Zeiss激光扫描共聚焦显微镜LSM710操作说明
德国Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜快速操作手册制作制作：：Zeiss 光学仪器光学仪器（（上海上海））国际贸易有限公司 孙 凯2009年6月目录目录：：系统组成及光路示意图实物照片实物照片说明说明2.1 开机顺序2.2 软件的软件的快速快速快速使用使用使用说明说明2.3 显微镜显微镜的的触摸屏控制2.4 关机顺序激光扫描共聚焦显微镜系统主要由激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：：电动荧光显微镜电动荧光显微镜、、扫描检测单元扫描检测单元、、激光器激光器、、电脑工作站及各相关附件组成电脑工作站及各相关附件组成。
系统系统组成及光路组成及光路组成及光路示意图示意图示意图：：电脑工作站激光器扫描检测单元电动荧光显微镜实物照片说明实物照片说明：：电动荧光显微镜扫描检测单元CO 2培养系统控制器激光器电脑工作站2.1 开机顺序（1）打开稳压电源打开稳压电源（（绿色按钮绿色按钮））（2）主开关 [ MAIN SWITCH ]“ON ” 电脑系统 [ SYSTEMS/PC ]“ON ”扫描硬件系统 [ COMPONENTS ]“ON ”（3）打开 [ 扫描载物台开关 ]打开 [ 电动显微镜开关 ]打开 [ 荧光灯开关 ]（注：具有荧光光强调节具有荧光光强调节旋钮旋钮旋钮））（4）Ar 离子激光器 “ON ”顺时针旋转钥匙 至 “—”预热预热等待约等待约15分钟分钟，，将激光器 [ 扳钮 ] 由“Standby“Laser run ”状态状态，，即可正常使用（5）打开 [ 电脑开关 ]，进入操作系统注：键盘上也具有 [ ]2.2 软件的快速使用说明（1）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN 图标（2）进入ZEN 界面，弹出对话框：“Start System ”————初始化整个系统，用于激光扫描取图、分析等。
“Image Processing ”——不启动共聚焦扫描硬件，用于已存图像数据的处理、分析。
（3）软件界面：1 功能界面切换功能界面切换：：扫描取图扫描取图（（Acquisition 、）、图像处理图像处理图像处理（（Processing 、）、维护维护维护（（Maintain ） （注：Maintain 仅供Zeiss 专业工程师使用专业工程师使用））2 动作按钮动作按钮；；3 工具组工具组（（多维扫描控制多维扫描控制））；4 工具详细界面工具详细界面；；5 状态栏状态栏；；6 视窗切换按钮视窗切换按钮；；7 图像切换按钮图像切换按钮；；8 图像浏览/预扫描窗口预扫描窗口；；9 文档浏览/处理区域处理区域；；10 视窗中图像处理模块动作按钮动作按钮：： Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。
Start ————开始扫描单张图片或一个实验流程（1组图片，如XYZ 、XYT 等）。
Stop ————暂停/结束扫描。
New ————建立一个新图像扫描窗口/文档。
激光激光连接状况检查连接状况检查眼睛观察/相机/共聚焦LSM 光路切换光路切换（（ZEN 软件界面右上角软件界面右上角））：Ocular ——通过观察筒用眼睛观察。
（激光安全保护装置自动阻断激光、保护眼睛。
） Camera ————光路切换至相机。
LSM ————共聚焦扫描成像光路。
显微镜设置显微镜设置：：“Ocular ”——>“Light Path ”——>点击物镜图标点击物镜图标，，选择物镜选择物镜————>样品聚焦样品聚焦。
透射光控制透射光控制（（Transmitted Light Control ）反射光光闸控制反射光光闸控制（（Reflected Light Shutter ）荧光激发块选择荧光激发块选择（（Reflector ）共聚焦LSM 扫描设置点击点击““LSM ”（ZEN 软件界面右上角软件界面右上角）），系统切换至共聚焦扫描光路系统切换至共聚焦扫描光路：：光路设置光路设置：：选取“荧光探针”、“颜色”、扫描方法，应用“Apply ”。
（注：Fastest 为最快速扫描，多条激光谱线同时扫描。
Best signal 为最佳信号扫描，多条激光谱线顺序扫描。
Best compromise 为兼顾速度与信号的折中式扫描。
）扫描图像参数设置扫描图像参数设置：：每个通道的精细调节每个通道的精细调节：：包括包括：：（1）Pinhole 的调节的调节（（一般设为1AU 。
该值越大该值越大，，则信号越强则信号越强，，但共聚焦图像效果会降低但共聚焦图像效果会降低。
原则上原则上，，在保证图像质量的前提下在保证图像质量的前提下，，该值越接近于1AU 越好越好））； （2）Master Gain 的调节的调节（（增大则信号和噪音都增增大则信号和噪音都增强强，减小则信号和噪音均减小减小则信号和噪音均减小。
原则上原则上，，在保证图像质量的前提下像质量的前提下，，Gain 值越小越好值越小越好））； （3）Digital Offset 的调节的调节（（可扣除背景噪音可扣除背景噪音，，但标本信号但标本信号也也有一定程度的扣除有一定程度的扣除。
原则上原则上，，在保证图像质量的前提下像质量的前提下，，Digital Offset 值越接近于0越好越好））； （4）Digital Gain 的调节的调节（（增大则信号和噪音都增强增大则信号和噪音都增强，，减小则信号和噪音均减小减小则信号和噪音均减小。
原则上原则上，，在保证图像质量的前提下像质量的前提下，，Gain 值越接近于1.0~1.2越好越好））；（5）另外另外，，对于每个通道对于每个通道，，需要灵活调节激光的强度需要灵活调节激光的强度（（激光强度越高激光强度越高，，则信号越强则信号越强，，但噪音也相应增强，同时标本更容易被漂白或淬灭同时标本更容易被漂白或淬灭。
原则上原则上，，在保证图像质量的前提下在保证图像质量的前提下，，激光强度越低越好激光强度越低越好。
）选择可连续扫描可连续扫描、、一边预览图像效果一边预览图像效果、、一边一边精细调节精细调节精细调节各个通道的扫描参数各个通道的扫描参数各个通道的扫描参数。
如果预览图像的效果可以如果预览图像的效果可以，，则先则先““Stop ”，再点击再点击““Single ” 或“Start ” 即可完成图像的扫描即可完成图像的扫描。
图像的保存图像的保存：：三种方法三种方法：：（1）“File ”菜单下菜单下，，“Save ”或者或者““Save AS ”。
（2）点击右下角按钮。
（3）点击工具栏按钮。
（如图所示如图所示））另外另外，，通过通过““File ”菜单下的菜单下的““Export ”，也可将图像以其它格式输出也可将图像以其它格式输出。
2.3 显微镜的显微镜的触摸屏控制触摸屏控制显微镜可由TFT 液晶触摸屏进行控制：由触摸屏“Home/主页”进入“Control/显微镜控制”界面，触摸屏常用控制界面触摸屏常用控制界面：：TFT 触摸屏控制 直观直观、、便捷便捷。
Objectives 物镜控制TL 透射光光闸 RL 反射光光闸Reflector 荧光激发块荧光激发块控制控制 荧光观察时荧光观察时，，需要选择相应的荧光激发块（或者激发波长或者激发波长、、发射波长相近的荧光激发块近的荧光激发块）） Light path 光路设置 触摸控制触摸控制，，可将光路切换至可将光路切换至““Eyepiece ”目镜观察筒目镜观察筒，，或者将光路切换或者将光路切换至左侧共聚至左侧共聚焦光路焦光路““Sideport L ”，或者将光路切换至前侧前侧““Frontport ”相机相机。
2.4 关机顺序关机顺序：：（1）关闭软件关闭软件：：主菜单主菜单““File ”——>“Exit ”，退出共聚焦软件ZEN 。
（2）关闭关闭主电脑主电脑主电脑操作系统操作系统操作系统、、显示器电源显示器电源。
（3）关闭 [荧光荧光灯电源灯电源 ]。
（4）关闭 [扫描载物台电源] 、[显微镜系统电源]。
（5）关闭Ar 激光器激光器：：先将 [扳钮] 从 “Laser run ” 扳到 “Standby ” 状态状态；； 再将 [钥匙] 逆时针逆时针从从“—”旋转到“O ”状态状态；； 等待约8-10分钟分钟、、激光器激光器风扇停止转动风扇停止转动风扇停止转动后后（切记切记！！），将 主开关 按钮按钮按到按到按到““OFF ”。
（6）如果使用了 [CO2培养系统] ，则关闭其电源则关闭其电源。
（7）扫描硬件系统 [ COMPONENTS ]“OFF ”电脑系统 [ SYSTEMS/PC ]“OFF ” 主开关 [ MAIN SWITCH ]“OFF ”（8）等 [灯箱] 充分冷却后充分冷却后，，再放防尘罩再放防尘罩。
（9）如果长时间如果长时间（（>1 day ）不使用不使用，，则关闭稳压电源则关闭稳压电源、、墙上总电源墙上总电源。
主要注意事项如下：（1）打开稳压电源时，应等待2分钟（电压稳定）后，再开其它开关。
（2）严格遵守[激光器]的开、关流程（详见“2.1 开机顺序”）。
（3）如果使用过[油镜]，或者物镜表面较脏，则需用[擦镜纸]擦干净物镜的前表面（清洁液使用无水乙醇和无水乙醚的混合液，混合比例：无水乙醇30%、无水乙醚70%）。
（4）不使用荧光时，不打开[荧光灯]。
避免频繁开/关荧光灯。
（5）必须等灯箱充分冷却后，再小心地盖上[防尘罩]。
（6）显微镜可由[TFT 触摸屏]控制，使用触摸屏时注意：①手指保持清洁、干燥状态，并且为了保证他人使用安全，触摸时严禁配戴有可能接触污染物或危险样品的手套； ②触摸屏已足够灵敏，不要大力按压触摸屏； ③不要旋转、插拔触摸屏。
（7）刻录图像数据资料：应使用刻录光驱刻录，实验前应准备好刻录光盘。
切记切记：：为了防止计算机病毒为了防止计算机病毒，，严禁在共聚焦电脑上使用U 盘、硬动硬硬动硬盘或盘或者上网者上网！！！！ （8）未经授权，严禁自行安装任何软件！！！（9）实验室温度应保持在22℃±2℃，湿度40%-60%。
（10）避免空调直接对着显微镜吹风。
（11）整个实验过程应注意保持显微镜周围环境清洁。
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册目录:1 系统得组成系统组成及光路示意图实物照片说明2 系统得使用2、1 开机顺序2、2 软件得快速使用说明2、3 显微镜得触摸屏控制2、4 关机顺序3 系统得维护1 系统得组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由:电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。
系统组成及光路示意图:电脑工作站激光器电动荧光显微镜扫描检测单元实物照片说明:电动荧光显微镜扫描检测单元CO2 培养系统控制器激光器电脑工作站2 系统得使用2、1 开机顺序(1)打开稳压电源(绿色按钮)等待2 分钟(电压稳定)后,再开其它开关(2)主开关[ MAIN SWITCH ]“ON”电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON”扫描硬件系统[ PONENTS ]“ON”(3)打开[ 电动显微镜开关]打开[ 荧光灯开关](注:具有5 档光强调节旋钮)(4)Ar 离子激光器主开关“ON”顺时针旋转钥匙至“—”预热等待约15分钟,将激光器[ 扳钮] 由“Standby”扳至“Laser run”状态,即可正常使用(5)打开[ 电脑开关],进入操作系统注:键盘上也具有[ 电脑开关]2、2 软件得快速使用说明(1)电脑开机进入操作系统界面后,双击桌面共聚焦软件ZEN 图标(2)进入ZEN 界面,弹出对话框:“Start System”——初始化整个系统,用于激光扫描取图、分析等。
“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件,用于已存图像数据得处理、分析。
(3)软件界面:1 功能界面切换:扫描取图(Acquisition)、图像处理(Processing)、维护(Maintain) (注:Maintain仅供Zeiss专业工程师使用)2 动作按钮;3 工具组(多维扫描控制);4 工具详细界面;5 状态栏;6 视窗切换按钮;7 图像切换按钮;8 图像浏览/预扫描窗口;9 文档浏览/处理区域;10 视窗中图像处理模块动作按钮:Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。
Zeiss LSM710激光共聚焦扫描显微镜使用与管理的研究
硬件部分 为电动荧光显微镜 、扫描检测单元 、激光 器 、电脑工 作
二 、荧 光 样 品 的 制备
站 ，软件部分为 ＺＥＮ操作分析软件。
激光共聚焦显微镜需要对没有 自发荧 光的生物样 品进行 前
（一 ）显微镜硬件部分
处理 ，使其具有荧光标记 ，再进行检测 。获得一份好 的荧光标 记
１激 光器 。激光器覆盖范围较广 ，能够满足多种荧光样品成 的样 品是拍摄到一张好照片 的先决条 件 ，没有好 的样品 ，即使有
显微镜在检测器前 ，焦平面的共轭位置加装 Ｐｉｎｈｏｌｅ。由于只有来 可选择 “Ｓｔａｒｔ Ｓｙｓｔｅｍ”和“Ｉｍａｇｅ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ”。“Ｓｔａｒｔ Ｓｙｓｔｅｍ”为初始
自焦平 面的发射 光信号可 以在共轭位置汇聚 ，穿过 Ｐｉｎｈｏｌｅ，而来 化整个 系统 ，用于激光扫描取 图、分析等 。“Ｉｍａｇｅ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ”为不
倍 物镜为 ４０倍 、６３倍油镜和 １００倍油镜。
等染 料可 用 ４０５ｒｉｍ激 光器 观察 ；ＧＦＰ、ＥＧＦＰ、ＹＦＰ、Ａｌｅｘａ一４８８等
３．荧光扫描检测器 。检测 器检 测范围为 ４００～８００ｎｍ，ＤＩＣ通 荧光蛋 白可用氩离子激光器观察 ；ＲＦＰ、Ａｌｅｘａ一５４６和 Ｃｙ３等染料
自非 焦平 面的发射 光信 号在共轭 位置是 发 散的 ，绝 大部 分被 启动共 聚焦 扫描硬件 ，用 于已存图像数据的处理 、分析。
Ｐｉｎｈｏｌｅ阻挡 ，所以检测器只能接收来 自焦平面 的发射光信号 。这
软件的工具栏有不同 的主页面 ，分别为 Ｌｏｃａｔｅ、Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ、
样 ，激光共聚焦扫描显微镜在很大程度 上限制了来 自非焦平面 ＦＣＳ、Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ和 Ｍａｉｎｔａｉｎ。Ｌｏｃａｔｅ主页面用于 目镜下观察样 品，
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册目录：1 系统的组成系统组成及光路示意图实物照片说明2 系统的使用2.1 开机顺序2.2 软件的快速使用说明2.3 显微镜的触摸屏控制2.4 关机顺序3 系统的维护1 系统的组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。
系统组成及光路示意图：电脑工作站激光器电动荧光显微镜扫描检测单元实物照片说明：电动荧光显微镜扫描检测单元CO2 培养系统控制器激光器电脑工作站2 系统的使用2.1 开机顺序（1）打开稳压电源（绿色按钮）等待2 分钟（电压稳定）后，再开其它开关（2）主开关[ MAIN SWITCH ]“ON”电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON”扫描硬件系统[ COMPONENTS ]“ON”（3）打开[ 电动显微镜开关]打开[ 荧光灯开关]（注：具有5 档光强调节旋钮）（4）Ar 离子激光器主开关“ON”顺时针旋转钥匙至“—”预热等待约15分钟，将激光器[ 扳钮] 由“Standby”扳至“Laser run”状态，即可正常使用（5）打开[ 电脑开关]，进入操作系统注：键盘上也具有[ 电脑开关]2.2 软件的快速使用说明（1）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN 图标（2）进入ZEN 界面，弹出对话框：“Start System”——初始化整个系统，用于激光扫描取图、分析等。
“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件，用于已存图像数据的处理、分析。
（3）软件界面：1 功能界面切换：扫描取图（Acquisition）、图像处理（Processing）、维护（Maintain）（注：Maintain仅供Zeiss专业工程师使用）2 动作按钮；3 工具组（多维扫描控制）；4 工具详细界面；5 状态栏；6 视窗切换按钮；7 图像切换按钮；8 图像浏览/预扫描窗口；9 文档浏览/处理区域；10 视窗中图像处理模块动作按钮：Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。
激光扫描共聚焦显微镜操作流程详解
激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope)激光扫描共聚焦显微镜(laser sea nning con focal microscope)，英文简写LSCM，俗称con focal。
LSCM是一种高科技显微镜，属于最先进的细胞生物学分析仪器。
我们学院使用的是瑞士徕卡公司(Leica)的TCS SP5型号的LSCM。
使用流程1、登陆或5号楼606室公用电脑下载?激光共聚焦预约使用审核表?，打印并填写。
2、联系卢剑清(手机：)审核并签名。
3、持已签名的?激光共聚焦预约使用审核表? 至5号楼610室预约使用时间，及领取钥匙，联系人：窦凯飞(手机：。
4、在熟练使用者的指导下，进行实验。
5、实验结束，及时归还钥匙。
仪器构造和原理LSCM的根本结构主要包括荧光显微镜系统及样品台、激光发射器、扫描器、检测器、图像存储处理和输出设备、计算机控制系统。
激光光源：激光扫描束经照明针孔形成点光源，普通显微镜采用的自然光或灯光是一种场光源，标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射光或散射光的干扰。
而LSCM以激光为光源，激光具有单色性强、方向性好、高亮度、相干性好等优点,可以防止普通显微镜的缺点。
一般常用的气体激光器如氩(Ar)、氪(Kr)、氦(He)、氖(Ne)。
illu min ati ng pin hole (照明针孔)：使激光经过照明针孔后形成点光源，点光源具有光源方向性强、发散小、亮度高、高度的空间和时间相干性以及平面偏振激发等独特的优点。
且与detector pinhole(探测器针孔)及焦平面形成共聚焦装置。
分光镜(BeamSplitter)：点光源发出的光经分光镜反射后，通过物镜在样品聚焦。
对标本内焦平面上的每一点进行扫描，Focal plane (焦平面)：激光点光源照射物体在焦平面处聚焦，激发荧光标记的样本发射荧光，形成焦点光斑。
该光斑经过物镜和分光镜等一系列装置的处理，分别在照明针孔及探测针孔两处聚焦。
ZeissLSM710激光共聚焦扫描显微镜使用与管理的研究
ZeissLSM710激光共聚焦扫描显微镜使用与管理的研究Zeiss LSM710激光共聚焦扫描显微镜使用与管理的研究引言:激光共聚焦扫描显微镜（LSM）是一种高级显微成像技术，可以提供高分辨率、三维、活细胞成像等功能。
毫无疑问，Zeiss LSM710作为常见且重要的LSM设备，被广泛应用于生命科学及其他相关领域的研究中。
然而，对于如何正确操作和管理这一设备的研究却相对较少。
本文旨在研究ZeissLSM710激光共聚焦扫描显微镜的使用与管理，为使用者提供一些有价值的指导和建议。
一、设备初步操作:1. 环境条件准备：LSM操作需要一个稳定的环境，包括适宜的温度、湿度和光线条件。
确保实验室的环境符合LSM工作要求。
2. 设备准备：先检查设备是否干净，灯泡和激光器是否正常工作。
检查进样仪、物镜等功能是否正常。
然后打开设备并等待其初始化。
3. 样品准备：合理的样品准备是得出准确成像结果的关键。
选择适当的培养基和酒精溶液来保持样品的稳定状态。
二、参数设置:1. 激光功率和扫描速度：选择适当的激光功率和扫描速度以确保得到高质量的成像结果。
过高的激光功率可能会损伤样品，而较慢的扫描速度可能会降低成像质量。
2. 激发和发射滤光片：根据样品的特点和需求设置激发和发射滤光片，以过滤出所需的激发光和发射光。
3. 成像深度设置和3D成像：如果需要观察样品内部的结构或进行3D成像，需要调整成像深度和设置扫描层的数量。
三、成像操作:1. 界面操作：学习和掌握LSM软件的界面操作，包括选择成像模式（亮场、荧光、共振等）、调整对比度和亮度、图像采集方式等。
2. 关注成像细节：在成像过程中，要特别关注细胞或组织的形态和颜色变化。
优化成像条件，如调整对焦、改变增益和缩放比例等，以获得最佳质量的图像。
3. 防止光伤害：光毒性是使用共聚焦显微镜的一个常见问题。
避免将样品长时间曝光在激光光束下，减少光强对样品的潜在伤害。
四、设备维护与管理:1. 设备清洁：定期清洁显微镜光路、物镜、滤光片等部件，以保持成像质量和设备寿命。
Zeiss LSM710激光共聚焦扫描显微镜使用与管理的研究
Zeiss LSM710激光共聚焦扫描显微镜使用与管理的研究作者：王美军，黄科，龚雨顺，马先锋来源：《现代职业教育·高职高专》2018年第03期[摘要] 激光共聚焦扫描显微镜是一种领先的实验手段，已经得到了广泛的应用，因此掌握其操作使用方法和进行基本的维护十分重要。
介绍了激光共聚焦扫描显微镜系统硬件和软件部分的构成；荧光样品的制备及要求；样品进行普通拍摄时光路、荧光检测通道及图像采集等参数的设置；最后在仪器的维护与管理上提出应保持室内整洁且温湿度适宜，同时在操作使用上应按严格的操作规范进行。
[关键词] Zeiss LSM710；激光共聚焦显微镜；操作使用；管理[中图分类号] TH742 [文献标志码] A [文章编号] 2096-0603（2018）07-0234-02激光共聚焦扫描显微镜是一种现代化的光学显微镜，它在生物、医学及工业等领域已有广泛的应用。
与普通光学显微镜不同的是，它以极细的激光束（点光源）替代传统的汞灯或长效金属卤素灯（场光源）作为激发光，具有良好的汇聚性，且激光束激发的样品区域大大缩小，减少了同一视野内相邻样品之间的发射信号干扰，其分辨力提高了30%～40%。
此外，激光共聚焦扫描显微镜在检测器前，焦平面的共轭位置加装Pinhole。
由于只有来自焦平面的发射光信号可以在共轭位置汇聚，穿过Pinhole，而来自非焦平面的发射光信号在共轭位置是发散的，绝大部分被Pinhole阻挡，所以检测器只能接收来自焦平面的发射光信号。
这样，激光共聚焦扫描显微镜在很大程度上限制了来自非焦平面的信号干扰，大大增强了图像的信噪比。
湖南农业大学园艺园林学院配置的是Zeiss LSM710倒置激光共聚焦显镜。
文章以倒置共聚焦显微为例，介绍了其硬软件的构成，荧光样品的制备要求、样品拍摄的参数设置及仪器的维护与管理。
一、激光共聚焦扫描显微镜系统的组成激光共聚焦扫描显微镜系统由硬件和软件部分组成，其中硬件部分为电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站，软件部分为ZEN操作分析软件。
激光共聚焦操作步骤
激光共聚焦操作步骤激光共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscope，简称LSCM），是一种光学显微镜，利用激光和扫描镜技术，能够对样品进行高分辨、高对比度的三维成像。
下面将介绍激光共聚焦显微镜的操作步骤。
1.准备工作：a.打开显微镜电源，确保仪器处于正常工作状态。
b.打开激光源电源，等待激光系统启动。
c.准备样品，将样品放置在载玻片上，并使用封口膜或密封胶固定。
2.调节孔径光阑：a.打开镜头盖，取下玻璃保护盖。
b.观察显微镜视野，调节孔径光阑的大小，以获得最佳的入射光。
c.用合适的滤光片选择适当激光激发波长。
3.调节激光功率：a.打开激光源的控制面板。
b.选择合适的激光功率，通常初次使用时可选择较低功率。
c.通过目镜观察激光处于合适的位置和方向，避免直接观察激光。
4.调节焦距：a.打开目镜盖，观察样品上的图像。
b.调节目镜的焦距，获得清晰的图像。
c.使用恰当的倍率进行观察，确保所需的细节可见。
5.调节光路：a.打开激光共聚焦显微镜软件，进行光路调节。
b.调节反射镜和聚焦镜，确保激光能够准确地聚焦在样品上。
c.通过调节扫描镜，使激光能够扫描整个样品。
6.设置扫描参数：a.在软件中选择扫描参数，如扫描速度、像素大小等。
b.减至最小的扫描区域，以便首先观察最感兴趣的区域。
c.如有需要，可以进行连续扫描或者多通道扫描的设置。
7.开始扫描：a.点击软件界面上的“开始”按钮，开始扫描。
b.观察扫描时光点在样品上的移动情况，确保图像的获取和处理是正确的。
c.根据需要调整扫描参数，以获得更好的图像质量。
8.界定感兴趣区域（ROI）：a.选择感兴趣的图像区域，用鼠标进行界定。
b.设置参数，如增益、对比度、亮度等，以便获得更好的视觉效果。
c.按下截图按钮，将感兴趣的图像保存下来。
9.分析和处理图像：a.关闭扫描功能，进入图像处理模式。
b.使用软件提供的功能分析和处理图像，如三维重建、图像拼接等。
激光共聚焦系统使用说明 Imager Vario LSM
共聚焦显微镜操作入门指南(仅供内部使用)文档作者：李宇(liyu@) 日期：2012-12-04文档校对：李宇日期：2012-12-04卡尔蔡司中国版权所有不得复制目录1开机 (1)1 .1接通总电源 (1)1 .2打开激光器 (1)1 .3打开控制器、主控电脑 (1)2使用激光共聚焦扫描软件Zen 2010 (2)2 .1打开软件 (2)2 .2切换到明场观察模式（目镜筒） (2)2 .3放入样品并在明场模式下找到焦平面 (3)2 .4切换到共聚焦扫描模式 (6)2 .5设置激光扫描参数，找到样品最亮的焦平面位置 (6)2 .6设置Z-stack扫描上下限 (8)2 .7开始扫描 (10)2 .8分析扫描结果，进行三维观测 (11)3关机 (15)4附：目镜中，使用明场、暗场和偏光模式观察样品 (16)4 .1明场模式 (16)4 .2暗场模式 (17)4 .3偏光模式 (17)5附：使用相机（CCD）拍摄明场、暗场和偏光图 (18)5 .1拍摄明场图 (18)5 .2拍摄暗场图 (19)5 .3拍摄偏光图 (19)1 开机1 .1接通总电源图 1 从左至右依次为：墙体总电源、稳压器电源、激光器和电脑电源1 .2打开激光器图 2 转动激光器钥匙，打开激光器，LED指示灯亮1 .3打开控制器、主控电脑图 3 依次打开左图显微镜主机控制器电源、右图电脑主机电源提示：当仅使用CCD拍图，或者长时间不用机器时，建议关闭激光器，以延长其寿命。
2 使用激光共聚焦扫描软件Zen 20102 .1打开软件双击图标，然后点击“Start System ”进入软件。
2 .2切换到明场观察模式（目镜筒）2 .2.1 在共聚焦软件中切换为明场观察模式：点击“Locate ”标签，选择“Online ”，点击“BF ”（Bright Field 的缩写）。
此时系统打开卤素灯，并将明场光学模块转入光路。
图 4 切换为明场观察模式提示：如果出现硬件通讯问题，软件左下角会弹出信息对话框，此时一般的解决方法是：1）重启Zen 软件；2）如果仍无效，关闭整个系统，过5分钟后再重启系统。
Zeiss LSM 710 User Manual
Zeiss LSM 710 User GuideStartup- Turn on Exfo lamp to the left of the microscope- Turn on [Main], [System] and [Component] switches- If the Argon laser is needed (458, 488 or 514nm):- Check that the toggle switch is set to [idle]- Turn the key on the front of the power supply clockwise- After 5 minutes switch laser to [run]. After another few minutes adjust thepotentiometer knob to the point just below where the red LED becomes illuminated.(While waiting, continue the startup sequence)-Turn on computer and log on using your Hawk ID and Hawk password and wait until MacAfee loads.-Start [ZEN 2010] software and do not use the microscope while the software loads. Visual Operation-Load slide- Select a X10 objective lens. Make sure the stage is sufficiently lowered [Loadingposition] using the key pad by the microscope or the lower button at the base of theinstrument-Load sample onto stage and return using the top left icon on the pad or the upperbutton.- In Zen in the [Occular] tab, select [Online]- Select the desired fluorophore or DIC filter- Select the proper objective lens- Locate region of interest- Close the reflected or transmitted light shutter usedConfocal Operation- Select [Acquisition]- Select [preset configuration] or use [Smart Setup]- If you have selected at dye that requires the 561nm line (i.e. AF 568, mCherry etc.) then turn the laser on via the [Laser] menuATTENTIONIf you are using a method from the “Smart setup” requiring more than ONE track (as seen in the [Imaging setup] window, you must follow these guidelines:- In the [Imaging setup] window select Switch track every [line] instead of [frame] using the pulldown window.- Check that each track display the proper highlighted emission curve. If not, adjust using the cursor under the emission spectra.All the tracks selected must have the same setup in their MBS (seen in the [Light Path] window).- Select [Select all] under the[Channel] window. For each track loaded you will see the laser line necessary for each dye excitation.- Under the [Light Path] window, select the MBS matching the excitation lines required for your imaging by clicking on the MBS icons (1st one and 2nd one under the window).→- In the Acquisition Mode menu select the desired parameters for final image- Select [Auto Exposure] to get initial gain and offset settings- Select [Live] to find your plan of focus using the focus knobs- In the [Channels] menu adjust the [laser power], [pinhole], [gain] and [offset] as needed - Select [Snap] to collect the final image- Save image to desired location (Do not store on drive C:\ instead use the D:\ drive)ATTENTIONAll images left on the D-drive are periodically purged without warningShutdownCheck the online scheduler to determine if someone is scheduled after you (within 1 hour).IF YES:- Turn the Argon laser switch toggle to [idle] and log out of softwareIF NO:- Turn the Argon laser switch toggle to [idle] and turn off key- Wait for Argon laser fan to switch off (about 5 min from turning the key off)- Move stage to load position- Remove slide- Gently remove oil from oil lens using lens paper or cotton swabs. Use a cotton swab with a little isopropyl alcohol to remove final traces of oil- Exit the Zen 2010 software and shut down the computer- Turn off the [System], [Components] and [Main] switches in this order- Turn off the Exfo lamp- Log your usage in the log book by the microscope.Revised: 06/25/2012。
共聚焦显微镜使用规章(暂行)
共聚焦显微镜使用规章（暂行）为保证共聚焦显微镜正常和充分的利用，维护好使用秩序，更好的为各位服务，特制订本规则，请切实严格遵守。
一、简介：共聚焦显微镜为蔡司LSM710，位于生科楼D511室，该显微镜有优异的灵敏度、反差度和稳定性，可广泛用于细胞与组织的免疫荧光染色实验、活细胞成像实验、以及光漂白实验等，结合软件的强大功能，可对图片做各种后期处理，如进行组织切片的3D重构，荧光强度的定量检测以及共定位系数的测定等。
本显微镜配备物镜倍数为10×、20×、40×和63×，激发光源为405 nm、458 nm、488 nm、514 nm、543 nm和633 nm。
二、预约规则：1、对外开放时间暂定为每周一、三下午14点至17点，其他时段需与管理员沟通协调。
预约仅限2周之内，并至少提前24小时。
由管理员按预约先后安排实验。
如预约取消或更改，需至少提前24小时告知，若预约无更改，管理员一律按预约起始时间开机待用，开机时间自此算起。
开机待用时间超过1小时按取消处理，管理员将关闭系统，预约实验者须支付1小时费用。
2、每次预约上机时间不得超过三小时，活细胞成像实验可酌情延时，但最长不得超过6小时。
每次预约仅限一个时段，请勿一次连续预约多个时段。
3、开放对象：不对非本校人员开放，仅本校人员的课题方可使用该仪器，对外合作课题必须是本校人员承担部分，一经发现非本校人员利用本校人员名义使用该仪器者，取消该实验室全体人员使用资格半年。
4、收费标准：按实际使用时间（即从开机到用毕关机的时间）收费300元/小时，不足1小时者，按1小时计。
费用结算方式另行通知。
5、预约方式：请通过网上预约平台进行预约，等待管理员审核通过。
预约时请务必提交以下详细信息：姓名（限两人以内）、所属实验室、联系方式、预约时段、样品性质（细胞贴片、组织切片或活细胞）、实验所用荧光染料的种类。
其他未尽事宜请及时与管理员沟通。