1.2基因工程的基本操作程序复习课件
PCR反应条件 72℃ PCR过程 PCR的特点
聚合酶链式反应 ， ① 概念：PCR全称为_____________ 体外 复制___________ 特定DNA片段 的 是一项在生物____ 核酸合成技术。 复制 ②原理：DNA _______ 已知基因的核苷酸序列 ③前提条件： ___________________； DNA 、DNA 原料：模板 _______ _______ 引物 、 ______________ ______________。 热稳定 DNA聚合酶、 四种脱氧核苷酸 n （n 为 ④方式：以指数 ____方式扩增，即2 __ 扩增循环的次数）
⑤反应过程：
a.变性(90～95℃):
DNA模板解链
b.退火(55～60℃): 引物与模板结合，形成局部双链
c.延伸(70～75℃):
在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为原料，从引 物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链
（3）据已知氨基酸序列合成DNA法 ：
根据已知蛋白质的 蛋白质的氨基酸序列 氨基酸序列，推测出 推测 相应的信使RNA序 列，然后按照碱基互 mRNA的核苷酸序列 补配对原则，推测出 推测 它的结构基因的核苷 结构基因的核苷酸序列 酸序列，再通过化学 化学合成 方法，以单核苷酸为 原料合成目的基因。 目的基因
双链cDNA片段法：若基因较小、 以人工合成。
知识点一：2.真核细胞的基因结构
非编码区 编码区 非编码区
编码区上游
启动子
与RNA聚合酶 结合位点
编码区下游
终止子
外显子
内含子
外显子： 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 内含子：不能够编码蛋白质的序列叫做内含子
⑤结果：使目的基因的片段短时内成百万倍地扩增
PCR技术扩增与DNA复制的比较
相 原理 同 原料 点 条件
解旋 方式 不 场所 同
PCR技术 DNA复制 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高温下 解旋酶催化 变性解旋 体外复制 细胞核内
热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶
点酶（2）反转录法（cDNA的构建方法）以目的基因转录成的信使RNA为模板，再 反转录酶的催化下反转录成互补的单链 DNA，然后在DNA聚合酶的作用下合成双 链DNA，即cDN的单链mRNA
反（逆）转录酶 单链互补DNA DNA聚合酶
（2）反转录法
（真核生物） （3）根据已知的氨基酸)
提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶切 一定大小的DNA片段 将DNA已知其mRNA
的序列 已知其翻译产物的氨基酸序列
结果 大量的DNA片段
形成整个DNA分子
三、将目的基因导入受体细胞
（一）转化： 受体细胞 内，并且在 目的基因进入_________ 稳定 和表达 受体细胞内维持_____ _____的过程
• 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆 菌、酵母菌和动植物细胞等。 • 将目的基因导入受体细胞的原理：
DNA引物
PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点50℃
引物1
引物2
PCR的基本原理
Taq酶
DNA引物
PCR反应条件 PCR过程 72℃ PCR的特点
引物1
引物2 Taq酶
PCR的基本原理
第1轮结束 第2轮开始
PCR反应条件 72℃ PCR过程 PCR的特点
PCR的基本原理
第2轮结束
三种目的基因提取的方法优缺点？ 优点 缺点
鸟枪法 反转录法
操作简便 广泛使用 专一性 强
工作量大，盲目，分 离出来的有时并非一 个基因 操作过程麻烦，mRNA 很不稳定，要求的技 术条件较高
根据已知氨 专一性最 仅限于合成核苷酸 对较少的简单基因 基酸合成 强 DNA法
95℃
模板DNA
PCR的基本原理
一、目的基因的获取
1、目的基因：主要指的是编码蛋白质 的结构基因，也可以是一些具有调控 作增目的基因； （3）通过DNA合用于原核生物
人工合 成法
借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。
将目的基因导入受体细胞
农杆菌转化法 导入植物细胞 基因枪法 花粉管通道法
方法
导入动物细胞 ——显微注射法 导入微生物细胞 ——Ca+处理法
（3）花粉管通பைடு நூலகம்法
四、目的基因的检测与鉴定
检测:
是否插入目的基因 是否转录 是否翻译
鉴定:
分子水平鉴定 个体生物学水平鉴定
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1.2基因工程的基本操作程序 (共59张PPT)
外显子
结构基因
内含子 转录、加工修饰
mRNA
原核细胞与真核细胞的基因结构比较
原核细胞 编码区是 _____的 连续 真核细胞 编码区是间隔的、 _____的 不连续
不同点 相同点
编码区 _ 和具 都由能够编码蛋白质的_____ 有调控作用的______ 非编码 区组成的
基因工程培育抗虫棉的简要过程：
补：原核细胞的基因结构 非编码区 编码区上游 启动子 编码区 非编码区 编码区下游 终止子
与RNA聚合酶结合位点
RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点， 并与其结合。 转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动， 并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。 转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA 聚合酶也从DNcDNA基因组和部分基因的比较类型
大小 基因中启动子 基因中内含子 基因多少 物种间基因交流cDNA基因组小 无 无
大 有 有
某种生物的部分基因 某种生物的全部基因
可以
部分基因可以
判断物种间的基因交流主要依据为：一个物种的基因在 另一个物种体内能否正常表达其中保存的基因在任何物种体内都能连续编码相应 的氨基酸,从而合成出正常的蛋白质.（绝大多数生物共 用一套遗传密码）.所以不同物种之间可以通.而原核生物与真核生物的基因结 构是不同的.原核生物的基因是连续的,全部都可以编码 蛋白质.但真核生物的基因是不连续的,分为外显子和内 含子.只有内含子才能编码蛋白质,而内含子是与外显子 交错分布的.所以真核生物的基因中,编码蛋白质的区域 是不连续的.所以原核生物的基因在原核生物或真核生 物之间都可以正常表达,从而可以进行物种间的基因交 流.但是真核生物的基因只有在真核生物体内才能通过 真核生物特有的机制正常表达,原核,真核-真核,原核-真核生物间可以交流,但 真核-原核间不能交流.
[人教版]《基因工程的基本操作程序》经典课件1
![[人教版]《基因工程的基本操作程序》经典课件1](https://360docs-1393072327.cos.ap-beijing.myqcloud.com/b67bcaac7fd5360cbb1adbbd.webp)
1.2 基因工程的基本操作程序
四 个 基 本 步 骤：
步骤一：目的基因的获取
目的基因是人们所需要转移或改 造的基因,
获取目的基因是实施基因工程的 第一步 。
• 目的基因的提取方法
直接分离基因
人工合成基因
反转录法
根据已知的氨基酸序列 合成DNA
（补充知识）基因的结构 1、原核细胞的基因结构
非编码区
段的技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环：
95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物
与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新
的脱氧核苷酸链）。下列有关PCR过程的叙述中不
正确的是（ ）
C
• A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的
氢键，也可利用解旋酶实现
• B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱 基互补配对原则完成
编码区
编码区上游
启动子
非编码区 编码区下游
终止子
与原R核NA聚编合码酶区结合能位转点录相应的信使RNA，能编码蛋白质
细①胞 RNA聚合酶能①够不识能别转调录控为序信列使中R的N结A合，位不点能，编并码与蛋
的②基 因②结
构
转其非录结编开合码始。区后，②RN有白A调聚质控合遗酶传沿信DN息A表分达子的移核动苷，酸并序以列， DNA分子的一条在链该为序模列板中合，成最R重N要A的。是位于编码区
但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只 知道目的基因序列的一段，或想从一种生物体内获得 许多基因，或者想知道这种生物与另一种生物之间有 多少基因不同，或者想知道一种生物在个体发育的不 同阶段表达的基因有什么不同，或者想得到一种因？
化学合成
目的基因
• 哪些新技术能大大简化基因工程的操作技术？
四 个 基 本 步 骤：
步骤一：目的基因的获取
目的基因是人们所需要转移或改 造的基因,
获取目的基因是实施基因工程的 第一步 。
• 目的基因的提取方法
直接分离基因
人工合成基因
反转录法
根据已知的氨基酸序列 合成DNA
（补充知识）基因的结构 1、原核细胞的基因结构
非编码区
段的技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环：
95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物
与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新
的脱氧核苷酸链）。下列有关PCR过程的叙述中不
正确的是（ ）
C
• A．变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的
氢键，也可利用解旋酶实现
• B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱 基互补配对原则完成
编码区
编码区上游
启动子
非编码区 编码区下游
终止子
与原R核NA聚编合码酶区结合能位转点录相应的信使RNA，能编码蛋白质
细①胞 RNA聚合酶能①够不识能别转调录控为序信列使中R的N结A合，位不点能，编并码与蛋
的②基 因②结
构
转其非录结编开合码始。区后，②RN有白A调聚质控合遗酶传沿信DN息A表分达子的移核动苷，酸并序以列， DNA分子的一条在链该为序模列板中合，成最R重N要A的。是位于编码区
但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只 知道目的基因序列的一段，或想从一种生物体内获得 许多基因，或者想知道这种生物与另一种生物之间有 多少基因不同，或者想知道一种生物在个体发育的不 同阶段表达的基因有什么不同，或者想得到一种因？
化学合成
目的基因
• 哪些新技术能大大简化基因工程的操作技术？
生物1.2《基因工程的基本操作程序》课件1(新人教版选)
基因工程的基本概念
第二章
基因工程的定义
基因工程的概念 基因工程的基本原理 基因工程的基本操作程序 基因工程的应用前景
基因工程的研究对象
基因：DNA分子中的特定功能区段
基因组：一个生物体内所有基因的总和
基因工程：以基因组为研究对象，通过人工设计和构建基因，实现基因 的重组、编辑和表达等操作 基因工程技术：利用基因工程技术，可以研究基因的结构和功能，开发 新的生物技术，应用于医学、农业、工业等领域
在农业领域的应用
抗虫抗病：通过基因工程培育抗虫抗病农作物，提高产量和品质 转基因技术：利用转基因技术将有益基因导入农作物，提高产量和抗逆性 生物肥料：利用基因工程生产生物肥料，提高土壤肥力和减少环境污染 农业生物技术：通过基因工程和农业生物技术，提高农业生产效率和可持续性
在工业领域的应用
生物制药：利用基因工程技术生产药物，如胰岛素、生长激素等 生物化工：利用基因工程技术生产化学品，如生物塑料、生物燃料等 生物冶金：利用基因工程技术从矿石中提取金属，如铜、锌等 生物环保：利用基因工程技术处理废水、废气等污染物，保护环境
在环境保护领域的应用
基因工程在环境保护中的应用：利用基因 工程技术对污染物进行降解和转化，减少 环境污染
基因工程在污水处理中的应用：通过基因 工程技术提高微生物的降解能力，提高污 水处理效率
基因工程在环境监测中的应用：利用基因 工程技术开发出快速、准确的检测方法， 对环境中的污染物进行监测
基因工程在生态修复中的应用：通过基 因工程技术培育出具有特定功能的微生 物或植物，用于修复受损的生态环境
04
将重组DNA导入受体细胞：将重组DNA导入 受体细胞，如细菌、酵母、动物细胞等
06
目的基因的表达与检测：对目的基因进行表 达，并通过特定的检测方法进行检测
高中生物 专题一 基因工程 1.2 基因工程的基本操作程序课件 新人教版选修3
1.．2 2基因基工因程工的程基的本基操本作操程作序程序
5
③人工合成法：如果基因比较小， 核苷酸序列 又 已 知 ， 可借助 DNA合成仪 用化学方法直接人工合成。
1.．2 2基因基工因程工的程基的本基操本作操程作序程序
6
二、基因表达载体的构建(阅读P11)
1.基因表达载体的功能 使目的基因在受体细胞中 稳定存在 ，并且可以遗传给下一代， 使目的基因能够表达 和发挥作用。
1.．2 2基因基工因程工的程基的本基操本作操程作序程序
13(5)一种生物的cDNA可以有许多种，但基因组只有一种。
(√)
(6)基因表达载体中需要含有起始密码、终止密码、目的基因、标
记基因。( × ) (7)常用卵细胞作为动物的受体细胞。( × )
(8)检测转基因生物的染色体上是否插入了目的基因是目的基因能
2.基因表达载体的构成
启动子
首端
RNA聚合酶 转录
终止子 标记
尾端 RNA聚合酶
转录 目的基因
1.．2 2基因基工因程工的程基的本基操本作操程作序程序
7
3.基因表达载体的构建过程 一般用同一种 限制 酶分别切割载体和目的基因，再用 DNA连接 酶把两者连接。
1.．2 2基因基工因程工的程基的本基操本作操程作序程序
8
三、将目的基因导入受体细胞(阅读P11－13)
1.转化的概念 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的
过程。
2.转化的方法
(1)导入植物细胞 ① 农杆菌转化 法：将目的基因导入双子叶植物和祼子植物。 ② 基因枪 法：将目的基因导入单子叶植物常用的方法。 ③ 花粉管通道 法：我国科学家独创的一种方法。
重点难点，个个击破 PCR技术扩增 人工合成
基因工程的基本操作程序 课件
[名师点拨] 关注基因工程操作过程的四个易误点 (1)限制酶剪切目的基因与质粒的次数不同：获取一个目的 基因需限制酶剪切 2 次，共产生 4 个黏性末端或平末端，切割 质粒一般只需要限制酶剪切 1 次，产生 2 个黏性末端或平末端， 因为质粒是环状 DNA 分子，而目的基因在 DNA 分子链上。 (2)切割目的基因和载体并非只能用同一种限制酶：如果用 两种不同限制酶切割后形成的黏性末端相同时，在 DNA 连接 酶的作用下，目的基因与载体也可以连接起来。
(3)目的基因的插入点不是随意的：基因表达需要启动子与 终止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的 部位。
(4)基因工程操作过程中只有第三步“将目的基因导入受 体细胞”没有碱基互补配对现象；第一步利用逆转录法获得 DNA，第二步中的黏性末端连接，第四步利用分子水平杂交的 方法检测，均存在碱基互补配对现象。
2．基因表达载体的组成[填图]
四、将目的基因导入受体细胞 1．导入植物细胞 (1)农杆菌转化法： ①原理：农杆菌Ti质粒上的 T-DNA 可整合到受体细胞的 染色体DNA上。 ②适用范围：主要适用于 双子叶植物 和 裸子植物 。 (2) 基因枪法 ：常用于单子叶植物。 (3)花粉管通道法：目的基因借助花粉用PCR技术扩增 (1)原理： DNA双链复制 。 (2)过程：
3．人工合成 (1)条件：基因比较小， 核苷酸序列 又已知。 (2)方法：通过 DNA合成仪 用化学方法直接人工合成。 三、基因表达载体的构建 1．构建基因表达载体的目的 (1)使目的基因在受体细胞中 稳定存在，并且可以 遗传给下 一代。 (2)使目的基因能够 表达 和发挥作用。
基因工程的基本操作程序
一、基因工程的基本操作程序 目的基因 的获取→ 基因表达载体 的构建→将目的基
高中生物同步课件：1.2 基因工程的基本操作程序(新人教版选修3)
程需要DNA聚合酶催化。
栏目 导引
专题1
基因工程
⑤属于双链DNA复制的过程，需要DNA聚合 酶催化。⑤过程在70～75 ℃环境下进行，所
需要的酶能够耐高温。
【答案】 RNA (2)稳定 (3)DNA聚合酶 (4)60
栏目 导引
(1)反转录酶(或逆转录酶)
分解
催化⑤过程的酶耐高温
专题1
基因工程
互动探究
基因工程
(2)化学合成法，即依照某一蛋白质的氨基酸 序列，通过密码子推算出其基因序列，然后 直接合成目的基因，其过程如下：
栏目 导引
专题1
基因工程
例1
(2012· 青岛市高二期末)1970年，科
学家证实了RNA病毒能依赖RNA合成DNA 的过程，并发现了催化此过程的酶。下面为 形成cDNA的过程和PCR扩增过程示意图。 请根据图解回答下列问题：
栏目 导引
专题1
基因工程
要点二
基因表达载体的构建
1.构建基因表达载体的目的：使目的基因在
受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一
代，使目的基因能够表达和发挥作用。 2.基因表达载体的构建 (1)启动子：一段有特殊结构的DNA片段，位 于基因的首端。它是RNA聚合酶识别和结合 的部位，可驱动基因转录。
栏目 导引
专题1
基因工程
四、目的基因的检测与鉴定
1..首先要检测转基因生物的DNA上是否插
DNA分子杂交 目的基因 入了_________,方法是采用______________
技术。 2. 其 次 还 要 检 测 目 的 基 因 是 否 转 录 出 了 mRNA 分子杂交 ________,方法是采用__________技术。
课件3：1.2 基因工程的基本操作程序
➢延伸：加热至70～ 退 75℃以目的基因为模火 板，合成互补的新 DNA链
延伸
3、人工合成目的基因 逆转录法
目的基因的信使RNA 逆转录酶
单链DNA DNA聚合酶
双链DNA （目的基因)
化学合成法
蛋白质的氨基酸序列 推测
信使RNA序列 推测
基因的核苷酸序列 人工合成
目的基因
经典例题 1. 利用PCR技术可获得目的基因，下列相关叙述错 误的是（A） A．用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部 序列 B．PCR反应体系中需添加磷酸、脱氧核糖和含氮的 碱基作为原料 C．PCR 体系中需要添加从受体细胞中提取的解旋 酶和DNA聚合酶 D．PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合 酶催化不同的反应
四、目的基因的检测与鉴定
①导入检测：目的基因是否导入受体细胞
分
方法—— DNA分子杂交
子
检测 ②表达检测 转录检测——分子杂交
检 测
翻译检测——抗原抗体杂交 法
鉴定
抗虫鉴定 抗病鉴定 个体水平的鉴定 活性鉴定等
经典例题
7.为达到相应目的，必须通过分子检测的是( B ) A.携带链霉素抗性基因受体菌的筛选 B.产生抗人白细胞介素－8抗体的杂交瘤细胞的筛选 C.转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定 A 反转录
cDNA
与运载体连接R技术扩增目的基因
PCR——聚合酶链式反应
是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合 成技术。通过此技术使其数量呈指数方式增加， 可获取大量的目的基因。
PCR技术
• 原理： DNA复制 • 前提：一段已知目的基因的核苷酸序列 • 原料：一段已知目的基因的核苷酸序列（模板DNA）
变式题
8．利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所 需要的产品。下列选项中能说明目的基因完成了在 受体细胞中表达的是( C)
专题1基因工程_1[1].2基因工程的基本操作程序PPT幻灯片
导入受体细胞的方法 主要 是借鉴细菌或病毒侵染细胞的 途径，且因受体细胞的不同而不同。
（一）导入植物细胞
1.农杆菌转化法 （适用于双子叶植物和裸子植物）
2.其他方法（见教材P12“生物技术资料卡”）
（1）基因枪法 适用于单子叶植物 （2）花粉管通道法
（二）导入动物细胞
含目的基因 显微 的表达载体 注射
用同位素标记的 目的基因片段杂交
显出 杂交带
（表明目的基因已转录出了mRNA）
检测DNA利用的是DNA与DNA杂交，检测 mRNA利用的是DNA与mRNA杂交。
3. 检测目的基因是否翻译出蛋白质
抗原—抗体杂交技术
提取受体生 物的蛋白质
与相应抗体杂交 显 出 杂交带
（表明目的基因已形成蛋白质产品）
（二）个体水平
蛋白质的氨 推
mRAN 推 基因DNA的 合
基酸顺序 测 核苷酸序列 测 核苷酸序列 成
目的 基因
DNA合成仪
二、基因表达载体的构建
用限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的 基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的 黏性末端互补配对后，在连接酶的作用下连接形成重 组DNA分子，即基因表达载体。
常用的检测手段主要从分子水平和个体水平 进行。
（一）分子水平
分子杂交技术
1. 检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因
提取受体生 物全部DNA
适当限制 酶切割
用同位素标记的
DNA片段
目的基因片段杂交
显出 杂交带
（表明目的基因已插入）
2. 检测目的基因是否转录出了mRNA
提取受体生 物的mRNA
例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状， 说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃 后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。
（一）导入植物细胞
1.农杆菌转化法 （适用于双子叶植物和裸子植物）
2.其他方法（见教材P12“生物技术资料卡”）
（1）基因枪法 适用于单子叶植物 （2）花粉管通道法
（二）导入动物细胞
含目的基因 显微 的表达载体 注射
用同位素标记的 目的基因片段杂交
显出 杂交带
（表明目的基因已转录出了mRNA）
检测DNA利用的是DNA与DNA杂交，检测 mRNA利用的是DNA与mRNA杂交。
3. 检测目的基因是否翻译出蛋白质
抗原—抗体杂交技术
提取受体生 物的蛋白质
与相应抗体杂交 显 出 杂交带
（表明目的基因已形成蛋白质产品）
（二）个体水平
蛋白质的氨 推
mRAN 推 基因DNA的 合
基酸顺序 测 核苷酸序列 测 核苷酸序列 成
目的 基因
DNA合成仪
二、基因表达载体的构建
用限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的 基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的 黏性末端互补配对后，在连接酶的作用下连接形成重 组DNA分子，即基因表达载体。
常用的检测手段主要从分子水平和个体水平 进行。
（一）分子水平
分子杂交技术
1. 检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因
提取受体生 物全部DNA
适当限制 酶切割
用同位素标记的
DNA片段
目的基因片段杂交
显出 杂交带
（表明目的基因已插入）
2. 检测目的基因是否转录出了mRNA
提取受体生 物的mRNA
例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状， 说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃 后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。
1.2 基因工程的基本操作程序(共79张PPT)
b、退火（复性55℃-65℃）： 系统温度降低，引物与DNA 模板结合，形成局部 双链 ________。 c、延伸（70℃-75℃）：在 Taq酶的作用下，合成与模 DNA链 。 板互补的________
d.重复a.b.c步骤：每重复 一倍 一次，目的基因增加___
PCR技术扩增与DNA复制的比较
目的基因导入受体细胞的原理：
借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。
第三步：将目的基因导入受体细胞 受体细胞 内，并且在 转化 ——目的基因进入_________ 稳定 和_____ 表达 的过程 受体细胞内维持_____
将目的基因导入 植物细胞 方法 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法
利用PCR技术扩增目的基因
• 前提：
一已知目的基因的核苷酸序列
• 条件
模板DNA； DNA引物； 四种脱氧核苷酸； 热稳定DNA聚合酶（Taq酶）
PCR扩增仪
PCR 技术的操作过程 a 、DNA 变性（90℃-95℃）： 双链DNA模板在热作用下， 氢键断裂，形成________ 单链DNA _____
都由能够编码蛋白质的______ 编码区和具有 相同点 调控作用的______ 非编码区组成的
思 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核 考 细胞与真核细胞基因结构一样长吗？
真核生物的基因用反转录法得到的
cDNA与原基因相同吗？
真核细胞的cDNA的获取
非编码区
基因
编码区
非编码区
启动子
转录 剪接 逆转录 复制 RNA聚合酶
热稳定的DNA聚合酶
半保留复制、 全解旋再复制 大量的DNA片段
结果
3. 人工合成法 在基因较小，核苷酸序列已知的情况下，可 以利用DNA合成仪人工合成
d.重复a.b.c步骤：每重复 一倍 一次，目的基因增加___
PCR技术扩增与DNA复制的比较
目的基因导入受体细胞的原理：
借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。
第三步：将目的基因导入受体细胞 受体细胞 内，并且在 转化 ——目的基因进入_________ 稳定 和_____ 表达 的过程 受体细胞内维持_____
将目的基因导入 植物细胞 方法 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法
利用PCR技术扩增目的基因
• 前提：
一已知目的基因的核苷酸序列
• 条件
模板DNA； DNA引物； 四种脱氧核苷酸； 热稳定DNA聚合酶（Taq酶）
PCR扩增仪
PCR 技术的操作过程 a 、DNA 变性（90℃-95℃）： 双链DNA模板在热作用下， 氢键断裂，形成________ 单链DNA _____
都由能够编码蛋白质的______ 编码区和具有 相同点 调控作用的______ 非编码区组成的
思 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核 考 细胞与真核细胞基因结构一样长吗？
真核生物的基因用反转录法得到的
cDNA与原基因相同吗？
真核细胞的cDNA的获取
非编码区
基因
编码区
非编码区
启动子
转录 剪接 逆转录 复制 RNA聚合酶
热稳定的DNA聚合酶
半保留复制、 全解旋再复制 大量的DNA片段
结果
3. 人工合成法 在基因较小，核苷酸序列已知的情况下，可 以利用DNA合成仪人工合成
基因工程的基本操作程序培训课程(ppt65页)
归纳: 基因工程的基本操作程序. 构建基因表达载体
目的基因、启动子、终止子、标记基因
3. 将目的基因导入受体细胞
农杆菌转化法、显微注射法、 Ca2+处理
4. 目的基因的检测与鉴定
检测：是否插入、转录、翻译 鉴定：
蛋白质工程是在基因工程的基础上,延伸出来的第二代基因工程。NA聚合酶识别结合位点 A、DNA按照碱基互补配对原则自我复制
①检测受体细胞中是否有目的基因 ②检测受体细胞中是否有致病基因 ③检测目的基因是否转录出mRNA ④检测目的基因是否翻译
出蛋白质
A．①②③④ B．④②①③
（3）通常采用(
采用基因工程的方法培养抗虫棉，下列导入目的基因的作法正确的是（ ）
3、基因表达载体的作用
a、使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给子代 b、同时使目的基因能表达和发挥作用
（多选）一个基因表达载体的构建应包括 ABCD
A．目的基因
B．启动子
C．终止子
D．标记基因
第三步：将目的基因导入受体细胞
转化：目的基因进入_受__体__细__胞__内，并且在受体细 胞内维持_稳__定__和_表__达__的过程。
④根据氨基酸序列推出脱氧核苷酸序列
推测
定向改造生物的遗传特性，获得人类所需的生物类型或生物产品
因为对现有蛋白质的改造或制造新的蛋白质，必须通过基因的修饰或基因的合成。
信使RNA序列 C．①③④ D．①②④ 单链DNA B、将含有某种生物不同的许多DNA片段，导入某个生物 体内，则这个生物就是一个基因C．酶工程D．发酵工程
将目的基因导入受体细胞
将目的基因导入植物细胞
的情况下，获得所需的目的基因。 人工合成法（真核生物）