免疫学实验设计
医学免疫学实验教学设计
医学免疫学实验教学设计免疫学是医学中非常重要的科目之一，它研究人体与生物体之间的相互作用和免疫机制。
为了更好地教授免疫学，实验教学也是必不可少的一部分。
本文将介绍医学免疫学实验教学的设计思路和具体实施方案。
实验教学的目的和意义1.帮助学生更好地理解课堂上学习的免疫学理论知识；2.培养学生的实验操作能力和科学研究精神；3.培养学生的团队合作意识和学术交流能力；4.提高学生的综合素质。
实验教学的设计和实施医学免疫学实验教学应该是以课程中学过的相关免疫学理论知识为基础，加以实际操作进行的。
实验教学的设计1.实验主题的确定。
根据免疫学课程的安排和教学目标，确定合理的实验主题；2.实验方案的制定。
在确定好实验主题后，需要考虑实验的各种操作流程、试剂和仪器的选择等方面的问题；3.实验材料和设备的准备。
根据实验方案需要准备好所需要的各类材料和设备；4.分组和分工。
对参加实验的学生进行分组和分工，分工明确，任务清晰；5.实验流程的讲解。
在实验开始前，对整个实验流程进行讲解，学生了解实验目的、流程和要求；6.操作的讲解。
对每个步骤进行具体的操作讲解，学生了解每个步骤的操作方法、注意事项和安全措施；7.实验数据的采集和分析。
在实验完成后，及时对实验数据进行收集和分析，对实验结果进行统计；8.报告书写和演讲。
学生完成实验后，需要按照规定撰写实验报告，并进行实验成果的汇报和演讲。
实验教学的实施1.分步骤一步一步进行。
实验教学的实施需要从简单易操作的步骤开始引导学生进行实验，逐步加大难度，以便让学生更好地理解和掌握每一个操作步骤；2.加强安全教育。
在实验教学的过程中要时刻注意学生的安全，加强安全教育，学生需要遵守实验室的规章制度，正确佩戴实验室个人防护用品和操作设备，保证实验的顺利进行；3.培养实验操作能力。
实验教学要注重学生实验操作的独立性和能力的培养，让学生在实践中更好地锻炼自己的操作技能，同时也加深对免疫学理论知识的印象和理解；4.督促学生完成实验报告。
免疫学实验方案设计——证明某产品具有免疫增强作用(从淋巴细胞数目及活性的角度考虑)
免疫细胞的计数
1. 直接计数 2. 检测细胞表面特征性标记分子 膜表面分子免疫荧光检测法 流式细胞分析法 免疫细胞化学法 抗体致敏细胞花环法 3. 检测细胞特定功能（微量细胞毒试验、细胞因子检测）
直接计数
细胞计数
数上不数下，数左不数右。
细胞计数板
细胞计数并检测活性
用Hank’s液重悬细胞 取10ul细胞悬液与90ul台盼蓝液混合
单次密度梯度分离法 单一密度 连续密度梯度
血浆
PBMC 分离液 多形核白细胞 红细胞
取PBMC
玻璃平皿
单核细胞吸附； 未吸附的为淋巴细胞
淋巴细胞及其亚群的分离
✓尼 龙 毛 分 离 法 ✓E 花 环 沉 降 法 （ 课 本 内 容 ） ✓免 疫 吸 附 分 离 法 ✓磁 珠 分 离 法 ( I M B ) ✓流 式 细 胞 术 ( F C M ) ✓抗 原 肽 - M H C 分 子 四 聚 体 技 术
• 免疫细胞的种类：
淋巴细胞：T细胞、B细胞、NK细胞 单核/巨噬细胞、树突状细胞、中心粒细胞
• 免疫细胞的分布：
• 外周血 • 免疫器官： • 组织
胸腺、骨髓 脾脏、淋巴结 粘膜相关淋巴组织
4
免疫细胞检测
免疫细胞数量与功能检测是判断机体免疫功能状态的重要指标
• 免疫细胞及亚群的分离、鉴定与计数 • 单核-吞噬细胞功能测定 • T淋巴细胞功能测定 • B淋巴细胞功能测定 • NK细胞功能测定 • 其他免疫细胞功能测定
取10ul于细胞计数板上 镜检
死细胞染成蓝色，活细胞不着色
Thank you!
磁珠分离法
• 在磁珠表面包被具免疫 反应性的抗体进行抗原 抗体反应，在细胞表面 形成玫瑰花结
免疫学实验技术教学设计
04
实验技术在教学中的意义
01
提高学生的实践能力
0 2 培 养 学 生 的科学素养 和创新能力
03
帮助学生理解免疫学的基本原理和 概念
提高学生的实验操作技能和实验设 计能力
04
05
培养学生的团队合作精神和沟通能 力
实验技术发展现状与趋势
免疫学实验技术在医学、生物学等 领域的应用越来越广泛
实验技术的发展与创新，推动了免 疫学研究的深入
教师姓名：李明 教学经验：10年 教学成果：发表多篇论文，获得多项教学奖项 教学方法：注重实践操作，注重学生动手能力的培养 教学特色：注重实验技术的创新和应用，注重培养学生的创新思维和实践能力
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免疫学实验技术教学设计
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目录
01 02 03 04 05 06
免疫学实验技术概述
免疫学实验技术教学目标与内容
免疫学实验技术教学方法与手段
免疫学实验技术教学评价与反馈
免疫学实验技术教学资源与平台 免疫学实验技术教学师资队伍与建
设
01
免疫学实验技术概述
实验技术定义与分类
实验技术的自动化、智能化趋势明 显，提高了实验效率和准确性
实验技术的标准化、规范化，提高 了实验结果的可靠性和可比性
实验技术的绿色化、环保化趋势， 减少了对环境的污染和破坏
02
免疫学实验的基本原理和方法
添加 标题
掌握免疫学实验的数据分析和结果 解释
01
免疫学实验技术：研究免疫反应和 免疫机制的实验方法
03
细胞免疫学实验技术：研究细胞免 疫反应的实验方法，如细胞培养、 细胞融合等
05
免疫学实验教学备课教案免疫实验的设计与操作
免疫学实验教学备课教案免疫实验的设计与操作免疫学实验教学备课教案一、实验目的本实验旨在通过设计与操作免疫学实验，让学生了解免疫学的基本理论知识与实验操作技巧，培养学生的实验思维能力和科学实验的技能。
二、实验原理免疫学实验是通过模拟真实的免疫反应过程来研究机体对抗疾病的机制。
实验中常用的技术包括免疫沉淀、免疫印迹、酶联免疫吸附试验等。
通过这些技术，可以检测抗原和抗体的相互作用，研究疫苗效果以及诊断免疫相关疾病等。
三、实验仪器与材料1. 电泳仪2. 分析天平3. 电源供应器4. 显微镜5. 细胞培养装置6. 活体小鼠7. 抗原和抗体标记试剂盒四、实验操作步骤1. 实验前准备a. 准备所需材料，并确认实验仪器的正常工作状态。
b. 为实验室提供良好的实验环境，确保安全与卫生。
c. 细心阅读实验操作步骤，了解实验的整体流程。
2. 抗原与抗体的制备a. 根据实验要求，选择合适的抗原并进行提取与纯化。
b. 制备抗体，可以通过免疫小鼠获得，或选择商业试剂盒。
3. 免疫沉淀实验a. 准备测试样品和控制样品。
b. 将抗原与抗体混合，反应一定时间。
c. 加入免疫沉淀试剂，沉淀免疫复合物。
d. 用电泳将复合物分离，观察结果。
4. 酶联免疫吸附试验(ELISA)a. 准备ELISA板，涂覆抗原。
b. 加入标准品和待测样品，与包被的抗体反应。
c. 加入辣根过氧化物酶结合的二抗，形成抗原-抗体-酶复合物。
d. 加入底物，观察颜色变化，并使用酶标仪测定吸光度。
五、实验结果与分析根据实验所得数据和观察结果，进行免疫实验的定量与定性分析。
通过对比实验组与对照组的结果，判断实验的有效性以及所研究问题的回答。
六、实验注意事项1. 在实验过程中，保持实验台面整洁，避免交叉污染。
2. 操作实验仪器时，注意安全操作规范，避免发生事故。
3. 确保实验操作符合伦理要求，保护动物的福利。
4. 结果分析时，要考虑实验可能存在的误差与不确定性。
七、实验拓展在完成基本免疫实验的学习后，可以进一步拓展实验内容，比如进行免疫细胞活性检测、蛋白质互作研究等。
免疫学实验设计——证实一产品有免疫增强作用(从影响淋巴细胞功能、T淋巴细胞增殖的角度考虑)
实验操作
(三)方法与结果: 1.淋巴细胞提取 (1)取人抗凝血3毫升，分成3份编号1.2.3，向2.3号中加入适量药品，向1.2.3中
分别加入1毫升Hanks液使之稀释。分别加于1毫升淋巴细胞分层液液面之上 (沿管壁轻轻加入，勿使两液相混)。 (2) 2000转/分离心30分钟，吸淋巴细胞层到另试管中加 5倍体积的Hanks液洗 1~2次，(1500转/分离心 10分钟)弃上 清即成。
材料
1、主要材料: 消毒肝素抗凝管(内含肝素10~20单位) 、注射器、微量加样器、
微量细胞培养板、49型玻璃纤维滤膜、离心机、细胞培养箱、 干燥箱、多头细胞收集器， FJ-2107液体闪烁计数仪。 2、主要试剂 完全RPMI-1640培养液(内含 15% FCS, 25mM Hepes, 5x102 mM= 巯基乙醇), 植物血凝素 (PHA，用完全RPMI- 1 640配成浓 度为30 ug/ml) ; H-TdR.工作液18.5KBq/20ul (中国原子能研 究院b同位素所)。 闪烁液(二甲苯1000 ml,ppo 7 g,popop0.5g) 。
证实一产品有免疫增强作用
（从影响淋巴细胞功能、T淋巴细胞增殖的角度考虑）
从T细胞功能的角度考虑
3H-TdR渗入法检测淋巴细胞转化率
实验原理：
胸腺嘧啶核苷(TdR) 是DNA合成的前身物。人外周血T淋巴细胞 在PHA刺激下发生母细胞转化而增殖，处于S期的细胞不断地摄 取TdR用以合成DNA。与此同时，H-TdR也不断地被摄入细胞内 而被放射性标记。通过液体闪烁计数测量方法，便可了解淋巴 细胞增殖活动的情况，籍以了解机体的细胞免疫功能。
实验操作
④终止培养时，用多头细胞收集器将细胞收集在49型玻 璃纤维滤膜_上，将滤膜置烤箱内烘干。
免疫反应实验设计
免疫反应实验设计免疫反应实验是一种重要的实验方法，用于研究生物体对外源抗原的免疫应答过程。
本文将介绍一种免疫反应实验的设计。
实验目的：本实验旨在研究小鼠对特定抗原的免疫反应及其效果。
实验材料和仪器：1. 小鼠（实验组和对照组各10只）；2. 特定抗原（抗原A）；3. 细胞培养培养基（RPMI 1640）；4. 透明化学药品及试剂；5. 免疫检测设备：ELISA板读取器、流式细胞仪等。
实验步骤：1. 小鼠实验组和对照组的处理：- 实验组：将实验组小鼠每天注射一定剂量的抗原A，连续注射10天；- 对照组：对照组小鼠注射生理盐水，与实验组一样的注射时间和剂量。
2. 血样收集：- 在注射结束后的第11天，分别从实验组和对照组的小鼠尾静脉采集血液样本；- 血样收集后，离心血液，收集上清液即血清。
3. 血清处理：- 将血清分装到离心管中，加入透明化学药品与试剂，如洗涤缓冲液和抗体及底物；- 根据实验需要，进行酶联免疫吸附试验（ELISA）或其他相关实验。
4. 数据分析：- 通过ELISA板读取器等设备，测量和记录实验组和对照组小鼠血清中特定抗原相关指标的光密度或浓度；- 使用统计软件（如SPSS）进行数据处理和相关统计分析，比较实验组和对照组的实验结果。
实验控制：1. 保证实验组和对照组的小鼠来源、年龄、性别和饲养环境等条件的统一；2. 控制实验组小鼠注射抗原A的剂量和时间，确保每只小鼠注射剂量的准确性和一致性；3. 相同的操作程序和处理方法，以减少实验误差和结果的差异。
结果分析：通过实验得到的数据可以对比实验组和对照组小鼠的免疫反应情况。
如果实验组小鼠的免疫反应明显高于对照组，可以说明该抗原在小鼠体内诱导了特异性的免疫反应。
实验数据的统计学分析将进一步验证实验结果的可靠性和显著性。
实验应用：免疫反应实验设计可以应用于各种研究领域，如疫苗研发、自身免疫疾病研究、药物免疫学评价等。
通过实验设计，可以深入了解生物体对特定抗原的免疫应答机制，为疾病预防和治疗提供理论基础和实验依据。
免疫学实验设计(从影响淋巴细胞功能、T细胞增殖角度考虑)
原理：
T淋巴细胞有植物血凝素( PHA)受体，在体外受刺激后， 可发生形态改变而转化为淋巴母细胞。用姬姆萨染色后，计算 200个淋巴细胞中转化为母细胞的细胞数(包括过渡型、母细胞 和分裂相淋巴细胞),依转比的百分率判定T淋巴细胞的功能。 细胞免疫缺陷时，患恶性肿瘤或某些其他疾病时，转化率显然 降低。
方法一：
头
体
尾
每张玻片计数200—400个细胞，计算转化率其中头部50—100，体部50—100，
尾部100—200细胞。
淋巴细胞转化率
转化淋巴细胞数 转化淋巴细胞数 未转化淋巴
100 %
一般认为转化率的正常值为60—70%
方法二：
（1）采肝素抗凝血1-2 毫升(1毫升血中加肝素20单位)充分混匀。37℃静置1- 2小时。红细胞沉淀 后，吸取血浆层并捎带些红细胞。移人另一无菌试管中。计算白细胞数然后2000rpm离心10分钟。弃上 清液。用199培养液将沉淀的白细胞配成1x107/毫升细胞悬液。
问题背景
市场上有一广告产品，据说有免疫增强作用请设 计一个方案证实之。（从影响淋巴细胞功能、T淋巴 细胞增殖的角度考虑。）
淋巴细胞转化实验
原理：
T淋巴细胞受到特异性抗原或非特异性抗原(PHA、PWM和 ConA )刺激均能使细胞发生转化。T淋巴细胞转化率的高低可反 映人体细胞免疫功能水平，常被作为细胞免疫功能指标之一。淋 巴细胞转化试验可从周围血中分离出淋巴细胞，也可采用全血试 验。试验方法主要有形态学方法和3H胸腺嘧啶核甘酸(3H-TdR) 掺人法二种。前法简单易行，不需特殊设备，本试验介绍这种方 法。
原理：
形态法
刺激物 PHA
淋巴细胞
增殖分化、DNA等大分子 物质合成增加
免疫学实验报告
实验一免疫学实验一、免疫细胞检测：1、淋巴细胞转化试验2、E花环形成试验3、大吞噬试验4、小吞噬试验二、凝集试验（玻片法）凝集+ 不凝集-细菌鉴定结果：三、酶联免疫吸附试验（ELISA）示教原理：结果：实验二细菌形态观察及革兰染色一、观察细菌的基本形态：1、球菌2、杆菌3、螺形菌葡萄球菌大肠杆菌霍乱弧菌（革兰染色）（革兰染色）（革兰染色）二、观察细菌的特殊结构：1、芽胞2、荚膜3、鞭毛破伤风杆菌肺炎链球菌伤寒杆菌（革兰染色）（荚膜染色）（镀银染色）三、革兰染色1、步骤：2、结果：葡萄球菌呈色，为革兰性菌；大肠杆菌呈色，为革兰性菌。
3、简述革兰染色的技术关键及医学意义。
实验三细菌人工培养及其代谢产物的观察一、常用培养基的制备：1、怎样配制100ml普通肉汤培基？2、含有%琼脂的培基为固体培基，制成平板用于；制成斜面用于。
3、含有%琼脂的培基为半固体培基，主要用于。
二、细菌在培养基中的生长情况1、平板划线分离培养结果（记录菌落形态）2、在液体培基中的生长情况：葡萄球菌：枯草杆菌：链球菌：3、在半固体培基中穿刺接种培养结果伤寒杆菌呈生长，运动；痢疾杆菌呈 生长， 运动。
三、细菌代谢产物的观察 1、糖发酵试验：产酸产气产酸不产气＋ 不分解－2、蛋白质分解试验：阳性＋阴性－3、细菌的色素：4、简述细菌代谢产物检查的意义。
实验四消毒灭菌与细菌分布试验一、记录并分析细菌分布检查的结果：根据上述检查结果，简述其在医学、药学工作中的实际意义。
二、高压蒸汽灭菌常用压力、温度及时间为：高压蒸汽灭菌器的使用要注意的是：三、紫外线杀菌试验1、培养后菌苔生长情况（绘图）：2、简述紫外线杀菌的特点及适用范围。
实验五药物的抗菌试验一、琼脂扩散法1、纸片法2、打孔法二、液体培养基连续稀释法（试管法）药物：浓度：菌种：结果：报告MIC：实验六病原性细菌一、观察下列细菌形态并绘图链球菌淋杆菌结核杆菌（革兰染色）（革兰染色）（抗酸染色）二、化脓性球菌1、葡萄球菌：阳性＋阴性－2、链球菌：3、抗链球菌溶血素“O”试验（简称抗“O”或ASO试验）：抗体效价为：简述其原理及临床意义：三、肠道杆菌：1、观察大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌在SS平板和双糖铁培养基中的菌落特点、生化反应、动力等。
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IL-35对小鼠的Ⅰ型糖尿病的治疗效果评定及免
疫机制的研究
138201李麒麟
一.立题依据
自身免疫性疾病（Autoimmune diseases）是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。
Ⅰ型糖尿病(T1DM 自身免疫性胰腺炎)就是其中的一员，其机制是体内除了抗原提呈细胞（APC）和活化的T 淋巴细胞外正常细胞几乎不表达MHC-Ⅱ类分子，研究表明IFN-γ转基因小鼠的胰岛β细胞分泌IFN-γ，由于IFN-γ刺激MHC-Ⅱ分子的表达这种小鼠的胰岛β细胞高表达MHC-Ⅱ类分子，这样以来免疫细胞就会结合并识别胰岛β细胞然后对其进行攻击，使其丧失胰岛素分泌活性，最终导致体内胰岛素缺乏。
临床发现人体发病机制与鼠基本相同，患者往往需要终生注射外源性胰岛素来控制体内的血糖水平。
白细胞介素-35（IL-35）是07年新发现的一种独特的免疫抑制性细胞因子，属于IL—12细胞因子家族，IL-35为异源二聚，主要由活化的调节性T细胞（Treg）分泌，对多种免疫细胞和细胞因子均有明显的抑制作用，参与介导机体免疫耐受的形成。
二.实验目的
通过提高NOD系小鼠（Ⅰ型糖尿病患鼠）体内的IL-35水平，观测小鼠各期的血糖尿糖等水平及后期的Ⅰ型糖尿病发病率、胰岛炎评分等，评定IL-35对Ⅰ型糖尿病的预防及治疗效果，并与其它一些免疫抑制性的药物（环孢菌素A）等，进行药敏对比；体外测定小鼠体内IL-4及干扰素-γ（IFN-γ）的等含量及T淋巴细胞的亚群分化情况及调节性T淋巴细胞的含量等，对小鼠的免疫体质及IL-35对Ⅰ型糖尿病作用的免疫学机制有大体认识及方向把握，为以后的研究打下基础。
三.实验对象
NOD系和NON系（正常不患病个体）小鼠
四.实验材料
IL-35试剂，磷酸盐缓冲液(PBS), 酶联免疫吸附试验（ElISA）试剂盒，流式细胞仪，CD8及CD4单克隆抗体，注射器等基础实验器械。
五.实验方法及步骤
1. 小鼠的分组与处理实验组,10只NOD系小鼠注射IL-35注射液，每三
天注射一次，注射量根据生物试剂公司提供的IL-35试剂说明书为准，连续注射7周.实验对照组,10只NOD系小鼠注射等量的磷酸盐缓冲液（PBS），注射方式同实验组.正常对照组10只NON系小鼠注射等量的磷酸盐缓冲液（PBS），注射方式同实验组.
2. 糖尿病及体重检测从各组小鼠10周龄开始每周记录体重，每天采取
断尾方式测血糖含量和尿糖含量，血糖连续2天超过16.00mmol/L即诊断为糖尿病,30周后观察期满终止观察，计算各组小鼠发病率
3. 胰腺炎严重程度评分30周后，颈椎脱臼法处死各组小鼠，取各组小鼠胰岛做HE色切片进行病理性胰岛炎评分。
评分标准：
1> 0级：胰岛完整无淋巴细胞浸润，计0分；
2> 1级：有胰岛周围淋巴细胞浸润（即胰岛周围炎）或<25%的胰岛面积受累，计1分；
3> 2级：浸润至胰岛內，25%→50%的面积受累,计2分；
4> 3级：>50%的面积受累，计3分。
记录各组小鼠评分值
4. 细胞因子水平测定取足等量的各组小鼠外周血用ELISA法检测IL-4及干扰素-γ（IFN-γ）的含量，以为IFN-γ指导Th0向Th1方向、分化IL-4指导Th0向Th2方向分化。
5.T淋巴细胞亚群测定取各组小鼠脾脏制成单核细胞悬液，应用细胞流式法进行T淋巴细胞亚群（主要是细胞免疫）计数，结果用百分比表示。
6. 调节性T细胞检测分选提取大鼠脾脏和淋巴结CD4+CD25+调节性T （Treg）并进行纯度和活性检测。
用免疫磁珠两步法既阴性选择和阳性选择分选提取小鼠CD4+CD25+调节性T细胞,流式细胞仪检测细胞纯度,台盼蓝染色法观察计算细胞存活率。
7.统计学处理分析应用实验常用统计学软件（SAS,SPSS等）进行大量数据的后处理，整理待分析。
六.预期结果及结论
实验组小鼠的发病率远低于对照组小鼠发病率，体重较对照组重；
且对照组饮食饮水量远多于实验组和正常对照组；
血糖和尿糖含量比对照组低并接近于正常对照组（可偏高）；
IL-4及干扰素-γ（IFN-γ）的含量实验组数据远低于对照组和正常对照组鼠，提示实验组发生了免疫的抑制（免疫的耐受）；
实验组T淋巴细胞亚群分化度和活性较对照组和正常对照组明显偏低；调节性T（Treg）细胞实验组计数和活性较对照组和正常对照组高，提示有免疫抑制及耐受。
预期结论
IL-35对Ⅰ型糖尿病有明显的抑制或治疗作用；
由于IL-35使Th0细胞向调节性T（Treg）细胞分化（优势分化方向）从而抑制T淋巴细胞的其他效应性分化（主要有Th1和Th2方向）使IL-2、IL-4及IFN-γ等主要免疫增强因子的分泌减少，有效抑制了荷主的免疫能力，从整体水平上降低自身免疫病的发生；
Treg的活性增值又能分泌IL-35和促进Fas 、Fasl途径激活相关基因致使T淋巴细胞凋亡，以上两项从整体水平上降低自身免疫病的发生；
IFN-γ分泌的减少还能抑制胰岛β细胞产生MHC-Ⅱ类分子使T淋巴细胞不能对其产生杀伤作用，从而不会引起免疫细胞对自体胰岛β细胞识别与破坏，保证了胰岛β细胞的正常胰岛素分泌功能，维持血糖的正常。
七.参考文献
【1】金伯泉·医学免疫学·第五版·北京：人民卫生出版社，2008
【2】宋文刚·免疫学实验教材·北京：北京大学医学出版社，2010
【3】孙黎飞·细胞免疫学实验研究方法·北京：人民军医出版社，2009 【4】王培林，傅松滨·医学遗传学·第三版·北京科学技术出版社2011 【5】哈佛医学院Brigham and Women’s医院，eBioscience公司的科学家·Nature·罕见的抑制性因子·美国·2007
【6】王嘉军·微生物学免疫学新进展·第37卷，第4期·2011
【7】周国庆，唐琴，黄丽，孙保亮·泰山医学院学报，Treg的免疫磁珠提取纯化方法
【8】姜小丽，杨婷等·中国免疫学杂志·2013年第四期·哮喘小鼠中Foxp3+Treg/Th17的失衡及意义
【9】王建华·糖尿病自我管理全书·北京：北京科学出版社·2010。