归一化法内标法外标法及标准加入法
仪器分析
1、仪器分析方法定量的一般方法有哪些归一化法，内标法，内标标准曲线法，外标法2、标准加入法的使用有哪些注意事项：(1) 待测元素的浓度与其对应的吸光度应呈线性关系。
(2 ) 为了得到较为准确的外推结果，最少应采用4个点（包括试样溶液本身）来作为外推曲线，并且第一份加入的标准溶液与试样溶液的浓度之比应适当，这可通过试喷试样溶液和标准溶液，比较两者的吸光度来判断。
增量值的大小可这样选择，使第一个加入量产生的吸收值约为试样原吸收值的一半。
(3) 本法能消除基体效应带来的影响,但不能消除背景吸收的影响。
这是因为相同的信号既加到试样测定值上，也加到增量后的试样测定值上，因此只有扣除了背景之后才能得到待测元素的真实含量，否则将得到偏高结果。
(4) 对于斜率大小的曲线（灵敏度差），容易引进较大的误差。
3、气相色谱方法对试样的要求有哪些？进样器温度对峰型有何影响？(1 ) 只要在气相色谱适用的温度范围内，具有20-1300pa蒸气压或沸点在500.C以下，热稳定性好，相对分子质量在400以下的物质，原则上均可采用气相色谱法进行分析。
(2 ) 当进样器温度过低时，灵敏度过低难以检测出试样峰型当进样器温度过高时，将试样分解，难以测出准确的峰型4、塔板理论的应用通常用塔板数（neff）来评价柱的效能比较符合实际。
neff 越大或Heff越小则色谱柱的柱效越高。
H= L / n5、色谱速率理论与Van-Deemter方程式的物理意义。
速率理论认为，单个组分粒子在色谱柱内固定相和流动相间要发生千万次转移，加上分子扩散和运动途径等因素，它在柱内的运动是高度不规则的，是随机的，在柱中随流动相前进的速度是不均一的。
H=A+B/u+CuA项为涡流扩散项；B/ u项为分子扩散项；C u为传质项；u为载气线速度，单位为cm/s。
6、色谱分析中定性和定量的基础是什么：定性的基础是出峰保留时间，定量的基础是色谱峰面积7、色谱方法中，分离组分与固定相性质，如何决定出峰顺序：相似相溶原理（1）分离非极性物质，一般选用非极性固定液，沸点低的先出峰，沸点高的后出峰（2）分离极性物质，选用极性固定液，极性小的先流出色谱柱，极性大的后流出色谱柱（3）分离非极性和极性混合物时，一般选用极性固定液，这时非极性组分先出峰，极性组分后出峰（4）对于能形成氢键的试样，一般选择极性的或是氢键形的固定液，不易形成氢键的先流出，最易形成氢键的最后流出。
加标
归一化法、内标法、外标法、标准加入法、加标回收率归一化法由于组分的量与其峰面积成正比，如果样品中所有组分都能产生信号，得到相应的色谱峰，那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。
若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，直接用峰面积归一化进行计算。
中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。
归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。
缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。
不适于微量杂质的含量测定。
把所有出峰的组分含量之和按100%计的定量方法，称为归一化法。
各成分校正因子一致时可用该法，该法简便、准确，特别是进样量不容易准确控制时，进样浓度及进样量的变化的影响很小。
其他操作条件，如流速、柱温等变化对定量结果的影响也很小。
GC应用广于HPLC。
外标法（标准曲线法、直接比较法）首先用欲测组分的标准样品绘制标准工作曲线。
具体作法是：用标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与欲测组分相同的色谱条件下，等体积准确量进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准工作曲线，此标准工作曲线应是通过原点的直线。
若标准工作曲线不通过原点，说明测定方法存在系统误差。
标准工作曲线的斜率即为绝对校正因子。
当欲测组分含量变化不大，并已知这一组分的大概含量时，也可以不必绘制标准工作曲线，而用单点校正法，即直接比较法定量。
单点校正法实际上是利用原点作为标准工作曲线上的另一个点。
因此，当方法存在系统误差时（即标准工作曲线不通过原点），单点校正法的误差较大。
因此规定，y=ax+b b的绝对值应不大于100%响应值是y的2%。
标准曲线法的优点：绘制好标准工作曲线后测定工作就很简单了，计算时可直接从标准工作曲线上读出含量，这对大量样品分析十分合适。
特别是标准工作曲线绘制后可以使用一段时间，在此段时间内可经常用一个标准样品对标准工作曲线进行单点校正，以确定该标准工作曲线是否还可使用。
归一化法_内标法_外标法
归一化法_内标法_外标法归一化法是一种常用的分析方法，也被称为校正方法。
它的主要思想是将分析物与内标物一起处理，通过确定它们之间的响应因子，将分析物的响应信号进行校正，从而消除各种因素对分析结果的影响，提高分析的准确性和可靠性。
归一化法的原理基于分析物和内标物在特定的实验条件下具有相似的物理和化学特性，即在相同的取样条件下，它们在仪器中的峰面积应该是成比例的。
因此，通过比较分析物和内标物的响应信号大小，可以确定它们之间的响应因子，进而校正分析结果，消除引起误差的各种因素。
归一化法的优点是灵活性高，适用于各种样品和仪器。
通过选择适当的内标物和优化实验条件，可以获得较高的准确性和精密度。
由于内标物是与分析物一同处理的，因此还能消除样品制备和分析过程中的误差，提高分析结果的可靠性。
归一化法的主要缺点是需要选择适当的内标物和确定响应因子。
内标物必须和分析物在物理和化学上具有相似的特性，并且不受任何影响，否则将影响校正结果。
另外，响应因子的确定需要进行一系列复杂的实验，包括内标物和分析物的浓度、检测器响应等，因此需要更多的时间和实验成本。
内标法是一种常用的分析方法，它的原理是在样品中加入已知浓度的内标物，通过内标物与分析物的测量信号比较，利用比率的关系消除不可避免的实验误差，从而提高分析结果的准确性和可靠性。
内标法适用于需要深入研究分析物性质，掌握其分析过程的基本规律，通过外加内标物的方式进行校正。
相对于其他方法，内标法需要更少的分析时间和分析成本，并且可以获得较高的精密度和准确性，特别适用于需要分析多个样品的场合。
外标法不像归一化法和内标法那样需要专门选择一种标准物质，而是直接使用外标样品校正分析结果。
与其他方法相比，外标法操作简单，不需要选择内标物或者确定响应因子，因此适用范围广，特别适用于需要快速对大量样品进行分析的场合。
但外标法的精密度和准确性相对较低，因为各种误差因素都包括在了分析物信号和外标信号的比例关系中。
外表法,内标法的区别
其中fi可为质量校正因子，也可为摩尔校正因子。 若各组分的定量校正因子相近或相同（如同系物中沸点接近的组分）， 则上式可简化为：
该法简称为归一化法。 校正归一化法的优点是：简便、准确，当操作条件如进样量、流速变化时，对定量结果影 响很小。缺点是：对该法的苛刻要求限制了该法的使用。该法适合于常量物质的定量。
• B内标法
• 所谓内标法是将一定量的纯物质作为内标物，加入到准确称量的试样中，根据被测物和
内标物的质量及在色谱图上相应的峰面积比，求出某组分的百分含量。当只需测定试样 中某几各组分时，而且试样中所有组分不能全部出峰时，可用此法。此法适合于微量物
质的分析。该法的计算公式如下：
• 其中，fsi是被测组分相对于内标物的相对校正因子。 • 该法的优点是：受操作条件的影响较小，定量结果较为准确，使用上不象归一化法那样 •
式中f1、f2、fn… 为各组分的相对校正因子，A1、A2、…An为各组分 的峰面积。如果操作条件稳定，也可以用峰高归一化法定量，此时组 分i的百分含量可按下式计算： pt%= hifi/(h1f1+h2f2 + ....hnfn )*100
• 式中f1、f2、fn、…为各组分在该操作条件下特定的峰高相对校正因子
归一化法_内标法_外标法的 区别
1
July 11, 2016
归一化法 normalization method
• 归一化法 normalization method 一种常用的色谱定量方法。归一化法
是把样品中各个组分的峰面积乘以各自的相对校正因子并求和，此和 值相当于所有组分的总质量，即所谓“归一”，样品中某组分i的百分含 量可用下式计算： pt%= Aifi/(A1f1+A2f2 + ....Anfn )*100
色谱定量的依据和方法详解
色谱定量的依据和方法详解一、色谱定量两大依据以气相色谱为例，气相色谱是用峰面积或者峰高来定量的。
依据如下：1、最重要的第一条，就是检测器的线性响应关系。
在所有的色谱检测器中，除了FPD之外，所有的检测器都遵从线性响应，也就是说m=KS。
这里m指单位时间内到达检测器的待测物质的量（包括质量或物质的量），K表示线性响应系数，S表示检测器响应信号的值。
也就是说，检测器响应信号的大小与单位时间到达检测器的被测物质的总量成正比。
当然我们也知道，这个关系是有范围的，match量太大或者太小，都会脱离线性。
2、其次就是第二条，就是塔板理论。
塔板理论充分阐述了峰高与进样量之间的关系，或者说他们之间是成正比的。
这个可以参考我对塔板理论的说明。
根据这两条，可以肯定的说，待测物质的峰高与待测物的进样总量成正比。
或者利用微积分可以推断出，待测物质的峰面积和待测物的进样总量成正比。
既然峰高和峰面积都与进样总量成正比，为什么我们喜欢用峰面积，而不是更简单的峰高呢？这个问题也很简单，因为塔板理论不完全正确，峰形经常不完全满足正态分布，所以峰高的代表性不足。
什么时候峰高能够有良好的代表性？很明显，峰形良好而且对称，成良好的正态分布曲线形状的时候。
或者说峰形尖锐且对称的时候。
色谱峰经常拖尾，所以用峰面积定量就可以了，峰面积绝大多数情形下，都具有很好的代表性。
但是在检测器超载，或者模数转换器超载，或者峰面积积分不准，或者进样代表性不足的时候，以及一些其他特殊情形下，用峰面积也不能得到正确结果。
但无论如何，用峰面积定量，已经是我们可能的最准确方法了。
二、色谱定量方法色谱定量方法共四种：外标法、归一化法、内标法、内加法（标准加入法）。
再细分归一化法还可以分为百分比法，带校正因子的归一化法，部分归一化法等。
在这些定量方法中，百分比法和外标法最简单，内加法最麻烦。
下面讲解这些方法各自适合的情况。
1、归一化法把所有出峰的组分含量之和按100%计的定量方法，称为归一化法。
谱图 & 数据处理外标法,归一化法, 校正面积归一化法, 内标
2014年5月26日星期一
3
2014年5月26日星期一
4
面积百分比法AREA%
AREA(i) AREA%= x 100%
ΣAREA(i)
假定 检测器响应都相同 所有组分都流出 所有组分都被检测到 优点 无需做校正 简单、快速的定量过程 进样量不要求严格 缺点 以上所有的假定 需测量所有的组分 所有的面积都必须准确
外标法（ESTD）
含量＝面积(i) x RF(i) 优点
校正检测器的响应 只对欲分析的组分峰做校正 无需所有峰都能被检测到
缺点
进样量必须准确 仪器必须有良好的稳定性 需定期做再校正
外标法（ESTD）
内标法（ISTD）
内标法 色谱分析中一种比较准确的定量方法，尤其在没有标 准物对照时，此方法更显其优越性。内标法是将一定重量 的纯物质作为内标物加到一定量的被分析样品混合物中， 然后对含有内标物的样品进行色谱分析，分别测定内标物 和被测组分的峰面积（或峰高）及相对校正因子。 在样品中添加内标物，通过组分与内标峰的面积比， 对组分进行定量。 该方法减小了进样误差对定量结果的影响。
内标法（ISTD）
面积(i) x RF(i) x ISTD浓度 含量＝ 面积(ISTD) x RF(ISTD) 优点
进样量不严格要求 只对欲分析的组分峰做校正 校正检测器的响应
缺点
必须加一个组分进到样品
内标法（ISTD）
选择内标物的标准
1. 样品中不存在 2. 容易得到 3. 化学性质与样品相似 4. 不会与样品发生反应 5. 在感兴趣组分附近流出 6. 与其它组分分离度良好
校准面积归一法(NORM)
RF(i) x AREAi)
NORM%=
Σ[RF(i) x AREA(i)] 假定
归一化法内标法外标法及标准加入法
归一化法、内标法、外标法及标准加入法归一化法把所有出峰的组分含量之和按100%计的定量方法，称为归一化法。
各成分校正因子一致时可用该法，该法简便、准确，特别是进样量不容易准确控制时，进样浓度及进样量的变化的影响很小。
其他操作条件，如流速、柱温等变化对定量结果的影响也很小。
GC应用广于HPLC。
外标法（标准曲线法、直接比较法）首先用欲测组分的标准样品绘制标准工作曲线。
具体作法是：用标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与欲测组分相同的色谱条件下，等体积准确量进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准工作曲线，此标准工作曲线应是通过原点的直线。
若标准工作曲线不通过原点，说明测定方法存在系统误差。
标准工作曲线的斜率即为绝对校正因子。
当欲测组分含量变化不大，并已知这一组分的大概含量时，也可以不必绘制标准工作曲线，而用单点校正法，即直接比较法定量。
单点校正法实际上是利用原点作为标准工作曲线上的另一个点。
因此，当方法存在系统误差时（即标准工作曲线不通过原点），单点校正法的误差较大。
因此规定，y=ax+b b的绝对值应不大于100%响应值是y的2%。
标准曲线法的优点：绘制好标准工作曲线后测定工作就很简单了，计算时可直接从标准工作曲线上读出含量，这对大量样品分析十分合适。
特别是标准工作曲线绘制后可以使用一段时间，在此段时间内可经常用一个标准样品对标准工作曲线进行单点校正，以确定该标准工作曲线是否还可使用。
标准曲线法的缺点：每次样品分析的色谱条件（检测器的响应性能，柱温度，流动相流速及组成，进样量，柱效等）很难完全相同，因此容易出现较大误差。
另外，标准工作曲线绘制时，一般使用欲测组分的标准样品（或已知准确含量的样品），因此对样品前处理过程中欲测组分的变化无法进行补偿。
内标法选择适宜的物质作为欲测组分的参比物，定量加到样品中去，依据欲测组分和参比物在检测器上的响应值（峰面积或峰高）之比和参比物加入的量进行定量分析的方法称为内标法。
内标法外标法归一化法的优缺点
内标法外标法归一化法的优缺点内标法、外标法和归一化法，听起来复杂，其实就像厨房里的调料，各有各的味道和用途。
先说说内标法。
这种方法就像在做菜的时候放点香料，增强了整体的风味。
你看，内标法通过加入已知浓度的标准物质来校正结果，这样一来，哪怕测量环境有点小变化，结果也能比较靠谱。
不过，内标法有个小问题，标准物质得和样品性质相似，不然就好比盐放在甜点里，完全不搭调啊。
再来聊聊外标法，这个方法就像是在外面找个好评，直接参考。
你得先测几个标准样品，建立一个关系模型，然后再用这个模型来算未知样品的浓度。
这种方法简单明了，特别适合一些常规分析，仿佛每次出门都能带上一个贴心的指南。
不过，这种方法也有风险，若标准样品的质量有问题，最终的结果可就让人哭笑不得了。
想象一下，你精心准备了一道菜，结果外面的调料全都是过期的，结果不堪入目。
接下来就是归一化法，这个方法有点像我们日常生活中的减肥，旨在消除数据中的干扰因素，确保结果的纯净。
归一化法通过调整数据，使得不同来源的数据可以直接比较，尤其在多样本实验中，简直是神器。
不过，归一化也有个缺陷。
你可能会失去一些关键信息，就好比为了减肥而忌口，最后发现自己失去了原本的风味，反而吃得不那么开心。
想想看，这三种方法就像是厨房里的三个大厨，各有各的绝活。
内标法就像是大厨加了秘制调料，外标法像是找了个食客的推荐，而归一化法则是根据大家的口味调整出最受欢迎的菜品。
选哪个，完全取决于你的需求，哪种更合适。
很多人对这三种方法的选择感到迷茫。
其实没必要太纠结，选适合自己的就好。
就像做饭，关键在于你想要什么样的口味，别太追求完美，有时候“简单就是美”。
所以，面对实验中的各种困惑，试着从实际出发，选择最贴近需求的方法。
分享个小窍门，别忘了在做实验的时候记录下每一个细节，哪怕是微不足道的小变化。
这就好比记下每次烹饪的经验，下一次做菜时能更得心应手。
无论是内标、外标还是归一化，都只是工具，关键在于你如何运用它们。
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归一化法
把所有出峰地组分含量之和按计地定量方法，称为归一化法.
各成分校正因子一致时可用该法，该法简便、准确，特别是进样量不容易准确控制时，进样浓度及进样量地变化地影响很小.文档来自于网络搜索
其他操作条件，如流速、柱温等变化对定量结果地影响也很小.应用广于.
外标法（标准曲线法、直接比较法）
首先用欲测组分地标准样品绘制标准工作曲线.具体作法是：用标准样品配制成不同浓度地标准系列，在与欲测组分相同地色谱条件下，等体积准确量进样，测量各峰地峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准工作曲线，此标准工作曲线应是通过原点地直线.若标准工作曲线不通过原点，说明测定方法存在系统误差.标准工作曲线地斜率即为绝对校正因子.文档来自于网络搜索
当欲测组分含量变化不大，并已知这一组分地大概含量时，也可以不必绘制标准工作曲线，而用单点校正法，即直接比较法定量.单点校正法实际上是利用原点作为标准工作曲线上地另一个点.因此，当方法存在系统误差时（即标准工作曲线不通过原点），单点校正法地误差较大.因此规定，地绝对值应不大于响应值是地.文档来自于网络搜索
标准曲线法地优点：绘制好标准工作曲线后测定工作就很简单了，计算时可直接从标准工作曲线上读出含量，这对大量样品分析十分合适.特别是标准工作曲线绘制后可以使用一段时间，在此段时间内可经常用一个标准样品对标准工作曲线进行单点校正，以确定该标准工作曲线是否还可使用.文档来自于网络搜索
标准曲线法地缺点：每次样品分析地色谱条件（检测器地响应性能，柱温度，流动相流速及组成，进样量，柱效等）很难完全相同，因此容易出现较大误差.另外，标准工作曲线绘制时，一般使用欲测组分地标准样品（或已知准确含量地样品），因此对样品前处理过程中欲测组分地变化无法进行补偿.文档来自于网络搜索
内标法
选择适宜地物质作为欲测组分地参比物，定量加到样品中去，依据欲测组分和参比物在检测器上地响应值（峰面积或峰高）之比和参比物加入地量进行定量分析地方法称为内标法.文档来自于网络搜索
内标法地关键是选择合适地内标物.内标物应是原样品中不存在地纯物质，该物质地性质应尽可能与欲测组分相近，不与被测样品起化学反应，同时要能完全溶于被测样品中.内标物地峰应尽可能接近欲测组分地峰，或位于几个欲测组分地峰中间，但必须与样品中地所有峰不重叠，即完全分开.文档来自于网络搜索
内标法地优点：进样量地变化，色谱条件地微小变化对内标法定量结果地影响不大，特别是在样品前处理（如浓缩、萃取，衍生化等）前加入内标物，然后再进行前处理时，可部分补偿欲测组分在样品前处理时地损失.若要获得很高精度地结果时，可以加入数种内标物，以提高定量分析地精度.文档来自于网络搜索
内标法地缺点：选择合适地内标物比较困难，内标物地称量要准确，操作较麻烦.使用内标法定量时要测量欲测组分和内标物地两个峰地峰面积（或峰高），根据误差叠加原理，内标法定量地误差中，由于峰面积测量引起地误差是标准曲线法定量地是由于进样量地变化和色谱条件变化引起地误差，内标法比标准曲线法要小很多，所以总地来说，内标法定量比标准曲线法定量地准确度和精密度都要好.文档来自于网络搜索
标准加入法
标准加入法实质上是一种特殊地内标法，是在选择不到合适地内标物时，以欲测组分地纯物质为内标物，加入到待测样品中，然后在相同地色谱条件下，测定加入欲测组分纯物质前后欲测组分地峰面积（或峰高），从而计算欲测组分在样品中地含量地方法.文档来自于网络搜
索
标准加入法地优点：不需要另外地标准物质作内标物，只需欲测组分地纯物质，进样量不必十分准确，操作简单.若在样品地前处理之前就加入已知准确量地欲测组分，则可以完全补偿欲测组分在前处理过程中地损失，是色谱分析中较常用地定量分析方法.文档来自于网络搜索
标准加入法地缺点：要求加入欲测组分前后两次色谱测定地色谱条件完全相同，以保证两次测定时地校正因子完全相等，否则将引起分析测定地误差.文档来自于网络搜索。