抗体的选择和保存
免疫荧光染色质量影响因素分析

免疫荧光染色质量影响因素分析免疫荧光染色是一种常用的细胞或组织分析方法,它能够通过特异性的抗体与目标蛋白结合,然后再使用荧光标记的二抗来检测目标蛋白的分布及表达水平。
免疫荧光染色技术具有灵敏度高、特异性好等优点,因此被广泛应用于生物医学研究领域。
免疫荧光染色的质量受多方面因素的影响,本文将对这些影响因素进行分析。
一、抗体的选择抗体的选择对于免疫荧光染色的结果至关重要。
需要选择具有高亲和力和特异性的抗体来保证染色的准确性和可靠性。
抗体的工艺制备和保存也会影响染色的质量,因此需要选择合适的抗体生产商或来源,并严格按照抗体的使用说明进行保存和使用。
二、样品的固定和预处理样品的固定和预处理对于免疫荧光染色的结果影响也较大。
不同类型的样品需要采用不同的固定和预处理方法,以确保目标抗原的完整性和可溶性。
在固定和预处理过程中,需要注意避免抗原损失或降解,同时保证样品的完整性和稳定性。
三、荧光标记的二抗选择荧光标记的二抗用于检测抗体与目标蛋白的结合情况,因此对于染色结果具有重要影响。
在选择荧光标记的二抗时,需要考虑其荧光标记物的稳定性和亮度,以及与抗体结合的效率和特异性。
四、染色试剂的质量免疫荧光染色过程中所使用的染色试剂的质量也会对染色结果产生影响。
染色缓冲液的pH值和离子强度、染色溶液的稀释比例等都会对染色的结果产生影响,因此需要选择高质量的染色试剂,并严格按照使用说明进行操作。
五、免疫荧光染色条件的控制免疫荧光染色过程中,温度、时间、光照等条件的控制也会对染色结果产生影响。
需要根据样品类型和抗体特性等因素,选择适当的染色条件,并严格控制每一步操作的执行。
六、荧光显微镜的性能和参数对于免疫荧光染色结果的观察和分析,荧光显微镜的性能和参数也会产生影响。
荧光显微镜的分辨率、亮度、对比度等参数会影响染色结果的清晰度和准确性,因此需要保证荧光显微镜的性能和参数处于最佳状态。
免疫荧光染色的质量受多方面因素的影响,包括抗体的选择、样品的处理、染色试剂的质量、染色条件的控制以及荧光显微镜的性能和参数等。
关于博士德抗体和试剂的保存方法

试剂保存指南一、抗体的保存:抗体保存得当与否直接决定了抗体的活性和使用效果。
如果抗体保存得当,大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。
请按照说明书或者抗体标签上推荐的保存条件正确保存抗体!无论是保存还是运输,绝对避免反复冻融抗体!1、收到抗体后请务必在1000-3000转离心1-2分钟后再打开管盖进行分装和保存!(由于运输过程中反复颠簸,管内微量抗体容易聚集在管盖处,一旦直接打开容易流失抗体。
(请放心博士德抗体出厂时保证已装入足量)2、对于Boster大部分抗体(纯化一抗),比较合适的保存方式是分装后保存在-20℃冰箱。
◇因为博士德的抗体(纯化一抗)出厂时抗体内已经加过防冻剂或抗体保护剂,即使在-20℃环境下也不会冻结成冰,反之,如果冻存过程中发现抗体能冻结成冰时请停止继续使用并及时与我们联系。
◇分装可以最大程度降低反复冻融对抗体活性的损害,同时也降低了多次从同一管中吸取抗体造成污染的可能性。
◇分装的量以一次实验用完为好,但建议最少不要少于10μL每份。
分装体积越小,抗体浓度可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响,同时分装次数越多移液吸头吸附的抗体也越多,可能会误认为抗体没有足量装入。
(最好用无菌的进口0.2ML离心管来分装抗体,国产的小管一般没有经过很好的硅化处理,容易吸附抗体蛋白,影响抗体活性。
)◇分装时请将无菌的微量移液器吸头先插入管底部反复吹打几次后再吸出抗体,以便抗体有效成分与抗体保护剂充分混匀。
◇复融后的分装抗体如果一次用不完,请将剩余母液保存在4℃冰箱,避免再冻起来!◇绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱的冷藏室中。
尽量将抗体保存在手动除霜冰箱里面,而不是在冰箱门上。
3、大部分抗体收到后4℃短暂保存1-2周对抗体活性是基本没有影响的。
如果抗体很快(1-2周内)就能使用完,推荐在4℃保存,避免反复冻融对抗体活性的损害。
如果要长期保存则分装后-20℃保存。
4、即用型抗体请务必保存在4℃冰箱,一定不能冷冻保存。
简述抗体的保存方法

简述抗体的保存方法一、简介抗体是免疫系统产生的一种特殊蛋白质,具有识别和结合特定抗原的能力。
在医学研究和临床诊断中,抗体被广泛应用于免疫组化、免疫印记、免疫沉淀等实验中。
为了确保抗体的稳定性和长期保存,合理的保存方法至关重要。
二、抗体的保存条件1. 温度抗体的保存温度是决定其稳定性的重要因素。
一般而言,抗体应保存在-20℃或更低的温度下,可以有效地减缓抗体的降解速度。
对于一些特殊的抗体,如酶标抗体、荧光抗体等,应根据其特性选择适当的保存温度。
2. 冷冻液在保存抗体时,应使用含有保护剂的冷冻液,如甘油、明胶、牛血清白蛋白等。
这些保护剂可以有效地减少抗体的降解和损伤,保持其活性和稳定性。
3. 分装为了避免多次冻融对抗体的影响,应将抗体分装成小份,每份只使用一次。
分装时应注意避免空气接触,以防止氧化和污染。
4. 储存容器抗体的储存容器应选择无毒、无味、耐低温和耐腐蚀的材质,如聚丙烯、聚乙烯等。
此外,储存容器应密封良好,以防止空气和水分进入,影响抗体的稳定性。
5. 防光抗体对光敏感,容易受到光的照射而降解和失活。
因此,在保存抗体时,应将其存放在避光的环境中,如黑暗的冷冻箱或冷藏室。
三、抗体的保存期限抗体的保存期限取决于其质量和保存条件。
一般而言,抗体在-20℃下可以保存6个月至1年,而在更低的温度下,如-80℃,可以保存数年甚至更长时间。
然而,值得注意的是,抗体的保存期限并非一成不变,受到多种因素的影响,如制备工艺、纯度、稀释液、保存温度等。
四、抗体的解冻和使用1. 解冻在使用冷冻保存的抗体之前,应先将其缓慢解冻至室温。
为了避免抗体的损伤,解冻过程中应尽量避免温度的突变和震动。
2. 稀释抗体在使用前需要进行适当的稀释。
稀释液的选择应根据实验需求和抗体的特性进行,一般常用的稀释液有PBS、BSA、TBST等。
3. 使用在实验中使用抗体时,应严格按照实验方案和操作规程进行。
避免抗体与其他试剂或物质的接触,以免干扰实验结果。
多克隆抗体纯化与保存

多克隆抗体纯化与保存
多克隆抗体的纯化和保存是制备高质量抗体的重要步骤。
以下是一些关于多克隆抗体纯化和保存的常见信息:
1. 纯化方法:多克隆抗体通常通过Protein A 或Protein G 的方法从动物血清中纯化抗体。
但是,对于某些使用场景,需要利用抗原亲和层析从总IgG 抗体中进一步纯化和分离抗原特异性抗体,从而获得纯度高、非特异性背景低的多克隆抗体。
2. 保存条件:多克隆抗体可以保存在50% 的丙三醇中,或保存在饱和硫酸铵中,或保存在-20℃。
对于某些特殊抗体,如酶偶联抗体、荧光抗体等,需要保存在4℃或避光保存。
3. 保存时间:多克隆抗体的保存时间取决于其类型和纯度。
一般来说,保存在50% 的丙三醇中的抗体可以保存数年,而保存在-20℃的抗体可以保存更长时间。
4. 保存前的处理:在保存前,需要对多克隆抗体进行适当的处理,例如去除任何可能的蛋白质杂质,并进行适当的稀释,以确保保存的抗体的稳定性和有效性。
总之,多克隆抗体的纯化和保存是制备高质量抗体的重要步骤。
在进行多克隆抗体制备时,应该根据具体情况选择适当的纯化和保存方法,并严格遵守保存条件,以确保抗体的稳定性和有效性。
抗体选择指南,抗体保存指南,抗体使用说明书样本

抗体选择指南抗体保存指南抗体说明书样本一抗体选择指南:检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体,需要考虑如下几种因素:1. 分析或应用的类型2. 样本蛋白的结构性质3. 样本的种属4. 抗体宿主的种类5. 抗体的标记和检测1分析试验的应用类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等,如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种分析试验验证,如果抗体不适用某些分析试验,则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。
2 样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体,至少两方面因素需要考虑(1)..待测样本蛋白的结构域:抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中的免疫原包括:全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体(如:细菌)或细胞,抗体说明书一般都有免疫原的描述,如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域,则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。
如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白,则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。
(2)样本的提取或处理过程:某些抗体要求样本经过某些特殊处理,例如:许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本,另一方面,某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。
当选择免疫组化的抗体时,应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织,而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织,这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来3 样本的物种应选择物种相同或有交叉反应的抗体,抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应,因其氨基酸序列同源性较高,如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中,并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白,而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过,应通过序列比对的方法来预测交叉反应,可应用Expasy 和 NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。
抗体试剂技术要求

抗体试剂技术要求随着生物医学领域的不断发展,抗体试剂作为一种重要的实验工具,被广泛应用于生物学研究、临床诊断以及药物开发等领域。
抗体试剂技术的要求包括多个方面,下面将从抗体选择、制备与储存、检测与验证等方面进行详细介绍。
抗体的选择是抗体试剂技术的关键步骤之一。
在选择抗体时,需要考虑抗体的特异性、亲和力、稳定性等因素。
特异性是指抗体只能与目标抗原特异性结合,而不与其他非特异性物质结合。
亲和力则是指抗体与抗原结合的强度,亲和力越高,抗体与抗原的结合越紧密。
稳定性是指抗体在不同条件下的保存稳定性,如耐高温、耐酸碱等。
因此,在选择抗体时,需要根据实验需求仔细评估这些因素。
抗体的制备与储存也是抗体试剂技术中不可忽视的环节。
一般来说,抗体的制备包括抗原的制备和免疫动物的免疫过程。
抗原的制备需要注意保持其天然结构和活性,以确保抗体的特异性。
免疫动物的选择则需要考虑其免疫应答能力、抗原的相似性等因素。
制备好的抗体需要正确储存,一般建议在-20℃或更低温度下保存,避免重复冻融。
此外,抗体的储存液应该选择适当的缓冲液,并添加一些保护剂,如蛋白质稳定剂,以增加抗体的稳定性。
抗体试剂技术中的检测与验证也是至关重要的一步。
在使用抗体试剂进行实验前,需要对抗体进行验证,以确保其特异性和敏感性。
常用的验证方法包括免疫印迹、免疫组化、流式细胞术等。
验证抗体时,应使用已知表达目标抗原的样本进行实验,并与负对照样本进行比较。
如果抗体的特异性和敏感性达到实验要求,则可以进行下一步实验。
除了上述内容,还有一些其他方面的要求需要注意。
例如,在实验中使用抗体试剂时,需要注意正确的稀释倍数和操作条件,避免出现误差。
此外,抗体试剂的交叉反应性也需要进行评估,以避免与其他相关物质发生非特异性结合。
最后,抗体试剂的批次一致性也是重要的要求之一,为了保证实验结果的准确性和可重复性,建议在同一批次中使用同一供应商提供的抗体试剂。
抗体试剂技术的要求包括抗体选择、制备与储存、检测与验证等多个方面。
抗体制备与使用实验指南_概述及解释说明

抗体制备与使用实验指南概述及解释说明1. 引言1.1 概述在生物科学研究中,抗体制备与使用是一项关键的实验工作。
抗体具有高度的特异性和亲和力,可以用于检测、定位和纯化特定分子或细胞结构。
因此,准确、可靠地制备和使用抗体对于科学研究的进展至关重要。
1.2 文章结构本文将以详细而全面的方式介绍抗体制备与使用的实验指南。
首先,我们会概述整篇文章的结构,并简要说明各个部分的内容。
接下来,我们将讨论抗体制备与使用的概念及其在科学研究中的应用。
然后,详细解释抗体制备实验流程中的各个步骤,并介绍相关方法和技术。
最后,我们会探讨抗体使用实验流程中需要注意的事项,并提供标定、优化以及特异性验证等方面的方法。
1.3 目的本文旨在为研究人员提供一份全面且易于理解的实验指南,帮助他们更好地理解和掌握抗体制备与使用技术。
通过本文所提供的内容,读者将能够了解不同类型的抗体制备方法、抗体选择与设计原则、抗体应用范围与限制等知识。
同时,我们也将详细讲解实验流程中的关键步骤,并提供一些常用的技术和方法。
通过学习本文,读者将能够正确地使用抗体进行科学研究,并在实验设计和结果解读方面取得更好的成果。
以上是“1. 引言”部分的内容,希望对你的长文撰写有所帮助。
如需继续撰写其他部分,请再告诉我需要撰写哪个部分的内容。
2. 抗体制备与使用实验指南概述:2.1 抗体制备方法介绍:抗体制备是指通过免疫动物或体外细胞培养等手段,获得能够特异性识别和结合特定抗原的抗体。
常用的抗体制备方法包括小鼠单克隆和多克隆抗体制备、大规模生产抗体以及重组技术获得单克隆抗体等。
每种方法有其优缺点,在选择时需根据实验需要和研究对象的特性进行权衡。
2.2 抗体选择与设计原则:在抗体选择时,要考虑目标分子的免疫原性、表达情况和应用需求等因素。
同时,还需要关注抗体的特异性、亲和力以及交叉反应性等指标,确保选用的抗体能够准确且可靠地检测目标分子。
此外,还需要考虑实验条件、成本和供应商信誉等方面的因素。
抗体的保存

抗体的保存来源:Frdbio丨发布时间: 2019-07-18 17:26:24抗体纯化后,一般将其缓冲液置换成PBS,便于后期标记或其他用途使用,如果浓度太低,需要浓缩,抗体浓缩后浓度最好不要太高,太高容易引起沉淀。
1. 抗体的浓缩1.1 透析袋浓缩将纯化的抗体装入透析袋中,透析袋表面覆满PEG20,000进行浓缩(不要用蔗糖浓缩)。
1.1.2 超滤管浓缩将纯化的抗体转入15 ml的超滤管,3,500rpm离心12min左右(根据要浓缩的体积摸索离心时间)。
2. 抗体浓度测定取适量抗体检测OD280nm的吸光度,读数不要超过2。
如果读数超过2,再稀释,用吸光度读数除以1.35,再乘以稀释倍数即为抗体的大致浓度(mg/ml)。
抗体的浓度(mg/ml)也可以用(OD280nm-0.35×OD495nm)/1.4这个公式计算。
3. 抗体的保存3.1 纯化完的抗体推荐于PBS或者TBS溶液保存,可添加0.1%叠氮化钠防腐剂,但是叠氮化钠可能对下游实验中的辣根过氧化物酶产生抑制作用,作为免疫检测试剂开发的抗体一般使用有机化合物高分子防腐剂,避免对下游酶或者荧光染料的影响,如有需要可联系福因德生物。
3.2 分装成小管,避免污染或者反复冻融,溶解时需要缓慢解冻,不可直接放热水急速解冻。
3.3 存放抗体容器不要选择聚苯乙烯材料,可以选择玻璃或者对蛋白低吸附材料的管子。
3.4 如果抗体要进行后期标记,最好在PBS中保存,不加防腐剂,短期内使用可放4℃,长期存放-20℃保存。
3.5 如果抗体只做免疫学实验,不进行标记可以添加保护剂(1% BSA或海藻糖),还可以加30%~50%甘油,-20℃保存,此保存方法只适合下游直接使用(ELISA,IHC,WB),不适合对其进行标记开发,但其在-20℃不结冰,对抗体效价保存较好,并且使用时也不用反复冻融。
3.6 冻干可以保存更长时间,但是同样要加入很多辅料保护剂,如:海藻糖、BSA,加了保护剂后期开发较难;也可以直接不加辅料保护,直接冻干,但效价损失大。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
抗体的选择和保存
当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候,如何选择适合我们实验需要的抗体,并恰当保存使用,是每个科研人员需要细心考虑的。
抗体种类繁多,品牌众多,技术参数不一,价格和质量更是相差甚大,如何购买到高质量价格合适的抗体,并准确地做出我们想要的结果,其中有很多细节需要注意。
一、怎样选择适合你实验需要的抗体
1. 一抗选择要点
(1)确定抗体的名字,注意中英文名字、它名、亚型等信息。
(2)确定你的实验类型,ELISA,WB,IHC,ICC,还是FACS。
一般抗体的说明书都会列出该抗体经验证过适用于何种实验的类型,如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种实验验证,请根据说明书列出的已验证的类型来选择适合你实验的抗体。
(3)确定实验样本的种属,Human,Mouse,还是Rat。
一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种物种实验,请根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验的抗体。
对于免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种的一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应,例如:检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源的一抗,最好选兔源的一抗,则二抗则可选择偶联了检测分子(酶、荧光素、生物素等)的抗兔IgG。
(4)样本蛋白的结构性质。
了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体,待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性,蛋白空间构象的改变,会影响抗体的免疫亲和反应。
抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中的免疫原包括:全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体(如:细菌)或细胞,抗体说明书一般都有免疫原的描述,如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域,则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。
如果打算用FACS 流式检测活细胞的表面蛋白,则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。
(5)单多克隆抗体的选择。
市面上的抗体还是以多克隆抗体为主,一般单克隆抗体特异性强,但亲和力相对小,检测抗原灵敏度相对就低;而多克隆抗体特异
性稍弱,但抗体的亲和力强,灵敏度高,但易出现非特异性染色(可以通过封闭等避免)。
(6)单克隆与多克隆抗体的区别
单克隆与多克隆抗体的区别这首先要从抗体的产生来探讨。
把某一抗原免疫某种动物而得到单抗或多抗。
如果用经免疫过的动物的脾细胞获得杂交瘤细胞,则得到单克隆抗体,如果用动物的血清,则得到多克隆抗体。
但从理论上说,这些抗体都应针对抗原来自的动物,例如如果用人蛋白抗原免疫小鼠,则这些抗体为鼠抗人。
由于一个大蛋白分子表面具有多种抗原决定簇,因此,免疫动物后,这些不同的决定簇分别诱导动物产生不同的抗体,每种抗体的特异性不同。
单抗是有单个细胞起源的细胞克隆分泌的,所以只针对蛋白抗原的单一抗原决定簇,而多抗是有多个不同克隆的B细胞产生的,是多种细胞的混合物,但其中的每一种抗体也只是针对一种决定簇。
多抗混合物中的每一抗体与蛋白抗原结合的能力是不同的,因此用多抗做实验与用单抗可有其优势,那就是能确保抗体与抗原结合从而显示抗原信息。
但也有其缺点,那就是交叉反应,往往造成假阳性。
2. 二抗选择要点
(1)种属来源。
主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源,如一抗是小鼠来源,那二抗就买抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
(2)标记物的选择。
有HRP、Biotin、荧光素等标记物。
一般SP三步法二抗选择Biotin标记的二抗,以与后面的SP结合反应,而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗,如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。
二、抗体的稳定性
1. 抗体的稳定性是自然界长期进化的结果。
抗体是免疫系统中最重要的分子之一,其稳定性是自然进化筛选的结果。
在众多物种中,抗体分子形成了保守而稳定的结构。
2. 抗体分子的高Tm值。
在室温下,甚至短时间温度达到50-60℃,抗体分子都能维持正确折叠,保持应有的活性。
3. 抗体的纯度。
采用先进的抗体纯化技术,确保抗体产品的高纯度,保障其抗体产品的稳定性。
4. 抗体的浓度。
高浓度的抗体产品可减少容器表面吸附造成的物质损失,高浓度的抗体稳定性更好,抗体产品中93%的浓度大于0.5mg/ml。
三、怎样确定抗体购买渠道和品牌
国外著名抗体品牌的质量一般没问题,但价格较贵,而且很多抗体品牌本身不生产抗体,所以能找到OEM抗体生产商生产的原装进口抗体,如美国的ProSci 公司,大部分常用抗体都可以在ProSci网站上查找到,同样一支抗体能少花费1000元,对于一个普通实验室来说,那将节约非常多的科研经费,而且ProSci 会提供信号通路的小包装抗体作为一个试剂盒,这样极大方便了用户,特别是经费不是很充足的用户。
随着网络技术的越来越普及,我们自己就可以通过国内外的相关网站来检索,国外最大的生物试剂查询网站:biocompare,国内最大的生物试剂查询网站:丁香通,来查找我们所需要的产品资料。
四、怎样保存已获得的抗体
抗体无论是保存还是运输都应尽可能地避免反复冻融,收到抗体后请根据实验的需要,对抗体进行分装,避免同一管抗体反复冻融(反复冻融会导致抗体空间结构变性,导致多聚体形成,从而降低抗体的结合能力)。
抗体保存得当与否,直接决定了抗体的活性和使用效果,如果抗体保存得当,抗体活性大部分都可以维持数年。
请谨记,无论何时请按照说明书推荐的保存条件正确处理和保存抗体。
1. 收到抗体后,请务必在4℃,12000rpm,离心3分钟,(无论是液体还是冻干粉状态),再打开管盖进行分装和保存(如果抗体体积小于50ul,请延长离心时间至5分钟,以保证全部抗体均离心下来)。
抗体一般使用特制的储存管,只有在12000rpm离心3分钟,才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来(即使是在10000rpm离心也会离心不完全,导致出现抗体的量不足的现象)。
2. 对于ProSci大部分抗体,比较合适的保存方式是,分装后保存在-20℃或者-80℃。
(1)对绝大多数抗体来说,保存在-20℃就完全足够了,没有任何证据显示保存在-80℃会更好。
(2)分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害,同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。
(3)分装的量以一次实验用完为好,最少不能少于10ul每份。
因为分装体积越小,抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。
(4)复融后的分装抗体如果一次用不完,将剩余母液保存在4℃,避免再冻起来。
(5)抗体工作液应该当天配制当天用完,4℃保存尽量不要超过1天。
(6)绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中,将抗体保存在冰箱里层,避免温度变化造成反复冻融。
3. 大部分抗体收到后4℃短暂保存1~2周对抗体活性没有影响。
4. 大部分抗体的运输条件:一般的运输过程需要1~2周的时间,所以是在低温4℃的条件下来完成的。
4℃运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害(如果使用干冰运输,那么收到时抗体是冻起来的,为了分装就需要解冻,这就多了一次冻融的过程),所以运输过程中绝对避免干冰运输。
五、关于叠氮化钠(sodium azide)的使用:
为了防止微生物污染,叠氮化钠经常被加入到抗体中(终浓度0.02% (w/v))。
ProSci的绝大部分抗体已经含有了0.02%-0.05%的叠氮化钠,在说明书的储存缓冲液中有标明。
注:叠氮化钠的去除方式
可以通过凝胶电泳或过滤的方式去除,IgG的分子量是150kDa(IgM约600kDa);叠氮化钠的分子量只有65Da,使用截留分子量为14kDa的滤膜即可将叠氮化钠从抗体中去除。