体外受精技术
体外受精技术的应用现状与法律政策
体外受精技术的应用现状与法律政策近年来，随着科技的进步，越来越多的人开始使用体外受精技术来实现生育的愿望。
在这种情况下，相关的法律政策也必须随之改变和更新，以适应无止境的科技革命和需求更广泛的人群。
本文将探讨一下体外受精技术的应用现状和相关的法律政策。
一、体外受精技术的应用现状体外受精技术是一种高端精细的生殖技术，可以帮助不孕不育夫妇实现生育的愿望。
目前，常见的体外受精技术主要包括试管婴儿技术和胚胎移植技术。
试管婴儿技术是指将男女双方的卵子和精子取出，在实验室中进行体外受精和培育，然后将受精卵重新植入母体，进行妊娠和分娩。
这种技术可以应用在男性因素、女性因素和不明原因造成的不孕不育中。
而胚胎移植技术则是指将成功的受精卵移植到母体内，越来越多的人将其视作安全、有效、可靠的解决办法，因为胚胎移植技术可以避免大量受精卵被丢弃的情况。
随着技术的不断进步，人们可以利用卵子、精子、胚胎的贮存和选择技术，通过体外受精技术进行生殖，提高怀孕的成功率和妊娠的健康水平。
二、法律政策在我国，体外受精技术还相对年轻，在法律上也存在很多问题和限制。
不过近年来，随着政策和法规的制定和推广，体外受精技术已经逐渐成为一个法律规范和有序管理的领域，以确保公众的利益和健康。
按照相关法规，体外受精技术主要应用于治疗不孕不育，必须在完全取得夫妇双方的知情同意和医生的诊断之后才能进行。
此外，核实精子、卵子和胚胎来源、确保实验室和诊所的医疗设备和设施符合卫生安全规定，并且对医疗人员进行专业培训和考核，也是保障公众健康和安全的重要手段。
同时，其他相关问题和法律政策，包括以下几点需要注意：1. 药物的使用和控制：体外受精中，需要使用一些药物辅助受孕，这些药物必须由专业医生进行处方和监管，遵守相关的规定；2. 合法性的核实：所有的体外受精中需要涉及的卵子、精子、胚胎等，都必须有相应的合法来源和证明。
3. 知情权保障：体外受精手术涉及很多风险和不确定性，必须在充分了解风险和收益的基础上，由双方完全自主地做出决定。
体外受精技术的优劣比较
体外受精技术的优劣比较人类对生育的需求是无穷无尽的。
而随着科学技术的不断进展，一些新型的生殖技术应运而生。
体外受精技术就是其中较为常见的一种，它也被称为试管婴儿技术。
相比于传统的自然受孕，体外受精技术的优劣如何呢？一、体外受精技术的优点：1.解决不孕不育问题。
体外受精技术对于那些没有通过传统方式受孕的女性，无疑是一种福音。
通过体外受精技术，他们可以实现自己的生育愿望。
2.遗传疾病筛查。
进行体外受精的夫妇可以通过基因检测排除遗传疾病。
这种方法不仅仅避免了孩子患病的风险，也减轻了夫妇的心理负担。
3.选性别。
对于一些夫妇来说，能够选择自己孩子的性别是一种非常重要的因素。
体外受精技术可以让他们轻松实现这个目的。
二、体外受精技术的缺点：1.费用较高。
体外受精技术需要进行多次试验，再加上后期的治疗和婴儿的护理费用，导致其成本远高于传统的自然受孕方式。
2.成功率有限。
体外受精技术的成功率与夫妇的年龄、身体状况等因素有关。
若是年龄较大或有慢性疾病的患者，成功率会大大降低。
3.孕产风险增加。
体外受精婴儿的诞生风险较自然受孕婴儿要高一些。
其中最大的原因是受精卵在人工条件下需要存为冷冻胚胎，婴儿的出生率较低。
三、结论：总体来说，体外受精技术的优点远大于缺点。
通过体外受精技术，许多夫妇实现了自己的生育愿望，同时也排除了遗传疾病的风险。
虽然孕产风险有所增加，但在科学家们的不断努力下，技术也日益完善。
因此，在符合条件的夫妇使用体外受精技术时，也应该注意保护受精卵和婴儿，避免一些不必要的风险。
体外受精技术
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟培养
2. 成熟培养时间 一般22h-24h，但猪40h-44h，马30h-36h，兔 仅12h-15h 3. 成熟培养的温度和气相环境 人和啮齿类动物：37℃ 牛、猪、羊和马等：38℃~39℃。 pH：7.7好于7.1，7.4，8.0 渗透压：330 Osm/kg好于300，320 气相： 5%CO2 5%CO2＋5%O2＋90%N2
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟
2. 激素 目前大多数都离不开FSH或LH或两者的混合 物，但仍有争议 GH能显著提高精子的受精率，促进卵裂及 胚泡的形成 甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrP） 胰岛素 激活素
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟
3. 生长因子 目前已经证实与卵母细胞成熟有关的生长因 子有：上皮细胞生长因子（EGF）、转化生长因 子α和β（TGF-α，β）、成纤维细胞生长因 子（FGF）、胰岛素类生长因子Ⅰ和（IGFⅡ-Ⅰ， Ⅱ） 4. 血清 胎牛血清（FBS）、发情牛血清（OCS）、发 情前期母牛血清（POS）、超排母牛血清 （SCS）、公牛血清（SS）。
卵母细胞的体外成熟
卵母细胞成熟培养液 以TCM-199较好，可使牛、羊、猪的卵 母细胞体外成熟率高达80%以上。 添加成分： • 促性腺激素：FSH、LH • FCS、BSA：有认为FCS比BSA好，而发情 牛血清或发情羊血清比FCS好。 • 抗生素
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟培养
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的采集与体外培养
1. 离体采集：30min内取卵巢，置生理盐水或PBS （25℃-35℃），3h内回收。 ⑴ 卵泡抽吸法： 针头穿刺，一次进针可抽吸卵巢 皮质的多个卵泡 优点：回收速度快，不易造成卵母细胞的污染； 缺点：容易损伤卵母细胞周围的卵丘细胞，影响 其随后的成熟。
体外受精全过程说明
体外受精全过程说明概述体外受精(IVF) 是一系列复杂的手术，可用于帮助生育或防止遗传问题，同时协助受孕。
在体外受精过程中，医生会从卵巢中采取（取出）成熟卵子，并将其放在实验室里授精。
然后会将受精卵（胚胎）或卵子（胚胎）移植回子宫中。
一个完整的体外受精周期大约需要三周。
有时会把这些步骤分成不同的部分，完成整个过程可能就需要更长的时间。
体外受精是最有效的辅助生殖技术。
该手术可以用女性自己的卵子和伴侣的精子来完成。
体外受精也可以用已知或匿名捐赠者的卵子、精子或胚胎完成。
在某些情况下，可能需要使用妊娠载体——将胚胎植入其子宫。
通过体外受精生出一个健康婴儿的几率取决于许多因素，如年龄和患不孕不育症的原因。
此外，体外受精可能会很耗时、昂贵并具有侵入性。
如果将一个以上的胚胎移植到子宫，体外受精可能会导致怀上多个胎儿（多胎妊娠）。
医生可以帮助您了解体外受精的工作原理、潜在的风险以及这种治疗不孕不育症的方法是否适合您。
做手术的理由体外受精(IVF) 是治疗不孕不育症或遗传问题的一种方法。
如果通过体外受精来治疗不孕不育症，患者和患者伴侣可在体外受精前尝试一些侵入性更小的治疗方案，如服用增加卵子产量的生育药物或宫内人工授精——一种在临近排卵时将精子直接植入子宫的手术。
体外受精有时可作为40 岁以上女性不孕症的主要治疗方法。
如果有某些健康问题，也可进行体外受精。
例如，如果伴侣一方出现以下情况，可选择体外受精：输卵管受损或堵塞。
输卵管受损或堵塞会使卵子难以受精或使胚胎难以到达子宫。
排卵障碍。
如果排卵不频繁或不排卵，可供受精的卵子将会减少。
子宫内膜异位症。
子宫内膜异位症是指子宫组织在子宫外植入并生长——通常会影响卵巢、子宫和输卵管的功能。
子宫肌瘤。
子宫肌瘤是子宫壁的良性肿瘤，常见于30-40 岁的女性。
子宫肌瘤会干扰受精卵的植入。
输卵管绝育术或切除术既往史。
如果做过输卵管结扎术——一种切断或阻断输卵管以永久避孕的绝育手术——但仍想怀孕，体外受精可能是输卵管复通术的替代方法。
体外受精的过程和意义
体外受精的过程和意义体外受精的过程和意义体外受精（In Vitro Fertilization，IVF）是一种助孕技术，通过人工方式将卵子和精子结合在体外培养皿中，并将活化的胚胎移植到母体子宫中，最终实现妊娠和分娩。
体外受精是现代医学领域的重要突破，对于那些面临生育困难的夫妇而言，具有重要的意义。
体外受精的过程通常包括以下几个步骤。
首先，女性需要进行排卵诱导，通过使用激素药物来促进卵子的发育和成熟。
随后，通过外科手术，医生将备选的卵子从女性的卵巢中取出。
接下来，从男性捐赠者或夫妇中收集精子样本，精子经过处理后与卵子在体外结合。
如果受精成功，形成的胚胎将被培养数天，然后通过一个简单的技术将其转移到母体子宫内。
最后，医生将通过血液测试来确认妊娠是否成功。
体外受精的过程虽然看似简单，但实际上需要高度的技术和专业知识。
这种技术的应用可以帮助许多因生理原因无法自然受孕的夫妻实现生育愿望，为家庭增添了新的希望。
它可以用于治疗许多不同类型的生育问题，如输卵管阻塞、子宫内膜异位症、男性精子质量问题等。
此外，体外受精还可以提供遗传病筛查的机会。
在受精过程中，医生可以进行胚胎细胞培养，并进行基因检测，以确定携带有遗传缺陷的胚胎。
这意味着对于有高遗传疾病风险的夫妇来说，他们可以通过选择健康的胚胎进行移植，减少遗传疾病的传播风险。
体外受精还对科学研究和医学进步具有重要意义。
通过研究胚胎发育的过程，科学家可以更好地了解人类生殖健康和发育过程中的潜在问题。
这也为研究人类生物学、治疗不育症以及其他相关医学领域的疾病提供了一个平台。
然而，体外受精也存在一些伦理和社会问题。
首先，体外受精的过程可能非常昂贵，并且无法为每个需要的夫妻提供服务。
这可能导致只有经济条件好的夫妻能够享受这一技术，进一步加剧社会阶层的不平等。
其次，人工受精的道德边界也备受关注，纠结于各种伦理法规中。
例如，胚胎移植时应该选择多少个？是否允许冷冻胚胎？这些问题引发了关于生命伦理和道德的争论。
体外受精和早期胚胎培养
胚胎发育阶段
受精卵经过卵裂期、桑椹胚期、囊胚 期和原肠胚期等阶段，最终发育成具 有内胚层、中胚层和外胚层的完整胚 胎。
了解胚胎发育的各个阶段有助于评估 胚胎的发育潜力和提高体外受精的成 功率。
在胚胎发育的不同阶段，对营养和生 长条件的需求也不同，因此需要选择 适当的培养液和调整培养条件以满足 其需求。
基因诊断
通过基因检测技术，可以诊断胚胎是 否存在遗传性疾病，为夫妇提供生育 健康后代的机会。
生殖科学研究
胚胎发育机制
体外受精和早期胚胎培养为生殖科学研究提供了实验模型，有助于深入了解胚 胎发育的机制和过程。
生殖医学研究
通过体外受精和胚胎培养技术，可以开展生殖医学相关研究，推动生殖健康领 域的科技进步。
挑战
尽管技术不断进步，但仍存在一些挑战，如胚胎发育不完全、成功率不稳定等问 题，需要进一步研究和探索。
社会影响与接受度
社会影响
体外受精和早期胚胎培养技术的发展 对社会产生深远影响，如改变生育观 念、减轻家庭负担等，同时也可能带 来一些社会问题，如代孕、胚胎买卖 等。
接受度
随着技术的普及和社会的进步，人们 对于体外受精和早期胚胎培养技术的 接受度逐渐提高，但仍存在一些观念 和文化上的障碍需要克服。
国际法规与政策
国际组织
国际合作
国际法
一些国际组织，如世界卫生组织（ WHO）和国际人类胚胎研究协会（ ISHRE）等，会制定一些指导原则和 政策建议，以指导各国在这一领域的 立法和实践。
由于体外受精和胚胎培养涉及到跨国 界的问题，因此国际合作在这一领域 非常重要。例如，不同国家的医疗机 构可能会进行合作，共享技术和经验 。
体外受精技术在人类生殖医学中的应用
体外受精技术在人类生殖医学中的应用随着科技的不断发展，人类生殖医学也得到了巨大的进步，其中最重要的技术之一就是体外受精技术。
体外受精技术涉及到多种不同的程序和技术，包括体外受精（IVF）、单精子注射（ICSI）、胚胎移植等。
这些技术不仅对于不孕症患者的治疗有着巨大的帮助，同时也为多种其他生殖医学问题提供了解决方案。
在本文中，我们将探讨体外受精技术在人类生殖医学中的广泛应用。
体外受精技术的概述体外受精是指将一个女性的卵子与一个男性的精子结合在一起，使其在实验室中进行受精，并在其发育成为一个胚胎后再将其放回到女性的子宫中。
这项技术已经成功地用于治疗各种不孕症状，包括卵巢功能减退症、输卵管的阻塞、精子数量不足等等。
此外，单精子注射（ICSI）也是一种常用的体外受精技术。
这种技术适用于那些由于各种原因而导致精子数目严重不足的男性患者。
在ICSI过程中，只需将一只精子注射到卵子中，从而成功地进行受精。
胚胎移植也是一项常用的体外受精技术。
在这种过程中，医生会将由卵子和精子受精而成的胚胎转移到患者的子宫中。
根据患者的需求和特定情况，医生可能会在转移前进行胚胎检测，并选择最健康的胚胎进行移植。
体外受精技术在不孕症治疗中的应用体外受精技术已经被用于治疗各种不孕症病例，包括女性的卵巢功能异常、输卵管阻塞、男性的精子数量不足，以及其他各种不孕症状。
在体外受精技术的过程中，医生会收集女性的卵子和男性的精子，并将其在实验室中结合起来。
经过数天的发育，医生会评估胚胎的质量，并将它们转移到患者的子宫中或保存起来以备后用。
由于体外受精技术的成功率有限，医生通常会收集多个卵子并进行多次尝试。
在女性的卵巢刺激后，一般能够得到10-20个卵子，而在最终的过程中，往往只有一到两个胚胎能够成功移植到患者的子宫中。
另外需要注意的是，体外受精技术的费用相对较高，因此对于某些患者而言可能并不是最优的选择。
体外受精技术在胚胎检测和筛选中的应用在胚胎移植前进行胚胎检测和筛选，是体外受精技术的另一个重要应用。
体外受精技术的研究和发展
体外受精技术的研究和发展近年来，随着人民生活水平的提高以及医学科学技术的发展，人们对于生命的认知和掌握也越来越深刻。
体外受精技术便是其中之一，它是近些年来广受欢迎的一项技术，它能够帮助许多不孕症夫妻实现生育梦想，受到了社会各界的广泛关注。
本文将从技术的研究与发展、应用与局限、伦理和道德等方面探讨体外受精技术。
一、技术的研究与发展体外受精技术，简称试管婴儿技术，是一种较先进的助孕技术，其主要原理是在体外将精子和卵子结合，形成胚胎，再将胚胎移植回母体内妊娠。
与传统的辅助生育技术相比，试管婴儿技术具有显著的优势，不受年龄、排卵、输卵管和睾丸等因素的限制，能够使那些因为生理原因不能自然受孕的夫妇获得生育机会，特别是对于不孕症患者，试管婴儿技术成为求得生育的希望之光。
实际上，体外生殖技术早在上个世纪60年代就已经开始研究。
1969年，英国生殖生物学家埃德华•斯图尔特博士在人工培养的体外卵子中引入精子，并且成功地实现了兔子的体外受精。
20世纪70年代初，利用体外受精技术，美国一位叫凯利的女孩成功出生，这标志着人们可以通过辅助生殖技术创造生命。
如今，体外受精技术已经应用于全球范围内，不断发展、完善之中。
敦煌一号，是我国人工备孕管理助产应急能力的提升的缩影之一，是我国第一个通过体外受精技术成功人工辅助受孕的婴儿。
与此同时，随着科技的不断进步以及人们对于试管婴儿技术的研究，越来越多的细节问题也得到了解决，未来的发展也能够不断革新，助力那些生育梦想尚未实现的夫妻实现他们的愿望。
二、应用与局限体外受精技术，虽然是一项相对成熟的技术，但是它的应用也存在着一定的局限性。
首先，它虽然可以缓解不孕症的问题，但是并不能完全解决，而且如果不孕症是由于女性输卵管等疾病造成的，那么试管婴儿的成功率通常会相对较低。
此外，如果胚胎品质或数量等因素不好的话，也会对试管婴儿技术的应用造成一定的限制。
除此之外，试管婴儿技术也可能会加重孪生子宫内着床，增加双胞胎等多胎妊娠等风险，这也是需要注意的。
体外受精技术在动物培育中的应用指南
体外受精技术在动物培育中的应用指南近年来，随着科学技术的不断发展，体外受精技术在动物培育中的应用越来越广泛。
体外受精技术是指将取自母体的卵子与父体的精子在体外进行受精，然后将受精卵植入母体的子宫进行发育，以实现对动物繁殖过程的精细控制。
本文将从四个方面介绍体外受精技术在动物培育中的应用指南。
首先，体外受精技术可以应用于黄牛繁殖领域。
黄牛是我国大力发展的重要反刍动物，其肉质优良，且适应性强，因此受到许多农民和养殖商的青睐。
然而，传统的自然交配繁殖方式存在一些问题，如精液质量难以控制、受精率低等。
体外受精技术可以帮助解决这些问题。
通过体外受精技术，可以在实验室中筛选质量较高的精子，提高受精率和受精卵的质量，从而提高繁殖效益。
其次，体外受精技术在家禽繁殖中也有广泛应用。
对于许多珍贵的家禽品种，传统的自然交配方式存在一些不足，如配种成本高、疾病传播风险大等。
而体外受精技术可以避免这些问题。
通过体外受精技术，可以将优质的精子和卵子在实验室中进行受精，成功率较高，可以保证种源的纯度和品质。
此外，体外受精技术还可以用于保存珍稀家禽的遗传资源，以防止遗传多样性的丧失。
第三，体外受精技术在猪繁殖领域也有广泛的应用。
猪是我国最主要的畜牧业家禽之一，对于提高猪肉产量和质量具有重要意义。
然而，由于猪的生殖特点，传统的自然交配方式效率较低。
体外受精技术可以解决这个问题。
通过体外受精技术，可以有效地控制受精时间和数量，减少种猪的使用量，提高繁殖效率。
此外，体外受精技术还可以筛选出优良品种的精子和卵子，进一步提高猪的肉质和品质。
最后，体外受精技术在马匹繁殖中也有应用前景。
马匹是广泛运用于农业、运输等领域的重要动物，其育种和繁殖工作至关重要。
传统的自然交配方式存在很多问题，如配种成本高、繁殖效率低等。
而体外受精技术可以解决这些问题。
通过体外受精技术，可以有效控制受精的时间和数量，提高繁殖效率。
此外，体外受精技术还可以帮助筛选马匹的优良品种，提高马匹的运动能力和品质。
体外受精技术的研究现状与应用
体外受精技术的研究现状与应用体外受精技术（in vitro fertilization，IVF）是一种辅助生殖技术，已经成为许多不孕家庭的救命稻草。
IVF技术最早确立于20世纪70年代，经历了多年的发展与完善，现在已经成为临床实践中最常用的辅助生殖技术之一。
本文将总结目前IVF技术的研究现状与应用，探讨其优点及局限性。
研究现状IVF技术可以为不孕不育的夫妇提供生育机会。
其具体操作流程为：将女性卵巢中发育成熟的卵子采集出来，借助试管中的高科技仪器，将卵子与精子在体外进行人工受精，使受精卵形成。
然后将受精卵培养数天至达到更高质量的胚胎，再将胚胎移植回女性子宫内，帮助其妊娠。
IVF技术相较于其他辅助技术优点明显，因此目前已经成为临床实践中最常用的方法之一。
首先，IVF技术可以允许子宫因素导致的不孕症患者受孕。
因为有的女性子宫异常，难以为受精卵提供支持，但通过IVF技术，可以使受精卵在体外培育，只有胚胎具有高质量才能移植回去，这样就可以绕开这一问题。
其次，IVF技术也可以帮助男性的不育症患者获得受孕机会。
例如对于精子质量差的男性，通过ICSI技术向卵子中注射单个精子，可以使其取得更高的受孕成功率。
应用IVF技术迅速发展并广泛应用于各种不孕不育的情况。
目前，IVF技术在以下方面得到了广泛应用：排卵障碍症，如PCOS、原发性卵巢功能不足等引起的不孕症；输卵管因素不孕、子宫因素不孕、男性因素不育等问题；遗传因素不孕，如药物治疗不孕，白血病放射线影响、染色体、单基因、多基因遗传病等情况引起的不孕。
局限性然而，IVF技术也存在其局限性。
首先，不能保证成功率100%。
IVF技术的成功率一般较低，国际上成功率最高也只有50%左右，还需结合个人因素进行评估。
其次，部分因素不适合IVF技术，如子宫内膜病变、卵管染色体畸变、男性因素不育中出现的少数单精子、重度腹膜炎等情况。
总结体外受精技术已经成为解决不孕不育问题的有效方法之一。
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体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞体外成熟的质量评定
⑴ 形态观察：细胞质均匀、没有空泡
⑵ 固定染色法 ：0.1%透明质酸酶 醋酸 酒精或醋酸甲醇（1:3）固定24h～48h 1%间苯二酚兰（Lacmoid）或1%地衣红 （Orcein）的40%醋酸溶液染色
⑶ 受精和胚胎发育潜能的评定
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟
卵母细胞成熟培养液 以TCM-199较好，可使牛、羊、猪的卵 母细胞体外成熟率高达80%以上。 添加成分： • 促性腺激素：FSH、LH • FCS、BSA：有认为FCS比BSA好，而发情 牛血清或发情羊血清比FCS好。 • 抗生素
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟培养
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟
卵母细胞成熟的标志 第一极体的排出、卵丘细胞的扩展可作为成熟的标 志，而生发泡破裂(GVBD)是卵母细胞恢复减数分裂的主 要标准，因此常用地衣红染色才可判断。 牛卵母细胞体外成熟标准： 1级成熟卵：卵丘细胞完全扩展，卵丘细胞至少向外扩 展3倍于裸卵直径； 2级成熟卵：卵丘细胞中等扩展，卵丘细胞至少向外扩 展2倍于裸卵直径； 3级成熟卵：卵丘细胞轻度假扩展，卵丘细胞仍紧紧粘 附于透明带上。 1级和2级卵通常均已排出第一极体。
体 外胞的体外成熟培养
2. 成熟培养时间 一般22h-24h，但猪40h-44h，马30h-36h，兔 仅12h-15h 3. 成熟培养的温度和气相环境 人和啮齿类动物：37℃ 牛、猪、羊和马等：38℃~39℃。 pH：7.7好于7.1，7.4，8.0 渗透压：330 Osm/kg好于300，320 气相： 5%CO2 5%CO2＋5%O2＋90%N2
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟
（2）卵母细胞的形态 A、 76.2%； B、67%； C、22%； D、11.4% （3）卵巢贮存时间与温度 <30º C 对成熟和胚胎发育不利(First & Parrish） 绵羊的卵巢贮存在22º C数小时对成熟无明 显影响，但体温条件下则会使卵母细胞的质量 下降 (Moodie & Graham )
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的采集 ⑵ B型超声波法：超声波探头和采卵器插入到阴 道子宫颈的一侧穹隆处。术者通过直肠将卵巢 贴在探头上，根据B超屏幕上所显示的卵泡位 置进行穿刺而将卵母细胞抽出 优点：不用手术，操作速度快，对母牛损伤小， 可频繁采卵，且亦可对妊娠母牛采卵； 缺点：操作技术较难掌握，并需要昂贵的超声设 备。
（二）精子获能处理方法 3.卵泡液孵育法 卵泡液含有来自血清的大分子物质，并含 有诱发精子获能和顶体反应的因子，故在精液 中添加一定浓度的卵泡液可诱发精子获能。 10%卵泡液，牛受精分裂率（40.3% Vs 87.5%）和囊胚发育率（8.3% Vs 40.4%）均 显著下降，但加入50%的卵泡内膜细胞条件液 则能 。 卵泡液可以用于精子的获能处理，但不能 用于IVF系统。
体外受精技术
体 外 受 精 的 概 念
狭义：将动物受精过程中的精卵结合在体外环 境下完成的现象。包括自然条件下的体外受精 (两栖类和鱼类)，和人为培养条件下的体外受 精(哺乳动物)。 广义：经过特殊处理的精子在体外使卵母细胞 受精的技术，所以体外受精的胚胎移植后所生 婴儿又称为“试管婴儿”。包括卵母细胞的体 外成熟和受精卵的体外培养两项配套技术。 优点：与体内受精相比，所需精子数减少，提 高精液利用率。 Example: 流式细胞含仪分离的性控精子只能用于体 外受精。
卵母细胞的体外成熟
影响卵母细胞成熟的因素 • 卵母细胞的来源：不同种类的动物、不同生理 阶段的动物(小牛低于成年牛)、卵母细胞的质量 等；
（1）动物种类与年龄： 牛、羊效果较好，而马、 猪较差。 小牛卵母细胞的平均直径 （118.04±1.15μm）比成年母牛的 （122.84±0.74μm）小。 体外成熟的小牛卵母细胞体外受精后发育潜 力也低于成年卵母细胞
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的采集与体外培养
1. 离体采集：30min内取卵巢，置生理盐水或PBS （25℃-35℃），3h内回收。 ⑴ 卵泡抽吸法： 针头穿刺，一次进针可抽吸卵巢 皮质的多个卵泡 优点：回收速度快，不易造成卵母细胞的污染； 缺点：容易损伤卵母细胞周围的卵丘细胞，影响 其随后的成熟。
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的采集
⑵ 卵巢解剖法：卵巢切为两半，去掉中间的髓质 部分，刀片划破卵泡，在培养液中反复冲洗 优点：能保持卵母细胞周围卵泡细胞的完整性，回 收率也相对较高；
缺点：回收的速度相对较慢，容易造成污染。
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的采集 2. 活体采集(Ovum Pick-Up,OPU) ⑴ 腔镜法：腹壁切开一小口，插入腹腔镜，操作 杆和穿刺针，配合将卵母细胞抽吸出来 优点：比较直观，容易掌握； 缺点：工作量大，对母牛有损伤，不能频繁手术。
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
影响卵母细胞成熟的因素
培养条件： 温度：37C较好，但各种动物最适温 度不同，如兔子低于体温3C较好，牛 35-39C都可，但38-39C最合适； 培养基：水、血清（无血清、有血 清)、 无血清时添加BSA等；有血清时如胎 牛血清、发情牛血清、公牛血清、超排 牛血清等；
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟
2. 激素 目前大多数都离不开FSH或LH或两者的混合 物，但仍有争议 GH能显著提高精子的受精率，促进卵裂及 胚泡的形成 甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrP） 胰岛素 激活素
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟
3. 生长因子 目前已经证实与卵母细胞成熟有关的生长因 子有：上皮细胞生长因子（EGF）、转化生长因 子α和β（TGF-α，β）、成纤维细胞生长因 子（FGF）、胰岛素类生长因子Ⅰ和（IGFⅡ-Ⅰ， Ⅱ） 4. 血清 胎牛血清（FBS）、发情牛血清（OCS）、发 情前期母牛血清（POS）、超排母牛血清 （SCS）、公牛血清（SS）。
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟培养
4.IVM系统 ⑴ 开放培养系统 1ml-2ml成熟培养液直接置于平皿内或培养 板内，放入50枚-200枚卵母细胞培养，上面不 盖石蜡油。 优点：简单，对培养液中的脂溶性物质没有若 影响，能同时培养大量细胞 缺点：渗透压变化较大，容易污染
国 内 外 研 究 现 状
世界体外受精的首创纪录
动物种类 兔 叙利亚仓鼠 小鼠 中国仓鼠 猫 土拨鼠 大鼠 狗 牛 猪 绵羊 山羊 首创纪录文献 Thibault(1954) Yanaginmachi,chang(1963) Whittingham(1968) Pickworth,Chang(1969) Hammer(1970) Yanagimachi(1972) Miyamoto,Chang(1973) Mahi,Yanagimachi(1976) Brackett(1978) Iritani,Niwa(1977) Bondioli,Wright(1980) 花田章(1985)
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟
卵母细胞成熟目的： 提供可利用的卵母细胞用于体 外受精、克隆等； 研究其体内成熟的模型。 卵母细胞体外成熟的特征 • 生发泡破裂； • 染色体凝集； • 纺缍体形成； • 极体排出； • 透明带软化； • 卵丘细胞扩展。
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外成熟培养
⑵ 微滴培养系统 将成熟培养液在做成50-500l的微滴，覆石蜡油， 将卵母细胞置于其中培养。 优点：渗透压比较稳定，不易污染； 缺点：对脂溶性物质有稀释作用，成本高，培养结果 易受石蜡油质量的影响。 ⑶ 密闭培养系统 置1～2ml培养液的试管中，胶塞，在培养箱或恒 温水浴中培养；若采用培养皿或微滴培养，则可将其 装入密闭的塑料袋内。 优点：不要CO2培养箱，方便运输 缺点：pH不如前者稳定。
（二）精子获能处理方法
1. 血清白蛋白法 将精子与血清白蛋白溶液进行长时间孵育 。
该法由于需要的时间较长，且诱发精子获能的作用 不强，故仅在IVF技术研究的初期进行过尝试，具有 一定作用，目前仅作为精子获能的一种辅助手段。
2. 高渗盐法 精子表面含有许多被膜蛋白，即所谓的“去能因 子”。当用高离子强度溶液处理精子时，这些被膜蛋 白将从精子的表面脱落，从而导致精子获能。 由于高离子强度溶液对精子具有渗透打击作用， 会影响精子的活力，故目前已废除不用。
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
精子的分离、洗涤与体外获能
离心洗涤法：对于活力好的精子直接 将其放入获能液或受精液中，离心洗涤 若干次便可。 BSA/Percoll密度梯度离心法：利用 形态正常精子密度高于异常精子的原理。 如将BSA制成不连续的密度梯度或将 Percoll制成30-40%或45-90%梯度，经平 衡离心从而得到高受精力的精子。 玻璃棉过滤法：采作小玻璃珠过滤除 去死精子。因其成本高，较少采用。
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的筛选
只有周围包被着完整卵丘（A级）或部分卵 丘脱落（B级）(1层以上卵丘细胞）、胞浆均 质并充满于透明带内的卵母细胞才能进行成熟 与胚胎发育的培养。 A级：卵丘细胞致密，至少有5层以上； B级：卵丘细胞为2-4层； C级：卵母细胞大部分被包裹； D级：卵母细胞少量被包裹； E级：裸卵。 A、B级可用于培养，C、D级成熟率低。
体 外 胚 胎 生 产 技 术 要 点
卵母细胞的体外保存
1. 37℃保存 应考虑保存时间与卵老化 2.低温保存 0℃-10℃ 兔:<10℃ 24h，受精率78％，78h仍可保持 受精能力；>10℃，受精能力显著降低。