抗体保存知多少
抗体基础知识
School of Medicine
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第 次课
授课时间 年 月 日
课程名称 免疫学检验 年 级
教师
张荣波
专业技术 职务
教案完成时间： 年 月 日
专业、层次
医学检验（本科）
授课方式 （大、小）
大 学时 4
授课题目（章、节）
第四章 单克隆抗体与基因工程抗体节 杂交瘤技术的基本原理
杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞后同时保持两者的主要特 征。当两个细胞紧密接触时候，其细胞膜可能融合在一起。融合细胞含有 两个不同的细胞核，称为异核体(heterokaryon)，产生具有原来两个细胞
基因信息的单个核细胞，称为杂交细胞(hybid cell)，包括 B 淋巴细胞杂 交细胞和 T 淋巴细胞杂交细胞。
3
辅助手段和时间 分配备注
基本内容
第三节 基因工程抗体技术 随着基因工程技术的崛起以及抗体分子遗传学的深入研究，应用基因 工程抗体改造现有优良的鼠单克隆抗体的基因，尽量减少抗体中的鼠源成 分，保留原有的抗体特异性，从而创造出新型抗体．基因工程抗体。 一、人源化抗体 人源化抗体以基因克隆及 DNA 重组技术改造将鼠源性单克隆抗体使其 大部分氨基酸序列为人源序列所取代，既保留了亲本鼠克隆抗体的亲合力 和特异性，又降低了鼠单克隆抗体的异源性。 (一)人一鼠嵌合抗体 人一鼠嵌合抗体是通过基因工程技术将人 IgC 区与鼠 IgV 区连接，导 入细胞内表达制备的抗体称为嵌合抗体。人一鼠嵌合抗体的特异性及亲合 力与亲本鼠单克隆抗体等同，但在人体内的半衰期可明显延长。 (二)抗体的表面修饰 通过改变 Ig 可变区表面残基使其人源化，降低鼠可变区的异源性。将 亲本鼠单克隆抗体 Fv 段表面暴露的骨架区中与人不同者改为人源性，使 Fv 的表面人源化，消除其免疫原而不影响 Fv 的整体空间构象。 二、小分子抗体 将抗体分子的抗原结合部位组建成分子量较小，但具有抗原结合功能 的分子片段，称为小分子抗蠢小分子抗体具有以下特点：可在大肠杆菌等 原核细胞表达生产成本降低；易于穿透血管或组织到脚胞部位，有利于疾 病的治疗；不含 Fc 段，副作用小；半衰期短，有利于毒素中和及清除。其 包括： （一）Fab 由一条完整的 L 链和一条约 1/2 的 H 链组成，只有一个抗原结合位点。 （二）Fv 和单链抗体（ScFv） Fv 由 VH 和 VL 构成，是抗体分子中保留抗原结合部位的最小功能片段。 把 VH 和 VL 用一段适当的寡核苷酸分子连接起来，使之表达为单一的肽链， 称为 ScFv。 （三）单区抗体及最小识别单位 单独重链可变区（VH）仍可保留相当程度抗原结合能力，其作用比 VL 大，称为单区抗体。
抗体制备理论知识
一、抗体制备相关概念概述（一）多克隆抗体的概念抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组球蛋白，这就是免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。
抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激机体，由一个B 淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体（Monclone antibody）。
由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体；除了抗原决定簇的多样性以外，同样一类抗原决定簇，也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE 和IgD 等五类抗体。
（二）免疫动物供免疫用的动物主要是哺乳动物和禽类，常选择家兔、绵羊、山羊、马、骡和豚鼠及小鼠等。
动物的选择常根据抗体的用途和量来决定，也与抗原的性质有关。
如要获得大量的抗体，多采用大动物；如要是获得直接标记诊断的抗体，则直接采用本动物；如要获得间接的标记诊断用抗体，则必须用异源动物制备抗体；如果难以获得的抗原，且抗体的需要量少，则可以采用纯系小鼠制备；一般实验室采用的抗体，多用兔和羊制备。
免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物，雌性动物特别是妊娠动物用于制备免疫抗体则非常不合适，有时甚至不产生抗体。
由于对免疫应答的个别差异，免疫时应同时选用数只动物进行免疫。
抗原是多种多样的，而且千差万别。
就其化学成分而言，有蛋白质抗原、类脂抗原、多糖类抗原和核酸抗原等。
就抗原性而言，有完全抗原和不完全抗原。
为了获得较好的抗血清，最好是选用蛋白质抗原，如要制备用于筛选细菌表达的cDNA 文库或免疫印迹的抗血清，最好选用可降解的蛋白质抗原。
不同的抗原，其免疫原性的强弱均不相同，这种免疫原性的强弱取决于抗原的分子量、化学活性基团、立体结构、物理形状和弥散速度等。
抗原的免疫剂量是依照给予动物的种类、免疫周期以及所要求的抗体特性等不同而不同。
抗体的知识
抗体的知识嘿，咱今儿来聊聊抗体这玩意儿！你说抗体像不像咱身体里的小卫士呀？它们可厉害着呢！咱每天在这大千世界里，到处都是各种各样的细菌、病毒啥的，就跟那敌军似的，老想着来侵犯咱。
可咱身体也不傻呀，这时候抗体就闪亮登场啦！抗体就好比是经过专门训练的特种兵，它们对那些坏家伙的特征那是了如指掌。
一旦有外敌入侵，抗体能迅速识别出来，然后紧紧地抱住它们，让它们没法捣乱。
这就好像是小卫士们齐心协力抓住了坏人，让他们不能再为非作歹。
你想想看，要是没有抗体，那咱的身体还不得被这些病菌闹得乱七八糟呀！说不定一个小感冒就能把咱给撂倒咯。
但是有了抗体在，咱就多了一层坚实的保护盾呀。
有时候咱生病打针、吃药，这其实也是在帮助咱的身体产生更多的抗体呢。
就像是给小卫士们提供了更厉害的武器和训练，让他们能更好地对抗敌人。
而且呀，抗体还挺聪明的。
它们可不是那种死板的卫士，它们会根据不同的敌人来调整自己的战术。
比如说这次遇到了一种新的病菌，抗体们就会赶紧研究它的弱点，然后想办法去对付它。
这是不是很神奇呀？咱的身体里可是有着一个庞大的抗体军团呢！它们时刻都在为咱的健康奋战。
你说咱是不是得好好爱护自己的身体，让这些小卫士们能更有干劲呀？咱可别老是熬夜、乱吃东西啥的，那不是给抗体们添乱嘛！咱得让抗体们知道，咱也在和它们一起努力，保持健康的生活方式，这样它们才能更好地保护咱呀！你说是不是这个理儿？所以呀，咱都要对自己的身体好一点，让抗体们能安心地守护咱。
别小看了这些小小的抗体，它们可是咱健康的大功臣呢！它们在咱身体里默默地工作着，为咱抵御着各种疾病的侵袭。
咱可得好好珍惜它们，和它们一起让咱的身体棒棒哒！。
抗体生物知识点高中总结
抗体生物知识点高中总结抗体是一类具有抗原特异性的球蛋白分子，是免疫系统中的重要成分，通过与抗原结合来识别和清除外来病原体或异常细胞。
在高中生物课程中，抗体是一个重要的知识点，对于理解免疫系统和免疫反应具有重要意义。
本文将从抗体的结构、功能和应用等方面进行总结。
一、抗体的结构抗体的结构是由免疫球蛋白分子构成的。
免疫球蛋白分子是一种由重链和轻链组成的蛋白质，分为五个类型，分别是IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。
每个抗体分子由两个重链和两个轻链组成，形成Y字型的结构。
抗体的结构由可变区和恒定区组成，可变区决定了抗体对抗原的特异性，而恒定区则决定了抗体的功能。
二、抗体的功能1. 识别和结合抗原：抗体通过其可变区的抗原结合部位可以识别和结合不同的抗原分子，实现对外来病原体或异常细胞的识别。
2. 中和病原体：抗体与病原体结合后，可以中和其毒性，阻止其侵入宿主细胞，从而保护宿主免受感染。
3. 激活补体系统：抗体与抗原结合后，可以激活补体系统，从而引起细胞溶解、炎症反应等机体免疫反应。
4. 促进巨噬细胞的吞噬作用：抗体与病原体结合后，可以促进巨噬细胞的吞噬作用，加强清除病原体的效果。
5. 诱导细胞毒性：某些抗体还可以诱导细胞毒性，使免疫细胞对感染的细胞进行攻击。
三、抗体的应用1. 临床诊断：抗体可以作为检测手段，用于临床诊断。
例如，通过检测特定抗体的水平来判断是否感染某种病原体。
2. 免疫治疗：利用抗体对特定抗原的识别和结合能力，可以开发抗体药物，用于治疗某些疾病。
例如，单克隆抗体药物在癌症、炎症性疾病等领域具有重要应用。
3. 免疫预防：通过接种疫苗来诱导机体产生特定抗体，从而达到免疫预防的目的。
4. 免疫相关疾病治疗：某些免疫相关疾病可以通过调节抗体水平或中和特定抗体来进行治疗。
5. 生物学研究：抗体可以用作生物学研究的工具，例如，通过特定抗体的识别，可以对蛋白质、细胞等进行定位和检测。
四、抗体的产生与调节抗体的产生受到机体免疫系统的调节。
抗体相关基本知识
抗体相关基本知识抗体相关基本知识抗体(antibody)是⽣物体在抗原物质刺激下，由B细胞分化成的浆细胞所产⽣的、可与相应抗原发⽣特异性结合反应的免疫球蛋⽩(Ig)。
按抗体的来源，可将其分为天然抗体和⼈⼯制备的抗体，是通过对特定⽣物体免疫接种特定抗原物质后⽽获得。
⼈⼯免疫动物制备的抗体应⽤甚为⼴泛，既可以⽤于科学研究，也可以⽤于疾病的预防、诊断和治疗。
体⼀、抗体的基本结构的基本结构经x线晶体衍射结构分析发现，抗体Ig由四条多肽链组成，各肽链之间由数量不等的链间⼆硫键连接。
Ig可形成“Y”字型结构，称为I g 单体，是构成抗体的基本单位。
（⼀）重链和轻链天然Ig分⼦含有四条异源性多肽链，其中，分⼦量较⼤的两条链称为重链(heavy chain,H)，⽽分⼦量较⼩的两条链称为轻链(Light chain,L)。
同⼀Ig分⼦中的两条H链和两条L链的氨基酸组成完全相同。
1.重链分⼦量为50000～75000，由450～550个氨基酸残基组成。
重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同，其抗原性也不同。
据此，可将抗体Ig分为5类(class)，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE,其相应的重链分别为µ链、δ链、γ链、α链和ε链，商品化的抗体绝⼤部分都是IgG。
不同类的Ig具有不同的特征，如链内和链间⼆硫键的数量和位置、结构域的数量及铰链区的长度等均不完全相同。
即使是同⼀类的Ig，其铰链区氨基酸组成和重链⼆硫键的数量、位置也不同，据此⼜可将同类Ig分为不同的亚类(subclass)。
IgG的亚类利⽤不同种属动物制备的IgG存在不同的亚类，常见的不同种属IgG亚类如下：兔:IgG（⽆亚类）⼩⿏:IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG2c,IgG3⼤⿏:IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG2c,IgM⼭⽺:IgG1,IgG2在进⾏某些抗体相关实验(如IF和FCM)的时候，我们常常需要仔细看⼀下所订购商品化抗体的IgG亚类，以⽅便我们选择同型对照(isotype control)IgG(即与⽬的蛋⽩抗体相同来源种属的相同类型正常IgG)作为抗体的阴性对照进⾏平⾏实验，以排除可能的⾮特异性染⾊结果。
抗体的保存建议
抗体的保存建议：抗体保存得当与否直接决定了抗体的活性和使用效果。
如果抗体保存得当，大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。
请按照说明书或者抗体标签上推荐的保存条件正确保存抗体！无论是保存还是运输，绝对避免反复冻融抗体！1.拿到抗体后请务必在1000-3000转离心1-2分钟后再打开管盖进行分装和保存！（由于运输过程中反复颠簸，管内微量抗体容易聚集在管盖处，一旦直接打开容易流失抗体。
请放心博士德抗体出厂时保证已装入足量。
）2.对于博士德大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在-20℃冰箱。
◇分装可以最大程度降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了多次从同一管中吸取抗体造成污染的可能性。
◇分装的量以一次实验用完为好，但建议最少不要少于10μL每份。
分装体积越小，抗体浓度可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响，同时分装次数越多移液吸头吸附的抗体也越多，可能会误认为抗体没有足量装入。
（最好用无菌的进口0.2ML离心管来分装抗体，国产的小管一般没有经过很好的硅化处理，容易吸附抗体蛋白，影响抗体活性。
）◇分装时请将无菌的微量移液器吸头先插入管底部反复吹打几次后再吸出抗体，以便抗体有效成分与抗体保护剂充分混匀。
◇复融后的分装抗体如果一次用不完，请将剩余母液保存在4℃冰箱，避免再冻起来！◇绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱的冷藏室中。
尽量将抗体保存在手动除霜冰箱里面，而不是在冰箱门上。
3.大部分抗体收到后4℃短暂保存1-2周对抗体活性是基本没有影响的。
如果抗体很快（1-2周内）就能使用完，推荐在4℃保存，避免反复冻融对抗体活性的损害。
如果要长期保存则分装后-20℃保存。
4.即用型抗体请务必保存在4℃冰箱，一定不能冷冻保存。
5.特殊抗体的保存：◇酶联抗体：一般保存在4℃，尽量避免冷冻起来。
否则可能会导致酶活力的下降或者丧失。
◇偶联抗体：所有偶联抗体需要4℃避光保存。
尤其是荧光标记抗体，对光极为敏感，因此所有实验阶段也是要避光操作的。
ELISA知识简介
图3 甲型肝炎病人血清中IgG抗体和IgM 抗 体出现的时间和水平。
每一系B细胞只产生针对某一抗原决定簇的抗体。如将多 种抗原或含有多个抗原决定簇的抗原注入机体，将由多系 的B细胞产生相应的多种抗体，这些抗体均存在于免疫血 清中。
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免疫测定中所用的抗血清一般用抗原免疫兔、羊或马制 得。产生抗体的B细胞可在体外与繁殖力强的肿瘤细胞融 合成杂交瘤细胞。将单个杂交瘤细胞分离，在体内或体外 培养而分泌的抗体单克隆抗体monoclonal antibody， McAb或Mab）。单克隆抗体仅针对一种抗原决定簇，具 有很高的特异性。单克隆抗体通常用抗原免疫小鼠制备。 将免疫的脾细胞（含产生抗体的B细胞）与小鼠肿瘤细胞 融合，分离杂交瘤细胞，接种于小鼠腹腔，产生的腹水中 含有浓度很高的单克隆抗体。
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1.3.2 最适比例
在恒定量的抗体中加入递增量的抗原形成抗体复合物. 抗原抗体比例最合适的范围，称为等价带（zone of quivalence）。在等价带前后分别为抗体过剩带和抗原过剩带 。 如果抗原或抗体极度过剩，则无沉淀物形成，在免疫测定中 称为带现象（zone nomenon）。抗体过量称为前带（ prezone），抗原地过量称为后带（postzone）。在用免疫 学方法测定抗原时，应使反应系统中有足够的抗体量，否则 测得的量会小于实际含量，甚至出现假阴性。
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1.3 抗原抗体反应
1.3.1 可逆性
抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态 平衡，其反应式为：
Ag+Ab→Ag·Ab
抗体的亲和力（affinity）是抗原抗体间的固有结合力， 可以用平衡常数K表示：K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab]
简述抗体的保存方法
简述抗体的保存方法一、简介抗体是免疫系统产生的一种特殊蛋白质，具有识别和结合特定抗原的能力。
在医学研究和临床诊断中，抗体被广泛应用于免疫组化、免疫印记、免疫沉淀等实验中。
为了确保抗体的稳定性和长期保存，合理的保存方法至关重要。
二、抗体的保存条件1. 温度抗体的保存温度是决定其稳定性的重要因素。
一般而言，抗体应保存在-20℃或更低的温度下，可以有效地减缓抗体的降解速度。
对于一些特殊的抗体，如酶标抗体、荧光抗体等，应根据其特性选择适当的保存温度。
2. 冷冻液在保存抗体时，应使用含有保护剂的冷冻液，如甘油、明胶、牛血清白蛋白等。
这些保护剂可以有效地减少抗体的降解和损伤，保持其活性和稳定性。
3. 分装为了避免多次冻融对抗体的影响，应将抗体分装成小份，每份只使用一次。
分装时应注意避免空气接触，以防止氧化和污染。
4. 储存容器抗体的储存容器应选择无毒、无味、耐低温和耐腐蚀的材质，如聚丙烯、聚乙烯等。
此外，储存容器应密封良好，以防止空气和水分进入，影响抗体的稳定性。
5. 防光抗体对光敏感，容易受到光的照射而降解和失活。
因此，在保存抗体时，应将其存放在避光的环境中，如黑暗的冷冻箱或冷藏室。
三、抗体的保存期限抗体的保存期限取决于其质量和保存条件。
一般而言，抗体在-20℃下可以保存6个月至1年，而在更低的温度下，如-80℃，可以保存数年甚至更长时间。
然而，值得注意的是，抗体的保存期限并非一成不变，受到多种因素的影响，如制备工艺、纯度、稀释液、保存温度等。
四、抗体的解冻和使用1. 解冻在使用冷冻保存的抗体之前，应先将其缓慢解冻至室温。
为了避免抗体的损伤，解冻过程中应尽量避免温度的突变和震动。
2. 稀释抗体在使用前需要进行适当的稀释。
稀释液的选择应根据实验需求和抗体的特性进行，一般常用的稀释液有PBS、BSA、TBST等。
3. 使用在实验中使用抗体时，应严格按照实验方案和操作规程进行。
避免抗体与其他试剂或物质的接触，以免干扰实验结果。
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抗体保存知多少
通常情况下，抗体经恰当保存和处理，大多数应能保持活性数月乃至数年。
当然，不同类型抗体，其保存的方法也可能不一样，以下就抗体的保存，提供一些参考!
一、保存温度和条件
对于很多抗体而言，保存在-20℃是完全足够了，没有任何证据显示保存在-80℃会有更多的好处!分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤，以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。
小等份只需冻融一次，如有剩余，可将剩余物保存于4oC. 在收到抗体时，在10,000 ×g 下离心20 秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液，并以小等份转移至低蛋白结合微量离心管中。
小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。
小等份应不小于10 µl; 等份越小，储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。
在大多数情况下，收到抗体时在4oC 下保存一至两周，然后再冷冻进行长期保存是可接受的，但也许腹水液是例外，它可能包含蛋白酶，因而应该尽快冻存。
同样，遵照说明书上的建议是重要的。
大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要1-2周的时间，所以是在4℃的条件下来完成的。
对于特殊的抗体，如酶、荧光素等偶联抗体、IgG3同型抗体等抗体的保存有其注意事项：
1、偶联抗体酶偶联抗体不应冻存，而应保存于4oC. 冻融不仅影响抗体结合能力，还会降低酶活性。
无论偶联至荧光染料、酶还是生物素，偶联抗体都应保存于深色试剂瓶中或用金属箔包裹. 暴露于光线中将损害偶联物的活性。
特别是荧光偶联物易受到光漂白影响，在实验的所有阶段都应避光。
2、IgG3的同型对照保存在4℃，避免冻起来。
因为如果出现冻融过程，该抗体非常容易形成多聚体
二、用叠氮化钠防止污染
为了防止微生物污染，可将叠氮化钠加入抗体制备品中达到0.02% (w/v). 的终浓度。
但是有时不能使用叠氮化钠，有以下两中情形：
(1)、如果用抗体染色或处理活细胞，或如果用抗体进行体内研究，一定要使用不包含叠氮化钠的制备品。
该抗菌剂也对大多数其它生物具有毒性：它阻断细胞色素电子传递系统。
(2)、叠氮化钠会干扰氨基参与的任何偶联，应在偶联进行前除去。
偶联后，
抗体可保存于叠氮化钠中，除此以外，0.01% 硫汞撒(硫柳汞)不含伯胺，也是可接受的替代物。
叠氮化钠可通过透析或凝胶过滤从抗体溶液中除去。
IgG 的分子量为150,000 道尔顿(IgM 为约600,000);叠氮化钠的分子量为65 道尔顿。
截留分子量为14,000 道尔顿的微透析装置可保留抗体同时使叠氮化物向外扩散。
在保持于4oC 的磁性搅拌器上的烧杯中，每毫升抗体使用至少一升冷PBS 并搅拌透析装置6 小时。
更换PBS 两次，每次更换搅拌至少6 小时。
如有可能，所有材料都应灭菌并且所得的制备物应无菌操作。
三、冷冻/融化损伤
重复冷冻/融化循环可使抗体变性，导致其形成使抗体结合能力
降低的聚集物。
保存于-20oC 对于大多数抗体是适当的;保存于
-80oC 无明显优势。
冰箱不能为无霜型。
这些冷冻和融化之间的循环(以减少结霜)恰恰是应该避免的。
出于相同原因，抗体试剂瓶应置于具有最小温度波动的冰箱区域，例如朝冰箱后部放置而不是置于门架上。
有些研究人员加入冷冻保护剂甘油达到50% 的终浓度以防止
冷冻/融化损伤;甘油可将凝固点降低至低于-20oC。
虽然这对于很多抗体是可接受的，但还是不能确保在该保存条件下的稳定性，通常我们参考具体产品说明书提供的保存方法。
在这里，我们也一般不建议将包含甘油的溶液保存于-80oC，因为该温度低于甘油的凝固点。
还要注意甘油可被细菌污染。
如果加入甘油或任何冷冻保护剂，则应当小心操作，以得到无菌制备物。
应避免抗体在稀释至工作浓度后在4℃下保存超过一天。
蛋白质在高浓度下保存时一般不易降解，理想的浓度为1 mg/ml 或更高。
这是在抗体溶液中加入蛋白质例如BSA 作为稳定剂的理论基础。
加入的蛋白质也有助于减少抗体因结合于容器壁上而造成的损失。
对于打算进行偶联的抗体而言，由于稳定蛋白质会与抗体竞争，降低了偶联的效率，所以不应加入稳定蛋白质。
此文章由广州深华生物技术有限公司编辑修改。