牛卵母细胞体外受精和体外成熟技术_桑国俊
试论牛卵母细胞体外受精技术
试论牛卵母细胞体外受精技术牛卵母细胞体外受精是指在脱离母体的情况下，人为创造母牛体内繁殖条件，在牛体外完成精卵结合，培育出受精卵并在体外培养至桑椹胚或是囊胚阶段，将胚胎移植到母牛体内孕育胎儿。
体外受精是繁育犊牛的重要技术，在牛繁殖领域应用普遍，涉及到的技术有牛卵母细胞的采集、成熟培养与判断，牛精子的筛选、获能，以及具体的受精操作等。
针对技术应用关键节点及技术参数、操作细节的分析研究，最终达到获取高质量胚胎的目的，助力于养牛业的高质量发展。
1 牛卵母细胞体外采集与培养技术1.1 牛卵母细胞体外采集技术1.1.1 采集方式常用的动物卵母细胞采集方式如下：（1）直接采集成熟的卵母细胞，采用超排技术从动物的输卵管采集，但不适用于牛这种大型动物；（2）活体采卵，选择繁殖性能优秀的母牛，借助腹腔镜直接采集，对采集母牛的繁殖性能影响较小；（3）从屠宰场获取，宰杀母牛后直接采集牛卵巢。
该采集方式简单、直接、成本低，可大批量采集。
1.1.2 采集技术在从屠宰场获取牛卵巢后，将其放入保温瓶中，瓶中事先装入用生理盐水稀释的硫酸庆大霉素，温度大约是30 ℃，用于保持牛卵巢的新鲜度。
在1 h 内完成卵泡的收集，在实验室环境下，使用生理盐水清洗干净牛卵巢，然后使用注射器直接吸取卵泡，获取卵泡液，准备进行体外成熟培养。
1.2 体外成熟培养使用体视显微镜筛选质量好的卵母细胞用于体外成熟培养，将筛选出的卵母细胞放入培养液中，培养液中含有17-E2 的中央记忆型T 细胞1.5 μg/mL；胎牛血清10%，促黄体生成素20%；卵泡刺激素20 μg/mL。
将培养液放入经过温度校正后的培养箱中，温度调整至38～39 ℃，气象条件为5%的CO2，培养时间22～24 h，需根据牛卵母细胞采集时的成熟情况，适当延长1～2 h，但不可超过26 h，一旦超过牛卵母细胞将进入老化期。
1.3 体外成熟判定在培养24 h 后进行牛卵母细胞的成熟检查，当其进入第二次减数分裂中期则判定为成熟。
牛卵母细胞体外成熟与体外受精的研究
牛卵母细胞体外成熟与体外受精的研究牛卵母细胞体外成熟与体外受精的研究引言：牛卵母细胞体外成熟与体外受精是现代生殖技术中的重要研究方向之一。
通过研究牛卵母细胞的体外成熟及体外受精，可以加深我们对生殖过程的理解，推动畜牧业的发展，为生物医学领域提供重要的实验基础。
本文将介绍牛卵母细胞的体外成熟与体外受精的研究进展，以及相关的方法和应用。
一、牛卵母细胞的体外成熟研究卵母细胞的成熟是生殖过程中的关键步骤之一，体外成熟是指将卵母细胞从卵巢中取出培养至成熟的过程。
牛卵母细胞的体外成熟研究，旨在解决牛卵母细胞体外成熟率低、受精能力不佳等问题。
目前，研究者主要通过调节培养基及培养条件，来提高牛卵母细胞的体外成熟率。
例如，添加合适浓度的激素和营养物质，可以促进卵母细胞的成熟。
同时，控制培养温度和氧含量，以及添加适当的生长因子，也对体外成熟起到积极的作用。
此外，研究者还通过体外成熟介质的改良来提高成熟率。
体外成熟的牛卵母细胞在形态上与体内成熟的卵母细胞相似，但功能仍有所差异。
因此，研究者也关注体外成熟卵母细胞的功能性评估，以验证其受精能力。
利用体外成熟的牛卵母细胞进行人工受精实验，可以通过观察卵子的受精率和胚胎发育情况，来评估体外成熟的效果。
二、牛卵母细胞的体外受精研究牛卵母细胞的体外受精是指将成熟的卵母细胞与精子在培养皿中进行受精，从而获得胚胎。
体外受精是一项重要的生殖技术，可以用于种畜改良、胚胎移植、遗传研究等方面。
体外受精的主要难点在于受精成活率和胚胎发育能力。
针对这些问题，研究者进行了大量的实验和探索。
例如，改良培养基成分和培养条件，控制精子-卵母细胞的接触时间和培养时间，可以提高受精成活率和胚胎发育能力。
此外，通过精子质量评估和优化、胚胎质量评估和筛选等方法，也对体外受精的效果进行了有效改善。
应用：牛卵母细胞体外成熟与体外受精的研究，不仅对畜牧业具有重要的推动作用，也在生物医学领域具有广阔的应用前景。
在畜牧业上，通过体外受精可以实现良种畜禽的繁殖，提高繁殖效率，改良品种。
哺乳动物卵母细胞体外成熟培养的研究_王俊全
的影响 目前 , 国内按照 COCs 分级标准 , 通常都将 COCs 分为 4 级。 COCs 选择级别不同 , 其培养成 熟率之间存在很大差异。 P av lok 在研究中发现, 成熟率由高 到低的顺序为 A 级、 B 级、 C 级和 D 级, 实验中各组之间的差异均达到极显著水平 ( p < 0. 01) , 其中 A 级 COCs 成熟率达到 63. 81% , B 级 COCs 成熟 率达 到 47. 81% , 明显 高 于 C 级 COCs 和 D 级 COCs, C 级 COCs 仅有个别发育成 熟, D 级 COCs 未见到 发育成熟 的卵母细 胞 。 因此 , A 级和 B 级 COCs 是卵母细胞体外培养和 胚胎体外生产的主要资源。 2. 2 卵泡直径也与卵母细胞的成熟相关性 国内一些学者对牛的卵泡直径研究中发现,
从屠宰场获得的卵巢, 其保存温度具有非常 关键的作用。李兵兵以生理盐水为保存液 , 保存 时间在 4 h 左右, 研究不同卵巢保存温度对牛卵 母细胞体外成熟的影响。结果表明, 在一定时间 内, 温度控制在 20- 37 , 可以减少因温度变化 而对卵母细胞造成的损害, 提高其 成熟率[ 10] ; 在 卵巢运输时间上, 有研究证明从屠宰场取卵巢到 带回实验室收集卵母细胞的时间以 4 h 之内成熟 率最高, 时间越长 , 卵的质量越差 , 表明卵母细胞 的质量与保存时间有很大关系 [ 11] 。 2. 5 采卵方法 从屠宰场卵巢获取卵母细胞一般采用解剖或 吸取的方法。有学者将采集的卵巢分别用抽吸法 和切割法采集浅层和深层的卵母细胞 , 记录各采 集方法所得的卵母细胞数和卵母细胞质量 , 然后 进行体外成熟培养 , 结果显示两种采卵方法的采 卵效果存在明显的差异 , 用切割法采集卵母细胞 所获得的 A 级卵母细胞显著高于抽吸法 24. 8% ( P< 0. 05)
牛卵母细胞及体外胚培养技术研究
牛卵母细胞及体外胚培养技术研究牛卵母细胞及体外胚培养技术研究序言：牛是人们生活中非常重要的家畜之一，其产奶、提供肉食和劳动能力等方面都具有重要的经济价值。
然而，传统的牛繁殖方式存在着一些问题，如繁殖效率低、繁殖周期长等，制约了牛产业的发展。
因此，研究牛卵母细胞及体外胚胎培养技术具有重要的理论和实际意义。
一、牛卵母细胞提取与培养卵母细胞是牛胚胎发育的重要原始细胞，提取和培养牛卵母细胞是开展体外胚胎培养研究的第一步。
目前，常采用超声波技术辅助输卵管穿刺取卵的方法，然后通过卵巢剖腹取卵的方法提取牛卵母细胞。
在体外培养的过程中，应注意控制培养液的温度、酸碱平衡以及添加适宜的营养物质等因素，以满足卵母细胞的生理需要。
二、牛体外胚胎培养技术体外胚胎培养技术是指将受精卵或早期胚胎转移到体外培养基中进行培养，使其继续发育并形成胚胎。
该技术的研究主要集中在以下几个方面：1. 培养基的优化体外胚胎培养的关键是培养基的优化。
培养基的组成应包括必需和非必需营养物质、酶、胺基酸、维生素、激素等，以提供胚胎发育所需的营养和生长因子。
同时，还需要控制培养基的温度、pH 值和气体环境，以维持胚胎发育的正常进程。
2. 胚胎的分级和选择在体外胚胎培养过程中，需要对胚胎进行分级和选择，以筛选出发育良好的胚胎，并移植到母牛体内。
通过观察胚胎的细胞数目、形态和活力等指标，可以初步评估其发育能力和潜在质量。
3. 胚胎的保护和冷冻技术在体外胚胎培养的过程中，存在一些不可控因素，如培养时间的延长、培养条件的不稳定等，容易导致胚胎的发育异常或死亡。
因此，需要对胚胎进行保护，选用适当的冷冻技术，储存健康的牛胚胎，以备不时之需。
结论：牛卵母细胞及体外胚胎培养技术的研究为改善牛繁殖效率和提高育种进展提供了有力支持。
通过牛卵母细胞的提取与培养，以及体外胚胎培养技术的不断优化和完善，可以大幅提高牛胚胎的获取率和存活率，缩短繁殖周期，达到节省繁殖成本、提高繁殖效益的目的。
肉牛新型繁育技术及其应用
繁殖母牛数量急剧下降已经成为我国肉牛业可持续发展的最大障碍，必需尽快尽早对其进行研究和恢复，否则，我国肉牛产业的可持续发展道路将会遇到牛源短缺的尴尬局面。
充分利用有限繁殖母牛进行肉牛繁殖的新型繁育技术，对肉牛产业发展非常重要。
这些技术包括双胎基因的测定、标记和浓缩、AI-MOET、免疫抑制等。
通过这一系列新型技术，可以提高繁殖母牛的双胎率，从而达到利用有限母牛繁育更多肉用犊牛的目的，为肉牛产业转型和可持续发展提供良好的技术支撑。
一、肉牛产业发展的瓶颈因素是繁殖母牛存栏危机1、繁殖母牛存栏量不足制约着肉牛产业的可持续发展。
繁殖母牛数量急剧下降已经成为我国肉牛业可持续发展的最大障碍。
我国能繁母牛约占40%，产犊率约为60%，1.38亿头存栏牛（2011年）中能繁母牛数量为5520万头，每年仅能生产出3312万头牛，占现在年屠宰5390万头的60%，不足部分只能通过宰杀母牛和青年牛补充。
2、繁殖母牛的环比效益低，现有条件难以有效支持群体稳定局面，下探趋势不减。
牛役用作用逐渐被取代、农村劳动力减少，使传统的饲养模式萎缩；繁殖母牛养殖生产周期长、成本大、经济效益不高，使饲养量下降；土地流转使粗饲料流失，加速零散养牛萎缩；劳务收入简单直接，从事肉牛产业的青壮年劳力迅速减少。
3、牛的繁殖率低，现有体系难以满足肉牛产业发展的需要。
牛自然妊娠双胎率只有0.5%，基本维持在一年一胎一犊的自然状态。
在一定区域内，肉牛出栏率应该与繁殖率处于动态平衡状态，原有积累消耗尽后，将可能出现产业萎缩现象。
目前，重育肥、轻繁殖的现象比较普遍。
屠宰厂见牛就宰，过度宰杀繁殖母牛，进一步加剧了繁殖母牛生存危机。
二、肉牛双胎生产技术应用的可行性1、母牛生理特征有利于进行双胎生产。
母牛在自然状态下为单胎生殖，但其具有双卵巢和双子宫角。
双卵巢和双子宫角在生殖方面具有相同的功能。
这一繁殖特性为人工辅助技术进行双胎生产奠3血吸虫病在血吸虫病流行的地区，我们使用哨兵钉螺来监测水源污染情况，因为钉螺是血吸虫的唯一中间宿主，而钉螺的感染率与水源污染程度密切相关，采用这种方法可以准确评价本地区血吸虫病的预防和控制水平。
试论牛卵母细胞体外受精技术
2023年第07期D O I:10.3969/J.I SSN.1671-6027.2023.07.044牛卵母细胞体外受精是指在脱离母体的情况下,人为创造母牛体内繁殖条件,在牛体外完成精卵结合,培育出受精卵并在体外培养至桑椹胚或是囊胚阶段,将胚胎移植到母牛体内孕育胎儿。
体外受精是繁育犊牛的重要技术,在牛繁殖领域应用普遍,涉及到的技术有牛卵母细胞的采集、成熟培养与判断,牛精子的筛选、获能,以及具体的受精操作等。
针对技术应用关键节点及技术参数、操作细节的分析研究,最终达到获取高质量胚胎的目的,助力于养牛业的高质量发展。
1牛卵母细胞体外采集与培养技术1.1.1采集方式常用的动物卵母细胞采集方式如下:(1)直接采集成熟的卵母细胞,采用超排技术从动物的输卵管采集,但不适用于牛这种大型动物;(2)活体采卵,选择繁殖性能优秀的母牛,借助腹腔镜直接采集,对采集母牛的繁殖性能影响较小;(3)从屠宰场获取,宰杀母牛后直接采集牛卵巢。
该采集方式简单、直接、成本低,可大批量采集。
1.1.2采集技术在从屠宰场获取牛卵巢后,将其放入保温瓶中,瓶中事先装入用生理盐水稀释的硫酸庆大霉素,温度大约是30℃,用于保持牛卵巢的新鲜度。
在1h内完成卵泡的收集,在实验室环境下,使用生理盐水清洗干净牛卵巢,然后使用注射器直接吸取卵泡,获取卵泡液,准备进行体外成熟培养。
使用体视显微镜筛选质量好的卵母细胞用于体外成熟培养,将筛选出的卵母细胞放入培养液中,培养液中含有17-E2的中央记忆型T细胞1.5μg/m L;胎牛血清10%,促黄体生成素20%;卵泡刺激素20μg/m L。
将培养液放入经过温度校正后的培养箱中,温度调整至38~39℃,气象条件为5%的CO2,培养时间22~24h,需根据牛卵母细胞采集时的成熟情况,适当延长1~2h,但不可超过26h,一旦超过牛卵母细胞将进入老化期。
在培养24h后进行牛卵母细胞的成熟检查,当其进入第二次减数分裂中期则判定为成熟。
牛卵母细胞体外受精和培养技术
２ １ ６ 高 离子 强 度 液 （ Ｉ ） 徐 君 等 Ｂ 液 中 ． ． ＨＳ Ｏ Ｎ Ｈ Ｏ 浓度 由 ３ ｏ Ｌ提 高 到 ４ ｏ Ｌ 超 排 ａＣ ７ｍｍ ｌ ｆ ７ｍｍ ｌ ， ／ 兔 卵母细 胞的 受精率 为 ６ ． ％ ， 胎 移植 妊娠 率 为 ３４ 胚 ５ ． ％ 。相关 研 究 表 明 高 离子 强 度 液 可 置换 精 子 ５６ 表 面抗原 物质 或去能 因子 ， 从而诱 发顶体 反应 。 ２ １７ 咖啡 因 咖啡 因和 Ｉ ．． Ａ对精 子 的获能具 有促
ａ ａｚ ｄ ｎ ｌｅ ．
Ｋｅ ｒ ｓ Ｂ ｖｎ ； ｃ ；ｎ ｖｔ ａ ａ ｉ ｉｎ ｉ ｉｏｆｒｉｚｔ ｎ ｎｖｒｏｍａｕａｉｎ ｙｗｏ ｄ ： ｏ ｉｅ Ｏｏ ￣ｅ Ｉ ｉｏｃ ｐ ｃｔ ｏ ；ｎｖｔ ｅｔ ｉ ｉ ；Ｉ ｉ ｔｒｔ ｒ ａ ｒ ｌａ ｏ ｔ ｏ
胚 胎移植技 术 作 为种 公 牛 的引 进 、 产奶 牛 和 高
３ ． ３ ℃ 。细 微 的 温差 会 影 响精 子 膜脂 的物 理 ８ ５～ ９ 状 态而影 响获 能效果 。
２ １２ ｐ ． ． Ｈ 精 子 获 能 的最 适 ｐ 为 ７ ４～８ ０， Ｈ ． ． 低
优质 肉牛扩繁 的技 术手 段 ， 生 产 中发 挥 了 良好 作 在 用， 但存 在着胚 胎 资源 短 缺 、 胎价 格 过 高 的 问题 。 胚 利用 活体采 卵技术 、 体 卵 巢采 卵 技术 可 显 著 降低 离 胚胎成 本 ， 进一 步扩 大胚胎 移植技 术 的应 用 范围 ， 其 技术基 础是要 通过 牛卵母 细胞 的体外 受精 （Ｖ ） Ｉ Ｆ 和
要 ： 本文综述 了牛卵母 细胞体 外受精和体外成 熟技 术 的研 究进展 ， 包括精 子的体 外获能 、 卵母 细
奶牛GV期卵母细胞OPS法和GMP法超低温冷冻效果
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动物医学进展
2009 年
第 30 卷
第 3 期 ( 总第 188 期 )
由表 1 可知 , 在 EFS30 和 EF S40 液中 , 形态正 常率分别为 68. 2% 和 69. 6% , 成熟率分别为 17. 9% 和19. 2% , 差异不显著, EDF S30 和 EDF S40 形态正 常率 分 别为 77. 4% 和 76. 1% , 成 熟 率 47. 8% 和 44. 1% , 差 异 也 不 显 著, 而 OP S 法 中 EF S 液 和 EDFS 液两组之间形态正 常率和成熟率 差显著 ( P < 0. 05) , 说明 EDF S 液冷冻 GV 期卵母细胞冷冻效 果好于 EFS 液。 2. 2 OPS 法和 GMP 法对牛 GV 期卵母细胞的影响 由表 2 可 知, OPS 法 和 GM P 法 分 别 采 用
液) , 直接投入液氮冷冻。 1. 7 解冻方法 OP S 管和 GMP 管由液氮中取出后, 直接将其 浸入 37 解冻 液 中解 冻。 在 30 恒 温 台上 在 WM1 中平衡 1 min, 再移入 WM2 中平衡 5 min, 然 后移入成熟培养液中与未冷冻的卵母细胞在同一条 件下进行培养比较。 1. 8 GV 期卵母细胞冷冻 - 解冻后的评价 解冻的冷冻卵母细胞经 1 次 ~ 3 次洗涤后, 置
建立了玻璃化冷冻法 , 不但将
操作时间缩短到 30 m in 之内, 而且方法简易, 设备 简单, 在生产中易于推广使用, 为卵母细胞及胚胎的 冷冻保存提供了有效手段 , 因而日益受到人们的重 视, 并已取得很大进展。目前许多研究者 致力于 人及家畜的卵母细胞冷冻保存技术的研究, 并有初 步成效。卵母细胞和胚胎的有效冷冻保存是保护品 种资源和拯救濒危动物不可缺少的技术保障之一, 通过对卵母细胞的冷冻保存 , 对探讨低温生物学特 性和体外受精机理的研究有着重要意义。玻璃化冷 冻因其具有方便实用的优势 , 在卵母细胞冷冻方面 受到了人们极大的重视。本试验通过使用自制 OPS ( open pulled st raw ) 毛 细 管 和 GM P ( glass mi cropipelt e) 毛细管 , 建立奶牛卵母细胞 GV 期玻璃化 冷冻体系和对玻璃化冷冻效果的对比研究。
桑国俊生命孕育的过程
500万个精子同步游向它们旳终点--隐蔽在输卵 管中旳卵子。虽然这个部队如此庞大， 但最终 能攻破卵子旳却只有一种
卵子旳外层被一层透明旳薄膜保护着，这使它看起来像一种悬浮在 天体中旳漂亮旳星球。此时经过种种障碍旳精子终于与卵子相遇， 卵子外膜成为它们第一道需要攻破旳关卡。此时，精子们把头钻到 卵子旳外壁上，尾巴不断拍打着，卵子则伴随精子尾部旳运动缓慢 地逆时针转动
我这个时候旳样子和小猪、小猫、小狗旳胎儿没 多大差别
这是长到11个星期旳胎儿。进入妊娠旳第四个月 后，胎儿从5厘米长到10厘米
胎儿
此时胎儿已长到四个半月，他移动手臂，把手指 放在唇边，这能够增进它对吮吸旳反应
小 小 生 命
孕全图
此时精子旳头已经钻进去了，我们还能够看到它 旳中部和尾部，它就像一种不断旋转旳钻头，在 尾巴拍打旳驱动下努力进入卵子
精子已 经进入 卵子， 完毕受 精
受精 卵一 分为 二
受精卵迅速分裂
受精后8天。胚牙完毕"着陆",微微嵌入子宫内膜。此时它 分裂发育为几百个细胞
受精后6星期，人形已隐约可见。这时，胚胎旳心 跳每分钟140--150下．是母亲心跳旳两倍
牛卵母细胞体外成熟及体外受精的研究
牛卵母细胞体外成熟及体外受精的研究
崔亚利;桑润滋
【期刊名称】《河北农业大学学报》
【年(卷),期】1999(022)001
【摘要】本研究分析了卵巢不同性周期阶段，外源激素和不同卵泡液浓度对卵母细胞体外成熟的影响。
结果表明，卵巢不同性周期阶段对卵母细胞体外成熟的影响不大；成熟培养基中添加ＦＳＨ，ＬＨ和同时添加ＬＨ，雌二醇，可以促进卵母细胞的体外成熟，成熟率分别为６３．０％，６４．０％，６９．１％，卵泡液代替血清，其成熟率分别为５０．７％，５７．６％，５１．９％，２０％ｂＦＦ效果最好。
【总页数】4页(P67-70)
【作者】崔亚利;桑润滋
【作者单位】河北农业大学动物科技学院;河北农业大学动物科技学院
【正文语种】中文
【中图分类】S814.4
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