派伊尔结在肠道黏膜免疫中的作用
肠道黏膜SIgA的功能及调节
肠道黏膜SIgA的功能及调节【关键词】肠黏膜免疫；SIgA；免疫调节［摘要］以SIgA为主的体液免疫在肠黏膜免疫系统中起主导作用，它是防御病菌在肠道黏膜黏附和定植的第一道防线。
SIgA的分泌受神经、内分泌和免疫系统的调节，在感染过程中肠道黏膜的免疫屏障被破坏，可造成消化道或全身性疾病。
研究肠黏膜免疫机制及其络调节有着重要的现实意义。
［关键词］肠黏膜免疫；SIgA；免疫调节消化道感染的发病率仅次于呼吸道，在感染性疾病中居第二位。
胃肠道不仅是消化、吸收营养物质的场所，而且是体内重要的免疫器官，在肠道黏膜免疫中起重要作用的是分泌型IgA（secretory Immuoglobulin A,SIgA）。
肠道黏膜的免疫屏障结构容易受到外界因素的影响，当其屏障功能被削弱时，外来微生物如细菌、病毒和寄生虫易于入侵，轻者出现消化不良、腹泻，重者可能会发生严重感染，甚至危及生命。
因此研究肠黏膜免疫机制及其络调节，对生长发育、疾病的治疗和一些口服疫苗的研制，均有重要意义。
1 SIgAIgA的组成和结构人类机体内SIgA有两种类型：一种是7SIgA单体，主要以单体形式存在于血液中，含量较少；另一种为11SIgA二聚体，通过分泌成分（secretory ponent,SC）和J链（Joining Chain）结合而形成SIgA，主要存在于共同黏膜免疫系统（CMIS）的外分泌液中，含量较多。
SC，分子量约80kD，糖蛋白，主要分布在分泌性腺体上皮细胞基底侧膜及游离腔面的细胞质内，作为IgA的特异受体（又称跨膜蛋白）在SIgA的合成、分泌和转运中起重要作用，并能保护SIgA不受蛋白水解酶的降解。
J链，分子量约15kD，糖蛋白，由合成Ig的淋巴细胞和浆细胞产生，在SIgA的合成中起聚合作用。
人类IgA有2个同种型：IgA1和IgA2。
IgA1是黏膜分泌的成分之一，在血清中大部分为IgA1（85%~90%），IgA1对细菌性蛋白酶比较敏感，受酶作用后活性下降；IgA2主要存在于黏膜分泌物中，肠道中IgA1和IgA2各占50%，IgA2对一些细菌所产生的蛋白酶有较强的耐受性。
免疫学-黏膜免疫
黏膜免疫系统与免疫应答 黏膜免疫系统中的固有免疫应答 黏膜免疫系统中的适应性免疫应答 黏膜免疫中的免疫耐受和免疫调节 粘膜免疫与疾病
直接接触病原体的解剖部位并能够分泌粘液的上皮细胞所覆盖，构成粘膜免疫系统 （mucosal immune system）。包括启动和行使免疫应答的粘膜下固有层中各种散在 的免疫细胞和一些器官化的淋巴组织，还包括与此相关的多种内分泌腺体：胰腺、眼 结膜和泪腺、唾液腺以及乳腺。因而黏膜免疫系统亦称黏膜相关淋巴组织（mucosaassociated lymphoid tissue, MALT）。
TCR CD8 T
Pf,Gz,FasL
TCR CD8
IL-6, KGF TNF-
NK
NKT
TNF-, Pf, Gz, IFN- FasL
IFN-,IL-4
MAIT
?
功能
调节
Th1/Th2 功能
毒性
炎症, 修复， 炎症 毒性
Th1/Th2
？
毒性 抗炎
功能？
TL: 非经典MHC I 类分子 胸腺白血病抗原；MIC: MHC I 类链相关分子；CD1d/a-GalCel: 分化抗原CD1d分子提呈的 半乳糖神经 酰胺； MR1: MHC相关I 类分子；MAIT: MR1限制性粘膜相关恒定链T 细胞; Pf: 穿孔素；Gz: 颗粒酶。KGF: 角朊细胞生长因子。
肠道粘膜相关的固有免疫应答
➢ 肠道上皮细胞的免疫屏障功能 ➢ 肠道上皮细胞分泌的粘液防止微生物接近上皮细胞 ➢ 肠道上皮细胞产生的防御素和细胞因子具有抗菌活性 ➢ 肠道上皮细胞表达的TLR和NLR显示双重免疫功能 ➢ 固有层中的DC和巨噬细胞具有炎症反应抑制作用和免
肠道黏膜免疫研究进展_丁轲
动物医学进展,2007,28(10):67-71Progress in Veterinary Medicine肠道黏膜免疫研究进展丁 轲,余祖华,王天奇(河南科技大学动物科技学院,河南洛阳471003) 摘 要:黏膜免疫是当前免疫学领域的研究热点,尤其是肠道黏膜免疫越来越被人们重视。
近年来国内外学者分别探讨了肠道黏膜组织结构、肠道菌群及黏膜疫苗对黏膜免疫的作用及影响,研究表明,肠道黏膜组织结构中主要是M细胞、树突状细胞和巨噬细胞进行抗原摄取和转运,对起始黏膜免疫起着重要的作用。
肠道菌群在免疫过程中主要是促进抗原的分泌和调节各种细胞因子的产生。
合适的黏膜疫苗能够有效地激发黏膜免疫反应,具有方便、快捷、安全、有效、持续等优点。
文章重点阐述了肠道菌群对黏膜免疫的影响及黏膜免疫的优点,并指出了制约黏膜免疫发展的关键因素、存在的问题及其发展前景。
关键词:黏膜免疫;肠道菌群;黏膜疫苗中图分类号:R392文献标识码:A文章编号:1007-5038(2007)10-0067-05 近年来,随着生物技术、分子生物学和药物投递系统等的发展及对免疫学研究的不断深入,黏膜免疫越来越受到人们的重视。
从当前免疫学发展的方向看,黏膜免疫是一种理想的免疫途径,将是未来发 收稿日期:2007-07-30 基金项目:河南科技大学青年基金项目(N o2007Q N023) 作者简介:丁 轲(1977-),男,河南永城人,副教授,博士,主要从事动物微生态学与动物传染病学研究。
[14] Kobin ger G P,Feldm ann H,Zhi Y,et al.C himpanzee adeno-viru s vaccin e protects again st Zaire Ebola viru s[J].Virology,2006,346(2):394-401.[15] Dai S Z,Kong S F,H uang L L,et al.Cons tru ction andpack age of the exp ression plasmid pAdEasy-1system enco-ding the hu man papillom aviru s16E7gene and the gene's in-fluence on H eLa cells[J].Zhong Hua Fu Chan Ke Za Zhi,2006,41(9):612-617.[16] Gong N,Dong C,C hen Z,et al.Adenovirus-mediated anti-sense-ERK2gene therapy attenuates chronic allog raft ne-ph ropathy[J].Transplantation Proceedings,2006,38(10):3228-3230.[17] Peterson B,Zhang J,Iglesias R,et al.H ealing of criticallysized femoral defects u s ing genetically modified m esenchy malstem cells from human adipose tissue[J].Tissue Eng,2005,11(1-2):120-129.[18] H an Z S,li Q W,Zhang Z Y,et al.High-level ex pres sion ofhum an lactoferrin in the milk of goats by using replication-de-fective aden oviral vectors[J].Protein Expr Purif,2007,53(1):225-231.[19] 何秀苗,秦爱建.动物腺病毒载体的研究进展[J].动物医学进展,2004,25(2):22-24.Advance in Adenovirus VectorDING Chang-gen1,2,LIU H ui-Li1(1.Institute o f Animal S cience and Veterinary Medicine,S hangh ai Acad emy o f A gr iculture S ciences,Sh angha i,201106,China;2.College o f Veterinary Medicine,Nanjing Ag riculture Un iver sity,Nan jin g,J ian gsu,210095,China)A bstract:The development of gene therapy and gene imm unity has been a m ajo r m eans for so lving the pro blem s in the biolo gical field.The desig n,sy nthesis and application of therapeutic agents have created the need fo r the re sea rch and development of mo re sophisticated gene delivery tools.Adenovirus vecto r (Adv)has been o ne o f general virus v ectors due to its w ide ho st range and low pathog enicity,stabilization of viral particles,low geno me rear rangement.H owever,targe ting fo r cells and host imm une respo nse have limited the applicatio n of Adv.People constantly fo cus on improving and consum mating and pay ex tensive-ly attention to its potential value.The article reviewed the character,develo pment and prospect fo r appli-catio n of Adv,w hich provide references fo r optimizing and using of Adv perfectly.Key words:Adeno virus;construction of vecto r;applicationDOI:10.16437/ ki.1007-5038.2007.10.028展的重要方向之一。
肠易激综合征患者结肠黏膜神经肽和IL-1 p变化及其意义
异 常 。 ２．２．２ 结 肠 黏 膜 ＳＰ、ＶＩＰ 和 ＩＬ一１Ｂ 免 疫 组 化 的 变 化 ：
用 ＶＩＰ促 进肠 道 分泌 解释 其在 ＩＢＳ发 病 中作用 。 目前 研究 认为 神经 肽 除 了参 与 对 胃肠 蠕 动 、分 泌 等 生 理 功
பைடு நூலகம்
免疫 组 化染 色 ，可 见 ＩＬ．１Ｂ染 色 颗 粒 主要 分 布 腺 上 皮 能调 节作 用 ，还参 与对 免疫 机 制调 节 作用 ，ＶＩＰ主 要通
D ｗａｓ ｍｕｃｏｓａ ｂｅｔｗｅｅｎ ＩＬ一１ Ｂ ａｎｄ ＶＩＰ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｉｌｅｏｃｅｃａｌ ｉｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ＩＢＳ（ｒ＝０．７５，Ｐ ＜０。０１）．Ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｒｅａ ａｎｄ
ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｏｐｔｉｃａｌ ｄｅｎｓｉｔｙ（ＩＯＤ）ｏｆ ＶＩＰ ｉｎ ｂｏｔｈ ｓｉｇｍｏｉｄ ｃｏｌｏｎ ａｎｄ ｉｌｅｏｃｅｃａｌ ｊｕｎｃｔｉｏｎ ｍｕｃｏｓａ ｗｅｒｅ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ
资 金 项 目 ：安 徽 省 教 育 厅 课 题 （２００５ＫＪ３４４２．Ｃ） 通 讯 作 者 ：王 巧 民 ，Ｅｍａｉｌ：Ｑｍｗａｎｇ９２８＠ ｍａｉｌ．ｃｈｉｎａ．ｃｏｒｎ 联 系 电 话 ：１３９６５０７９１９０
１ 材 料 与 方 法 １．１ 一 般 资 料 ＩＢＳ组 ２１例 ，其 中 男 性 １０例 ，女 性 １ １例 。 年 龄 ２５ ～５３ 岁 ，平 均 年 龄 ３９．２ 岁 。 病 程 １０１．３±７６．６月 。所 有 研 究 对 象 均 参 照 ＩＢＳ诊 断 的 Ｒｏｍｅ ＩＩ标 准 ；对 照组 １７例 ，无 消 化 道症 状 的志 愿肠 镜 体 检 者 。 年 龄 ２９～５６岁 ，平 均 年 龄 ４１．２岁 。 内 镜 下 排 除炎症 、肿 瘤 和息 肉等器 质性 疾病 ；所 有受 试对 象 均 排 除咽炎 、风 湿性 疾病 等 慢 性 疾 病 史 及 近期 服 用 非 甾 体 消炎 药和糖 皮 质激 素 。
病理第6.7章 细菌的感染与免疫
抗衰老作用
正常菌群中双岐杆菌、乳杆菌、肠球菌可产生过氧 化物岐化酶（SOD），催化自由基（O2-）岐化， 清除O2- 的毒性保护组织细胞。
抗肿瘤作用
正常菌群中双岐杆菌、乳杆菌、肠球菌除产生多种 酶分解致癌物质，如降解亚硝酸胺为仲胺和亚硝酸 盐，排出体外；还可激活巨噬细胞抗肿瘤。
微生态平衡与失调
微生态学（microecology）：细胞或分子水平 研究微生物与宿主、环境三者之间相互关系的综合 性学科。 医学微生态学：研究寄居在人体表面和外界相 通腔道黏膜表面的微生物与微生物、微生物与人体， 以及微生物和人体与外界环境之间相互依存、相互 制约的关系。 微生态平衡，微生态失调，菌群失调症
活化的单核-巨噬细胞产生活性氧中介物
（H2 O2 、 O2- 、 OH- ）、活性氮中介物
（NO、NO-2 、NO-3 等。中性粒细胞和NK细 胞也参与抗胞内菌免疫。
2.细胞免疫： 参与抗胞内菌（或病毒）感染。
CD4+ Th1分泌细胞因子（CK）（IL-2、 IFN-γ、TNF-α）引起迟发型超敏反应，增强巨噬细 胞的杀伤能力，清除胞内菌。 CTL释放穿孔素、颗粒酶破坏靶细胞，释放病原 体，通过抗体调理吞噬清除；IFN-γ活化巨噬细胞， 增强杀伤能力。
杀死 的病原体由蛋白酶、核酸酶、脂酶 等降解、消化 残渣排至吞噬细胞外
3.吞噬作用的后果
随机体的免疫程度、病原体种类、毒力不同而异。
（1）完全吞噬：病原体在吞噬溶酶体中被杀灭和消化，未消化的 残渣被排除胞外。大多数化脓菌5～10min即死，30～60min被破坏。 （2）不完全吞噬:某些胞内寄生菌或病毒在机体免疫力地下时，只 被吞噬不被杀死。
第二节 细菌的致病作用
致病性 细菌的侵袭力
分泌型IgA
感谢观看
SC能通过糖类残基使sIgA与表皮表面的粘膜抗体附着于适当的组织处，破坏细菌定位，从而清除细菌。SC上 N一糖基给细菌的附着以及凝集素提供了位置。SC的糖基与Mac-1的凝集素结合位点结合，诱导IgA受体 FcaR(CD89)传递sIgA信号，从而引起呼吸爆发、吞噬活动及细胞因子释放。
sIgA与SC能优先活化人的嗜酸性粒细胞，并诱导其降解和产生过氧化物，从而调节体内与粘膜嗜酸性粒细胞 有关的疾病和一些过敏性疾病。在激活巨噬细胞方面，sIgA与IgA在功能上有差异。Marjolein等用炎症介质诱导 一种转基因小鼠的Kupffer细胞表达FcaR1，发现sIgA不能通过这个受体启动巨噬细胞的活动，而血液中的与细菌 结合的IgA则可调节巨噬细胞的吞噬活动。
作用研究
人的肠道内，寄生着大量的细菌，同时会有各种病原体入侵，这些抗原进入血液循环就会带来潜在危害。而 sIgA能够构成一道生物屏障来抵御这些有害物质。sIgA不仅可聚集潜在和入侵的病原体使之易于通过蠕动和粘液 纤毛运动将其清除，而且sIgA一免疫复合体可特异地与肠PP中的M细胞结合被转运入PP内，与一定数量的PP细胞 如DC、T和B淋巴细胞选择性交联，如与DC结合并被摄取，就可加强没有炎性反应伴随的免疫进程；与T细胞结合 的sIgA可能起另一种局部免疫调节作用，导致粘膜中II一4、IL-10和TGF-13等细胞因子生成。由此可见，sIgA 通过PP进入粘膜可能起很重要的免疫调节作用，以保护肠道屏障的完整。Biblioteka sIgA通过共生菌参与肠道黏膜免疫
正常生理情况下，肠腔内寄生了大量的微生物，这其中的共生菌能刺激肠道中黏膜产生sIgA，并且是主要来 源。
树突状细胞会摄取极少量的(0.0001%)的细菌，而大部分的细菌都会被黏液阻隔在外层。派伊尔结中DCs的一 个亚型可表达趋化因子受体CX3CR1，当DCs从肠上皮表面摄取共生菌或致病菌后，DCs携带细菌只能够转运到肠系 膜淋巴结，不进入二级淋巴组织，从而避免不必要的系统免疫启动。DCs摄取肠腔细菌后可诱导sIgA的分泌，共 同监控粘液层细菌的入侵或粘液层内细菌的增殖。
猪场腹泻问题的元凶——猪圆环病毒2型
由基损伤，以及显著降低病毒（PCV2）和其他肠道病原 混合感染的机率。 目前，由于猪圆环病毒 2 型疫苗的广泛普及和应用， 大多数猪场可能最常见的形式是猪圆环病毒 2 型亚临床 感染（PCV2-SI） ，而因为病毒引起的典型的全身性和 / 或消化系统的临床症状和病变的案例越来越少，除了一 些未接种猪圆环疫苗和 / 或疫苗接种不当的猪场。众多 的案例证实，目前大多数出现腹泻问题的猪场往往都伴 有猪圆环病毒 2 型亚临床感染（PCV2-SI）的存在，这 很可能与猪圆环病毒 2 型（PCV2）和肠道致病菌混合感 染的结果，而前者往往是引起这些临床问题的主要原因。 因此，利用现有的诊断工具来确定某些特定的肠道疾病 中各个病原菌所占的比重是非常重要的，这可有助于我 们从源头解决实际问题，达到事半功倍的效果。另外， 在这种情况下，病理学检查（大体和组织病理学）对我 们的评估同样会有很大的帮助。
2017 年第 8 期
环球视野
猪场腹泻问题的元凶——猪圆环病毒 2 型
黎先伟 译 By Jorge Martínez
生长育肥猪腹泻是商业化养猪场普遍存在的一个问 题，这往往严重限制了生猪的生产效率和盈利水平。通 常情况下，引起 4 周龄以上猪的肠道疾病主要有以下几 种病原，包括轮状病毒、冠状病毒、大肠杆菌、短螺旋 体属、沙门氏菌、耶尔森氏菌、细胞内劳森菌、有齿结 节线虫和猪鞭虫等。事实上，在大多数情况下，仔猪断 奶后腹泻和结肠炎是由于饲料、饮水和其他环境因素等 相互作用并发的病因引起的。 众所周知， 相关研究已证实猪圆环病毒 2 型（PCV2） 是一种可引起全身性疾病的病原，即是引起猪圆环病毒 2 型全身性疾病（PCV2-SD）和猪圆环病毒 2 型亚临床感 染（PCV2-SI）的主要病原。不过，近年来越来越多的 研究表明，猪圆环病毒 2 型是能够引起猪群腹泻的一个 重要的病原，而且在猪圆环病毒病（PCVDs）中，猪圆 环病毒 2 型肠道疾病（PCV2-ED）已被单独列为一类疾 病，其定义包括 ： （1）病猪发生腹泻 ； （2）肉芽肿性肠 炎， 并用显微镜在派伊尔结（又称派尔集合淋巴结（Peyer patch）是肠黏膜免疫系统的重要组成部分，是小肠粘膜 内的一组淋巴滤泡） ，而不是其他淋巴组织中观察到淋巴 细胞缺失 ;（3）在肠道粘膜或派伊尔结中检测中高含量 的猪圆环病毒 2 型（PCV2）病原，而在其他系统组织中 并未检测到。 为 了 阐 明 猪 圆 环 病 毒 2 型 肠 道 疾 病（PCV2-ED） 是否确实存在，科研人员设计了一个试验，以研究调查 在西班牙的养猪场中，生长育肥猪感染猪圆环 2 型病毒 并出现腹泻流行情况，同时评估猪圆环病毒 2 型肠道疾 病（PCV2-ED）和猪圆环病毒 2 型全身性疾病（PCV2SD）间潜在的叠加可能。本研究从不同的养猪场中采集 了 96 头患有腹泻的猪，并将正头完整的猪送往巴萨罗 那自治大学兽医学院的猪病诊断实验室进行剖检和实
肠道粘膜免疫应答的机制ppt课件
先天性和获得性免疫应答的区别
机体防御细胞（如巨噬细胞）表面 表达有能够识别PAMP的PRR
TLR依靠识别PAMP的分子结构，经过一系 列信号转导，启动针对病原体的固有免疫 应答，在细胞信号转导中发挥重要作用， 是联系固有性免疫和适应性免疫的纽带。
Toll样受体信号转导通路
NOD蛋白是一种重要的细胞内PRR，可以
肠道粘膜免疫应答的机制
肠道黏膜免疫反应的诱导发生部位在IEC和PP。 IEC功能 吸收肠腔内各种抗原 摄取和释放分泌型IgA（SIgA）
提成抗原，分泌细胞因子
肠道免疫的效应部位主要 原，对维持肠黏膜内环境稳定，保持肠 黏膜免疫耐受状态起重要作用。 抗原成分在诱导机体先天性和获得性 免疫应答过程中起重要作用。
识别细菌细胞壁成分肽聚糖（PGN），参 与先天性免疫应答并诱导炎症反应和细胞 凋亡。
NOD分子信号转导途径
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TNF-A 和 IL-10 的 能 力 相 当 。
2.2 对腹腔巨噬 cell 吞噬活性的影响
从结果来看，第②组小鼠腹腔巨噬 cell 吞噬活
性显著增强，p＜0.05 具有统计学意义， 第③组进一
步显著上升，p＜0.05 具有统计学意义， 其它菌株组
除了第⑥组与空白组相比较也均有提升，且差异明
显，p＜0.05 具有统计学意义， 而第⑥组与空白组无
2013.12 3
科学探索
组稿 \Email: nmgxmy2008@
代当 Husbandry Animal Modern 业殖养禽畜
（7）测定小鼠腹腔巨噬 cell 的吞噬活性
在实验 3 周后，脱臼处死小鼠，使用 PBS 溶液
取其腹腔渗出液，经过与荧光标记以及培养基的培
养后， 在 530nm 发射光以及 485nm 激光波长的光
致敏可抑制小鼠对 sIgA 的分泌,乳酸菌则可增
强小鼠对 sIgA 的分泌 ，第③，④，⑤三 组 均 可 削 弱
由于致敏导致的 sIgA 分泌下降情况，且效果显著，
p＜0.05 （具有统计学意义）。 第⑥组菌株无明显作
用，p＞0.05（不具有统计学意义）。 详细见表 2。
表 2 各组对小鼠分泌 sIgA 的影响比较
8.96±0.39 11.09±0.45ab 9.95±1.23ab 8.96±0.17a
⑤致敏 plantarumFn008 L 洗胃组
7.97±0.35
标注：a 表示与空白组差异 显 著 （p＜0.05），b 表 示 与 致 敏 组 差 异 显 著 （p＜0.05）。
2.3 测定小鼠粪便中 sIgA
关键词：派伊尔结；乳酸菌；肠道黏膜；免疫作用 肠道相关淋巴组织由细胞因子以及相关淋巴 组织（PP）构成，其中 PP 也是我们惯称的派伊尔结。 肠 道 的 免 疫 反 应 诱 导 器 官 派 伊 尔 结 (Peyer.s patches, PP)外表的滤泡连接上皮(FAE)具有一些特 定的受体可以结合某些细菌[1]。 本次实验主要研究 乳酸菌黏附内化于派伊尔结性能从而发挥免疫作 用的机制。 结果发现派伊尔结是通过细菌的内化吸 附能力从而被诱导产生免疫因子发挥免疫作用的。 具体内容如下。 1 材料和方法 1.1 材料 FITC(异硫氰酸荧光素)于 Amresco 采购；OVA （ 卵 清 蛋 白 ） 于 Hyclone 采 购 ；RPMI1640 是 由 GIBCO 公 司生产的培 养基。 用于 TNF-A，IL-10， IL-12 检测的试剂为中国医药上海化学试剂公司产 品。 实验采用的所有菌株均为本实验室培养。 1.2 方法 （1）培养乳酸菌 将保存在含 甘油 15%的细菌 培养基中的 乳酸 菌菌株进行活化（使用-70e 的琼脂培养基），之后将 其进行单株 菌落分离 培 养 在 37e 的 液 体 培 养 基 内 17h，进 行连续 2 次的 转接，使用 4800r/min 的离心 速度离心 10min，进行菌株的收集。 （2）荧光标记乳酸菌
当代 畜禽养殖业 Modern Animal Husbandry
科学探索
组稿 \Email: nmgxmy2008@
派伊尔结在肠道黏膜免疫中的作用
齐旺梅 海日汗 内蒙古农业大学兽医学院 010018
摘要:采用荧光标记法对乳酸菌内化于派伊尔 结的能力进行定量分析，培养派伊尔结与乳酸菌内 化的组织块并测定派伊尔结在肠道黏膜免疫中所 起的作用。 派伊尔结是通过细菌菌株的内化黏附， 被诱导产生免疫细胞因子，从而发挥其在肠道黏膜 免疫中的作用，并且免疫因子分泌的多少与细菌菌 株的内化黏附能力成正比。
⑥致敏 caseiFn012 洗胃组
26.34±0.30
标 注 ：a 表 示 与 空 白 组 差 异 显 著 （p＜0.05），b 表 示 与 致
敏 组 差 异 显 著 （p＜0.05）
3 结论
笔者通过此次研究得出， 派伊尔结是通过细菌
菌株的内化黏附，被诱导产生免疫细胞因子从而发
挥其在肠道黏膜免疫中的作用，并且免疫因子分泌
hydrophobicity, mucosal immuno -modulating
capacities and cell wall protein profiles in indige-
nous and exogenous bacteria [J].J Appl Microbiol,
2004,96(2): 230-243.
组别
sIgA（pg/ml）
①空白组
26.13±0.14
②致敏空白组
26.13±0.15
③致敏 L. rhamnosusGG 洗胃组
29.15±0.17ab
④致敏 L. acidophilusFn037 L 洗胃组
27.94±0.41ab
⑤致敏 plantarumFn008 L 洗胃组
26.67±0.21ab
下，检测荧光值。
（8）测定小鼠粪便中 sIgA
实验 3 周后，对每只小鼠进行粪便的新鲜收集
并给予称重， 使用 PBS 稀释后于温室培养半个小
时，混合离心，按照测定试剂说明书测定小鼠粪便
中的 sIgA。
（9） 统计学方法
所有实验数据均采用统计学软件 SPSS19.0 进
行计算处理，并使用方差检验。
2 结果
for vaccine delivery [J]. AdvDrug Deliv Rev,
2004, 56 (6): 721-726.
[2] Vinderola CG, Medici M, Perdigon G.
Relationship betweeninteraction sites in the gut,
响因素[J].科技导报，2008，26（23）：65-69.
4 2013.12
的多少与细菌菌株的内化黏附能力成正比。 这可为
以后工作中对免疫调节性乳酸杆菌以及活菌疫苗
载体的筛选提供科学依据。
参考文献：
[1] Brayden DJ, Baird AW. Apical membrane
receptors on intes -tinal M cells: potential targets
把 活 细 菌 或 处 理 过 的 细 菌 悬 浮 于 100 mg PmLFITC 中 (溶解于 PBS,pH7.3),37e 暗处作用 1 h, PBS 洗四次,然后把细菌悬浮于 PBS(109CFUPmL)[2]。
（3）制备体外派伊尔结 参 照 原 雪 琦 、 常 桂 芳 等 [3,4]的 制 备 进 行 方 法 总 结：把 6 周 龄 健 康 KM 种 小 鼠 用 乙 醚 麻 醉,脱 颈 处 死,取出小肠,用预冷的 PBS（磷酸缓冲液）清洗内容 物,剪下派伊尔结段组织块。 （4）测定乳酸菌内化黏附于派伊尔结 将被荧光素标记的乳酸菌按照菌株的不同放 入 96 孔板的微孔， 每个微孔内放入 4 个派伊尔结 组织块（内壁朝上）。 于暗处 37e 的培养基进行 1 小 时的摇床培养。 然后使用 PBS 进行清洗，加入消化 液， 于 70e 培养基 内 17 小 时 ， 待 组 织 块 耗 尽 ，以 PBS 为空白对照， 使用化学发光或荧光分析仪，分 别在 530nm 发射光以及 485nm 激光波长的光下对 荧光值进行检测。 内化黏附性为每克派伊尔结相对 的荧光数值。 （5）测定细胞因子 按照 TNF-A，IL-10，IL-12 检测试剂的说明书 进行检测。 每个样品要重复检测。 （6）小鼠分组处理 实验采用的是 6 周龄的小鼠（KM 种），随机分 成 6 个小组，每组 10 只。 ①为空白组：不进行 OVA 致敏处理， 全程使用 PBS 洗胃。 ②为致敏空白组： 进行 OVA 致敏处理，全程使用 PBS 洗胃。 ③致敏 L. rhamnosusGG 洗胃组：进行 OVA 致敏处理，全程 使用菌悬溶液洗胃。第④，⑤，⑥三组分别为致敏 L. acidophilusFn037 L 洗胃组，致敏 plantarumFn008 L 洗胃组，致敏 caseiFn012 洗胃组，其操作方法均与第 ③组相同。 在实验 3 周后，脱臼处死小鼠，看小鼠粪 便形状，水样球状粪便就成功。
2.1 乳酸菌对派伊尔结的黏附性以及诱导细胞因
子的数量比较L . ca源自eiFn012 ， L . plantarumFn008 ， L.philu-
sFn037，L. rhamnosusGG 对 派 伊 尔 结 的 内 化 能
力 依 次 增 强 ， 但 对 派 伊 尔 结 诱 导 产 生 IL -12 ，
明显差异（p＞0.05）。 具体见表 1。
表 1 各组对腹腔巨噬 cell 吞噬活性的影响比较
组别
腹腔巨噬 cell 吞噬活性荧光值
①空白组
8.06±0.36
②致敏空白组 ③致敏 L. rhamnosusGG 洗胃组 ④致敏 L. acidophilusFn037 L 洗胃组 ⑤致敏 plantarumFn008 L 洗胃组
[3] 原雪琦,孙进,常桂芳,乐国伟,施用晖. 10 株乳酸
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