朊病毒的检测方法
阮病毒介绍
单个的解剖部位，或组织器官。
Bjorn Sigurdsson, Iceland.
牛海绵状脑病(bovine spongiform encephalopathy, BSE )
1984年疯牛病在英国被首次发现。1987年 Wells首先进行了报道。感染原因为进食病 羊的肉制品。 1992年至少18万头牛感染了PrD,平均每周 800～1000头牛发病。 目前全世界发现有此病的国家已超过一百 个，其中部分国家的疯牛病只在英国进口 的牛中发生。
朊病毒感染引起人和动物的主要疾病
1.羊瘙痒病（scrapie） 2.疯牛病（bovine spongiform encephalopathy, BSE ） 3.库鲁病（Kuru） 4.克-雅氏症（Creutzefeldt-jakob disease, CJD）
传染性病毒性痴呆（transmissible virus dementia, TVD） 5. 致死性家族性失眠症（fatal familial insomnia, FFI） 6. 吉斯特曼-斯召斯列综合征（Gerstmann-Straussler
syndrome, GSS）
朊病毒病的分类
第一类: 羊瘙痒病；牛海绵状脑病；散发性、家族性及医源性克雅
病（sporadic, familial and iatrogenic CJD, sCJD, fCJD, iCJD）；库鲁 病；散发性、家族性致死性失眠症（Sporadic and familial fatal insomnia，sFI , fFI）。
由正常PrPc转化成恶性PrPsc的机理和因素不清，难以预防； 6. 100%病死率，缺乏治疗药物，无法研制预防疫苗。
朊病毒病的研究进展
朊病毒病的研究进展发表时间：2013-04-24T13:47:27.997Z 来源：《医药前沿》2013年第7期供稿作者：卢韦华琳[导读] 对动物而言可分为牛海绵状脑病和羊痒病等；对于人类可分为库鲁病、克雅氏病、变异型克雅氏病等卢韦华琳（四川大学基础医学与法医学院四川成都 60041）【摘要】朊病毒病是一类由朊病毒引起的致死性神经退行性疾病，对人类社会的危害日益明显。
本文就朊病毒病的致病机制、检测及治疗的研究进展做一综述。
【关键词】朊病毒朊蛋白致病机制检测治疗综述【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）07-0088-02 朊病毒病是一种慢性、致死性、神经退行性传染病。
对动物而言可分为牛海绵状脑病和羊痒病等；对于人类可分为库鲁病、克雅氏病、变异型克雅氏病等[1]。
该疾病主要由于人和动物感染朊病毒引起。
朊病毒并非普遍意义的病毒，而是一种可自我复制的小分子蛋白，其特点包括：无核酸、无免疫源性、对外界环境的抵抗力强、传染性强、可在多物种间传播等，可造成人和动物的神经元、脑组织、胶质细胞造成一系列损伤。
本文着重介绍朊病毒病的致病机制、检测及治疗的研究进展。
1、致病机制朊病毒朊病毒有2种同分异构体，即正常细胞型朊病毒（PrPc）和致病型朊病毒（PrPSc）。
功能上，PrPc具有超氧化物歧化酶(SOD)活性，可调节免疫，与信号转导和突触传递有关[2]。
PrPsc可杀死神经细胞，破坏机体的GABA系统且影响细胞内钙调节等[3]。
结构上，PrPc 是4个α螺旋(H1～H4)的球形蛋白，含43％的α螺旋，很少或几乎不含β折叠；而PrPSc有2个螺旋(Hl和H2)形成4个β折叠链，含有43％的β折叠和30％的α螺旋[4]转化 PrPc转化为致病PrPSc现有两种学说：①一种认为PrPc和PrPsc可互相转化，正常情况下处于平衡，当外来PrPsc进入体内会形成多聚体，破坏这种平衡，从而PrPc大量消耗；②一种认为PrPsc有模版作用，可促使PrPc构象改变，PrPsc得以繁殖形成多聚体。
[医学]朊病毒的发现与研究
![[医学]朊病毒的发现与研究](https://img.taocdn.com/s3/m/2c33774bc281e53a5802ffbc.png)
质疑？？？
没有核酸，这个病原物如何增殖？如何复制本身的遗传信息 是不是存在核酸，只是未能检测出来
随着研究深入，得到更多打破传统观念的结果
（1）寻找Prn-p基因 编码朊蛋白的基因，不但在染病动物脑中存在，在正
常动物脑中也有，而且表达的一样多 正常小鼠（PrPc) 得病小鼠（PrPsc）
结论：PrPsc的出现可能不是调节基因起作用的
子模型 • 阿兹海默症或通过朊病毒传染
thanks
• 1980s
英国
疯牛病
丹尼尔 ·伽杜塞克 （D.Gajdusek)
由于查明库鲁病的病因，认为是一种 潜伏期极长的进行性病毒 获得1976年诺贝尔生理学或医学奖
三.朊病毒的发现
1997年，为肯定斯坦利·普 鲁希纳在研究克雅氏病（
Creutzfeldt-Jakob disease ，CJD）病原体的过程中发 现了朊蛋白（Prion），并 在其致病机理的研究方面的 贡献。授予其诺贝尔生理学 或医学奖
（2）朊蛋白在正常动物脑中的功能是什么 剔除PrP基因的遗传工程小鼠，看不出病症，看起来一
切正常，亦能正常生育
（3）PrP%小鼠做出贡献 把染病小鼠的脑提取物接种给PrP%小鼠，不染病，
接种给普通小鼠却染病
由此得出：PrPc蛋白的存在是染病的必要条件
（4）PrPc蛋白的一些性质
• 由208个氨基酸残基组成，分子量33-35kd（大小仅为最小 病毒的1%）
• 1974年普鲁西纳正式开始对羊搔痒病开始研究， 1982年发表第一篇文章
• 1975年起，普鲁西纳得到并用于研究的经费共5000 多万美元
普鲁西纳的研究工作
目标： 分离，纯化病原物，并加以鉴定，每步
都离不开检测方法
山东版必修1《课外阅读疯牛病与朊病毒》ppt课件
另外，检测方法还有：
• • • • • 4、蛋白质错误折叠循环扩增 5、毛细管电泳法 6 、Protein A磁珠检测朊病毒 7、双色强荧光目标扫描法 8、红细胞分化相关因子水平检测方法
朊病毒病治疗的思路
• 朊病毒在机体内复制的分子基础是PrP6与PrP&间 构象转化，故而阻断PrPc向着PrP＆转化是朊病 毒病治疗的一个切入点。此外，朊病毒病主要特 征是朊病毒在中枢神经系统聚集，引起患病个体 脑组织的病理变化，凶此，减少PrP&的蓄积也是 治疗过程中经常考虑到的另外一个方面。
疯牛病（BSE）
• BSE的病程一般为14～90天，潜伏期长达4～6年 。这种病多发生在4岁左右的成年牛身上。其症状 不尽相同，多数病牛中枢神经系统出现变化，行 为反常，烦躁不安，对声音和触摸，尤其是对头 部触摸过分敏感，步态不稳，经常乱踢以至摔倒 、抽搐。发病初期无上述症状，后期出现强直性 痉挛，粪便坚硬，两耳对称性活动困难，心搏缓 慢(平均50次/分)，呼吸频率增快，体重下降，极 度消瘦，以至死亡。
下图为朊病毒的结构
朊病毒的危害
• 朊病毒病可以是遗传性的，也可以是传染性的。 朊病毒的传播途径包括，食用动物肉骨粉饲科、 牛骨粉汤；医源性感染，如使用脑垂体生长激素 、促性腺激素和硬脑膜移植、角膜移植、输血等 。 • 由朊病毒引起的病统称朊病毒病或传染性海绵脑 病，它们都为致死性中枢神经系统的慢性退化性 脑病，感染朊病毒后有超长的潜伏期，平均20年 ，最长可达到50年，发病前无法检测和诊断。
朊病毒病治疗的研究进展
• 1、化学治疗
• 常常使用一些具有抗朊病毒作用的化合物来治疗。然而， 这些物质在体外培养接种朊病毒的细胞模型中有效，有的 且对动物模型有毒性，或在体内治疗效率极低，甚至无效 。
初中生物朊病毒知识点总结
初中生物朊病毒知识点总结一、朊病毒的基本概念朊病毒（Prion）是一种特殊的传染性蛋白质，它不含有遗传物质如DNA或RNA，但却能够诱导正常的朊蛋白发生结构变化，从而引发一系列神经退行性疾病。
朊病毒的发现挑战了传统关于病原体必须含有遗传物质的观点，为生物学领域带来了新的研究课题。
二、朊病毒的结构与特性1. 结构特点- 朊病毒通常由一个或多个异常折叠的朊蛋白分子组成。
- 这些异常折叠的蛋白质具有高度的稳定性和抵抗蛋白酶消化的能力。
- 朊病毒的形态多样，可以在多种生物体内发现。
2. 传染性- 朊病毒能够通过直接或间接接触传播，例如通过受污染的手术器械、器官移植等途径。
- 它们能够在宿主体内诱导正常的朊蛋白发生结构变化，从而形成更多的朊病毒。
三、朊病毒引起的疾病1. 克雅氏病（Creutzfeldt-Jakob Disease, CJD）- 是人类中最常见的朊病毒疾病。
- 表现为进行性痴呆、肌阵挛、行为改变等症状。
- 通常在症状出现后1-2年内导致死亡。
2. 变异型克雅氏病（Variant Creutzfeldt-Jakob Disease, vCJD） - 主要影响年轻人群，平均发病年龄在30岁以下。
- 症状包括精神病性症状、严重头痛、肌肉僵硬等。
3. 格特瑞-斯特劳斯勒症候群（Gerstmann-Sträussler-Scheinker syndrome, GSS）- 表现为共济失调、眼肌麻痹、痴呆等症状。
4. 动物中的朊病毒疾病- 牛海绵状脑病（Bovine Spongiform Encephalopathy, BSE），俗称“疯牛病”。
- 羊瘙痒症（Scrapie）。
四、朊病毒的检测与诊断1. 临床诊断- 根据病人的临床症状和体征进行初步诊断。
- 朊病毒疾病的症状与其他神经退行性疾病相似，需要通过实验室检测来确诊。
2. 实验室检测- 免疫组化染色：利用抗体特异性识别朊蛋白。
- 西方印迹（Western blot）：检测脑组织中的异常朊蛋白。
朊病毒
朊病毒简介朊病毒又称蛋白质侵染因子（又称毒阮）。
朊病毒是一类能侵染动物并在宿主细胞内复制的小分子无免疫性疏水蛋白质。
朊是蛋白质的旧称，朊病毒意思就是蛋白质病毒，是唯一不用DNA，RNA作遗传物质的病毒。
朊病毒是一类能引起哺乳动物和人的中枢神经系统病变的传染性的病变因子，美国生物学家斯垣利·普鲁辛纳（Prusiner）认为它是一种蛋白质侵染颗粒。
病毒概述严格意义上讲，病毒为非生物。
它们无细胞结构且个体积微小，其构成很特别，仅由核酸和蛋白质构成。
核酸（DNA或RNA）在病毒的遗传上起着重要作用，而蛋白质外壳只对核酸起保护作用，本身并没有遗传性。
这是人们对病毒的基本认识。
然而，随着人们对一些疾病的深入研究，科学家们发现，还有一类物质与一般病毒不一样，它只有蛋白质而无核酸，但却既有感染性，又有遗传性，并且具有和一切已知传统病原体不同的异常特性。
它就是朊病毒。
病毒研究用朊病毒命名朊粒（prion)不大恰当，朊粒的生物性状与病毒差异很大，它的发现，提示在传统的传染病病原微生物及寄生虫之外，又增加了一种全新类型的病原因子，其生物学位置还未确定。
朊病毒就是蛋白质病毒，是只有蛋白质而没有核酸的病毒。
1997年诺贝尔医学或生理学奖的获得者美国生物学家斯垣利·普鲁辛纳（S. B. Prusiner）就是由于研究朊病毒作出卓越贡献而获此殊荣的。
朊病毒不仅与人类健康、家畜饲养关系密切，而且可为研究与痴呆有关的其他疾病提供重要信息。
就生物理论而言，朊病毒的复制并非以核酸为模板，而是以蛋白质为模板，这必将对探索生命的起源与生命现象的本质产生重大的影响。
病毒特性朊病毒与常规病毒一样，有可滤过性、传染性、致病性、对宿主范围的特异性，但它比已知的最小的常规病毒还小得多（约30～50nm）。
电镜下观察不到病毒粒子的结构，且不呈现免疫效应，不诱发干扰素产生，也不受干扰作用。
朊病毒对人类最大的威胁是可以导致人类和家畜患中枢神经系统退化性病变，最终不治而亡。
有关朊病毒的几个经典实验
有关朊病毒的⼏个经典实验有关朊病毒的⼏个经典实验近年来不断爆发的疯⽜病，引起了全世界的关注。
医学上称疯⽜病为⽜脑海绵状病，是⽜的⼀种致命性神经系统疾病。
现在我们知道朊病毒(prion)是引起动物及⼈的⼀种传染性病原，疯⽜病．⽺瘙痒病、⼈类海绵状脑病等都是感染朊病毒后发病的。
其实⼤约在300年前，⼈们已经注意到绵⽺⾝上患的“⽺搔痒症”，其症状表现为：丧失协调性，站⽴不稳，烦躁不安，奇痒难熬，直到瘫痪死亡。
为了搞清该病的致病因素，科学家们进⾏了许多实验。
实验⼀：病毒与细胞不同，⼀般⼩于100纳⽶。
科学家（斯但利?普鲁⾟纳）将患病脑组织提取液过滤后的滤液去感染正常动物，动物得病。
该实验说明病原不是细胞类⽣物⽽应该是病毒类。
实验⼆：20世纪60年代，英国⽣物学家T·Alper⽤紫外线等⼿段破坏患有⽺瘙痒症（⽺的类疯⽜病）⽺的脑组织中的核酸后，再将抽提物注射到健康脑中，仍有感染能⼒。
因为有核酸的病原体在破坏核酸后会丧失感染能⼒，于是，她提出疑问：瘙痒症的感染因⼦可能不含核酸？后来，美国有位年轻⼈普鲁⾟纳意识到这是⼀个前所未有的⼤问题，⽴即进⾏了研究。
实验三：普鲁⾟纳⽤多种理化因素，如紫外线照射、电离辐射、超声波以及80～100℃⾼温、甲醛、羟胺、核酸酶类处理病原，病原仍然具有感染性。
这些因素都是破坏核酸的，⽽病原对此表现出相当的耐受能⼒。
他再⽤破坏蛋⽩质的蛋⽩酶K、尿素、苯酚、氯仿等处理病原，处理后的病原不会感染正常动物。
总的来说，凡能作⽤于核酸并使之失活的⽅法，均不能导致朊病毒失活；凡能使蛋⽩质消化、变性、修饰⽽失活的⽅法，均可能使朊病毒失活。
由此可见，病原本质上是具有感染性的蛋⽩质。
实验四：普鲁⾟纳(1991)对⽺瘙痒病感染的培养细胞进⾏脉冲跟踪实验，证明正常的prp c 转变为prp sc是以prp sc为模板，结合prp c使它转换成与prp sc相同的构象。
普鲁⾟纳历经8年研究证实这个感染物确实不含核酸⽽只是蛋⽩质，且起名为朊病毒。
《朊病毒及其检测》课件
朊病毒防治的伦理问题
保护隐私
在朊病毒的防治过程中，应尊重患者的隐私权和个人信息保密。
人道关怀
对于感染朊病毒的患者，应提供人道关怀和心理支持，减轻他们的痛苦和恐惧 。
05
朊病毒相关实验及案例分析
实验一：朊病毒的分离和纯化
总结词
朊病毒的分离和纯化是研究朊病毒的基础步骤，涉及到病毒的提取、离心、过滤和纯化等过程。
总结词
要点二
详细描述
体外感染实验是研究朊病毒致病机制的重要手段，可以模 拟病毒在体外环境中的感染过程。
首先，将纯化的朊病毒与敏感细胞进行共培养，观察病毒 对细胞的感染情况。通过荧光染色、免疫学检测等方法检 测病毒感染后细胞内病毒抗原的表达情况。此外，还可以 通过测定细胞病变、细胞死亡等情况来评估病毒感染的严 重程度。这些实验结果有助于深入了解朊病毒的致病机制 和传播途径，为预防和治疗朊病毒感染提供科学依据。
02
朊病毒的致病机理
朊病毒的感染机制
朊病毒通过与宿主细 胞表面的受体结合， 进入细胞内。
朊病毒的感染机制还 包括对细胞膜的破坏 和细胞骨架的改变等 。
在细胞内，朊病毒经 过一系列的生物化学 反应，最终导致细胞 死亡。
朊病毒对宿主细胞的影响
朊病毒可以导致宿主细胞的结 构和功能发生变化，如细胞膜 的通透性增加、细胞骨架的紊 乱等。
朊病毒的生物学特性
传播方式
致病机制
朊病毒可通过接触、消化道、血液等途径 传播，如食用感染朊病毒的动物器官或血 液等。
朊病毒进入宿主细胞后，会诱导正常朊蛋 白错误折叠，形成淀粉样沉淀，导致细胞 功能紊乱和死亡。
疾病类型
诊断与防治
朊病毒可引起多种致命性疾病，如疯牛病 、克-雅病等。
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朊病毒的检测方法
朊病毒作为传染性海绵状脑病(TSE)的病原体，是TSE的诊断标志物，与组织病理学损伤(海绵状变性)相比，不仅出现的时间非常早，而且分布也十分广泛。
因此，检测朊病毒对 ISE的早期鉴测、分类鉴别、最终确诊、监测控制以及对朊病毒致病机制的探索、研究，有着极其重要的意义。
1 动物传递实验
动物实验是判断生物体是否感染朊病毒、测定感染滴度、研究朊病毒传染性的主要手段。
随着检测技术的进步，现在动物实验的许多功能已被更快捷、更准确的方法所代替，但作为生物学方法仍然是研究朊病毒不可缺少的重要环节。
目前，已知的朊病毒病大多已建立了动物感染模型，小鼠、大鼠和仓鼠是最常用的朊病毒实验动物。
常规方法是将无菌的组织标本，用Teflon研棒匀浆后作10倍连续稀释，每个稀释度通常脑内接种6只小鼠(10～30μl)、大鼠(30μl)或仓鼠(50μl)。
接种动物每3天检查1次，发现其出现毛乱、弓背、运动过慢和后肢瘫痪等病状后逐日检查，濒死扑杀，取脑组织作病理学检查，以验证朊病毒感染。
如接种动物不发病，则继续观察至其死亡或适时盲传，最后取脑组织作病理学检查。
根据动物发病和死亡数计算滴度。
该方法的优点是比较敏感，是研究朊病毒生物学特性的重要实验。
其缺点是费时、费力，滴定误差大，需消耗大量动物，费用昂贵。
由于种属屏障和毒株、动物个体差异等因素的影响，传递的成功率往往相差较大，个别 GSS毒株的动物传递始终未获成功。
因此，实验阴性并不能排除朊病毒感染，使用转基因动物是一条经济实用的削弱或消除种属屏障的实验途径，可明显改善传递效果。
2 免疫学方法
免疫学检测方法由于其灵敏度高，特异性强，方法众多，能适合不同检验要求的需要，目前已成为检测朊病毒的最主要方法。
(1)组织印迹：组织印迹技术是将灵敏的蛋白检测技术和解剖学组织保存技术结合起来，用于检测组织中微量的PrPsc。
其灵敏度较高，甚至可以超过一般的免疫印迹，已被广泛地用于朊病毒的研究。
(2)斑点印迹：1990年，Serban等介绍了一种用硫氰酸胍处理的斑点印迹方法，将组织标本置于冷的裂解缓冲液中匀浆，然后500r/min离心5 min，去除不溶性残渣，上清液与含SDS 样本缓冲液等量混合，吸取4μl混合液，点样于干的NC膜上，空气中干燥,iK消化，3mol/L 硫氰酸胍处理，封闭后，进行免疫学检测。
斑点印迹法灵敏度较低，但操作简便，对仪器设备要求低，适用大批量标本的筛查，易于普及推广。
(3)免疫印迹：由于使用了凝胶电泳分离技术和免疫检测技术，除了可以鉴定标本中特定的组分外，还能显示其电泳分离图谱，运用价值较高。
免疫印迹技术简便、快速，对仪器设备要求低，而且不受组织自溶的影响，能在组织病理学结果阴性或含糊的情况下检出PrPres，具有早期确诊价值。
目前，已成为朊病毒研究中最常用的检测方法之一。
其基本步骤是：将待检组织标本匀浆、离心、蛋白酶K消化等一系列处理后，在12.5％SDS-聚丙烯酰胺凝胶上电泳，随后将蛋白质转印至NC膜或PVDF膜上，封闭，用特异性抗体进行免疫学检测。
(4)免疫组化：免疫组化是利用特异性抗体直接显示组织切片上致病性PrP。
由于可以对PrPres的沉积进行精确的解剖学定位，为临床病理学诊断提供客观依据，因此，具有很高的临床诊断价值。
免疫组化可以检测甲醛固定、石蜡包埋的组织标本，应用面较广。
其基本步骤是：将甲醛固定或石蜡包埋的组织标本经一系列预处理后，依次与特异性抗体和酶标记第二抗体反应，最后加底物显色，显微镜下观察。
(5)酶联免疫吸附实验：该方法具有灵敏、特异、简便、快速、可定量、自动化等特点，非常
适合大批量标本的普查筛选工作。
目前报道的用于检测朊病毒的ELISA方法有两种：一种是
间接法，即先将从各个标本中提取的PrPres分别包被于酶标板的孔中；另一种是双抗体夹心法，即先用特异性抗体包被酶标板，再加入标本提取物，37℃孵育。
此后两种方法都依次加
入特异性1抗、酶标2抗，最后加底物显色，酶标仪读板。
(6)关于免疫学检测中标本预处理的几点说明：①适当的标本预处理，可以暴露PrPres原先
隐蔽的抗原表位和(或)修复被福尔马林破坏的抗原表位，提高PrPres的免疫反应性，有利于
实验灵敏度的提高。
②预处理并不是万能的，多种预处理都有失败的事例，预处理的效果可
能取决于预处理暴露或修复的抗原表位能否被实验使用的抗体所识别。
③某些预处理(如高
压蒸汽处理法)可同时增加PrPsen的免疫反应性，但这对PrPsen的检测帮助不大，Yokoyama
认为这仅仅是由于PrPsen表达太低造成的。
④某些实验使用的抗体不能分辨 PrPres和PrPsen，又没有用PK消化以去除PrPsen，这些实验采用预处理的目的主要是利用 PrPres和PrPsen对预处理反应的差异，筛选预处理条件，尽量增强所用抗体与PrPres的免疫反应性，
抑制与PrPsen的免疫反应性，扩大二者实验结果的差异，以达到筛查患感染TSE生物体的目的。
⑤不进行标本预处理，单靠选用改良的抗体，同样可以提高试验的灵敏度。
3 借助特殊仪器的检测方法
(1)电镜法：电镜检测瘙痒病相关纤维(SAF)是朊病毒检测的另外一种方法。
现在认为PrPsc是SAF的组成成分。
瘙痒病相关纤维为杆状、纤维状结构，其实是PrPsc在用去垢剂提取过程中，不同提取条件下形成的产物，感染生物体的组织切片中尚未发现SAF。
基本步骤是：将被检
组织置于10％N-laruoylsarcosine溶液中匀浆，差速离心、PK消化，重悬于蒸馏水中，负染，电镜观察。
镜下可见两种瘙痒病特有的大分子纤维。
电镜检查SAF灵敏度较低，不如免疫印
迹方法。
(2)毛细管SDS-凝胶电泳：该法主要是通过理化方法--差速、超速离心，sodium N-lauroylsarcosine、PK处理，提纯PrPsc，然后在 Beckman P/ACE 5 500上进行毛细管SDS-凝胶
电泳。
根据各组分通过检测器时，在214 nm波长处产生吸收峰的时间和峰形，鉴别出瘙痒
病病原因子PrPsc。
该法标本用量少，无需免疫学试剂，判断直观；缺点是需用超速离心机、专用毛细管电泳仪。
(3)荧光标记肽链的毛细管电泳免疫测定法：该法是根据免疫竞争原理测定，采用无区带毛细
管电泳技术结合免疫荧光技术，检测标本中微量的PrPse。
其基本原理是将人工合成PrPsc特
异性肽链(142～154)标记上荧光，然后与一定量的特异性抗体、羊脑提取物一起电泳，荧光
标记的肽链与抗体结合后，迁移率发生改变，从而与游离的标记肽链分离开来，由于抗体的
量只能结合大约50％的标记肽链，因而荧光标记的结合型肽链与游离型标记肽链的比例是固
定的。
当羊脑提取物中存在微量的PrPsc，由于其与标记肽链竞争结合抗体，导致结合型肽链与游离型肽链的比例发生改变，从而被仪器检测出来。
该方法灵敏度很高，能检测到135 pg
的PrPsc，可用于检测朊病毒水平很低的脑外组织(如血液等)。
(4)双色强荧光目标扫描法：该法是运用共聚焦双色荧光相关分光镜技术检测极其微量的朊病毒。
其基本原理是利用致病性 PrPres，在适当条件下自我复制和自发聚集的特点，将重组
PrP(rPrP)标记上绿色荧光，PrPres与正常构象的rPrP结合后，通过变构复制出大量的异常构
象的rPrP盖。
由于PrPres在一定条件下可自发聚集，从而使PrPres周围聚集了大量的rPrP 盖，使其荧光强度超过游离的rPrP50倍。
同时为了增强实验的特异性，又加入了标记上红色
荧光的特异性单抗，使PrPres- rPrP盖聚集体又标记上红色荧光。
只有同时发出高强度红、绿荧光的颗粒，才能被检测仪器判为PrPres。
目前，朊病毒领域的许多方面对人类来说还有一片空白或知之甚少，如朊病毒突破种属屏障
传播的程度，通过生物制品和临床医疗传播的危险性，其他传播途径的探知，以及朊病毒致
病机制的研究等等，诸多方面的问题都离不开朊病毒的检测，朊病毒检测方法的发展必将为
朊病毒的研究开辟广泛的前景。
参考文献
[1] 赵德明,杨建民,刘美丽,尹晓敏,马李颖,周向梅.一种牛朊病毒抗体及其制备方法.申请人:中国农业大学,中华人民共和国国家知识产权局 2005年.
[2] 孙宪锋,董小平,张宝云,周伟,王长安,赵同兴,洪涛,人朊病毒多肽抗体的制备及应用中华医学会中华微生物学和免疫学杂志 2000年第1期.
[3] 张磊,李宁.朊病毒疾病的诊断技术期刊-核心期刊生物技术通报.2001年,第05期.。