培养箱中 培
碱 性 美 蓝 液 ； 抗 生 素 药 敏 片 ， 购 氏 染 色 法 及 芽 孢 染 色 法 在 光 学 养 ４８ ｈ， 然 后 用 碘 溶 液 覆 盖 平
自杭州天和微生物试剂有限公 显微镜下观察菌体形态及芽孢 板， 观察菌落周围是否有透明圈
是在颗粒饲料还是液体饲料中
都较稳定。还可以用于微生物肥
料和酶制剂生产的菌种筛选。芽
孢 杆 菌 是 一 类 好 氧 型 、内 生 抗 逆
孢子的杆状细菌。它以孢子状态
进入畜禽肠道进行生长繁殖， 消
耗肠内氧气， 造成厌氧环境， 使
乳 酸 菌 、双 歧 杆 菌 增 加 ， 大 肠 杆
ห้องสมุดไป่ตู้
菌减少， 属于益生菌， 既对动物
的土样中分离出了 ４ 种枯草芽
孢杆菌， 但其具体属于哪个菌种
还有待进一步鉴定。通过生理生
化 试 验 、药 物 敏 感 试 验 等 ， 可 得
到这 ４ 种芽孢杆菌的部分生化
特点及对几种药物的敏感程度，
为今后的进一步试验提供了参
考。
来自土壤中的芽孢杆菌， 其
中一些可作为益生菌应用于工
农业生产。用作饲料添加剂不论
产气。
至乙醚中， 静置片刻后乙醚层浮
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四川畜牧兽医·２００８·０２ 期·总第 ２０８ 期
于培养液的上面， 此时沿管壁缓 慢加入 ５～１０ 滴吲哚试剂 （ 加入 吲哚试剂后切勿摇动试管， 以防 破坏乙醚层影响结果） ， 观察结 果。如有吲哚存在， 乙醚层呈现 玫瑰红色， 即为吲哚试验阳性反 应， 否则为阴性。 １．６ 抗 药 性 试 验 采 用 药 敏 片法。主要使用的药敏片有： 氯霉素、氨苄青霉素、卡那霉 素、环丙沙星、链霉素、四环 素 ， 复 方 新 诺 明 。吸 取 ８０ μＬ 菌 液 滴 于 ＬＢ 平 板 培 养 基 中 ， 用 无菌涂菌棒将其涂布均匀， 用 镊子无菌取出药敏片， 贴于平 板上， 并略微用力压按药敏片， 防止其脱落。待菌液完全晾干 后 ， 倒 置 平 板 ， 于 ３７ ℃培 养 箱 中 培 养 １２ ｈ。 ２ 结果 ２．１ 形 态 学 观 察 划 线 培 养 大 约 ６ ｈ 后 ， ２０ 个 培 养 基 上 可 见单个菌落生长。发现有 ４ 种 形态不一致的菌落， 分别记为 １～４ 号。