Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜 操作手册
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册目录：1 系统的组成系统组成及光路示意图实物照片说明2 系统的使用2.1 开机顺序2.2 软件的快速使用说明2.3 显微镜的触摸屏控制2.4 关机顺序3 系统的维护1 系统的组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。
系统组成及光路示意图：电脑工作站激光器电动荧光显微镜扫描检测单元实物照片说明：电动荧光显微镜扫描检测单元CO2 培养系统控制器激光器电脑工作站2 系统的使用2.1 开机顺序（1）打开稳压电源（绿色按钮）等待2 分钟（电压稳定）后，再开其它开关（2）主开关[ MAIN SWITCH ]“ON”电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON”扫描硬件系统[ COMPONENTS ]“ON”（3）打开[ 电动显微镜开关]打开[ 荧光灯开关]（注：具有5 档光强调节旋钮）（4）Ar 离子激光器主开关“ON”顺时针旋转钥匙至“—”预热等待约15分钟，将激光器[ 扳钮] 由“Standby”扳至“Laser run”状态，即可正常使用（5）打开[ 电脑开关]，进入操作系统注：键盘上也具有[ 电脑开关]2.2 软件的快速使用说明（1）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN 图标（2）进入ZEN 界面，弹出对话框：“Start System”——初始化整个系统，用于激光扫描取图、分析等。
“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件，用于已存图像数据的处理、分析。
（3）软件界面：1 功能界面切换：扫描取图（Acquisition）、图像处理（Processing）、维护（Maintain）（注：Maintain仅供Zeiss专业工程师使用）2 动作按钮；3 工具组（多维扫描控制）；4 工具详细界面；5 状态栏；6 视窗切换按钮；7 图像切换按钮；8 图像浏览/预扫描窗口；9 文档浏览/处理区域；10 视窗中图像处理模块动作按钮：Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。
蔡司共聚焦显微镜安全操作及保养规程
蔡司共聚焦显微镜安全操作及保养规程前言蔡司共聚焦显微镜是一种高分辨率成像设备，广泛应用于生命科学、物质科学等领域。
为保障设备安全、延长设备使用寿命，特制定本文档，介绍该设备的安全操作及保养规程。
安全操作规程1.在操作前，应查询设备的使用说明书，并全面了解设备的性能及操作方法。
2.在使用前，应先检查设备是否正常，确保仪器各部件安装牢固、电线不松动，各部件动作正常。
3.严禁将化学试剂或其他腐蚀性物质放入显微镜中，以免损坏设备。
4.操作中应遵循“先关灯后关机，先开机后开灯”的原则，确保设备正常开启或关闭。
5.切勿使用过大或过小的力量操作显微镜，以免影响设备寿命。
6.当设备因异常情况需要紧急停机时，应使用急停开关，切勿使用电源开关，避免损坏设备。
7.在设备开启状态下，切勿随意更换设备配件或涉及设备内部维修，如有异常情况应立即向厂商或专业技术人员求助。
保养规程1.在设备正常使用期间，应加强对设备的保养和维护，保持设备的清洁和干燥。
2.设备需要接通电源时，在保证电压稳定的情况下，应使用稳定的电源并加装过电压保护装置，避免对设备产生损害。
3.在操作前，应对设备进行彻底清洁，清洁过程中不得直接将水或清洁剂倒在设备上或对设备产生损害的部位。
4.在清洗设备时，应用干燥软布或软毛刷进行擦拭，切勿使用含有酸碱成分的清洁剂或物品，以免对设备产生腐蚀或损害设备表面。
5.在清洗设备表面时，不得将清洁剂或水进入仪器内部，以免对设备产生损害。
6.镜头是设备中最为重要的部分，应特别注意保养，如镜头脱落、变形、磨损或压伤等情况，应及时向专业技术人员进行维修和更换。
7.设备长时间不用时，应及时切断电源并将设备置于安全干燥的地方，保护好设备的各部件，避免设备长时间不用而导致的性能损害。
结语蔡司共聚焦显微镜是一种高精度设备，安装、操作及保养过程中需要严格遵守规程，避免对设备产生不必要的损害。
在设备的日常使用和保养过程中，我们应该掌握正确的操作和保养方法，保证设备在长期使用中保持良好的性能状态。
激光共聚焦显微镜操作规程
激光共聚焦显微镜操作规程一、准备工作a)打开计算机。
依次打开激光器电源、钥匙开关。
多线氩离子(458 nm, 488 nm, 514 nm) ON、氦氖绿(543 nm) ON、氦氖红(633 nm) ON。
打开汞灯电源开关。
b)登陆Windows XP系统。
双击快捷方式：FV10-ASW 1.1。
User ID: Administrator ; Passeword: Administrator。
注意区分大小写。
二、显微镜镜下观察１.微分干涉差观察a)使用手控面板选择物镜。
插入起偏镜。
插入微分干涉滑块。
b)点击FV10-ASW软件中的图标。
标本聚焦.２.荧光观察：c)使用手控面板选择物镜。
d)打开汞灯的机械快门，拉出DIC滑块，点击FV10-ASW软件中的图标e)使用手控面板选择荧光滤色片。
标本聚焦。
３.获取单张荧光图像a)点击FV10-ASW软件中的按钮。
b)关闭汞灯快门，点击按钮，关闭卤素灯快门。
c)点击染料选择按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料。
点击Apply按钮。
d)点击XY Repeat按钮开始扫描。
调节图像。
点击Stop按钮停止扫描。
e)选择AutoHV,，并选择扫描速度。
f)点击XY按钮取得一幅图像。
g)点击SeriesDone按钮，“2D View-LiveImage(x)”2D界面就出现。
h)保存该幅图像:右图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像。
(保存为“xml”类型是击FV10-ASW软件专用的图像格式。
)４.获得单张（荧光+微分干涉）图像a)点击FV10-ASW软件中的按钮，关闭汞灯快门。
点击按钮，关闭卤素灯快门。
b)点击染料选择按钮，在染料列表中，双击用于观察的荧光染料。
点击Apply按钮。
c)选择TD1。
d)点击XY Repeat按钮开始扫描。
调节绿色(FITC)图像和微分干涉差的图像。
点击Stop按钮停止扫描。
e)选择AutoHV, 并选择扫描速度。
Zeiss激光扫描共聚焦显微镜操作手册
Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册目录：1 系统的组成系统组成及光路示意图实物照片说明2 系统的使用开机顺序软件的快速使用说明显微镜的触摸屏控制关机顺序3 系统的维护1 系统的组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成;系统组成及光路示意图：电脑工作站激光器电动荧光显微镜扫描检测单元实物照片说明：电动荧光显微镜扫描检测单元CO2 培养系统控制器激光器电脑工作站2 系统的使用开机顺序1打开稳压电源绿色按钮等待2 分钟电压稳定后,再开其它开关2主开关MAIN SWITCH “ON”电脑系统SYSTEMS/PC “ON”扫描硬件系统COMPONENTS “ON”3打开电动显微镜开关打开荧光灯开关注：具有5 档光强调节旋钮4Ar 离子激光器主开关“ON”顺时针旋转钥匙至“—”预热等待约15分钟,将激光器扳钮由“Standby”扳至“Laser run”状态,即可正常使用5打开电脑开关,进入操作系统注：键盘上也具有电脑开关软件的快速使用说明1电脑开机进入操作系统界面后,双击桌面共聚焦软件ZEN 图标2进入ZEN 界面,弹出对话框：“Start System”——初始化整个系统,用于激光扫描取图、分析等;“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件,用于已存图像数据的处理、分析;3软件界面：1 功能界面切换：扫描取图Acquisition、图像处理Processing、维护Maintain注：Maintain仅供Zeiss专业工程师使用2 动作按钮；3 工具组多维扫描控制；4 工具详细界面；5 状态栏；6 视窗切换按钮；7 图像切换按钮；8 图像浏览/预扫描窗口；9 文档浏览/处理区域；10 视窗中图像处理模块动作按钮：Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示;Start ——开始扫描单张图片或一个实验流程1组图片,如XYZ、XYT 等;Stop ——暂停/结束扫描;New ——建立一个新图像扫描窗口/文档;激光连接状况检查眼睛观察/相机/共聚焦LSM 光路切换ZEN软件界面右上角：Ocular ——通过观察筒用眼睛观察;激光安全保护装置自动阻断激光、保护眼睛; Camera ——光路切换至相机;LSM ——共聚焦扫描成像光路;显微镜设置：“Ocular”——>“Light Path”——>点击物镜图标,选择物镜——>样品聚焦;透射光控制Transmitted Light Control反射光光闸控制Reflected Light Shutter荧光激发块选择Reflector共聚焦LSM 扫描设置点击“LSM”ZEN软件界面右上角,系统切换至共聚焦扫描光路：光路设置：Smart Setup ——自动预设光路选取“荧光探针”、“颜色”、扫描方法,应用“Apply”;注：Fastest 为最快速扫描,多条激光谱线同时扫描;Best signal 为最佳信号扫描,多条激光谱线顺序扫描;Best compromise 为兼顾速度与信号的折中式扫描;扫描图像参数设置：每个通道的精细调节：包括：1Pinhole的调节一般设为1AU;该值越大,则信号越强,但共聚焦图像效果会降低;原则上, 在保证图像质量的前提下,该值越接近于1AU 越好；2Master Gain的调节增大则信号和噪音都增强,减小则信号和噪音均减小;原则上,在保证图像质量的前提下,Gain值越小越好；3Digital Offset的调节可扣除背景噪音,但标本信号也有一定程度的扣除;原则上,在保证图像质量的前提下,Digital Offset值越接近于0越好；4Digital Gain的调节增大则信号和噪音都增强,减小则信号和噪音均减小;原则上,在保证图像质量的前提下,Gain值越接近于~越好；5另外,对于每个通道,需要灵活调节激光的强度激光强度越高,则信号越强,但噪音也相应增强,同时标本更容易被漂白或淬灭;原则上,在保证图像质量的前提下,激光强度越低越好; 选择可连续扫描、一边预览图像效果、一边精细调节各个通道的扫描参数;如果预览图像的效果可以,则先“Stop” ,再点击“Single” 或“Start”即可完成图像的扫描;图像的保存：三种方法：1“File”菜单下,“Save”或者“Save AS”;2点击右下角按钮;3点击工具栏按钮;如图所示另外,通过“File”菜单下的“Export”,也可将图像以其它格式输出;显微镜的触摸屏控制显微镜可由TFT 液晶触摸屏进行控制：由触摸屏“Home/主页”进入“Control/显微镜控制”界面,触摸屏常用控制界面：TFT触摸屏控制直观、便捷;Objectives物镜控制TL透射光光闸RL反射光光闸Reflector荧光激发块控制荧光观察时,需要选择相应的荧光激发块或者激发波长、发射波长相近的荧光激发块Light path光路设置触摸控制,可将光路切换至“Eyepiece”目镜观察筒,或者将光路切换至左侧共聚焦光路“Sideport L”,或者将光路切换至前侧“Frontport”相机;关机顺序：1关闭软件：主菜单“File”——>“Exit”,退出共聚焦软件ZEN;2关闭主电脑操作系统、显示器电源;3关闭荧光灯电源;4关闭电动显微镜电源;5关闭Ar 激光器：先将扳钮从“Laser run” 扳到“Standby” 状态；再将钥匙逆时针从“—”旋转到“O”状态；等待约8-10分钟、激光器风扇停止转动后切记,将主开关按钮按到“OFF”;6扫描硬件系统COMPONENTS “OFF”电脑系统SYSTEMS/PC “OFF”主开关MAIN SWITCH “OFF”7等灯箱充分冷却后,再放防尘罩;8如果系统长时间超过5个小时不使用,则关闭稳压电源;3 系统的维护主要注意事项如下：1打开稳压电源时,应等待2 分钟电压稳定后,再开其它开关;2严格遵守激光器的开、关流程详见“、开/关机顺序”;3如果使用过油镜,或者物镜表面较脏,则需用擦镜纸擦干净物镜的前表面清洁液使用无水乙醇和无水乙醚的混合液,混合比例：无水乙醇30%、无水乙醚70%;4不使用荧光时,不打开荧光灯;避免频繁开/关荧光灯;5必须等灯箱充分冷却后,再小心地盖上防尘罩;6显微镜可由TFT触摸屏控制,使用触摸屏时注意：①手指保持清洁、干燥状态,并且为了保证他人使用安全,触摸时严禁配戴有可能接触污染物或危险样品的手套；②触摸屏已足够灵敏,不要大力按压触摸屏；③不要旋转、插拔触摸屏;7刻录图像数据资料：应使用刻录光驱刻录,实验前应准备好刻录光盘; 切记：为了防止计算机病毒,严禁在共聚焦电脑上使用U盘、硬动硬盘或者上网8未经授权,严禁自行安装任何软件9实验室温度应保持在22℃±2℃,湿度40%-60%;10避免空调直接对着显微镜吹风;11整个实验过程应注意保持显微镜周围环境清洁;。
激光共聚焦显微镜操作指南说明书
激光共聚焦显微镜操作指南说明书激光共聚焦显微镜（Laser Scanning Confocal Microscope）是一种高分辨率、高对比度的显微镜，广泛应用于生物医学研究、材料科学等领域。
本操作指南将详细介绍激光共聚焦显微镜的操作流程和基本操作技巧，帮助用户正确、高效地使用该设备。
一、设备准备在开始使用激光共聚焦显微镜前，需要进行以下设备准备：1. 检查电源线和数据线是否连接正常，确保设备供电和数据传输正常；2. 检查激光源是否正常工作，激光功率是否稳定；3. 检查镜头和滤光片是否清洁，清除灰尘和污渍，确保成像质量；4. 准备适当的标本样品，并将其固定在载玻片上。
二、系统启动1. 确保设备处于待机状态，按下电源按钮，等待系统启动；2. 检查系统软件是否正常运行，若出现异常情况，及时联系维修人员进行处理；3. 检查镜头和滤光片的安装是否正确，确保成像时的光路通畅；4. 开启激光源，根据需要选择合适的激光波长和功率；5. 调节扫描镜和物镜的位置，使光线准确聚焦在样品上。
三、图像获取1. 打开激光共聚焦显微镜软件，并根据需要选择合适的成像模式；2. 调节激光功率和增益，确保图像的亮度和对比度适宜；3. 调节扫描镜的扫描速度，根据样品的要求选择合适的扫描速度；4. 调节焦距和聚焦位置，通过手动或自动对焦功能获取清晰的图像；5. 点击图像捕捉按钮，记录当前图像或录制图像序列。
四、图像处理和分析1. 通过激光共聚焦显微镜软件提供的图像处理功能，对图像进行调整和增强，以获得更好的观察效果；2. 根据需要，利用软件提供的计算和分析功能对图像进行进一步处理，如三维重建、光学切片等；3. 对图像进行定量分析时，选择合适的工具和算法，并按照要求设定参数；4. 记录和保存处理后的图像数据，以备后续分析和报告撰写使用。
五、设备关闭1. 停止图像采集和处理工作；2. 降低激光功率，关闭激光源；3. 将扫描镜和物镜返回初始位置，关闭设备；4. 断开电源和数据线，保持设备清洁干燥。
激光共聚焦系统使用说明 Imager Vario LSM
共聚焦显微镜操作入门指南(仅供内部使用)文档作者：李宇(liyu@) 日期：2012-12-04文档校对：李宇日期：2012-12-04卡尔蔡司中国版权所有不得复制目录1开机 (1)1 .1接通总电源 (1)1 .2打开激光器 (1)1 .3打开控制器、主控电脑 (1)2使用激光共聚焦扫描软件Zen 2010 (2)2 .1打开软件 (2)2 .2切换到明场观察模式（目镜筒） (2)2 .3放入样品并在明场模式下找到焦平面 (3)2 .4切换到共聚焦扫描模式 (6)2 .5设置激光扫描参数，找到样品最亮的焦平面位置 (6)2 .6设置Z-stack扫描上下限 (8)2 .7开始扫描 (10)2 .8分析扫描结果，进行三维观测 (11)3关机 (15)4附：目镜中，使用明场、暗场和偏光模式观察样品 (16)4 .1明场模式 (16)4 .2暗场模式 (17)4 .3偏光模式 (17)5附：使用相机（CCD）拍摄明场、暗场和偏光图 (18)5 .1拍摄明场图 (18)5 .2拍摄暗场图 (19)5 .3拍摄偏光图 (19)1 开机1 .1接通总电源图 1 从左至右依次为：墙体总电源、稳压器电源、激光器和电脑电源1 .2打开激光器图 2 转动激光器钥匙，打开激光器，LED指示灯亮1 .3打开控制器、主控电脑图 3 依次打开左图显微镜主机控制器电源、右图电脑主机电源提示：当仅使用CCD拍图，或者长时间不用机器时，建议关闭激光器，以延长其寿命。
2 使用激光共聚焦扫描软件Zen 20102 .1打开软件双击图标，然后点击“Start System ”进入软件。
2 .2切换到明场观察模式（目镜筒）2 .2.1 在共聚焦软件中切换为明场观察模式：点击“Locate ”标签，选择“Online ”，点击“BF ”（Bright Field 的缩写）。
此时系统打开卤素灯，并将明场光学模块转入光路。
图 4 切换为明场观察模式提示：如果出现硬件通讯问题，软件左下角会弹出信息对话框，此时一般的解决方法是：1）重启Zen 软件；2）如果仍无效，关闭整个系统，过5分钟后再重启系统。
Zeiss激光扫描共聚焦显微镜LSM700操作说明-cai
电动荧光显微镜
扫描检测单元
激光器
电脑工作站
ÓÉ Foxit PDF Editor ±à¼-
°æȨËùÓÐ (c) by Foxit Software Company, 2004 - 2007 ½öÓÃÓÚÆÀ¹À¡£
实物照片说明：
电动荧光显微镜
扫描检测单元
CO2 培养系统控制器
激光器 电Байду номын сангаас工作站
打开 [ 荧光灯开关 ] （注：具有荧光光强调节旋钮）
（3）打开 [ 电脑开关 ]，进入操作系统 注：键盘上也具有 [ 电脑开关 ]
（4） 打开激光器电源开关，将激光器上的钥匙转到水 平位置
ÓÉ Foxit PDF Editor ±à¼°æȨËùÓÐ (c) by Foxit Software Company, 2004 - 2007 ½öÓÃÓÚÆÀ¹À¡£
ÓÉ Foxit PDF Editor ±à¼°æȨËùÓÐ (c) by Foxit Software Company, 2004 - 2007 ½öÓÃÓÚÆÀ¹À¡£
2.4 关机顺序：
（1）关闭软件：主菜单“File”——>“Exit”，退出共聚焦软件 ZEN。 （2）关闭主电脑操作系统、显示器电源。 （3）关闭 [荧光灯电源 ]。 （4）关闭 [扫描载物台电源] 、[显微镜系统电源]。 （5）如果使用了 [CO2 培养系统] ，则关闭其电源。 （6）等 [灯箱] 充分冷却后，再放防尘罩。 （7）如果长时间（>1 day）不使用，则关闭稳压电源、墙上总电源。
激光连接状况检查
ÓÉ Foxit PDF Editor ±à¼°æȨËùÓÐ (c) by Foxit Software Company, 2004 - 2007 ½öÓÃÓÚÆÀ¹À¡£
Zeiss LSM 780 激光扫描共聚焦显微镜光路设置和不同扫描模式的使用
Zeiss LSM 780 激光扫描共聚焦显微镜光路设置和不同扫描模式的使用对于使用激光扫描共聚焦显微镜的研究者来说，实验设计、样品准备、仪器操作和后期图片处理是一个实验至关重要的四步，前两步是任何一个研究者都必须具备的能力，否则无从谈起上机实验，后期图片处理无非就是修饰润色使图片从视觉上更美观，而对大多数从事生物学医学领域的研究者来说，仪器的操作可能是最关键的一步，而仪器操作中光路的设置和不同扫描模式的选择可能是最难掌握和最难学习的模块，因为这部分可能涉及一些物理光谱学的知识。
文章就以自己实验室Zeiss LSM 780激光扫描共聚焦显微镜为例，简要介绍其三种光路设置和五种不同扫描模式如何选择使用，希望对使用者有所帮助。
标签：激光扫描共聚焦显微镜；光路设置；扫描模式引言随着现代科学技术的飞速发展，各种荧光蛋白、荧光染料和精密光学元件不断出现[1-5]，激光扫描共聚焦显微镜技术得到了极大的发展，各种公司，各种型号的共聚焦系统不间断问世或完善，广泛应用在细胞生物学医学领域[6-8]。
广泛的应用使得这一设计精密又操作复杂的仪器必须让有需要的研究者方便学习和掌握。
就以蔡司公司为例，科学技术的发展和适应市场的需要，不同型号的共聚焦系统逐步上市和使用，LSM 510、510 Meta、700、710、780等在硬件技术提高的同时，操作软件也在一步步简化。
文章以华南农业大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室的一台超高灵敏度检测Zeiss LSM 780系统为例，介绍其光路设置和不同扫描模式的选择，因为它是目前蔡司公司推出的上述普通激光扫描共聚焦显微镜中型号最高的一款，它的光路设置和扫描模式的配置将集上述所有型号系统的内置设置于一身，希望能给实验者提供较全面的指导。
1 Zeiss LSM 780 激光扫描共聚焦显微镜三种光路设置（1）最“傻瓜式”一键操作：Zeiss LSM 780使用Zen 2011软件，软件操作界面有一个Resue按钮。
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Zeiss 激光扫描共聚焦显微镜操作手册
目录:
1 系统得组成
系统组成及光路示意图
实物照片说明
2 系统得使用
2、1 开机顺序
2、2 软件得快速使用说明
2、3 显微镜得触摸屏控制
2、4 关机顺序
3 系统得维护
1 系统得组成
激光扫描共聚焦显微镜系统主要由:电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。
系统组成及光路示意图:
电脑工作站
激光器
电动荧光显微镜扫描检测单元
实物照片说明:
电动荧光显微镜
扫描检测单元
CO2 培养系统控制器
激光器
电脑工作站
2 系统得使用
2、1 开机顺序
(1)打开稳压电源(绿色按钮)
等待2 分钟(电压稳定)后,再开其它开关
(2)主开关[ MAIN SWITCH ]“ON”
电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON”
扫描硬件系统[ PONENTS ]“ON”
(3)打开[ 电动显微镜开关]
打开[ 荧光灯开关]
(注:具有5 档光强调节旋钮)
(4)Ar 离子激光器主开关“ON”
顺时针旋转钥匙至“—”
预热等待约15分钟,
将激光器[ 扳钮] 由“Standby”扳至
“Laser run”状态,即可正常使用
(5)打开[ 电脑开关],进入操作系统
注:键盘上也具有[ 电脑开关]
2、2 软件得快速使用说明
(1)电脑开机进入操作系统界面后,双击桌面共聚焦软件ZEN 图标
(2)进入ZEN 界面,弹出对话框:
“Start System”——初始化整个系统,用于激光扫描取图、
分析等。
“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件,用于已
存图像数据得处理、分析。
(3)软件界面:
1 功能界面切换:扫描取图(Acquisition)、图像处理(Processing)、维护(Maintain) (注:Maintain仅供Zeiss专业工程师使用)
2 动作按钮;
3 工具组(多维扫描控制);
4 工具详细界面;
5 状态栏;
6 视窗切换按钮;
7 图像切换按钮;8 图像浏览/预扫描窗口;9 文档浏览/处理区域;10 视窗中图像处理模块
动作按钮:
Single ——扫描单张图片、并在图像预览窗口显示。
Start ——开始扫描单张图片或一个实验流程(1组图片,如XYZ、XYT 等)。
Stop ——暂停/结束扫描。
New ——建立一个新图像扫描窗口/文档。
激光连接状况检查
眼睛观察/相机/共聚焦LSM 光路切换(ZEN软件界面右上角):
Ocular ——通过观察筒用眼睛观察。
(激光安全保护装置自动阻断激光、保护眼睛。
) Camera ——光路切换至相机。
LSM ——共聚焦扫描成像光路。
显微镜设置:
“Ocular”——>
“Light Path”——>
点击物镜图标,选择物镜——>
样品聚焦。
透射光控制(Transmitted Light Control)
反射光光闸控制(Reflected Light Shutter)
荧光激发块选择(Reflector)
共聚焦LSM 扫描设置
点击“LSM”(ZEN软件界面右上角),系统切换至共聚焦扫描光路:
光路设置:
Smart Setup ——自动预设光路
选取“荧光探针”、“颜色”、扫描方法,
应用“Apply”。
(注:Fastest 为最快速扫描,多条激光谱线同时扫
描。
Best signal 为最佳信号扫描,多条激光谱线顺
序扫描。
Best promise 为兼顾速度与信号得折
中式扫描。
)
扫描图像参数设置:
每个通道得精细调节:
包括:
(1)Pinhole得调节(一般设为1AU。
该值越大,则信号越强,但共聚焦图像效果会降低。
原则上, 在保证图像质量得前提下,该值越接近于1AU 越好);
(2)Master Gain得调节(增大则信号与噪音都增强,减小则信号与噪音均减小。
原则上,在保证图
像质量得前提下,Gain值越小越好);
(3)Digital Offset得调节(可扣除背景噪音,但标本信号也有一定程度得扣除。
原则上,在保证图
像质量得前提下,Digital Offset值越接近于0越好);
(4)Digital Gain得调节(增大则信号与噪音都增强,减小则信号与噪音均减小。
原则上,在保证图
像质量得前提下,Gain值越接近于1、0~1、2越好);
(5)另外,对于每个通道,需要灵活调节激光得强度(激光强度越高,则信号越强,但噪音也相应增
强,同时标本更容易被漂白或淬灭。
原则上,在保证图像质量得前提下,激光强度越低越好。
) 选择可连续扫描、一边预览图像效果、一边精细调节各个通道得扫描参数。
如果预览图像得效果可以,则先“Stop” ,再点击“Single” 或“Start”
即可完成图像得扫描。
图像得保存:
三种方法:
(1)“File”菜单下,“Save”
或者“Save AS”。
(2)点击右下角按钮。
(3)点击工具栏按钮。
(如图所示)
另外,通过“File”菜单下得“Export”,也可将图像以其它格式输出。
2、3 显微镜得触摸屏控制
显微镜可由TFT 液晶触摸屏进行控制:
由触摸屏“Home/主页”进入“Control/显微镜控制”界面,
触摸屏常用控制界面:
TFT触摸屏控制
直观、便捷。
Objectives物镜控制
TL透射光光闸
RL反射光光闸
Reflector荧光激发块控制
荧光观察时,需要选择相应得
荧光激发块
(或者激发波长、发射波长相
近得荧光激发块)
Light path光路设置
触摸控制,可将光路切换至“Eyepiece”
目镜观察筒,或者将光路切换至左侧共聚
焦光路“Sideport L”,或者将光路切换至
前侧“Frontport”相机。
2、4 关机顺序:
(1)关闭软件:主菜单“File”——>“Exit”,退出共聚焦软件ZEN。
(2)关闭主电脑操作系统、显示器电源。
(3)关闭[荧光灯电源]。
(4)关闭[电动显微镜电源]。
(5)关闭Ar 激光器:
先将[扳钮] 从“Laser run” 扳到“Standby” 状态;
再将[钥匙] 逆时针从“—”旋转到“O”状态;
等待约8-10分钟、激光器风扇停止转动后(切记！),
将主开关按钮按到“OFF”。
(6)扫描硬件系统[ PONENTS ]“OFF”
电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“OFF”
主开关[ MAIN SWITCH ]“OFF”
(7)等[灯箱] 充分冷却后,再放防尘罩。
(8)如果系统长时间(超过5个小时)不使用,则关闭稳压电源。
3 系统得维护
主要注意事项如下:
(1)打开稳压电源时,应等待2 分钟(电压稳定)后,再开其它开关。
(2)严格遵守[激光器]得开、关流程(详见“2、1、2、4 开/关机顺序”)。
(3)如果使用过[油镜],或者物镜表面较脏,则需用[擦镜纸]擦干净物镜得前表面(清洁液使用无水乙醇与无水乙醚得混合液,混合比例:无水乙醇30%、无水乙醚70%)。
(4)不使用荧光时,不打开[荧光灯]。
避免频繁开/关荧光灯。
(5)必须等灯箱充分冷却后,再小心地盖上[防尘罩]。
(6)显微镜可由[TFT触摸屏]控制,使用触摸屏时注意:
①手指保持清洁、干燥状态,并且为了保证她人使用安全,触摸时严禁配
戴有可能接触污染物或危险样品得手套;
②触摸屏已足够灵敏,不要大力按压触摸屏;
③不要旋转、插拔触摸屏。
(7)刻录图像数据资料:应使用刻录光驱刻录,实验前应准备好刻录光盘。
切记:为了防止计算机病毒,严禁在共聚焦电脑上使用U盘、硬动硬盘或
者上网！！！
(8)未经授权,严禁自行安装任何软件！！！
(9)实验室温度应保持在22℃±2℃,湿度40%-60%。
(10)避免空调直接对着显微镜吹风。
(11)整个实验过程应注意保持显微镜周围环境清洁。